專利名稱：一種煙草赤星病菌孢子懸浮液及其應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于農(nóng)業(yè)微生物技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種煙草赤星病菌孢子懸浮液及其應(yīng)用。
背景技術(shù)：
煙草赤星病(Tobacco Brown Spot)是煙葉成熟期普遍發(fā)生的葉部病害，其病原為鏈格孢菌(Altorimriei alternata)。目前,在實(shí)驗(yàn)室一般采用平板培養(yǎng)菌絲、自然產(chǎn)孢后制備煙草赤星病菌孢子懸浮液，但其菌絲培養(yǎng)時(shí)間通常在10天以上才能長滿平板，菌絲老熟、產(chǎn)孢量足以制備孢子懸浮液還需要繼續(xù)培養(yǎng)5 10天，由于其培養(yǎng)時(shí)間長，容易造成培養(yǎng)基干燥，培養(yǎng)物污染，而且不經(jīng)過誘導(dǎo)菌絲產(chǎn)孢效率低。盡管有個(gè)別研究通過紫外光誘導(dǎo)可加快產(chǎn)孢，但紫外劑量與時(shí)間難以控制，容易造成變異，也容易導(dǎo)致培養(yǎng)物污染。因此，如何更為有效的制備煙草赤星病菌孢子懸浮液是一個(gè)亟待解決的技術(shù)問題。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的第一目的在于提供一種培養(yǎng)快速、產(chǎn)孢量大、質(zhì)量穩(wěn)定的煙草赤星病菌孢子懸浮液，第二目的在于提供該煙草赤星病菌孢子懸浮液的應(yīng)用。除非另有說明，本發(fā)明中所采用的百分?jǐn)?shù)均為質(zhì)量百分?jǐn)?shù)。本發(fā)明的第一目的是這樣實(shí)現(xiàn)的，所述的煙草赤星病菌孢子懸浮液是按以下步驟制備的:
A、病菌分離:從發(fā)病 田塊中采集有典型癥狀的煙草病葉，經(jīng)過分離、純化、致病力測定篩選出煙草赤星病菌菌種；
B、病菌培養(yǎng):將菌種產(chǎn)生孢子的菌絲點(diǎn)接到培養(yǎng)基平板上，每個(gè)平板接種3 4點(diǎn)，在18h黑暗6h光照交替條件下，于27 29°C恒溫培養(yǎng)4飛(1，選擇菌絲呈黑褐色、菌絲較致密的培養(yǎng)物用于誘導(dǎo)產(chǎn)孢；
C、誘導(dǎo)產(chǎn)孢:將符合誘導(dǎo)產(chǎn)孢條件的培養(yǎng)基平板密封后置于2 4°C的冰箱內(nèi)黑暗誘導(dǎo)培養(yǎng)2 3d，然后轉(zhuǎn)入培養(yǎng)箱，黑暗、梯度降溫培養(yǎng)，歷時(shí)2 3d由20°C降溫至15°C ；
D、制備孢子懸浮液:誘導(dǎo)培養(yǎng)完成后，使用促進(jìn)孢子萌發(fā)溶液將培養(yǎng)基平板上的孢子和菌絲洗下，組織搗碎f2min，使孢子與菌絲分離、孢子從孢子鏈斷開成單孢，然后過濾除去菌絲，濾液即為赤星病菌孢子懸浮液。本發(fā)明的第二目的是這樣實(shí)現(xiàn)的，所述的煙草赤星病菌孢子懸浮液在煙草品種抗感赤星病測定中的應(yīng)用；或所述的煙草赤星病菌孢子懸浮液在防治煙草赤星病藥劑、生防菌或天然產(chǎn)物篩選中的應(yīng)用；或所述的煙草赤星病菌孢子懸浮液在研究煙草赤星病菌的土壤生態(tài)及病菌侵染循環(huán)中的應(yīng)用。本發(fā)明采用多點(diǎn)接種方式，能夠較快長滿平板，比常規(guī)中央平板接種方式要縮短3 4天；通常病菌在培養(yǎng)基平板上由于營養(yǎng)耗盡、菌絲老熟而激發(fā)和促進(jìn)自然產(chǎn)孢，產(chǎn)孢時(shí)間比較分散，比本發(fā)明產(chǎn)孢時(shí)間還要延長2 3天以上。本發(fā)明縮短培養(yǎng)時(shí)間達(dá)5 7天，培養(yǎng)周期大大縮短。本發(fā)明利用低溫高濕刺激、梯度程序降溫、黑暗誘導(dǎo)等方法的綜合作用促進(jìn)煙草赤星病菌快速、大量的產(chǎn)生孢子，病菌在前期適溫、短時(shí)間光照(相當(dāng)于短日照)培養(yǎng)時(shí)，菌絲生長速度快；在2 4°C黑暗冰箱中造成低溫高濕刺激，20°C到15°C梯度程序降溫、黑暗誘導(dǎo)直接促進(jìn)了老熟菌絲大量產(chǎn)生孢子；經(jīng)測算，同樣大小的培養(yǎng)基平板，利用本發(fā)明方法產(chǎn)孢量為常規(guī)產(chǎn)孢量的5(Γ100倍。本發(fā)明由于接種量大、病菌前期培養(yǎng)菌絲生長快，誘導(dǎo)產(chǎn)孢時(shí)為密封狀態(tài)，大大降低了培養(yǎng)物被污染的機(jī)會，從而保證了培養(yǎng)質(zhì)量；培養(yǎng)菌絲、誘導(dǎo)產(chǎn)孢的時(shí)間相對固定、集中，能夠達(dá)到同步生長、同步產(chǎn)孢，同一病菌同批次、不同批次間制備的孢子量差異小，所以質(zhì)量更為穩(wěn)定。
具體實(shí)施例方式下面結(jié)合實(shí)施例對本發(fā)明作進(jìn)一步的說明，但不以任何方式對本發(fā)明加以限制，基于本發(fā)明教導(dǎo)所作的任何變更或改進(jìn)，均屬于本發(fā)明的保護(hù)范圍。本發(fā)明所述煙草赤星病菌孢子懸浮液是按以下步驟制備的:
Α、病菌分離:從發(fā)病田塊中采集有典型癥狀的煙草病葉，經(jīng)過分離、純化、致病力測定篩選出煙草赤星病菌菌種；
B、病菌培養(yǎng):將菌種產(chǎn)生孢子的菌絲點(diǎn)接到培養(yǎng)基平板上，每個(gè)平板接種3 4點(diǎn)，在18h黑暗6h光照交替條件下，于27 29°C恒溫培養(yǎng)4飛(1，選擇菌絲呈黑褐色、菌絲較致密的培養(yǎng)物用于誘導(dǎo)產(chǎn)孢；
C、誘導(dǎo)產(chǎn)孢:將符合誘導(dǎo)產(chǎn)孢條件的培養(yǎng)基平板密封后置于2 4°C的冰箱內(nèi)黑暗誘導(dǎo)培養(yǎng)2 3d，然后轉(zhuǎn)入培養(yǎng)箱，黑暗、梯度降溫培養(yǎng)，歷時(shí)2 3d由20°C降溫至15°C (降溫速率約每9.6 14.4h降溫1°C);
D、制備孢子懸浮液:誘導(dǎo)培養(yǎng)完成后，使用促進(jìn)孢子萌發(fā)溶液將培養(yǎng)基平板上的孢子和菌絲洗下，組織搗碎f2min，使孢子與菌絲分`離、孢子從孢子鏈斷開成單孢，然后過濾除去菌絲，濾液即為赤星病菌孢子懸浮液。作為優(yōu)選實(shí)施方式:
B步驟所述的培養(yǎng)基為燕麥培養(yǎng)基(0A)、馬鈴薯葡萄糖培養(yǎng)基(PDA)、馬鈴薯蔗糖培養(yǎng)基(PSA)、查彼培養(yǎng)基(Czapek’ s medium)或理查培養(yǎng)基(Richard’ s medium)。D步驟所述的促進(jìn)孢子萌發(fā)的溶液為f 2%的滅菌葡萄糖、果糖、蔗糖、蛋白胨溶液中一種或一種以上組合?；蛘撸珼步驟所述的促進(jìn)孢子萌發(fā)溶液為2 5%感病品種煙草成熟的新鮮煙葉組織搗碎液，所述的組織搗碎液是經(jīng)過濾滅菌的。所述的感病品種煙草為K326、云煙85或G140。D步驟所述的組織搗碎采用的是研缽、搗碎機(jī)或研磨機(jī)。D步驟所述的過濾為脫脂棉過濾或4飛層脫脂紗布過濾。本發(fā)明所述的煙草赤星病菌孢子懸浮液在煙草品種抗感赤星病測定中的應(yīng)用，是將煙草赤星病菌孢子懸浮液調(diào)整濃度、加入分散劑作為煙草赤星病的人工接種物?；蛩龅臒煵莩嘈遣【咦討腋∫涸诜乐螣煵莩嘈遣∷巹?、生防菌或天然產(chǎn)物篩選中的應(yīng)用，調(diào)整煙草赤星病菌孢子懸浮液濃度涂布平板即可?；蛩龅臒煵莩嘈遣【咦討腋∫涸谘芯繜煵莩嘈遣【耐寥郎鷳B(tài)及病菌侵染循環(huán)中的應(yīng)用，調(diào)整煙草赤星病菌孢子懸浮液濃度后，吸附于載體上，然后埋入或拌入土壤。本發(fā)明的工作原理:
本發(fā)明采用多點(diǎn)接種方式，加快了培養(yǎng)進(jìn)程，縮短培養(yǎng)周期。本發(fā)明利用低溫高濕刺激、梯度程序降溫、黑暗誘導(dǎo)等方法的綜合作用促進(jìn)煙草赤星病菌快速、大量的產(chǎn)生孢子，產(chǎn)孢量為常規(guī)產(chǎn)孢量的5(Γ100倍。本發(fā)明由于接種量大、病菌前期培養(yǎng)菌絲生長快，誘導(dǎo)產(chǎn)孢時(shí)為密封狀態(tài)，大大降低了培養(yǎng)物被污染的機(jī)會，從而保證了培養(yǎng)質(zhì)量；培養(yǎng)菌絲、誘導(dǎo)產(chǎn)孢的時(shí)間相對固定、集中，能夠達(dá)到同步生長、同步產(chǎn)孢，同一病菌同批次、不同批次間制備的孢子量差異小，所以質(zhì)量更為穩(wěn)定。實(shí)施例1
從發(fā)病田塊中采集有典型癥狀的煙草病葉，經(jīng)過分離、純化、致病力測定篩選出煙草赤星病菌菌種；將菌種產(chǎn)生孢子的菌絲點(diǎn)接到培養(yǎng)基平板上，每個(gè)平板接種3點(diǎn)，在18h黑暗6h光照交替條件下，于27°C恒溫培養(yǎng)4d，選擇菌絲呈黑褐色、菌絲較致密的培養(yǎng)物用于誘導(dǎo)產(chǎn)孢；將符合誘導(dǎo)產(chǎn)孢條件的培養(yǎng)基平板，在密封狀態(tài)下置于2°C的冰箱內(nèi)黑暗誘導(dǎo)培養(yǎng)2d，然轉(zhuǎn)入培養(yǎng)箱黑暗、梯度降溫培養(yǎng)，歷時(shí)2d由20°C降溫至15°C (降溫速率約每9.6h降溫1°C);誘導(dǎo)培養(yǎng)完成后，以1%的滅菌葡萄糖溶液作為促進(jìn)孢子萌發(fā)溶液，使用促進(jìn)孢子萌發(fā)溶液將培養(yǎng)基平板上的孢子和菌絲洗下，以研缽組織搗碎lmin，使孢子與菌絲分離、孢子從孢子鏈斷開成單孢，然后用脫脂棉過濾過濾除去菌絲，濾液即為赤星病菌孢子懸浮液。實(shí)施例2
從發(fā)病田塊中采集有典型癥狀的煙草病葉，經(jīng)過分離、純化、致病力測定篩選出煙草赤星病菌菌種；將菌種產(chǎn)生孢子的菌絲點(diǎn)接到培養(yǎng)基平板上，每個(gè)平板接種4點(diǎn)，在18h黑暗6h光照交替條件下，于29°C恒溫培養(yǎng)6d，選擇菌絲呈黑褐色、菌絲較致密的培養(yǎng)物用于誘導(dǎo)產(chǎn)孢；將符合誘導(dǎo)產(chǎn)孢條件的培養(yǎng)基平板，在密封狀態(tài)下置于4°C的冰箱內(nèi)黑暗誘導(dǎo)培養(yǎng)3d，然轉(zhuǎn)入培養(yǎng)箱黑暗、梯度降溫培養(yǎng)，歷時(shí)3d由20°C降溫至15°C(降溫速率約每14.4h降溫ΓΟ;誘導(dǎo)培養(yǎng)完成后，以2%的滅菌果糖、蔗糖溶液作為促進(jìn)孢子萌發(fā)溶液，使用促進(jìn)孢子萌發(fā)溶液將培養(yǎng)基平板上的孢子和菌絲洗下，以搗碎機(jī)組織搗碎2min，使孢子與菌絲分離、孢子從孢子鏈斷開成單孢，然后用6層脫脂紗布過濾除去菌絲，濾液即為赤星病菌孢子懸浮液。實(shí)施例3
從發(fā)病田塊中采集有典型癥狀的煙草病葉，經(jīng)過分離、純化、致病力測定篩選出煙草赤星病菌菌種；將菌種產(chǎn)生孢子的菌絲點(diǎn)接到培養(yǎng)基平板上，每個(gè)平板接種3點(diǎn)，在18h黑暗6h光照交替條件下，于28°C恒溫培養(yǎng)5d，選擇菌絲呈黑褐色、菌絲較致密的培養(yǎng)物用于誘導(dǎo)產(chǎn)孢；將符合誘導(dǎo)產(chǎn)孢條件的培養(yǎng)基平板，在密封狀態(tài)下置于3°C的冰箱內(nèi)黑暗誘導(dǎo)培養(yǎng)2.5d，然轉(zhuǎn)入培養(yǎng)箱黑暗、梯度降溫培養(yǎng)，歷時(shí)2.5d由20°C降溫至15°C (降溫速率約每12h降溫1°C);誘導(dǎo)培養(yǎng)完成后，以1.5%的滅菌蔗糖、蛋白胨混合溶液作為促進(jìn)孢子萌發(fā)溶液，使用促進(jìn)孢子萌發(fā)溶液將培養(yǎng)基平板上的孢子和菌絲洗下，以研磨機(jī)組織搗碎1.5min,使孢子與菌絲分離、孢子從孢子鏈斷開成單孢，然后用4層脫脂紗布過濾除去菌絲，濾液即為赤星病菌孢子懸浮液。 實(shí)施例4從發(fā)病田塊中采集有典型癥狀的煙草病葉，經(jīng)過分離、純化、致病力測定篩選出煙草赤星病菌菌種；將菌種產(chǎn)生孢子的菌絲點(diǎn)接到培養(yǎng)基平板上，每個(gè)平板接種4點(diǎn)，在18h黑暗6h光照交替條件下，于27°C恒溫培養(yǎng)4d，選擇菌絲呈黑褐色、菌絲較致密的培養(yǎng)物用于誘導(dǎo)產(chǎn)孢；將符合誘導(dǎo)產(chǎn)孢條件的培養(yǎng)基平板，在密封狀態(tài)下置于2°C的冰箱內(nèi)黑暗誘導(dǎo)培養(yǎng)3d，然轉(zhuǎn)入培養(yǎng)箱黑暗、梯度降溫培養(yǎng)，歷時(shí)2d由20°C降溫至15°C (降溫速率約每9.6h降溫1°C);誘導(dǎo)培養(yǎng)完成后，以經(jīng)過濾滅菌的3.5%感病品種煙草G140成熟的新鮮煙葉組織搗碎液作為促進(jìn)孢子萌發(fā)溶液，使用促進(jìn)孢子萌發(fā)溶液將培養(yǎng)基平板上的孢子和菌絲洗下，以研缽組織搗碎lmin，使孢子與菌絲分離、孢子從孢子鏈斷開成單孢，然后用5層脫脂紗布過濾除去菌絲，濾液即為赤星病菌孢子懸浮液。實(shí)施例5
從發(fā)病田塊中采集有典型癥狀的煙草病葉，經(jīng)過分離、純化、致病力測定篩選出煙草赤星病菌菌種；將菌種產(chǎn)生孢子的菌絲點(diǎn)接到培養(yǎng)基平板上，每個(gè)平板接種4點(diǎn)，在18h黑暗6h光照交替條件下，于29°C恒溫培養(yǎng)6d，選擇菌絲呈黑褐色、菌絲較致密的培養(yǎng)物用于誘導(dǎo)產(chǎn)孢；將符合誘導(dǎo)產(chǎn)孢條件的培養(yǎng)基平板，在密封狀態(tài)下置于4°C的冰箱內(nèi)黑暗誘導(dǎo)培養(yǎng)2d，然轉(zhuǎn)入培養(yǎng)箱黑暗、梯度降溫培養(yǎng)，歷時(shí)3d由20°C降溫至15°C(降溫速率約每14.4h降溫1°C);誘導(dǎo)培養(yǎng)完成后，以經(jīng)過濾滅菌的2%感病品種煙草K326成熟的新鮮煙葉組織搗碎液作為促進(jìn)孢子萌發(fā)溶液，使用促進(jìn)孢子萌發(fā)溶液將培養(yǎng)基平板上的孢子和菌絲洗下，以研缽、搗碎機(jī)或研磨機(jī)組織搗碎2min，使孢子與菌絲分離、孢子從孢子鏈斷開成單孢，然后用脫脂棉過濾過濾 除去菌絲，濾液即為赤星病菌孢子懸浮液。實(shí)施例6
從發(fā)病田塊中采集有典型癥狀的煙草病葉，經(jīng)過分離、純化、致病力測定篩選出煙草赤星病菌菌種；將菌種產(chǎn)生孢子的菌絲點(diǎn)接到培養(yǎng)基平板上，每個(gè)平板接種3點(diǎn)，在18h黑暗6h光照交替條件下，于28°C恒溫培養(yǎng)5d，選擇菌絲呈黑褐色、菌絲較致密的培養(yǎng)物用于誘導(dǎo)產(chǎn)孢；將符合誘導(dǎo)產(chǎn)孢條件的培養(yǎng)基平板，在密封狀態(tài)下置于3°C的冰箱內(nèi)黑暗誘導(dǎo)培養(yǎng)2.5d，然轉(zhuǎn)入培養(yǎng)箱黑暗、梯度降溫培養(yǎng)，歷時(shí)2.5d由20°C降溫至15°C (降溫速率約每12h降溫1°C);誘導(dǎo)培養(yǎng)完成后，以經(jīng)過濾滅菌的5%感病品種煙草云煙85成熟的新鮮煙葉組織搗碎液作為促進(jìn)孢子萌發(fā)溶液，使用促進(jìn)孢子萌發(fā)溶液將培養(yǎng)基平板上的孢子和菌絲洗下，以研缽、搗碎機(jī)或研磨機(jī)組織搗碎1.5min，使孢子與菌絲分離、孢子從孢子鏈斷開成單孢，然后用4層脫脂紗布過濾除去菌絲，濾液即為赤星病菌孢子懸浮液。實(shí)施例7
以赤星病菌97Aa003菌株按實(shí)施例1的方法制備煙草赤星病菌孢子懸浮液，并以該懸浮液進(jìn)行品種抗性評價(jià)，具體步驟為:
1.材料與方法 1.1材料
供試品種為NC71、NC297、云煙201、KRK26共4個(gè)品種，抗病對照品種為凈葉黃，感病對照品種為G140共6個(gè)品種。1.2 方法
1.2.1抗性測定品種的小區(qū)布置
試驗(yàn)處理為6個(gè)處理，每個(gè)品種為I個(gè)處理，每處理植煙30株，4次重復(fù)。小區(qū)隨機(jī)排列。管理與種植同優(yōu)質(zhì)烤煙模式。試驗(yàn)用地約1.5畝。本試驗(yàn)在云南省煙草農(nóng)業(yè)科學(xué)研究院研和試驗(yàn)基地進(jìn)行。1.2.2病菌人工接種
封頂去2片腳葉后，將煙草赤星病菌孢子懸浮液用1%的葡萄糖稀釋至10萬個(gè)孢子/ml，按0.2%的質(zhì)量比加入吐溫80、過325目標(biāo)準(zhǔn)篩的硅藻土，攪拌均勻，噴霧處理中下部葉，至葉片布滿均勻一層細(xì)小水珠為止，接種后在試驗(yàn)田中灌注水至半溝，保濕24 48h。1.2.3病情調(diào)查
在煙草赤星病菌接種的前一天，進(jìn)行一次病情基數(shù)調(diào)查，接種后每7d調(diào)查一次病情。調(diào)查各處理的葉片，調(diào)查記載采用GB/T 23222 “煙草病害分級及調(diào)查方法”中煙草赤星病害的國家標(biāo)準(zhǔn)。以發(fā)病盛期時(shí)病情指數(shù)的高低，評價(jià)抗性。2.結(jié)果與分析
受試驗(yàn)品種的抗性測定結(jié)果見表I。表I抗性品種的測定結(jié)果(病情基數(shù)為O)
權(quán)利要求
1.一種煙草赤星病菌孢子懸浮液，其特征在于所述的煙草赤星病菌孢子懸浮液是按以下步驟制備的: A、病菌分離:從發(fā)病田塊中采集有典型癥狀的煙草病葉，經(jīng)過分離、純化、致病力測定篩選出煙草赤星病菌菌種； B、病菌培養(yǎng):將菌種產(chǎn)生孢子的菌絲點(diǎn)接到培養(yǎng)基平板上，每個(gè)平板接種3 4點(diǎn)，在18h黑暗6h光照交替條件下，于27 29°C恒溫培養(yǎng)4飛(1，選擇菌絲呈黑褐色、菌絲較致密的培養(yǎng)物用于誘導(dǎo)產(chǎn)孢； C、誘導(dǎo)產(chǎn)孢:將符合誘導(dǎo)產(chǎn)孢條件的培養(yǎng)基平板密封后置于2 4°C的冰箱內(nèi)黑暗誘導(dǎo)培養(yǎng)2 3d，然后轉(zhuǎn)入培養(yǎng)箱，黑暗、梯度降溫培養(yǎng)，歷時(shí)2 3d由20°C降溫至15°C ； D、制備孢子懸浮液:誘導(dǎo)培養(yǎng)完成后，使用促進(jìn)孢子萌發(fā)溶液將培養(yǎng)基平板上的孢子和菌絲洗下，組織搗碎f2min，使孢子與菌絲分離、孢子從孢子鏈斷開成單孢，然后過濾除去菌絲，濾液即為赤星病菌孢子懸浮液。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的煙草赤星病菌孢子懸浮液，其特征是:B步驟所述的培養(yǎng)基為燕麥培養(yǎng)基、馬鈴薯葡萄糖培養(yǎng)基、馬鈴薯蔗糖培養(yǎng)基、查彼培養(yǎng)基或理查培養(yǎng)基。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的煙草赤星病菌孢子懸浮液，其特征是:D步驟所述的促進(jìn)孢子萌發(fā)的溶液為廣2%的滅菌葡萄糖、果糖、蔗糖、蛋白胨溶液中一種或一種以上組合。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的煙草赤星病菌孢子懸浮液，其特征是:D步驟所述的促進(jìn)孢子萌發(fā)溶液為2 5%感病品種煙草成熟的新鮮煙葉組織搗碎液，所述的組織搗碎液是經(jīng)過濾滅菌的。
5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的煙草赤星病菌孢子懸浮液，其特征是:所述的感病品種煙草為K326、云煙85或G140。
6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的煙草赤星病菌孢子懸浮液，其特征是:D步驟所述的組織搗碎采用的是研缽、搗碎機(jī)或研磨機(jī)。
7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的煙草赤星病菌孢子懸浮液，其特征是:D步驟所述的過濾為脫脂棉過濾或4飛層脫脂紗布過濾。
8.—種權(quán)利要求1所述的煙草赤星病菌孢子懸浮液在煙草品種抗感赤星病測定中的應(yīng)用。
9.一種權(quán)利要求1所述的煙草赤星病菌孢子懸浮液在防治煙草赤星病藥劑、生防菌或天然產(chǎn)物篩選中的應(yīng)用。
10.一種權(quán)利要求1所述的煙草赤 星病菌孢子懸浮液在研究煙草赤星病菌的土壤生態(tài)及病菌侵染循環(huán)中的應(yīng)用。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種煙草赤星病菌孢子懸浮液及其應(yīng)用，所述的煙草赤星病菌孢子懸浮液是通過病菌分離、病菌培養(yǎng)、誘導(dǎo)產(chǎn)孢、制備孢子懸浮液步驟獲得的。所述的煙草赤星病菌孢子懸浮液應(yīng)用于煙草品種抗感赤星病測定中，或防治煙草赤星病藥劑、生防菌或天然產(chǎn)物篩選中，或研究煙草赤星病菌的土壤生態(tài)及病菌侵染循環(huán)中。本發(fā)明采用多點(diǎn)接種方式，培養(yǎng)速度快、培養(yǎng)周期短；利用低溫高濕刺激、梯度降溫、黑暗誘導(dǎo)等方法的綜合作用促進(jìn)煙草赤星病菌快速、大量的產(chǎn)生孢子，為常規(guī)產(chǎn)孢量的50~100倍。本發(fā)明方法污染小，培養(yǎng)菌絲、誘導(dǎo)產(chǎn)孢的時(shí)間相對固定、集中，同步生長、同步產(chǎn)孢，同批次、不同批次制備孢子量差異小，質(zhì)量更為穩(wěn)定。
文檔編號C12R1/645GK103194421SQ20131009416
公開日2013年7月10日 申請日期2013年3月22日 優(yōu)先權(quán)日2013年3月22日
發(fā)明者方敦煌, 劉勇, 李永平, 肖炳光 申請人:云南省煙草農(nóng)業(yè)科學(xué)研究院