專利名稱：萃取發(fā)酵和調(diào)控pH制備紅曲色素的方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種生物工程技術(shù)領(lǐng)域的發(fā)酵方法，具體地，涉及一種萃取發(fā)酵和調(diào)控pH制備紅曲色素的方法。
背景技術(shù)：
紅曲霉菌(Monascus sp)固態(tài)發(fā)酵生產(chǎn)的紅曲米是我國傳統(tǒng)的食品色素添加劑，也是一種傳統(tǒng)的中藥，在我國已經(jīng)有一千多年的使用歷史。當今采用現(xiàn)代微生物液態(tài)深層發(fā)酵技術(shù)生產(chǎn)紅曲紅色素，該色素作為食品色素添加劑在東亞國家廣泛使用，如中國、日本、韓國、臺灣、泰國、越南等。自從發(fā)現(xiàn)了紅曲霉菌發(fā)酵生產(chǎn)紅曲色素也產(chǎn)生具有神經(jīng)毒性和腎毒性的副產(chǎn)物桔霉素以來，紅曲紅色素在歐美生產(chǎn)已經(jīng)禁止生產(chǎn)和銷售。特別地，紅曲色素產(chǎn)品是紅曲紅色素、紅曲紅色素、紅曲橙色素組成的混合物。除東亞一些國家制定了紅曲紅色素的國家標準允許其生產(chǎn)和銷售外，紅曲黃色素和紅曲橙色素還沒有出臺相應的國家標準。為了保障食品安全，紅曲色素產(chǎn)品中控制副產(chǎn)物的含量，特別是具有毒副作用的桔霉素的含量，一直是食品微生物的重要研究內(nèi)容。在發(fā)酵過程中，利用現(xiàn)代生物技術(shù)手段改造微生物菌株以抑制桔霉素的形成從技術(shù)上具有可行性，但是基因工程改造微生物所獲得的發(fā)酵產(chǎn)品屬于基因工程食品。由于食品安全的特殊性，基因工程食品在很多國家獲得生產(chǎn)、銷售的許可權(quán)是非常繁瑣和困難的。采用發(fā)酵工程技術(shù)并結(jié)合下游分離技術(shù)降低桔霉素的含量成為重要的手段，如調(diào)節(jié)溶氧等操作參數(shù)。微生物次級代謝產(chǎn)物的形成強烈地依賴于發(fā)酵條件。在紅曲霉菌的發(fā)酵過程中，調(diào)節(jié)發(fā)酵介質(zhì)的PH可以改變紅曲色素中各色素組分的分率。在近中性pH條件下，紅曲紅色素的分率較高，這和傳·統(tǒng)工藝采用大米發(fā)酵紅曲米一致。降低發(fā)酵液的PH使紅曲橙色素和紅曲黃色素的分率相應增加，導致色素顏色變黃。2012年廣東“鹽煽雞”食品風波就是因為添加了紅曲黃色素。雖然紅曲黃色素的安全性得到了國內(nèi)外研究的證實，但是PH變化對紅曲霉菌代謝副產(chǎn)物形成的影響卻缺乏研究。部分學者從紅曲黃色素本身的安全性推斷紅曲黃色素產(chǎn)品的安全性，因副產(chǎn)物(如桔霉素、洛伐他仃等)含量和毒性難以得到確鑿的證據(jù)，不能讓消費者信服，也難以得到國家食品管理機構(gòu)的認可。為了滿足市場對紅曲黃色素的需求，同時保障食品安全，迫切需要開發(fā)桔霉素含量低、紅曲色素中色素組分相對單一的紅曲霉菌發(fā)酵技術(shù)。經(jīng)對現(xiàn)有技術(shù)文獻的檢索發(fā)現(xiàn)，Zhiqiang Hu, Xuehong Zhang, Zhenqiang ffu, Hanshi Qi, Zhilong Wang.Export ofintracellular Monascus pigments by two-stage microbial fermentation in nonionicsurfactant micelle aqueous solution.Journal of biotechnology，2012，162:202—209.(胡志強，張雪洪，吳振強，齊翰實，王志龍.“在非離子表面活性劑膠束溶液中應用兩段發(fā)酵技術(shù)釋放胞內(nèi)紅曲色素《生物技術(shù)學報》，2012，162 =202-209)中介紹，紅曲霉菌在非離子表面活性劑膠束溶液中發(fā)酵能將胞內(nèi)紅曲色素分泌到細胞外環(huán)境，實現(xiàn)了將胞內(nèi)產(chǎn)物萃取發(fā)酵到胞外表面活性劑膠束溶液。但是，不同的發(fā)酵培養(yǎng)基和發(fā)酵方式對紅曲色素組成分率的影響，尤其是對副產(chǎn)物桔霉素形成的影響，還沒有研究報道。在進一步的檢索中，還沒有關(guān)于在表面活性劑膠束溶液中萃取發(fā)酵與調(diào)控pH相結(jié)合實現(xiàn)控制色素組成和桔霉素含量的文獻報道。

發(fā)明內(nèi)容
針對現(xiàn)有技術(shù)中的缺陷，本發(fā)明的目的是提供一種萃取發(fā)酵和調(diào)控pH制備紅曲色素的方法，該方法應用萃取發(fā)酵與調(diào)控PH技術(shù)開發(fā)桔霉素含量低的水溶性/疏水性紅曲紅色素、疏水性紅曲橙色素、疏水性紅曲黃色素等系列紅曲色素產(chǎn)品。本發(fā)明提供一種萃取發(fā)酵和調(diào)控pH制備紅曲色素的方法，所述方法通過萃取發(fā)酵技術(shù)與調(diào)控PH技術(shù)相結(jié)合，制備桔霉素含量低且紅曲色素組分相對單一的紅曲色素；所述方法包括如下步驟:步驟1，紅曲霉菌在種子培養(yǎng)基中進行培養(yǎng)，得種子液，所述的紅曲霉菌為中國工業(yè)微生物菌株保藏中心提供(Monascus anka, CICC5013)；步驟2，為了保護調(diào)節(jié)pH可以控制紅曲色素的組成，同時可以在低pH條件下控制桔霉素的形成，將所述種子液接種到含氮源的發(fā)酵培養(yǎng)液中，進行發(fā)酵培養(yǎng)，調(diào)節(jié)發(fā)酵培養(yǎng)液的PH值，離心，得紅曲霉菌濕細胞；取紅曲霉菌濕細胞預處理，釋放胞內(nèi)產(chǎn)物，檢測發(fā)酵液pH、細胞內(nèi)外的色素濃度、細胞內(nèi)外的桔霉素含量；其中，所述預處理具體為:取0.5g濕細胞在等體積的發(fā)酵液70% (V/V)的乙醇(pH=2)溶液中浸泡I小時;步驟3，為了保護萃取發(fā)酵可以進一步控制紅曲黃色素的形成，同時控制桔霉素的含量，將所述紅曲霉菌濕細胞接種到含非離子表面活性劑的發(fā)酵培養(yǎng)基中，進行培養(yǎng)，調(diào)節(jié)發(fā)酵培養(yǎng)基的PH值，濁點萃取，分離；取部分細胞預處理，釋放胞內(nèi)產(chǎn)物，檢測發(fā)酵液pH、細胞內(nèi)外的色素濃度、細胞內(nèi)外的桔霉素含量。優(yōu)選地，所述色素濃度，其檢測方法具體為:將胞外發(fā)酵液或胞內(nèi)產(chǎn)物釋放液用70% (V/V)的乙醇(pH=2)溶液適當吸收，采用分光光度計分布測定410、470、510nm處的吸光值。上述吸光值乘上吸收倍數(shù)得的吸光度單位分別表示黃色素、橙色素和紅色素的濃度。對應地，測定樣品在可見波長范圍(390 540nm)的吸光度，可以檢驗樣品對應的吸收光
-1'TfeP曰。所述桔霉素含量，其檢測方法具體為:將胞外發(fā)酵液或胞內(nèi)產(chǎn)物釋放液用70% (V/V)的乙醇(pH=2)溶液適當吸收，采用薄層層析(默克公司硅膠F254板)，溶劑系統(tǒng)為醋酸:甲醇、氯仿=9:21:285，檢測波長為365nm，在Rf為0.56處可以檢測到桔霉素的熒光強弱。同時，在自然光下，在Rf分別為0.8,0.68和O處可以檢測到紅曲橙色素，紅曲黃色素和紅曲紅色素。優(yōu)選地，步驟I中，所述種子培養(yǎng)基由如下含量的各組分組成:7jC 100ml，蛋白胨2g，酵母粉2g，葡萄糖2g。優(yōu)選地，步驟I中，所述培養(yǎng)在溫度為30°C，200rpm的搖床中進行，培養(yǎng)時間為32小時。 優(yōu)選地，步驟2中，所述發(fā)酵培養(yǎng)在溫度為30°C，200rpm的搖床中進行，培養(yǎng)時間為5-7天。
優(yōu)選地，步驟2中，所述發(fā)酵培養(yǎng)液的初始pH值為2.5 6，最終pH值為2.3 7。優(yōu)選地，步驟3中，所述培養(yǎng)是指在溫度為30°C，200rpm的搖床中進行，培養(yǎng)時間為3 4天；所述分離是指在70°C的水浴中靜置2小時。優(yōu)選地，步驟3中，所述發(fā)酵培養(yǎng)基的初始pH值為3 5，最終pH值為2.2 6.2。優(yōu)選地，步驟3中，所述發(fā)酵培養(yǎng)基由如下含量的各組分組成:水100ml，葡萄糖 5g，KH2PO4 0.4g, MgSO4 0.lg，CaCl2 0.005g，非離子表面活性劑 I 4g/100ml，氮源5g/100 15g/100ml。優(yōu)選地，所述氮源包括了常用的無機氮源和有機天然氮源。所述氮源為大米粉、玉米粉、黃豆粉、谷氨酸鈉、硫酸銨、氯化銨、硝酸鈉。優(yōu)選地，本發(fā)明使用了非離子表面活性劑Triton X-100的膠束溶液實現(xiàn)了胞內(nèi)色素的萃取發(fā)酵和濁點萃取。以硫酸銨、氯化銨等為發(fā)酵培養(yǎng)基的氮源，萃取發(fā)酵實現(xiàn)了將胞內(nèi)產(chǎn)物萃取到胞外發(fā)酵液，且胞外色素是紅曲黃色素，桔霉素含量較低。進一步實現(xiàn)了胞外發(fā)酵液的濁點萃取，桔霉素主要分配在表面活性劑稀相而紅曲黃色素分配在表面活性劑濃相，從而在分離階段進一步降低了表面活性劑濃相中桔霉素的含量，可以由表面活性劑濃相獲得低桔霉素含量的紅曲黃色素產(chǎn)品。優(yōu)選地，本發(fā)明使用了非離子表面活性劑Triton X-100的膠束溶液實現(xiàn)了胞內(nèi)色素的萃取發(fā)酵和濁點萃取。以硝酸鈉等發(fā)酵培養(yǎng)基的氮源，萃取發(fā)酵實現(xiàn)了將胞內(nèi)產(chǎn)物萃取到胞外發(fā)酵液，胞外色素是紅曲紅色素，桔霉素含量較高。進一步實現(xiàn)了胞外發(fā)酵液的濁點萃取，桔霉素主要分配在表面活性劑稀相而紅曲紅色素分配在表面活性劑濃相，從而在分離階段進一步降低了表面活性劑濃相中桔霉素的含量，可以由表面活性劑濃相獲得低桔霉素含量的紅曲紅色素產(chǎn)品。

優(yōu)選地，本發(fā)明使用了非離子表面活性劑Triton X-100的膠束溶液實現(xiàn)了胞內(nèi)色素的萃取發(fā)酵和濁點萃取。以谷氨酸鈉等為發(fā)酵培養(yǎng)基的氮源，萃取發(fā)酵實現(xiàn)了將胞內(nèi)產(chǎn)物萃取到胞外發(fā)酵液，胞外色素是水溶性紅曲紅色素衍生物，桔霉素含量較高。進一步濁點萃取胞外發(fā)酵液，桔霉素主要分配在表面活性劑稀相，水溶性紅曲紅色素衍生物在兩相中具有一定的分配，但主要分配在表面活性劑濃相，從而在分離階段進一步降低了表面活性劑濃相中桔霉素的含量，可以由表面活性劑濃相獲得低桔霉素含量的水溶性紅曲紅色素衍生物產(chǎn)品(親水性紅曲紅色素衍生物)。本發(fā)明采用調(diào)控pH和萃取發(fā)酵的目的在于獲得組分相對單一、桔霉素含量低的系列紅曲色素產(chǎn)品，如水溶性紅曲紅色素、脂溶性紅曲橙色素、脂溶性紅曲黃色素和脂溶性紅曲紅色素等。本發(fā)明采用調(diào)控pH的目的在于調(diào)節(jié)紅曲色素中色素組分的分率和控制代謝副產(chǎn)物桔霉素的形成。本發(fā)明采用萃取發(fā)酵技術(shù)的目的在于改變紅曲色素組分的分率，并將胞內(nèi)色素分泌到細胞外。本發(fā)明采用萃取發(fā)酵技術(shù)將胞內(nèi)產(chǎn)物分泌到胞外的目的在于進一步實現(xiàn)胞外發(fā)酵液的濁點萃取。本發(fā)明采用濁點萃取胞外發(fā)酵液的目的在于實現(xiàn)紅曲色素與桔霉素在兩相系統(tǒng)中的不均勻分配，進一步降低桔霉素的含量。與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明具有如下的有益效果:本發(fā)明采用發(fā)酵及控制發(fā)酵的pH值，進而控制了紅曲色素和桔霉素的形成，本發(fā)明同時應用萃取發(fā)酵技術(shù)和濁點萃取調(diào)節(jié)色素組成和去除副產(chǎn)物桔霉素，實現(xiàn)了低桔霉素含量的疏水性紅曲紅色素、疏水性紅曲橙色素、疏水性紅曲黃色素和水溶性紅曲紅色素(紅曲紅色素的谷氨酸衍生物)系列產(chǎn)品開發(fā)。本發(fā)明方法簡單，容易實現(xiàn)，產(chǎn)率高，成本低，重復性強，環(huán)保，有較好的應用前景。
具體實施例方式下面結(jié)合具體實施例對本發(fā)明進行詳細說明。以下實施例將有助于本領(lǐng)域的技術(shù)人員進一步理解本發(fā)明，但不以任何形式限制本發(fā)明。應當指出的是，對本領(lǐng)域的普通技術(shù)人員來說，在不脫離本發(fā)明構(gòu)思的前提下，還可以做出若干變形和改進。這些都屬于本發(fā)明的保護范圍。實施例1本實施例涉及一種萃取發(fā)酵和調(diào)控pH制備紅曲色素的方法，所述方法包括如下步驟:步驟I，紅曲霉菌在種子培養(yǎng)基水(IOOml，蛋白胨2g，酵母粉2g，葡萄糖2g)中進行培養(yǎng)32小時，得種子液，所述的紅曲霉菌為中國工業(yè)微生物菌株保藏中心提供(Monascusanka, CICC5013)；步驟2，將所述種子液接種到初始pH值為4，以硝酸鈉為氮源的發(fā)酵培養(yǎng)液中，在溫度為30°C，200rp·m的搖床中進行5天的發(fā)酵培養(yǎng)，調(diào)節(jié)發(fā)酵培養(yǎng)液的pH值，離心，得紅曲霉菌濕細胞；取紅曲霉菌濕細胞預處理,釋放胞內(nèi)產(chǎn)物,檢測發(fā)酵液pH、細胞內(nèi)外的色素濃度、細胞內(nèi)外的桔霉素含量；其中，所述預處理具體為:取0.5g濕細胞在等體積的發(fā)酵液70% (V/V)的乙醇(pH=2)溶液中浸泡I小時;分析胞外發(fā)酵液410、470和510nm處紅曲色素的吸光度分別為2、I和1.8吸光度單位；胞內(nèi)色素經(jīng)乙醇溶液提取后410、470和510nm處的吸光度分別為35、25和32吸光度單位。發(fā)酵液最終pH為6.8，胞內(nèi)外桔霉素含量經(jīng)薄層層析分析表明含量高，在胞內(nèi)外都有明顯分配，更傾向于分配在胞外發(fā)酵液。薄層層析表明紅曲色素主要成分是紅曲紅色素。步驟3，將發(fā)酵培養(yǎng)的細胞0.5g，加入初始pH為4的發(fā)酵培養(yǎng)基(水100ml，葡萄糖 5g，KH2PO4 0.4g, MgSO4 0.lg, CaCl2 0.005g，硫酸銨 5g/100ml、Triton X-1004g/100ml)中培養(yǎng)5天后，分析胞外發(fā)酵液410、470和510nm處紅曲色素的吸光度分別為65,45和22吸光度單位；胞內(nèi)色素經(jīng)乙醇溶液提取后410、470和510nm處的吸光度分別為25、20和15吸光度單位。發(fā)酵最終pH為2.2，胞內(nèi)外桔霉素含量經(jīng)薄層層析分析表明基本不含桔霉素。薄層層析表明紅曲色素主要成分是紅曲黃色素。進一步在70度水浴中濁點萃取胞外發(fā)酵液，表面活性劑濃相中410、470和510nm處紅曲色素的吸光度分別為120、60和20吸光度單位；表面活性劑稀相中410、470和510nm處的吸光度分別為15、8和7吸光度單位。實施效果:本實施例產(chǎn)品經(jīng)薄層層析分析結(jié)果可得:在表面活性劑稀相能檢測到桔霉素的存在，在表面活性劑濃相檢測不到。實施例2本實施例涉及一種萃取發(fā)酵和調(diào)控pH制備紅曲色素的方法，所述方法包括如下步驟:步驟I，紅曲霉菌在種子培養(yǎng)基(IOOml，蛋白胨2g，酵母粉2g，葡萄糖2g)中進行培養(yǎng)32小時，得種子液，所述的紅曲霉菌為中國工業(yè)微生物菌株保藏中心提供(Monascusanka, CICC5013)；步驟2，將所述種子液接種到初始pH值為4，以谷氨酸鈉為氮源的發(fā)酵培養(yǎng)液中，進行發(fā)酵培養(yǎng)7天后，調(diào)節(jié)發(fā)酵培養(yǎng)液的pH值，離心，得紅曲霉菌濕細胞；取紅曲霉菌濕細胞預處理，釋放胞內(nèi)產(chǎn)物，檢測發(fā)酵液pH值、細胞內(nèi)外的色素濃度、細胞內(nèi)外的桔霉素含量；其中，所述預處理具體為:取0.5g濕細胞在等體積的發(fā)酵液70% (V/V)的乙醇(pH=2)溶液中浸泡I小時；分析胞外發(fā)酵液410、470和510nm處紅曲色素的吸光度分別為10、8和12吸光度單位；胞內(nèi)色素經(jīng)乙醇溶液提取后410、470和510nm處的吸光度分別為30、22和32吸光度單位。發(fā)酵液最終pH為6.5，胞內(nèi)外桔霉素含量經(jīng)薄層層析分析表明含量高，在胞內(nèi)外都有明顯分配，更傾向于分配在胞外發(fā)酵液。薄層層析表明紅曲色素主要成分是紅曲紅色素衍生物。步驟3，將發(fā)酵培養(yǎng)的細胞0.5g，加入初始pH為4的發(fā)酵培養(yǎng)基(水100ml，葡萄糖 5g，KH2PO4 0.4g, MgSO4 0.lg, CaCl2 0.005g，硫酸銨 15g/100ml、Triton X-1003g/100ml)中培養(yǎng)3天后，分析胞外發(fā)酵液410、470和510nm處紅曲色素的吸光度分別為45,25和20吸光度單位；胞內(nèi)色素經(jīng)乙醇溶液提取后410、470和510nm處的吸光度分別為35、30和18吸光度單位。發(fā)酵最終pH為2.2，胞內(nèi)外桔霉素含量經(jīng)薄層層析分析表明基本不含桔霉素。薄層層析表明紅曲色素主要成分是紅曲黃色素。進一步在70度水浴中濁點萃取胞外發(fā)酵液，表面活性劑濃相中410、470和510nm處紅曲色素的吸光度分別為110、60和30吸光度單位；表面活性劑稀相中410、470和510nm處的吸光度分別為15、8和7吸光度單位。實施效果:本實施例產(chǎn)品經(jīng)薄層層析分析結(jié)果可得:薄層層析分析能在表面活性劑稀相能檢測到桔霉素的存在，在表面活性劑濃相檢測不到。實施例3本實施例涉及一種萃取發(fā)酵和調(diào)控pH制備紅曲色素的方法，所述方法包括如下步驟:步驟I，紅曲霉菌在種子培養(yǎng)基(IOOml，蛋白胨2g，酵母粉2g，葡萄糖2g)中進行培養(yǎng)32小時，得種子液，所述的紅曲霉菌為中國工業(yè)微生物菌株保藏中心提供(Monascusanka, CICC5013)；步驟2，將所述種子液接種到初始pH值為6，以谷氨酸鈉為氮源的發(fā)酵培養(yǎng)液中，進行發(fā)酵培養(yǎng)7天后， 調(diào)節(jié)發(fā)酵培養(yǎng)液的pH值，離心，得紅曲霉菌濕細胞；取紅曲霉菌濕細胞預處理，釋放胞內(nèi)產(chǎn)物，檢測發(fā)酵液pH值、細胞內(nèi)外的色素濃度、細胞內(nèi)外的桔霉素含量；其中，所述預處理具體為:取0.5g濕細胞在等體積的發(fā)酵液70% (V/V)的乙醇(pH=2)溶液中浸泡I小時；分析胞外發(fā)酵液410、470和510nm處紅曲色素的吸光度分別為5、3和5吸光度單位；胞內(nèi)色素經(jīng)乙醇溶液提取后410、470和510nm處的吸光度分別為20、12和22吸光度單位。發(fā)酵液最終pH為7，胞內(nèi)外桔霉素含量經(jīng)薄層層析分析表明含量高，在胞內(nèi)外都有明顯分配，更傾向于分配在胞外發(fā)酵液。薄層層析表明紅曲色素主要成分是紅曲紅色素衍生物。步驟3，將發(fā)酵培養(yǎng)的細胞0.5g，加入初始pH為5.5的發(fā)酵培養(yǎng)基(水100ml，葡萄糖 5g，KH2PO4 0.4g, MgSO4 0.lg, CaCl2 0.005g，硝酸鈉 15g/100ml、Triton X-1003g/100ml)中培養(yǎng)4天后，分析胞外發(fā)酵液410、470和510nm處紅曲色素的吸光度分別為55,40和53吸光度單位；胞內(nèi)色素經(jīng)乙醇溶液提取后410、470和510nm處的吸光度分別為
15、8和12吸光度單位。發(fā)酵最終pH為6.2，胞內(nèi)外桔霉素含量經(jīng)薄層層析分析在細胞內(nèi)外明顯存在桔霉素，桔霉素更傾向于分配在胞外。薄層層析表明紅曲色素主要成分是紅曲紅色素。進一步在70度水浴中濁點萃取胞外發(fā)酵液，表面活性劑濃相中410、470和510nm處紅曲色素的吸光度分別為108、80和110吸光度單位；表面活性劑稀相中410、470和510nm處的吸光度分別為5、2和5吸光度單位。實施效果:本實施例產(chǎn)品經(jīng)薄層層析分析結(jié)果可得:薄層層析分析能在表面活性劑稀相能明顯檢測到桔霉素的存在，在表面活性劑濃相幾乎檢測不到。實施例4本實施例涉及一種萃取發(fā)酵和調(diào)控pH制備紅曲色素的方法，所述方法包括如下步驟: 步驟I，紅曲霉菌在種子培養(yǎng)基(IOOml，蛋白胨2g，酵母粉2g，葡萄糖2g)中進行培養(yǎng)32小時，得種子液，所述的紅曲霉菌為中國工業(yè)微生物菌株保藏中心提供(Monascusanka, CICC5013)；步驟2，將所述種子液接種到初始pH值為2.5，以谷氨酸鈉為氮源的發(fā)酵培養(yǎng)液中，進行發(fā)酵培養(yǎng)5天后，調(diào)節(jié)發(fā)酵培養(yǎng)液的pH值，離心，得紅曲霉菌濕細胞；取紅曲霉菌濕細胞預處理，釋放胞內(nèi)產(chǎn)物，檢測發(fā)酵液pH值、細胞內(nèi)外的色素濃度、細胞內(nèi)外的桔霉素含量；其中，所述預處理具體為:取0.5g濕細胞在等體積的發(fā)酵液70% (V/V)的乙醇(pH=2)溶液中浸泡I小時；分析胞外發(fā)酵液410、470和510nm處紅曲色素的吸光度分別為1、0.3和0.8吸光度單位；胞內(nèi)色素經(jīng)乙醇溶液提取后410、470和510nm處的吸光度分別為30、45和12吸光
度單位。發(fā)酵液最終pH為2.5，胞內(nèi)外桔霉素含量經(jīng)薄層層析分析表明基本不含桔霉素。薄層層析表明紅曲色素主要成分是紅曲橙色素。步驟3，將發(fā)酵培養(yǎng)的細胞0.5g，加入初始pH為3.5的發(fā)酵培養(yǎng)基(水100ml，葡萄糖 5g，KH2PO4 0.4g, MgSO4 0.lg, CaCl2 0.005g，硝酸鈉 15g/100ml、Triton X-1003g/100ml)中培養(yǎng)4天后，分析胞外發(fā)酵液410、470和510nm處紅曲色素的吸光度分別為53,40和50吸光度單位；胞內(nèi)色素經(jīng)乙醇溶液提取后410、470和510nm處的吸光度分別為
14、9和12吸光度單位。發(fā)酵最終pH為6.2，胞內(nèi)外桔霉素含量經(jīng)薄層層析分析在細胞內(nèi)外明顯存在桔霉素，桔霉素更傾向于分配在胞外。薄層層析表明紅曲色素主要成分是紅曲紅色素。進一步在70度水浴中濁點萃取胞外發(fā)酵液，表面活性劑濃相中410、470和510nm處紅曲色素的吸光度分別為100、80和108吸光度單位；表面活性劑稀相中410、470和510nm處的吸光度分別為5、2和5吸光度單位。實施效果:本實施例產(chǎn)品經(jīng)薄層層析分析結(jié)果可得:薄層層析分析能在表面活性劑稀相能明顯檢測到桔霉素的存在，在表面活性劑濃相幾乎檢測不到。實施例5本實施例涉及一種萃取發(fā)酵和調(diào)控pH制備紅曲色素的方法，所述方法包括如下步驟:步驟I，紅曲霉菌在種子培養(yǎng)基(IOOml，蛋白胨2g，酵母粉2g，葡萄糖2g)中進行培養(yǎng)32小時，得種子液，所述的紅曲霉菌為中國工業(yè)微生物菌株保藏中心提供(Monascusanka, CICC5013)；步驟2，將所述種子液接種到初始pH值為6，以谷氨酸鈉為氮源的發(fā)酵培養(yǎng)液中，進行發(fā)酵培養(yǎng)5天后，調(diào)節(jié)發(fā)酵培養(yǎng)液的pH值，離心，得紅曲霉菌濕細胞；取紅曲霉菌濕細胞預處理，釋放胞內(nèi)產(chǎn)物，檢測發(fā)酵液pH值、細胞內(nèi)外的色素濃度、細胞內(nèi)外的桔霉素含量；其中，所述預處理具體為:取0.5g濕細胞在等體積的發(fā)酵液70% (V/V)的乙醇(pH=2)溶液中浸泡I小時；分析胞外發(fā)酵液410、470和510nm處紅曲色素的吸光度分別為5、3和5吸光度單位；胞內(nèi)色素經(jīng)乙醇溶液提取后410、470和510nm處的吸光度分別為20、32和18吸光度單
位?！ぐl(fā)酵液最終pH為4，胞內(nèi)外桔霉素含量經(jīng)薄層層析分析表明含量高，在胞內(nèi)外都有明顯分配，更傾向于分配在胞外發(fā)酵液。薄層層析表明紅曲色素主要成分是紅曲橙色素。步驟3，將發(fā)酵培養(yǎng)的細胞0.5g，加入初始pH為5的發(fā)酵培養(yǎng)基(水100ml，葡萄糖 5g, KH2PO4 0.4g, MgSO4 0.lg, CaCl2 0.005g，谷氨酸鈉 15g/100ml、Triton X-1003g/100ml)中培養(yǎng)3天后，分析胞外發(fā)酵液410、470和510nm處紅曲色素的吸光度分別為50,35和50吸光度單位；胞內(nèi)色素經(jīng)乙醇溶液提取后410、470和510nm處的吸光度分別為
15、10和14吸光度單位。發(fā)酵最終pH為6.2，胞內(nèi)外桔霉素含量經(jīng)薄層層析分析在細胞內(nèi)外明顯存在桔霉素，桔霉素更傾向于分配在胞外。薄層層析表明紅曲色素主要成分是紅曲紅色素衍生物。進一步在70度水浴中濁點萃取胞外發(fā)酵液，表面活性劑濃相中410、470和510nm處紅曲色素的吸光度分別為90、75和98吸光度單位；表面活性劑稀相中410、470和510nm處的吸光度分別為15、12和13吸光度單位。實施效果:本實施例產(chǎn)品經(jīng)薄層層析分析結(jié)果可得:薄層層析分析能在表面活性劑稀相能明顯檢測到桔霉素的存在，在表面活性劑濃相幾乎檢測不到。實施例6本實施例涉及一種萃取發(fā)酵和調(diào)控pH制備紅曲色素的方法，所述方法包括如下步驟:步驟I，紅曲霉菌在種子培養(yǎng)基(IOOml，蛋白胨2g，酵母粉2g，葡萄糖2g)中進行培養(yǎng)32小時，得種子液，所述的紅曲霉菌為中國工業(yè)微生物菌株保藏中心提供(Monascusanka, CICC5013)；
步驟2，將所述種子液接種到初始pH值為3.5，以谷氨酸鈉為氮源的發(fā)酵培養(yǎng)液中，進行發(fā)酵培養(yǎng)6天后，調(diào)節(jié)發(fā)酵培養(yǎng)液的pH值，離心，得紅曲霉菌濕細胞；取紅曲霉菌濕細胞預處理，釋放胞內(nèi)產(chǎn)物，檢測發(fā)酵液pH值、細胞內(nèi)外的色素濃度、細胞內(nèi)外的桔霉素含量；其中，所述預處理具體為:取0.5g濕細胞在等體積的發(fā)酵液70% (V/V)的乙醇(pH=2)溶液中浸泡I小時；分析胞外發(fā)酵液410、470和510nm處紅曲色素的吸光度分別為5、2.5和5吸光度單位；胞內(nèi)色素經(jīng)乙醇溶液提取后410、470和510nm處的吸光度分別為21、33和17吸光度單位。發(fā)酵液最終pH為3.7，胞內(nèi)外桔霉素含量經(jīng)薄層層析分析表明含量高，在胞內(nèi)外都有明顯分配，更傾向于分配在胞外發(fā)酵液。薄層層析表明紅曲色素主要成分是紅曲橙色素。步驟3，將發(fā)酵培養(yǎng)的細胞0.5g，加入初始pH為3的發(fā)酵培養(yǎng)基(水100ml，葡萄糖 5g, KH2PO4 0.4g, MgSO4 0.lg, CaCl2 0.005g，谷氨酸鈉 15g/100ml、Triton X-1003g/100ml)中培養(yǎng)3天后，分析胞外發(fā)酵液410、470和510nm處紅曲色素的吸光度分別為60,35和20吸光度單位；胞內(nèi)色素經(jīng)乙醇溶液提取后410、470和510nm處的吸光度分別為25,10和8吸光度單位。發(fā)酵最終pH為3.5，胞內(nèi)外桔霉素含量經(jīng)薄層層析分析在細胞內(nèi)外存在少量桔霉素，桔霉素更傾向于分配在胞外。薄層層析表明紅曲色素主要成分是紅曲橙色素。進一步在70度水浴中濁點萃取胞外發(fā)酵液，表面活性劑濃相中410、470和510nm處紅曲色素的吸光度分別為110、75和35吸光度單位；表面活性劑稀相中410、470和510nm處的吸光度分別為5、2和I吸光度單位。實施效果:本實施例產(chǎn)品經(jīng)薄層層析分析結(jié)果可得:薄層層析分析能在表面活性劑稀相能明顯檢測到桔霉素的存在，在表面活性劑濃相幾乎檢測不到。實施例7本實施例涉及一種萃取發(fā)酵和調(diào)控pH制備紅曲色素的方法，所述方法包括如下步驟:步驟I，紅曲霉菌在種子培養(yǎng)基(IOOml，蛋白胨2g，酵母粉2g，葡萄糖2g)中進行培養(yǎng)32小時，得種子液，所述的紅曲霉菌為中國工業(yè)微生物菌株保藏中心提供(Monascusanka, CICC5013)；步驟2，將所述種子液接種到初始pH值為2.5，以谷氨酸鈉為氮源的發(fā)酵培養(yǎng)液中，進行發(fā)酵培養(yǎng)6天后，調(diào)節(jié)發(fā)酵培養(yǎng)液的pH值，離心，得紅曲霉菌濕細胞；取紅曲霉菌濕細胞預處理，釋放胞內(nèi)產(chǎn)物，檢測發(fā)酵液pH值、細胞內(nèi)外的色素濃度、細胞內(nèi)外的桔霉素含量；其中，所述預處理具體為:取0.5g濕細胞在等體積的發(fā)酵液70% (V/V)的乙醇(pH=2)溶液中浸泡I小時；分析胞外發(fā)酵液410、470和510nm處紅曲色素的吸光度分別為3、1和I吸光度單位；胞內(nèi)色素經(jīng)乙醇溶液提取后410、470和510nm處的吸光度分別為24、38和18吸光度單位。發(fā)酵液最 終pH為2.8，胞內(nèi)外桔霉素含量經(jīng)薄層層析分析表明含量明顯將低，在胞內(nèi)外都有明顯分配。薄層層析表明紅曲色素主要成分是紅曲橙色素。步驟3，將發(fā)酵培養(yǎng)的細胞0.5g，加入初始pH為5的發(fā)酵培養(yǎng)基(水100ml，葡萄糖 5g, KH2PO4 0.4g, MgSO4 0.lg, CaCl2 0.005g，大米粉 5g/100ml、Triton X-1003g/100ml)中培養(yǎng)3天后，分析胞外發(fā)酵液410、470和510nm處紅曲色素的吸光度分別為54,40和51吸光度單位；胞內(nèi)色素經(jīng)乙醇溶液提取后410、470和510nm處的吸光度分別為
16、9和12吸光度單位。發(fā)酵最終pH為6.2，胞內(nèi)外桔霉素含量經(jīng)薄層層析分析在細胞內(nèi)外明顯存在桔霉素，桔霉素更傾向于分配在胞外。薄層層析表明紅曲色素主要成分是紅曲紅色素。進一步在70度水浴中濁點萃取胞外發(fā)酵液，表面活性劑濃相中410、470和510nm處紅曲色素的吸光度分別為100、80和108吸光度單位；表面活性劑稀相中410、470和510nm處的吸光度分別為5、2和5吸光度單位。實施效果:本實施例產(chǎn)品經(jīng)薄層層析分析結(jié)果可得:薄層層析分析能在表面活性劑稀相能明顯檢測到桔霉素的存在，在表面活性劑濃相幾乎檢測不到。實施例8本實施例涉及一種萃取發(fā)酵和調(diào)控pH制備紅曲色素的方法，所述方法包括如下步驟:步驟I，紅曲霉菌在種子培養(yǎng)基(IOOml，蛋白胨2g，酵母粉2g，葡萄糖2g)中進行培養(yǎng)32小時，得種子液，所述的紅曲霉菌為中國工業(yè)微生物菌株保藏中心提供(Monascusanka, CICC5013)；步驟2，將所述種子液接種到初始pH值為6，以谷氨酸鈉為氮源的發(fā)酵培養(yǎng)液中，進行發(fā)酵培養(yǎng)6天后，調(diào)節(jié)發(fā)酵培養(yǎng)液的pH值，離心，得紅曲霉菌濕細胞；取紅曲霉菌濕細胞預處理，釋放胞內(nèi)產(chǎn)物，檢測發(fā)酵液pH值、細胞內(nèi)外的色素濃度、細胞內(nèi)外的桔霉素含量；其中，所述預處理具體為:取0.5g濕細胞在等體積的發(fā)酵液70% (V/V)的乙醇(pH=2)溶液中浸泡I小時；分析胞外發(fā)酵液 410、470和510nm處紅曲色素的吸光度分別為5、2和6吸光度單位；胞內(nèi)色素經(jīng)乙醇溶液提取后410、470和510nm處的吸光度分別為21、30和24吸光度單位。發(fā)酵液最終pH為4.3，胞內(nèi)外桔霉素含量經(jīng)薄層層析分析表明含量高，在胞內(nèi)外都有明顯分配，更傾向于分配在胞外發(fā)酵液。薄層層析表明紅曲色素主要成分是紅曲橙色素。步驟3，將發(fā)酵培養(yǎng)的細胞0.5g，加入初始pH為5的發(fā)酵培養(yǎng)基(水100ml，葡萄糖 5g, KH2PO4 0.4g, MgSO4 0.lg, CaCl2 0.005g，大米粉 5g/100ml、Triton X-1003g/100ml)中培養(yǎng)3天后，分析胞外發(fā)酵液410、470和510nm處紅曲色素的吸光度分別為54,40和51吸光度單位；胞內(nèi)色素經(jīng)乙醇溶液提取后410、470和510nm處的吸光度分別為
16、9和12吸光度單位。發(fā)酵最終pH為6.2，胞內(nèi)外桔霉素含量經(jīng)薄層層析分析在細胞內(nèi)外明顯存在桔霉素，桔霉素更傾向于分配在胞外。薄層層析表明紅曲色素主要成分是紅曲紅色素。進一步在70度水浴中濁點萃取胞外發(fā)酵液，表面活性劑濃相中410、470和510nm處紅曲色素的吸光度分別為100、80和108吸光度單位；表面活性劑稀相中410、470和510nm處的吸光度分別為5、2和5吸光度單位。實施效果:本實施例產(chǎn)品經(jīng)薄層層析分析結(jié)果可得:薄層層析分析能在表面活性劑稀相能明顯檢測到桔霉素的存在，在表面活性劑濃相幾乎檢測不到。實施例9
本實施例涉及一種萃取發(fā)酵和調(diào)控pH制備紅曲色素的方法，所述方法包括如下步驟:步驟I，紅曲霉菌在種子培養(yǎng)基(IOOml，蛋白胨2g，酵母粉2g，葡萄糖2g)中進行培養(yǎng)32小時，得種子液，所述的紅曲霉菌為中國工業(yè)微生物菌株保藏中心提供(Monascusanka, CICC5013)；步驟2，將所述種子液接種到初始pH值為4，以谷氨酸鈉為氮源的發(fā)酵培養(yǎng)液中，進行發(fā)酵培養(yǎng)6天后，調(diào)節(jié)發(fā)酵培養(yǎng)液的pH值，離心，得紅曲霉菌濕細胞；取紅曲霉菌濕細胞預處理，釋放胞內(nèi)產(chǎn)物，檢測發(fā)酵液pH、細胞內(nèi)外的色素濃度、細胞內(nèi)外的桔霉素含量；其中，所述預處理具體為:取0.5g濕細胞在等體積的發(fā)酵液70% (V/V)的乙醇(pH=2)溶液中浸泡I小時；分析胞外發(fā)酵液410、470和510nm處紅曲色素的吸光度分別為4、1.5和0.8吸光度單位；胞內(nèi)色素經(jīng)乙醇溶液提取后410、470和510nm處的吸光度分別為45、35和30吸光
度單位。發(fā)酵液最終pH為2.3，胞內(nèi)外桔霉素含量經(jīng)薄層層析分析表明基本不含桔霉素。薄層層析表明紅曲色素主要成分是紅曲橙色素。步驟3，將發(fā)酵培養(yǎng)的細胞0.5g，加入初始pH為4的發(fā)酵培養(yǎng)基(水100ml，葡萄糖 5g, KH2PO4 0.4g, MgSO4 0.lg, CaCl2 0.005g，玉米粉 15g/100ml、Triton X-1003g/100ml)中培養(yǎng)3天后，分析胞外發(fā)酵液410、470和510nm處紅曲色素的吸光度分別為35、15和10吸光度單位；胞內(nèi)色素經(jīng)乙醇溶液提取后410、470和510nm處的吸光度分別為
15、10和7吸光度單位。發(fā)酵最終pH為2.2，胞內(nèi)外桔霉素含量經(jīng)薄層層析分析表明基本不含桔霉素。薄層層析表明紅曲色素主要成分是紅曲黃色素。進一步在70度水浴中濁點萃取胞外發(fā)酵液，表面活性劑濃相中410、470和510nm處紅曲色素的吸光度分別為80、30和10吸光度單位；表面活性劑稀相中410、470和510nm處的吸光度分別為15、8和7吸光度單位。實施效果:本實施例產(chǎn)品經(jīng)薄層層析分析結(jié)果可得:薄層層析分析能在表面活性劑稀相能檢測到桔霉素的存在，在表面活性劑濃相檢測不到。實施例10本實施例涉及一種萃取發(fā)酵和調(diào)控pH制備紅曲色素的方法，所述方法包括如下步驟:步驟I，紅曲霉菌在種子培養(yǎng)基(IOOml，蛋白胨2g，酵母粉2g，葡萄糖2g)中進行培養(yǎng)32小時，得種子液，所述的紅曲霉菌為中國工業(yè)微生物菌株保藏中心提供(Monascusanka, CICC5013)；步驟2，將所述種子液接種到初始pH值為4，以谷氨酸鈉為氮源的發(fā)酵培養(yǎng)液中，進行發(fā)酵培養(yǎng)6天后，調(diào)節(jié)發(fā)酵培養(yǎng)液的pH值，離心，得紅曲霉菌濕細胞；取紅曲霉菌濕細胞預處理，釋放胞內(nèi)產(chǎn)物，檢測發(fā)酵液PH值、細胞內(nèi)外的色素濃度、細胞內(nèi)外的桔霉素含量；其中，所述預處理具體為:取0.5g濕細胞在等體積的發(fā)酵液70% (V/V)的乙醇(pH=2)溶液中浸泡I小時；

分析胞外發(fā)酵液410、470和510nm處紅曲色素的吸光度分別為4、1.5和0.8吸光度單位；胞內(nèi)色素經(jīng)乙醇溶液提取后410、470和510nm處的吸光度分別為45、35和30吸光度單位。發(fā)酵液最終pH為6.3，胞內(nèi)外桔霉素含量經(jīng)薄層層析分析表明基本不含桔霉素。薄層層析表明紅曲色素主要成分是紅曲橙色素。步驟3，將發(fā)酵培養(yǎng)的細胞0.5g，加入初始pH為4的發(fā)酵培養(yǎng)基(水100ml，葡萄糖 5g, KH2PO4 0.4g, MgSO4 0.lg, CaCl2 0.005g，黃豆粉 15g/100ml、Triton X-1003g/100ml)中培養(yǎng)3天后，分析胞外發(fā)酵液410、470和510nm處紅曲色素的吸光度分別為45,25和15吸光度單位；胞內(nèi)色素經(jīng)乙醇溶液提取后410、470和510nm處的吸光度分別為18、13和6吸光度單位。發(fā)酵最終pH為2.2，胞內(nèi)外桔霉素含量經(jīng)薄層層析分析表明基本不含桔霉素。薄層層析表明紅曲色素主要成分是紅曲黃色素。進一步在70度水浴中濁點萃取胞外發(fā)酵液，表面活性劑濃相中410、470和510nm處紅曲色素的吸光度分別為90、35和15吸光度單位；表面活性劑稀相中410、470和510nm處的吸光度分別為15、8和7吸光度單位。實施效果:本實施例產(chǎn)品經(jīng)薄層層析分析結(jié)果可得:薄層層析分析能在表面活性劑稀相能檢測到桔霉素的存在，在表面活性劑濃相檢測不到。本發(fā)明通過萃取發(fā)酵技術(shù)與調(diào)控pH技術(shù)相結(jié)合，實現(xiàn)了微生物發(fā)酵生產(chǎn)桔霉素含量低且紅曲色素組分相對單一的水溶性/疏水性紅曲紅色素、疏水性紅曲橙色素、疏水性紅曲黃色素等系列紅曲色素產(chǎn)品。采用萃取發(fā)酵技術(shù)，微生物在非離子表面活性劑膠束溶液中發(fā)酵培養(yǎng)能將胞內(nèi)紅曲色素釋放到胞外表面活性劑膠束溶液，且在控制發(fā)酵液低pH條件下產(chǎn)生桔霉素含量低的胞外紅曲黃色素。升高溫度可以實現(xiàn)濁點萃取，濁點萃取能使桔霉素分配在表面活性劑稀相而紅曲色素分配在表面活性劑濃相。在低pH萃取發(fā)酵時，形成桔霉素含量低的胞外黃色素發(fā)酵液，濁點萃取能進一步去除其中的桔霉素而獲得桔霉素含量低的疏水性紅曲黃色素。在高PH萃取發(fā)酵時，形成桔霉素含量高的水溶性/疏水性紅曲紅色素發(fā)酵液，濁點萃取也能去除其中的桔霉素而獲得桔霉素含量低的水溶性/疏水性紅曲紅色素。以上是本發(fā)明·優(yōu)選實施例的描述，應當理解的是，本發(fā)明的實施并不局限于上述的情形，本發(fā)明特別適合于細胞內(nèi)產(chǎn)物的發(fā)酵過程，如細胞內(nèi)微生物酶的生產(chǎn)、細胞內(nèi)有機小分子物質(zhì)的生產(chǎn)以及細胞內(nèi)油脂類化合物的生產(chǎn)等，可以有效地解除胞內(nèi)產(chǎn)物抑制，提高微生物發(fā)酵產(chǎn)物的濃度和調(diào)節(jié)微生物發(fā)酵次級代謝產(chǎn)物的組成。從而提高了微生物發(fā)酵的體積產(chǎn)率和提高了胞內(nèi)產(chǎn)物發(fā)酵、產(chǎn)物釋放等過程的效率。以上對本發(fā)明的具體實施例進行了描述。需要理解的是，本發(fā)明并不局限于上述特定實施方式，本領(lǐng)域技術(shù)人員可以在權(quán)利要求的范圍內(nèi)做出各種變形或修改，這并不影響本發(fā)明的實質(zhì)內(nèi)容。
權(quán)利要求
1.一種萃取發(fā)酵和調(diào)控pH制備紅曲色素的方法，其特征在于，所述方法通過萃取發(fā)酵技術(shù)與調(diào)控PH技術(shù)相結(jié)合，制備桔霉素含量低且紅曲色素組分相對單一的紅曲色素；所述方法包括如下步驟: 步驟1，紅曲霉菌在種子培養(yǎng)基中進行培養(yǎng)，得種子液； 步驟2，將所述種子液接種到含氮源的發(fā)酵培養(yǎng)液中，進行發(fā)酵培養(yǎng)，調(diào)節(jié)發(fā)酵培養(yǎng)液的pH值，離心，得紅曲霉菌濕細胞； 步驟3，將所述紅曲霉菌濕細胞接種到含非離子表面活性劑的發(fā)酵培養(yǎng)基中，進行培養(yǎng)，調(diào)節(jié)發(fā)酵培養(yǎng)基的PH值，濁點萃取，分離，即可。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的萃取發(fā)酵和調(diào)控pH制備紅曲色素的方法，其特征在于，步驟2中，所述發(fā)酵培養(yǎng)液的最終pH值為2.5以下時，微生物發(fā)酵產(chǎn)生紅曲橙色素，且桔霉素含量低。
3.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的萃取發(fā)酵和調(diào)控pH制備紅曲色素的方法，其特征在于，步驟2中，所述發(fā)酵培養(yǎng)液的初始pH值為2.5 6，最終pH值為2.3 7。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的萃取發(fā)酵和調(diào)控PH制備紅曲色素的方法，其特征在于，步驟3中，所述發(fā)酵培養(yǎng)基的最終pH值為2.5以下時，微生物發(fā)酵產(chǎn)生紅曲黃色素，且桔霉素含量低。
5.根據(jù)權(quán)利要求1或4所述的萃取發(fā)酵和調(diào)控pH制備紅曲色素的方法，其特征在于，步驟3中，所述發(fā)酵培養(yǎng)基的初始pH值為3 5，最終pH值為2.2 6.2。
6.根據(jù)權(quán)利要求1或4所述的萃取發(fā)酵和調(diào)控pH制備紅曲色素的方法，其特征在于，步驟3中，所述培養(yǎng)是指 在溫度為30°C，200rpm的搖床中進行，培養(yǎng)時間為3 4天；所述分離是指在70°C的水浴中靜置2小時。
7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的萃取發(fā)酵和調(diào)控pH制備紅曲色素的方法，其特征在于，步驟3中，所述發(fā)酵培養(yǎng)基中由如下含量的各組分組成:水100ml，葡萄糖5g，KH2PO4 0.4g，MgSO4 0.lg，CaCl2 0.005g，非離子表面活性劑 I 4g/100ml，氮源 5g/100 15g/100ml。
8.根據(jù)權(quán)利要求1或7所述的萃取發(fā)酵和調(diào)控pH制備紅曲色素的方法，其特征在于，所述氮源為大米粉、玉米粉、黃豆粉、谷氨酸鈉、硫酸銨、氯化銨、硝酸鈉。
9.根據(jù)權(quán)利要求1或7所述的萃取發(fā)酵和調(diào)控pH制備紅曲色素的方法，其特征在于，所述非離子表面活性劑為Triton X-100。
全文摘要
本發(fā)明提供了一種萃取發(fā)酵和調(diào)控pH制備紅曲色素的方法，包括如下步驟步驟1，紅曲霉菌在種子培養(yǎng)基中進行培養(yǎng)，得種子液；步驟2，將所述種子液接種到含氮源的發(fā)酵培養(yǎng)液中，進行發(fā)酵培養(yǎng)，調(diào)節(jié)發(fā)酵培養(yǎng)液的pH值，離心，得紅曲霉菌濕細胞；步驟3，將所述紅曲霉菌濕細胞接種到含非離子表面活性劑的發(fā)酵培養(yǎng)基中，進行培養(yǎng)，調(diào)節(jié)發(fā)酵培養(yǎng)基的pH值，濁點萃取，分離，即可。本發(fā)明采用調(diào)節(jié)發(fā)酵的pH值，控制紅曲色素和桔霉素的形成，同時應用萃取發(fā)酵和濁點萃取調(diào)節(jié)色素組成去除副產(chǎn)物桔霉素，制得桔霉素含量較低的紅曲紅色素。本發(fā)明方法簡單，容易實現(xiàn)，產(chǎn)率高，成本低，重復性強，環(huán)保，有較好的應用前景。
文檔編號C12P1/02GK103224958SQ20131012351
公開日2013年7月31日 申請日期2013年4月10日 優(yōu)先權(quán)日2013年4月10日
發(fā)明者王志龍, 康碧玉 申請人:上海交通大學