專利名稱：利用枸杞多糖制備小分子量功能性多糖及寡糖的方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及生物醫(yī)藥技術(shù)領(lǐng)域，具體地涉及利用枸杞多糖制備小分子量功能性多糖及寡糖的方法。
背景技術(shù)：
枸杞(Lycium bararum L.)是我國傳統(tǒng)藥食同源中藥材,具有補(bǔ)腎養(yǎng)肝、潤肺明目、益精、補(bǔ)血等功效。臨床醫(yī)學(xué)研究還表明，枸杞子對糖尿病、高血壓、視神經(jīng)萎縮、腎炎、肝炎等有顯著療效。這些藥理作用與枸杞活性多糖有關(guān)。枸杞多糖(Lyciumbarb arum polysaccharides, LBP)是枸杞的有效成分之一。經(jīng)研究發(fā)現(xiàn)，LBP具有降血糖、抗疲勞、增強(qiáng)免疫、耐缺氧、延緩衰老、促進(jìn)排鉛等多種生物功能。因此LBP作為天然抗氧化劑具很高的開發(fā)價(jià)值。LBP組成較為復(fù)雜，分子量分布范圍較廣，可從幾千到幾十萬。黃琳娟等從制備枸杞多糖LBP經(jīng)DEA-cellulose, Sephadex柱層析得到均一組分LbGP3、LbGP4和LbGP5，分子量分別為9.25 X 104、21.48 X IO4和
2.37X IO4C黃琳娟等，藥學(xué)學(xué)報(bào)，1998，33(7):512-516)。趙春久等分離的4種枸杞多糖在8000到66000之間(北京醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào)，1997, 29⑶:231-233),何進(jìn)等采用DEAE纖維素柱層析和凝膠柱層析法分離純化3種枸杞多糖分子量均大于2萬(中國藥學(xué)雜志’ 1996,31(12):716-720)。徐鵬利用水做溶劑從枸杞中提取糖類成分，經(jīng)體積分?jǐn)?shù)95%乙醇沉淀脫蛋白質(zhì)和多糖，再經(jīng)大孔樹脂分離，得到的低聚糖通過離子交換和凝膠柱層析，得到了 2個(gè)低聚糖組分。經(jīng)ES1-MS分析測定低聚糖的平均分子量分別為666.4，504.3(食品與發(fā)酵工業(yè).2009.35:196-198)。研究表明，多糖的生物活性與其相對分子量大小有關(guān)，相對分子量越大，體積越大，越不利于多糖跨越多重細(xì)胞膜障礙而進(jìn)入生物體內(nèi)發(fā)揮生物學(xué)活性。袁振林研究表明只有分子量在20000左右的枸杞多糖對S-180腫瘤和路易絲肺癌有較好的療效(亡息化工，2003，3:43-45)。李越鯤研究不同分子量枸杞多糖的體外抗氧化活性，采用膜分離技術(shù)對枸杞多糖(LBP)進(jìn)行分離，以得到分子量〈I萬(LBPl)U 3萬(LBP2)、3 5萬(LBP3)、>5萬(LBP4)的多糖，并對LBP及這4種小分子枸杞多糖的體外抗氧化活性進(jìn)行測定。結(jié)果表明不同分子量的小分子多糖抗氧化活性均高于粗多糖，其中LBP2清除超氧院離子自由基作用、清除羥自由基活性、總抗氧化能力最強(qiáng)，顯著高于LBP (安徽農(nóng)業(yè)科學(xué)，2012, 40 (29): 14174-14175)。潘志強(qiáng)經(jīng)糖化酶降解枸杞多糖相對分子質(zhì)量由30000降到17000左右，并研究表明:中相對分子質(zhì)量的枸杞多糖可顯著增加小鼠脾臟指數(shù)；可顯著增強(qiáng)巨噬細(xì)胞的吞噬能力，提高機(jī)體對病原微生物的抵抗力；可顯著促進(jìn)T及B淋巴細(xì)胞的增殖，從而增強(qiáng)機(jī)體的體液免疫和細(xì)胞免疫功能(藥物研究，2010，19:13-14)。王博采用非特異性酶PronaseE和β -消除反應(yīng)釋放糖鏈，然后酸降解得到以半乳糖為主要糖組成的聚合度為2 8寡聚半乳聚糖主鏈,命名為OL-oligosaccharides,并檢測了片段的免疫活性(西北大學(xué)’ 2011年碩士學(xué)位論文’枸杞糖復(fù)合物L(fēng)bGp4的降解及其活性寡糖片斷的初步探究)。姚瑞祺等采用5種不同截留分子量的超濾膜分離LBP測定不同分子量枸杞多糖(LBP)的含量和鐵離子還原力(FRAP)法測定抗氧化活性。結(jié)果得到6種不同分子量的LBP樣品液，其中分子量5000以下的LBP占74.5%，F(xiàn)RAP值0.745; 5000 I萬的占 11.0%，F(xiàn)RAP 值 0.597; I 3 萬的占 7.7%, FRAP 值 0.923;3 10 萬的占 2.4%, FRAP 值1.060; 10 30萬的占2.4%, FRAP值0.720; 30萬以上的占1.9%, FRAP值0.401。結(jié)論為分子量在5000以下的LBP為總多糖的主要功效成分，開發(fā)利用價(jià)值最大(姚瑞祺等，食品工業(yè)科摶.2008.29:89-91)。寡糖(Oligosaccharide),也稱低聚糖,是指由2至10個(gè)單糖單位通過糖苷鍵連接起來，形成直鏈或分枝鏈的一類糖，一般以出發(fā)端(還原端)的糖命名，如麥芽寡糖、寡果糖，寡木糖、纖維寡糖等。目前已開發(fā)成功的有低聚果糖、大豆低聚糖、低聚半乳糖、低聚異麥芽糖、低聚木糖、乳酮糖、低聚乳果糖、低聚龍膽糖等。功能性寡糖具有獨(dú)特的生理功能，如促進(jìn)雙歧桿菌增殖、抗齲齒、抗衰老、防肥胖、防止膽固醇積累、降低血壓等作用，另外某些寡糖對人體及動(dòng)植物具有特殊的生理作用，在食品、保健、醫(yī)藥、化工、農(nóng)業(yè)、飼料工業(yè)等領(lǐng)域具有廣闊的開發(fā)前景。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是提供一種利用枸杞多糖制備小分子量功能性多糖及寡糖的方法。本發(fā)明的方法，包括以下步驟:(1)多糖溶液的反復(fù)凍融:將枸杞粗多糖加去離子水配成多糖溶液，低溫條件下(-20 -70°C )冷凍，冷凍完全后，室溫條件下緩慢融化，將糖液低溫離心，反復(fù)凍融離心多次，直至無沉淀為止；(2)脫蛋白:將經(jīng)過反復(fù)凍融的枸杞多糖溶液采用Sevage法(氯仿:正丁醇=4:1)脫蛋白，經(jīng)透析，乙醇沉 淀，干燥，得純化的枸杞多糖；(3)將純化后的枸杞多糖加水充分溶解至透明狀態(tài)，添加化學(xué)降解劑或酶解降解齊U，加載超聲波條件下進(jìn)行降解I 3h，然后加入一定體積的乙醇，使多糖處于剛剛析出懸濁物而不立即產(chǎn)生沉淀狀態(tài)；(4)加載超聲波條件下繼續(xù)對多糖-乙醇溶液進(jìn)行超聲處理，隨著超聲時(shí)間的延長，向體系中緩慢逐步添加濃度> 95%的乙醇，出現(xiàn)懸濁物后暫停添加，待超聲降解作用使得懸濁物降解消失后繼續(xù)添加乙醇至懸濁物出現(xiàn)，如此反復(fù)進(jìn)行至體系中乙醇濃度為80% 85%，體系未見懸濁物產(chǎn)生，停止超聲作用，終止反應(yīng)，得枸杞多糖降解液；(5)枸杞多糖降解液通過減壓濃縮回收乙醇，濃縮液加入等體積去離子水經(jīng)微濾去除不溶物后，通過膜分離技術(shù)，截留小分子量的枸杞多糖，聚合度2 10的枸杞寡糖產(chǎn)物，產(chǎn)物濃縮、干燥得產(chǎn)品。步驟(I)中所述的枸杞粗多糖為，采用水提醇沉法得到的枸杞粗多糖；多糖提取方法包括熱水提取、酶解提取、超聲波提取、微波提取等方法中的一種或多種方法；沉淀多糖的乙醇終濃度> 70% ;所述的枸杞粗多糖配成的糖溶液濃度為5% 10% ;低溫冷凍條件為-20 -70°C;冷凍時(shí)間2 5h ;融化后糖液低溫離心條件為O 4°C，3000 5000rpm，10 20min。步驟(3)中所述的化學(xué)降解劑指的是過氧化氫(H202)、亞氯酸鈉(NaClO2)、鹽酸(HC1)、過硼酸鈉(NaBO3)中的一種或兩種及以上混合物；化學(xué)降解劑使用濃度為0.5 3%，所述的酶解降解劑指的是糖化酶、纖維素酶、溶菌酶、淀粉酶中的一種或兩種及以上混合物；所述的糖化酶即為α -1，4-葡萄糖水解酶，酶解的控制溫度30 65°C，pH值在3.0 6.0;每克枸杞多糖所需酶的用量為100 1000U ;所述的高濃度乙醇為濃度大于95%乙醇；超聲過程中超聲波的功率控制范圍為100 1000W，占空比1:1 1:3。步驟(4)中使用化學(xué)降解劑降解，反應(yīng)終止后添加氨水或氫氧化鈉調(diào)節(jié)pH至中性；超聲停止時(shí)間以超聲體系中懸濁物的消失為準(zhǔn)。步驟(5)所述的中膜分離技術(shù)指的是超濾和納濾技術(shù)，降解液經(jīng)微濾去除不溶物，泵入超濾裝置，根據(jù)需要設(shè)置不同截留分子量(2000 5000Da)，分子量大未被降解的產(chǎn)物返回降解槽繼續(xù)降解，小分子量產(chǎn)物泵入納濾裝置中，濾掉單糖，得到產(chǎn)物為聚合度2 10的枸杞寡糖產(chǎn)物。本發(fā)明多糖降解過程中加入一定體積的乙醇，使多糖處于剛剛析出懸濁物而不立即產(chǎn)生沉淀狀態(tài)；目的在于使得超聲波的空化效應(yīng)在多糖鏈之間充分發(fā)生作用。乙醇沉淀多糖的過程為隨著乙醇濃度的逐漸增加大分子量多糖首先沉淀出來，小分子量多糖及寡糖溶解在乙醇溶液中，沉淀出來的大分子量多糖由于糖鏈處于緊縮狀態(tài)，具有一定的“剛性”，而完全溶解在水溶液中多糖的糖鏈?zhǔn)嬲?，相對具有一定“柔性”，因此，超聲波的空化作用、機(jī)械效應(yīng)以及瞬時(shí)高溫效應(yīng)對“剛性”糖鏈更具有較強(qiáng)的破壞和斷鍵作用。隨著超聲降解的不斷進(jìn)行，降解后的小分子多糖逐漸被體系中的乙醇溶解稀釋，因此，逐步增加乙醇濃度，讓未降解的大分子多糖繼續(xù)析出，繼續(xù)接受降解作用，直至所有范圍分子量的多糖均被降解為一個(gè)較窄范圍?；瘜W(xué)降解劑過氧化氫(H202)、亞氯酸鈉(NaClO2)以及過硼酸鈉(NaBO3)屬于強(qiáng)氧化性試劑，聯(lián)合超聲波用于降解多糖具有高效、快速等優(yōu)點(diǎn)，產(chǎn)生的副產(chǎn)物為鈉鹽，便于去除。酶解降解劑糖化酶、纖維素酶、溶菌酶、淀粉酶可特異性、選擇性地切斷糖苷鍵，具有反應(yīng)溫和，無副產(chǎn)物產(chǎn)生，酶活持續(xù)久可反復(fù)利用等優(yōu)點(diǎn)。
具體實(shí)施方式
`實(shí)施例1(I)稱取IOOg枸杞粗多糖，加去離子水配制成5%濃度的多糖溶液，置入-20°C低溫條件下冷凍5h，室溫條件下緩慢融化，將糖液在4°C，5000rpm條件下，離心lOmin，去雜質(zhì)，上清液再次凍融，重復(fù)此步驟，至離心后無雜質(zhì)沉淀為止；(2)將經(jīng)過反復(fù)凍融的枸杞多糖溶液加入Sevage試劑(氯仿:正丁醇=4:1)，震蕩、離心，脫除中間蛋白層，上清液經(jīng)透析袋去離子水透析，加85%乙醇沉淀，沉淀物干燥，得純化的枸杞多糖；(3)將純化后的枸杞多糖加水充分溶解至透明狀態(tài)，添加3%濃度的過氧化氫(H2O2),加載超聲波條件下(超聲波設(shè)置功率1000W，占空比1:1)進(jìn)行降解lh，緩慢加入20%乙醇，使多糖處于剛剛析出懸濁物而不立即產(chǎn)生沉淀狀態(tài)；(4)繼續(xù)加載超聲波條件下，對體系進(jìn)行超聲處理，隨著超聲時(shí)間的延長，向體系中緩慢逐步添加95%乙醇，待體系中乙醇濃度增至85%，體系仍未見懸濁物產(chǎn)生，添加氨水調(diào)節(jié)PH至中性，終止反應(yīng)，得多糖降解液；(5)枸杞多糖降解液通過減壓濃縮回收乙醇，濃縮液加入等體積去離子水經(jīng)微濾去除不溶物后，泵入超濾裝置，設(shè)置留分子量2000，未被降解的產(chǎn)物返回降解槽繼續(xù)降解，小分子量產(chǎn)物泵入納濾裝置中，濾掉單糖，得到產(chǎn)物為聚合度2 10的枸杞寡糖產(chǎn)物，產(chǎn)物干燥得枸杞寡糖產(chǎn)品。實(shí)施例2(I)稱取IOOg枸杞粗多糖，加去離子水配制成10%濃度的多糖溶液，置入_70°C低溫條件下冷凍2h，室溫條件下緩慢融化，將糖液在0°C，3000rpm條件下，離心20min，去雜質(zhì)，上清液再次凍融，重復(fù)此步驟，至離心后無雜質(zhì)沉淀為止；(2)脫蛋白步驟同實(shí)施例1 ;(3)將純化后的枸杞多糖加水充分溶解至透明狀態(tài)，添加1%濃度的過氧化氫/亞氯酸鈉體系(H202/NaC102=l:1 )，加載超聲波條件下，超聲波設(shè)置功率500W，占空比1: 3，對體系進(jìn)行超聲處理3h，加入30%乙醇，使多糖處于剛剛析出懸濁物；(4)隨著超聲時(shí)間的延長，向體系中緩慢逐步添加95%乙醇，待體系中乙醇濃度增至80%，體系仍未見懸濁物產(chǎn)生，終止反應(yīng)，得多糖降解液；(5)枸杞多糖降解液通過減壓濃縮回收乙醇，濃縮液加入等體積去離子水經(jīng)微濾去除不溶物后，泵入超濾裝置，設(shè)置留分子量5000，未被降解的產(chǎn)物返回降解槽繼續(xù)降解，小分子量產(chǎn)物泵入超濾裝置，設(shè)置留分子量2000,可得分子量為2000 5000的小分子量枸杞多糖，產(chǎn)物干燥得小分子量枸杞多糖產(chǎn)品；分子量2000以下的寡糖溶液泵入納濾裝置中，濾掉單糖，得到產(chǎn)物為聚合度2 10的枸杞寡糖產(chǎn)物，產(chǎn)物干燥得枸杞寡糖產(chǎn)品。實(shí)施例3(I)- (2)步驟同實(shí)施例1(3)將純化后的枸杞多糖加水充分溶解至透明狀態(tài)，添加2%濃度的過氧化氫/鹽酸(H202/HC1=1:1)，加載超聲波條件下，超聲波設(shè)置功率500W，占空比1:3，對體系進(jìn)行超聲處理2.5h，加入20%乙醇，使多糖處于剛剛析出懸濁物；(4)隨著超聲時(shí)間的延長，向體系中緩慢逐步添加95%乙醇，待體系中乙醇濃度增至85%，體系未見懸濁物產(chǎn)生，添加氫氧化鈉調(diào)節(jié)pH至中性，終止反應(yīng)，得多糖降解液；(5)枸杞多糖降解液通過減壓濃縮回收乙醇，濃縮液加入等體積去離子水經(jīng)微濾去除不溶物后，泵入超濾裝置，設(shè)置留分子量2000，未被降解的產(chǎn)物返回降解槽繼續(xù)降解，小分子量產(chǎn)物泵入納濾裝置中，濾掉單糖、氯化鈉等，得到產(chǎn)物為聚合度2 10的枸杞寡糖產(chǎn)物，產(chǎn)物干燥得枸杞寡糖產(chǎn)品。實(shí)施例4(I)- (2)步驟同實(shí)施例1(3)將純化后的枸杞多糖加水充分溶解至透明狀態(tài)，添加0.5%濃度的過硼酸鈉(NaBO3),加載超聲波條件下，超聲波設(shè)置功率1000W，占空比1: 1，對體系進(jìn)行超聲處理2h，緩慢加入30%乙醇，使多糖處于剛剛析出懸濁物；(4)隨著超聲時(shí)間的延長，向體系中緩慢逐步添加95%乙醇，待體系中乙醇濃度增至85%，體系仍未見懸濁物產(chǎn)生，添加氫氧化鈉調(diào)節(jié)pH至中性，終止反應(yīng)，得多糖降解液；

(5)枸杞多糖降解液通過減壓濃縮回收乙醇，濃縮液加入等體積去離子水經(jīng)微濾去除不溶物后，泵入超濾裝置，設(shè)置留分子量2000，未被降解的產(chǎn)物返回降解槽繼續(xù)降解，小分子量產(chǎn)物泵入納濾裝置中，濾掉單糖、氯化鈉等，得到產(chǎn)物為聚合度2 10的枸杞寡糖產(chǎn)物，產(chǎn)物干燥得枸杞寡糖產(chǎn)品。實(shí)施例5(I)稱取IOOg枸杞粗多糖，加去離子水配制成7%濃度的多糖溶液，置入_20°C低溫條件下冷凍4h，室溫條件下緩慢融化，將糖液在4°C，5000rpm條件下，離心15min，去雜質(zhì)，上清液再次凍融，重復(fù)此步驟，至離心后無雜質(zhì)沉淀為止；( 2)脫蛋白步驟同實(shí)施例1 ;(3)將純化后的枸杞多糖加水充分溶解至透明狀態(tài)，添加100份300U的糖化酶，控制溫度62°C，pH值在4.5，加載100W低功率超聲波條件，占空比1: 2，對體系進(jìn)行超聲處理
1.5h，然后緩慢加入30%乙醇，使多糖處于剛剛析出懸濁物；(4)隨著超聲時(shí)間的延長，向體系中緩慢逐步添加95%乙醇，待體系中乙醇濃度增至80%，體系仍未見懸濁物產(chǎn)生，終止反應(yīng)，得多糖降解液； (5)枸杞多糖降解液通過減壓濃縮回收乙醇，濃縮液加入等體積去離子水經(jīng)微濾去除不溶物后，泵入超濾裝置，設(shè)置留分子量4000，未被降解的產(chǎn)物返回降解槽繼續(xù)降解，小分子量產(chǎn)物泵入超濾裝置，設(shè)置留分子量2000,可得分子量為2000 4000的小分子量枸杞多糖，產(chǎn)物干燥得小分子量枸杞多糖產(chǎn)品；分子量2000以下的寡糖溶液泵入納濾裝置中，濾掉單糖，得到產(chǎn)物為聚合度2 10的枸杞寡糖產(chǎn)物，產(chǎn)物干燥得枸杞寡糖產(chǎn)品。實(shí)施例6(I)稱取IOOg枸杞粗多糖，加去離子水配制成5%濃度的多糖溶液，置入_70°C低溫條件下冷凍2h，室溫條件下緩慢融化，將糖液在4°C，4000rpm條件下，離心lOmin，去雜質(zhì)，上清液再次凍融，重復(fù)此步驟，至離心后無雜質(zhì)沉淀為止；( 2)脫蛋白步驟同實(shí)施例1 ;(3)將純化后的枸杞多糖加水充分溶解至透明狀態(tài)，添加100份200U的糖化酶與IOOOU淀粉酶混合物(10:1 )，控制溫度60°C，pH值在4.0，加載200W低功率超聲波條件，占空比1:1,對體系進(jìn)行超聲處理2h，緩慢加入30%乙醇，使多糖處于剛剛析出懸濁物；(4)隨著超聲時(shí)間的延長，向體系中緩慢逐步添加95%乙醇，待體系中乙醇濃度增至85%，體系仍未見懸濁物產(chǎn)生，終止反應(yīng)，得多糖降解液；(5)枸杞多糖降解液通過減壓濃縮回收乙醇，濃縮液加入等體積去離子水經(jīng)微濾去除不溶物后，泵入超濾裝置，設(shè)置留分子量5000，未被降解的產(chǎn)物返回降解槽繼續(xù)降解，小分子量產(chǎn)物泵入超濾裝置，設(shè)置留分子量2000,可得分子量為2000 5000的小分子量枸杞多糖，產(chǎn)物干燥得小分子量枸杞多糖產(chǎn)品；分子量2000以下的寡糖溶液泵入納濾裝置中，濾掉單糖，得到產(chǎn)物為聚合度2 10的枸杞寡糖產(chǎn)物，產(chǎn)物干燥得枸杞寡糖產(chǎn)品。實(shí)施例7(I)- (2)步驟同實(shí)施例6(3)將純化后的枸杞多糖加水充分溶解至透明狀態(tài)，添加100份活力單位為500U的纖維素酶、溶菌酶混合酶(10:1 )，控制溫度35°C，pH值在6.0，加載300W低功率超聲波條件，占空比1:2，對體系進(jìn)行超聲處理1.5h，緩慢加入30%乙醇，使多糖處于剛剛析出懸濁物；(4)隨著超聲時(shí)間的延長，向體系中緩慢逐步添加95%乙醇，待體系中乙醇濃度增至85%，體系仍未見懸濁物產(chǎn)生，終止反應(yīng)，得多糖降解液；
(5)枸杞多糖降解液通過減壓濃縮回收乙醇，濃縮液加入等體積去離子水經(jīng)微濾去除不溶物后，泵入超濾裝置，設(shè)置留分子量2000，未被降解的產(chǎn)物返回降解槽繼續(xù)降解，小分子量產(chǎn)物泵入納濾裝置中，濾掉單糖，得到產(chǎn)物為聚合度2 10的枸杞寡糖產(chǎn)物，產(chǎn)物干燥得枸杞寡糖產(chǎn)品。實(shí)施例8(I)- (2)步驟同實(shí)施例6(3)將純化后的枸杞多糖加水充分溶解至透明狀態(tài)，添加100份換算活力單位為600U的纖維素酶、溶菌酶混合酶(10:1 )，控制溫度35°C，pH值在6.0，加載500W功率超聲波條件，占空比1:1，對體系進(jìn)行超聲處理lh，然后緩慢加入30%乙醇，使多糖處于剛剛析出懸濁物；(4)隨著超聲時(shí)間的延長，向體系中緩慢逐步添加95%乙醇，待體系中乙醇濃度增至85%，體系仍未見懸濁物產(chǎn)生，終止反應(yīng)，得多糖降解液；(5)枸杞多糖降解液通過減壓濃縮回收乙醇，濃縮液加入等體積去離子水經(jīng)微濾去除不溶物后 ，泵入超濾裝置，設(shè)置留分子量2000，未被降解的產(chǎn)物返回降解槽繼續(xù)降解，小分子量產(chǎn)物泵入納濾裝置中，濾掉單糖，得到產(chǎn)物為聚合度2 10的枸杞寡糖產(chǎn)物，產(chǎn)物干燥得枸杞寡糖產(chǎn)品。
權(quán)利要求
1.利用枸杞多糖制備小分子量功能性多糖及寡糖的方法，其特征在于，所述方法包括以下步驟: (1)多糖溶液的反復(fù)凍融:將枸杞粗多糖加去離子水配成多糖溶液，低溫條件下冷凍，冷凍完全后，室溫條件下緩慢融化，將糖液低溫離心，反復(fù)凍融離心多次，直至無沉淀為止; (2)脫蛋白:將經(jīng)過反復(fù)凍融的枸杞多糖溶液采用Sevage法(氯仿:正丁醇=4:1)脫蛋白，經(jīng)透析，乙醇沉淀，干燥，得純化的枸杞多糖； (3)將純化后的枸杞多糖加水 充分溶解至透明狀態(tài)，添加化學(xué)降解劑或酶解降解劑，力口載超聲波條件下進(jìn)行降解I 3h，然后加入一定體積的乙醇，使多糖處于剛剛析出懸濁物而不立即產(chǎn)生沉淀狀態(tài)； (4)加載超聲波條件下繼續(xù)對多糖-乙醇溶液進(jìn)行超聲處理，隨著超聲時(shí)間的延長，向體系中緩慢逐步添加濃度> 95%的乙醇，出現(xiàn)懸濁物后暫停添加，待超聲降解作用使得懸濁物降解消失后繼續(xù)添加乙醇至懸濁物出現(xiàn)，如此反復(fù)進(jìn)行至體系中乙醇濃度為80% 85%，體系未見懸濁物產(chǎn)生，停止超聲作用，終止反應(yīng)，得枸杞多糖降解液； (5)枸杞多糖降解液通過減壓濃縮回收乙醇，濃縮液加入等體積去離子水經(jīng)微濾去除不溶物后，通過膜分離技術(shù)，截留小分子量的枸杞多糖，以及聚合度2 10的枸杞寡糖產(chǎn)物，產(chǎn)物濃縮、干燥得產(chǎn)品。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的利用枸杞多糖制備小分子量功能性多糖及寡糖的方法，其特征在于，步驟(I)中所述的枸杞粗多糖為，采用水提醇沉法得到的枸杞粗多糖；多糖提取方法包括熱水提取、酶解提取、超聲波提取、微波提取等方法中的一種或多種方法；沉淀多糖的乙醇終濃度彡70%。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的利用枸杞多糖制備小分子量功能性多糖及寡糖的方法，其特征在于，步驟(I)中枸杞粗多糖配成的糖溶液濃度為5% 10% ;低溫冷凍條件為-20 -70°C;冷凍時(shí)間2 5h ;融化后糖液低溫離心條件為O 4°C，3000 5000rpm，10 20min。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的利用枸杞多糖制備小分子量功能性多糖及寡糖的方法，其特征在于，步驟(3)中化學(xué)降解劑指的是過氧化氫(H202)、亞氯酸鈉(NaClO2)、鹽酸(HC1)、過硼酸鈉(NaBO3)中的一種或兩種及以上混合物。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的利用枸杞多糖制備小分子量功能性多糖及寡糖的方法，其特征在于，步驟(3)中或酶解降解劑指的是糖化酶、纖維素酶、溶菌酶、淀粉酶中的一種或兩種及以上混合物。
6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的利用枸杞多糖制備小分子量功能性多糖及寡糖的方法，其特征在于，步驟(3)及步驟(4)中超聲波的功率控制范圍100 1000W，占空比1:1 1:3，步驟(4)中超聲停止時(shí)間以超聲體系中懸濁物的消失為準(zhǔn)。
7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的利用枸杞多糖制備小分子量功能性多糖及寡糖的方法，其特征在于，步驟(5)中膜分離技術(shù)指的是超濾和納濾技術(shù)，降解液經(jīng)微濾去除不溶物，泵入超濾裝置，根據(jù)需要設(shè)置不同截留分子量(2000 5000Da)，分子量大而未被降解的產(chǎn)物返回降解槽繼續(xù)降解，小分子量產(chǎn)物泵入納濾裝置中，濾掉單糖，得到產(chǎn)物為聚合度2 10的枸杞寡糖產(chǎn)物。
8.根據(jù)權(quán)利要求5所述的利用枸杞多糖制備小分子量功能性多糖及寡糖的方法，其特征在于，步驟(3)中所述的化學(xué)降解劑使用濃度為0.5 3%，反應(yīng)終止后添加氨水或氫氧化鈉調(diào)節(jié)PH至中性。
9.根據(jù)權(quán)利要求6所述的利用枸杞多糖制備小分子量功能性多糖及寡糖的方法，其特征在于，步驟(3)中所述的糖化酶即為α -1, 4-葡萄糖水解酶；酶解的控制溫度30 65°C，pH值在3.0 6.0;每克枸 杞多糖所需酶的用量為100 1000U。
全文摘要
本發(fā)明涉及生物醫(yī)藥技術(shù)領(lǐng)域，具體地提供一種利用枸杞多糖制備小分子量功能性多糖及寡糖的方法。其步驟包括將枸杞粗多糖溶液低溫條件下反復(fù)凍融除雜質(zhì)，采用Sevage法脫蛋白；純化后的枸杞多糖溶液，添加輔助降解劑，加載超聲波超聲處理，加入少量體積的乙醇，使多糖處于剛剛析出懸濁物而不立即產(chǎn)生沉淀狀態(tài)；梯度提高乙醇濃度至85%，至懸濁物消失時(shí)終止反應(yīng)，得多糖降解液；多糖降解液經(jīng)過膜分離技術(shù)，制備分子量小于5000的枸杞多糖，及聚合度為2～10的枸杞寡糖產(chǎn)品。本發(fā)明工藝簡單，操作簡便，適用于工業(yè)生產(chǎn)，而且所得的小分子量枸杞多糖、枸杞寡糖具有抗腫瘤，抗氧化、抗衰老、提高免疫力等活性，在食品和醫(yī)藥領(lǐng)域具有廣泛應(yīng)用前景。
文檔編號C13K13/00GK103172759SQ20131008509
公開日2013年6月26日 申請日期2013年3月18日 優(yōu)先權(quán)日2013年3月18日
發(fā)明者趙兵, 趙慶生, 查圣華, 王曉東 申請人:中國科學(xué)院過程工程研究所