檢測10種海域致病菌的基因芯片的制作方法
【專利摘要】本發(fā)明公開了檢測10種海域致病菌的基因芯片，包括固相載片，固相載片上設(shè)有質(zhì)控探針和檢測探針，檢測探針的核苷酸序列組份為SEQ?ID?NO.1-SEQ?ID?NO.27所示，可以同時(shí)檢測出陰溝腸桿菌、遲緩愛德華菌、糞鏈球菌、強(qiáng)壯弧菌、哈維氏弧菌、副溶血弧菌、燦爛弧菌、創(chuàng)傷弧菌、鰻弧菌和黃海希瓦氏菌，而且不需要活的細(xì)菌，只要有DNA即可；具有高通量、平行性、微型化、自動(dòng)化、快速靈敏、定量、樣品用量少等顯著優(yōu)點(diǎn)。
【專利說明】檢測10種海域致病菌的基因芯片
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及細(xì)菌基因芯片，具體涉及檢測10種海域致病菌的基因芯片。
【背景技術(shù)】
[0002]隨著人類對(duì)海洋開發(fā)力度的加大,海域生態(tài)環(huán)境承載的壓力也與日俱增,而由于病原微生物在海洋環(huán)境中的存在與適宜條件下的大量繁殖，影響了人類對(duì)海洋的開發(fā)與利用活動(dòng)，影響了近岸海域的海洋功能，也對(duì)人體健康造成了潛在的威脅。首先如人、畜共患致病菌通過食用海產(chǎn)品等途徑感染人類，嚴(yán)重危及人類的健康和生命安全，因海產(chǎn)品中的霍亂弧菌和副溶血弧菌等引發(fā)的霍亂和腹瀉等事件頻發(fā)。其次，由于濱海游泳、水上運(yùn)動(dòng)、旅游、度假等休閑娛樂活動(dòng)而傳播的細(xì)菌性疾病，已成為嚴(yán)重的公眾健康問題。還有我國沿海有600多個(gè)大型排污口，約84%的入海排污口超標(biāo)排放污染物。而船舶排放壓艙水及受到污損的船體、錨鏈等也是造成地理性隔離水體間有害生物傳播的最主要途徑。有些致病微生物的抗性遠(yuǎn)遠(yuǎn)超過陸生微生物，也是引發(fā)大多數(shù)感染性疾病的病原體，它給人類帶來的災(zāi)難有時(shí)甚至是毀滅性的。因此，致病菌的快速、準(zhǔn)確、靈敏、特異的診斷技術(shù)是有效預(yù)防感染性疾病發(fā)生，控制其暴發(fā)性傳播的前提和關(guān)鍵。因?yàn)樽匀画h(huán)境中僅有小于1%左右的微生物可培養(yǎng)，而基因芯片不需要活的細(xì)菌，只要有DNA即可；基因芯片具有高通量、平行性、微型化、自動(dòng)化、快速靈敏、定量、樣品用量少等顯著特點(diǎn)。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0003]本發(fā)明所要解決的技 術(shù)問題是提供一種高通量、檢測靈敏的檢測10種海域致病囷的基因芯片。
[0004]本發(fā)明的技術(shù)方案是檢測10種海域致病菌的基因芯片，包括固相載片，所述固相載片上設(shè)有質(zhì)控探針和檢測探針，所述檢測探針如下:陰溝腸桿菌的檢測探針的核苷酸序列如SEQ ID N0.1和SEQ ID N0.2所示，遲緩愛德華菌的檢測探針的核苷酸序列如SEQID N0.3和SEQ ID N0.4所示，糞鏈球菌的檢測探針的核苷酸序列如SEQ ID N0.5、SEQ IDN0.6和SEQ ID N0.7所示，強(qiáng)壯弧菌的檢測探針的核苷酸序列如SEQ ID N0.8、SEQ ID N0.9和SEQ ID N0.10所示，哈維氏弧菌的檢測探針的核苷酸序列如SEQ ID N0.11和SEQ IDN0.12所示，副溶血弧菌的檢測探針的核苷酸序列如SEQ ID N0.13、SEQ ID N0.14和SEQID N0.15所示，燦爛弧菌的檢測探針的核苷酸序列如SEQ ID N0.16和SEQ ID N0.17所示，創(chuàng)傷弧菌的檢測探針的核苷酸序列如SEQ ID N0.18,SEQ ID N0.19,SEQ ID N0.20、SEQ IDN0.21和SEQ ID N0.22所示，鰻弧菌的檢測探針的核苷酸序列如SEQ ID N0.23和SEQ IDN0.24所示，黃海希瓦氏菌的檢測探針的核苷酸序列如SEQ ID N0.25、SEQ ID N0.26和SEQID N0.27 所示。
[0005]所述質(zhì)控探針HEX的核苷酸序列如SEQ ID N0.28所示，PC的核苷酸序列如SEQID N0.29所示，NC的核苷酸序列如SEQ ID N0.30所示。
[0006]與現(xiàn)有技術(shù)相比本發(fā)明優(yōu)點(diǎn)在于檢測10種海域致病菌的基因芯片，包括固相載片，固相載片上設(shè)有質(zhì)控探針和檢測探針，檢測探針的核苷酸序列組份為SEQ ID N0.1-SEQID N0.27所示，可以同時(shí)檢測出陰溝腸桿菌、遲緩愛德華菌、糞鏈球菌、強(qiáng)壯弧菌、哈維氏弧菌、副溶血弧菌、燦爛弧菌、創(chuàng)傷弧菌、鰻弧菌和黃海希瓦氏菌，而且不需要活的細(xì)菌，只要有DNA即可；具有高通量、平行性、微型化、自動(dòng)化、快速靈敏、定量、樣品用量少等顯著優(yōu)點(diǎn)。
【具體實(shí)施方式】
[0007]以下結(jié)合實(shí)施例對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步詳細(xì)描述。
[0008]一、固相載體(基片)的選取
[0009]常用的固相載體包括尼龍膜、硝酸纖維素膜、玻璃片和各種有機(jī)高分子制作的薄膜等，本實(shí)施例所使用的為75.5mmX25.2mmXl.0mm的玻璃片作為基片，要求外觀無劃痕、無缺損，玻璃片表面要經(jīng)過化學(xué)修飾后，才能將DNA探針固定在基片上，現(xiàn)有的玻璃片表面化學(xué)修飾主要有氨基修飾、醛基修飾和巰基修飾。本實(shí)施例選擇對(duì)玻璃片進(jìn)行醛基修飾，為北京博奧生物有限公司的產(chǎn)品。
[0010]二、探針的制備
[0011]1、質(zhì)控探針的設(shè)計(jì):在芯片設(shè)計(jì)時(shí)采用了表1所示的質(zhì)控探針，探針均在NCBI中進(jìn)行了比對(duì)，和己知基因無明顯同源性，也可市售其它質(zhì)控探針，只要與己知基因無明顯同源性即可。
[0012]表1:質(zhì)控探針表
[0013]
【權(quán)利要求】
1.檢測10種海域致病菌的基因芯片，包括固相載片，所述固相載片上設(shè)有質(zhì)控探針和檢測探針，其特征在于所述檢測探針如下:陰溝腸桿菌的檢測探針的核苷酸序列如SEQ IDN0.1和SEQ ID N0.2所示，遲緩愛德華菌的檢測探針的核苷酸序列如SEQ ID N0.3和SEQ IDN0.4所示，糞鏈球菌的檢測探針的核苷酸序列如SEQ ID N0.5,SEQ ID N0.6和SEQ ID N0.7所示，強(qiáng)壯弧菌的檢測探針的核苷酸序列如SEQ ID N0.8,SEQ ID N0.9和SEQ ID N0.10所示，哈維氏弧菌的檢測探針的核苷酸序列如SEQ ID N0.11和SEQ ID N0.12所示，副溶血弧菌的檢測探針的核苷酸序列如SEQ ID N0.13、SEQ ID N0.14和SEQ ID N0.15所示，燦爛弧菌的檢測探針的核苷酸序列如SEQ ID N0.16和SEQ ID N0.17所示，創(chuàng)傷弧菌的檢測探針的核苷酸序列如 SEQ ID N0.18、SEQ ID N0.19、SEQ ID N0.20、SEQ ID N0.21 和 SEQ IDN0.22所示，鰻弧菌的檢測探針的核苷酸序列如SEQ ID N0.23和SEQ ID N0.24所示，黃海希瓦氏菌的檢測探針 的核苷酸序列如SEQ ID N0.25,SEQ ID N0.26和SEQ ID N0.27所示。
2.如權(quán)利要求1所述的檢測10種海域致病菌的基因芯片，其特征在于所述質(zhì)控探針HEX的核苷酸序列如SEQ ID N0.28所示，PC的核苷酸序列如SEQ ID N0.29所示，NC的核苷酸序列如SEQ ID N0.30所示。
【文檔編號(hào)】C12Q1/04GK103540668SQ201310499649
【公開日】2014年1月29日 申請(qǐng)日期:2013年10月22日 優(yōu)先權(quán)日:2013年10月22日
【發(fā)明者】蘇秀榕, 周君, 李太武 申請(qǐng)人:寧波大學(xué)