用于制備羥基取代的氨基甲酸酯的生物催化劑的制作方法
【專利摘要】本公開內(nèi)容涉及用于制備羥基取代的氨基甲酸酯化合物的工程化酮還原酶多肽、和多核苷酸、載體、宿主細(xì)胞，以及制備和使用該酮還原酶多肽的方法。
【專利說明】用于制備羥基取代的氨基甲酸酯的生物催化劑 1.【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本公開內(nèi)容涉及用于生產(chǎn)手性化合物的生物催化劑介導(dǎo)的方法和在該方法中使 用的生物催化劑。
[0002] 2.參考序列表、表格或計(jì)算機(jī)程序
[0003] 序列表的正式復(fù)本作為ASCII格式化文本文件與說明書經(jīng)EFS-Web同時(shí)被提交， 文件名為"CX2-103W01_ST25. txt"，創(chuàng)建日期為2012年11月13日，且大小為290,640 字節(jié)。相對于2011年11月18日隨母案美國臨時(shí)申請61/561，665提交的具有文件名 "CX2-103USP1_ST25. txt"的序列表，該序列表僅有較少的格式更改。經(jīng)EFS-Web提交的序 列表為本說明書的一部分，并且據(jù)此通過引用整體并入本文。
[0004] 3.背景
[0005] β -腎上腺素能受體為G蛋白偶聯(lián)受體超家族的成員，并通過將Gas的刺激與腺 苷酸環(huán)化酶的激活偶聯(lián)，介導(dǎo)對外部配體，特別是腎上腺素和去甲腎上腺素的響應(yīng)，導(dǎo)致增 加的細(xì)胞內(nèi)第二信使cAMP。已知β-腎上腺素能受體有三個(gè)亞型。-受體主要表達(dá)于 心臟、冠狀動(dòng)脈、腎、肌肉和中樞神經(jīng)系統(tǒng)，并影響心臟刺激、冠狀血管擴(kuò)張以及結(jié)腸和食管 的松弛。在β?-受體中的多態(tài)性與幾種形式的高血壓和心臟衰竭相關(guān)并影響靜息心率。 β2_腎上腺素能受體發(fā)現(xiàn)于肺、胃腸道、肝、子宮、血管平滑肌、心臟和骨骼肌中，在那里其 部分地調(diào)節(jié)平滑肌松弛（例如，支氣管擴(kuò)張 ）。β 3-腎上腺素能受體主要表達(dá)于脂肪組織 (棕色和白色）、膀胱、膽囊、結(jié)腸和心臟。
[0006] 各個(gè)腎上腺素能受體亞型的種間特異性表達(dá)存在差異，提示不同亞型在不同物 種的相同組織中的作用。在人中，β 3_腎上腺素能受體表達(dá)于膀胱逼尿肌，且β3-腎上 腺素能受體mRNA是遭受根治性膀胱切除術(shù)的患者中的主要mRNA。此外，^和^選擇 性激動(dòng)劑對逼尿肌功能無影響，而β 3_選擇性激動(dòng)劑產(chǎn)生濃度依賴性舒張（IgawaY.等 人，1999, Br J Pharmacol. 126:819-25)。這些觀察結(jié)果導(dǎo)致了開發(fā)β 3-腎上腺素能受體激 動(dòng)劑用于治療各種形式的膀胱過度活動(dòng)綜合征（參見，例如，IgawaY.等人，2010, Korean JUrol.51:811-818)?；诹u甲基吡咯烷的β3-腎上腺素能受體特異性激動(dòng)劑描述于 W02009124167和W02009124166中。羥基吡咯烷藥物的合成可使用具有結(jié)構(gòu)（a)和（b)的 中間體，其中Ar表示芳基基團(tuán)，且R 1(l和R11表示保護(hù)基團(tuán)。
[0007]
【權(quán)利要求】
1. 一種工程化酮還原酶多肽，所述工程化酮還原酶多肽能夠?qū)⒌孜锘衔铮?)，（1-氧 代-1-苯基己-5-炔-2-基）氨基甲酸叔丁酯，轉(zhuǎn)化為產(chǎn)物化合物（1)，（1-輕基-1-苯基 己-5-炔-2-基）氨基甲酸叔丁酯，
所述酮還原酶多肽包括具有與SEQ ID NO:4的至少80 %序列同一性和特征X40R和 X206L或F的氨基酸序列，條件是當(dāng)X206為F時(shí)，所述序列還包括與SEQ ID N0:4相比選自 以下的一個(gè)或多個(gè)殘基差異：X7S ;X17M ;X17Q ;)(17R ;X23V ;X27L ;X29G ;X60I ;X64V ;X71P ; X87L ；X94A ；X94P ；X94S ；X95M ；X96L ；X96Y ；X105G ；X113I ；X122A ；X127R ；X131S ；X144V ； X145L ；X147I ；X147L ；X147Q ；X150Y ；X152G ；X153G ；X157C ；X173L ；X195A ；X195G ；X196M ； X198S ;X199H ;X208R ;X216R ;X221S ;X243S ;X245I ;X249F ;X249G ;和 X249Y。
2. 如權(quán)利要求1所述的工程化酮還原酶多肽，其中所述氨基酸序列包括X40R和 X206F，以及與SEQ ID N0:4相比選自以下的一個(gè)或多個(gè)殘基差異：X7S ;X17M;X17Q ;X17R ; X23V ；X27L ；X29G ；X60I ；X64V ；X71P ；X87L ；X94A ；X94P ；X94S ；X95M ；X96L ；X96Y ；X105G ； X113I ；X122A ；X127R ；X131S ；X144V ；X145L ；X147I ；X147L ；X147Q ；X150Y ；X152G ；X153G ； X157C ；X173L ；X195A ；X195G ；X196M ；X198S ；X199H ；X208R ；X216R ；X221S ；X243S ；X245I ； X249F ;X249G ;和 X249Y。
3. 如權(quán)利要求1所述的工程化酮還原酶多肽，其中所述氨基酸序列包括X40R和X206F 或L，以及與SEQIDN0:4相比選自以下的至少一個(gè)或多個(gè)殘基差異：X17Q/R/M ;X64V;X94P; X144V ;X147Q/I/L ;X157C ;和 X196M。
4. 如權(quán)利要求1所述的工程化酮還原酶多肽，其中所述氨基酸序列包括至少與SEQ ID N0:4相比選自以下的殘基差異組合： (a) X40R、X196M、和 X206F/L ; (b) X40R、X144V、和 X206F/L ; (c) X40R、X17H/R/Q、和 X206F/L ; (d) X40R、X94P、和 X206F/L ; (e) X40R、X196M、和 X206F/L ; (f) X40R、X198S、和 X206F/L ; (g) X40R、X17H/R/Q、X94P 和 X206F/L ; (h) X40R、X71P、X157C 和 X206F/L ; (i) X40R、X94P、X144V、X196M 和 X206F/L ; (j) X17H/R/Q、X40R、X64V、X147I/Q/L、和 X206F/L ; (k) X17H/R/Q、X40R、X64V、X94P、X144V、X147I/Q/L、X157C、X196M 和 X206F/L ;以及 (l) X17Q、X40R、X64V、X71P、X94P、X144V、X147I、X157C、X196M、X206F、和 X249F。
5. 如權(quán)利要求1所述的工程化酮還原酶多肽，所述工程化酮還原酶多肽能夠以至少10 倍的SEQ ID N0:4的參考多肽的活性將所述底物化合物（2)轉(zhuǎn)化為所述產(chǎn)物化合物（1)， 其中所述氨基酸序列包括所述特征X40R和X206L或F，以及與SEQIDN0:4相比選自以下 的一個(gè)或多個(gè)殘基差異：X60I ;X71P ;X94P ;X94A ;X95M ;X96L ;X96Y ;X127R ;X144V ;X145I ; X150Y ；X152G ；X153G ；X157C ；X195A ；X195G ；X196M ；X198S ；X199H ；X206F ；X216R ；X245I ； X245F ;X249Y ;和 X249F。
6. 如權(quán)利要求1所述的工程化酮還原酶多肽，所述工程化酮還原酶多肽具有與SEQ ID N0:4或32的參考多肽相比增加的熱穩(wěn)定性，其中所述氨基酸序列包括所述特征X40R和 X206L或F，以及與SEQ ID N0:4相比選自以下的一個(gè)或多個(gè)殘基差異：X17Q ;X17R ;X17W ; X64V ;X71P ;X87L ;X94S ;X94P ;X147Q ;X147I ;X147L ;X157C ;X198S ;X249Y ;和 X249F。
7. 如權(quán)利要求1所述的工程化酮還原酶多肽，所述工程化酮還原酶多肽能夠形成非對 映體過量于反式-(1-羥基-1-苯基己-5-炔-2-基）氨基甲酸叔丁酯化合物（lb)和（Id) 的產(chǎn)物順式 -(卜輕基-1-苯基己-5-炔-2-基）氨基甲酸叔丁酯化合物（la)和（lc)
8. 如權(quán)利要求7所述的工程化酮還原酶多肽，其中所述氨基酸序列包括與SEQ ID NO: 4 相比選自以下的或多個(gè)殘基差異：X17Q ;X64V ;X71P ;X87L ;X147I ;X157C ;X196M ;和X249F。
9. 如權(quán)利要求7所述的工程化酮還原酶多肽，所述工程化酮還原酶多肽能夠以相比于 化合物（lb)和（Id)的至少50的非對映體比形成產(chǎn)物化合物（la)和（lc)。
10. 如權(quán)利要求1所述的工程化酮還原酶多肽，其中所述氨基酸序列包括選自由以下 組成的組的序列：SEQ ID N0:18、20、22、24、26、28、30、32、34、36、38、40、42、44、56、58、60、 62、64、66、68、70、72、74、76、78、80、82、84、86、88、90、92、94、96、98、100、102、104、106、108、 110、112、114、116、118、120、122、124、126、128、130、132、134、136、138、140、142、144、146、 148、150、152、154、156、158、160、162、164、166、168、170 和 172。
11. 如權(quán)利要求1至10中任一項(xiàng)所述的工程化酮還原酶多肽，其中所述肽固定在固體 支持物上。
12. -種多核苷酸，所述多核苷酸編碼如權(quán)利要求1至10中任一項(xiàng)所述的工程化酮還 原酶多肽。
13. 如權(quán)利要求12所述的多核苷酸，所述多核苷酸包括選自由以下組成的組的核苷酸 序列：SEQ ID N0:17、19、21、23、25、27、29、31、33、35、37、39、41、43、55、57、59、61、63、65、67、 69、71、73、75、77、79、81、83、85、87、89、91、93、95、97、99、101、103、105、107、109、111、113、 115、117、119、121、123、125、127、129、131、133、135、137、139、141、143、145、147、149、151、 153、155、157、159、161、163、165、167、169 和 171。
14. 一種表達(dá)載體，所述表達(dá)載體包含如權(quán)利要求12所述的多核苷酸。
15. 如權(quán)利要求14所述的表達(dá)載體，所述表達(dá)載體包含控制序列。
16. 如權(quán)利要求15所述的表達(dá)載體，其中所述控制序列為啟動(dòng)子。
17. -種宿主細(xì)胞，所述宿主細(xì)胞包括如權(quán)利要求12所述的多核苷酸。
18. 如權(quán)利要求17所述的宿主細(xì)胞，所述宿主細(xì)胞為大腸桿菌（E.coli)。
19. 一種用于制備如權(quán)利要求1至10中任一項(xiàng)所述的工程化酮還原酶多肽的方法，包 括在適合于表達(dá)所述工程化多肽的培養(yǎng)條件下培養(yǎng)權(quán)利要求17所述的宿主細(xì)胞。
20. 如權(quán)利要求19所述的方法，所述方法還包括分離所表達(dá)的多肽。
21. -種用于制備式（I)的產(chǎn)物化合物的方法
其中 Ar是5至7元碳環(huán)或雜環(huán)； R1 的每次出現(xiàn)獨(dú)立地選自鹵素、_C00Ra、-C(0)Rb、-OR。、-S02、-SR d、-S(0) R6、-NRfRg、--N02、-CN、烷基、雜烷基、環(huán)烷基、環(huán)烷基烷基、雜環(huán)烷基、雜環(huán)烷基烷 基、芳基、芳基烷基、雜芳基和雜芳基烷基，其中1?'妒、1^、1^、1^、1^、1^、妒和紀(jì)獨(dú)立地選自Η 和任選地取代的燒基、雜燒基、環(huán)燒基、環(huán)燒基燒基、雜環(huán)燒基、雜環(huán)燒基燒基、芳基、芳基燒 基、雜芳基、和雜芳基烷基； R2選自任選地取代的燒基、稀基、塊基、雜燒基、環(huán)燒基、環(huán)燒基燒基、環(huán)燒基稀基、環(huán) 烷基炔基、雜環(huán)烷基、雜環(huán)烷基烷基、雜環(huán)烷基烯基、雜環(huán)烷基炔基、芳基、芳基烷基、芳基烯 基、芳基炔基、雜芳基、雜芳基烷基、雜芳基烯基、雜芳基炔基、烷基硫代、烷基亞磺?；头?基亞橫醜基； R3和R4,彼此獨(dú)立地，選自Η、任選地取代的燒基、環(huán)燒基、環(huán)燒基燒基、雜環(huán)燒基、雜環(huán) 烷基烷基、芳基、芳基烷基、雜芳基、雜芳基烷基、烷氧基羰基、芳基烷氧基羰基、雜芳基烷氧 基羰基、和保護(hù)基團(tuán)，或R3和R 4中的一個(gè)與R2形成任選地取代的5至7元雜環(huán)，以及 m為0至10 ; 所述方法包括使式（Π )的底物化合物，
其中R1、!?2、!?3、!?4和m如以上定義， 在適當(dāng)?shù)姆磻?yīng)條件下在輔因子NADPH或NADH的存在下與權(quán)利要求1至10中任一項(xiàng)的 工程化酮還原酶多肽接觸。
22. 如權(quán)利要求21所述的方法，其中Ar為5至7元芳基或雜芳基。
23. 如權(quán)利要求22所述的方法，其中Ar選自噻吩基、苯基和吡啶基。
24. 如權(quán)利要求21所述的方法，其中所述式（II)的產(chǎn)物化合物包括式（lb)的化合物
其中 R6、R7、R8、R9 和 R1CI 各自獨(dú)立地選自 H、鹵素、-COORa、-C(0)Rb、-OR。、-S02、-SR d、-S(O) R6、-NRfRg、--N02、-CN、烷基、雜烷基、環(huán)烷基、環(huán)烷基烷基、雜環(huán)烷基、雜環(huán)烷基烷 基、芳基、芳基烷基、雜芳基和雜芳基烷基，其中1?'妒、1^、1^、1^、1^、1^、妒和紀(jì)獨(dú)立地選自Η 和任選地取代的燒基、雜燒基、環(huán)燒基、環(huán)燒基燒基、雜環(huán)燒基、雜環(huán)燒基燒基、芳基、芳基燒 基、雜芳基、和雜芳基烷基； η為1至4, R11選自Η和任選地取代的烷基、雜烷基、環(huán)烷基、環(huán)烷基烷基、芳基、芳基烷基、雜芳基、 和雜芳基烷基；以及 R12選自Η、任選地取代的燒基、環(huán)燒基、環(huán)燒基燒基、雜環(huán)燒基、雜環(huán)燒基燒基、芳基、芳 基烷基、雜芳基、雜芳基烷基和保護(hù)基團(tuán)； 所述方法包括使式（lib)的底物化合物
其中 其中 R6、R7、R8、R9、R1(l、R 11、R12 和 η 如以上定義， 在適當(dāng)?shù)姆磻?yīng)條件下在輔因子NADPH或NADH的存在下與權(quán)利要求1至10中任一項(xiàng)的 工程化酮還原酶多肽接觸。
25. 如權(quán)利要求24所述的方法，其中R11是任選地取代的苯基。
26. 如權(quán)利要求24所述的方法，其中所述式（lb)的產(chǎn)物化合物包括式（Ibl)和（Ib3) 的化合物，并且所述方法形成非對映體過量于式（Ib2)和（Ib4)的化合物的式（Ibl)和 (Ib3)的產(chǎn)物化合物，
其中 R6、R7、R8、R9、R1(l、R 11、R12和η如權(quán)利要求24中所定義； 所述方法包括使式（lib)的底物化合物
在適當(dāng)?shù)姆磻?yīng)條件下在輔因子NADPH或NADH的存在下與權(quán)利要求7至9中任一項(xiàng)的 工程化酮還原酶多肽接觸。
27. 如權(quán)利要求24至26中任一項(xiàng)所述的方法，其中所述式（lib)的底物化合物包括式 (Ilbl)和（IIb2)的化合物的混合物
28. 如權(quán)利要求27所述的方法，其中所述混合物包括式（Ilbl)和（IIb2)化合物的外 消旋混合物。
29. 如權(quán)利要求24至28中任一項(xiàng)所述的方法，其中η為2。
30. 如權(quán)利要求24所述的方法，其中所述式（lb)的產(chǎn)物化合物包括式（Id)的化合物
其中 R12如權(quán)利要求24所定義； 所述方法包括使式（lid)的底物化合物
在適當(dāng)?shù)姆磻?yīng)條件下在輔因子NADPH或NADH的存在下與權(quán)利要求1至10中任一項(xiàng)的 工程化酮還原酶多肽接觸。
31.如權(quán)利要求24所述的方法，其中所述式（lb)的產(chǎn)物化合物包括式（Idl)和（Id3) 的化合物，并且所述方法形成非對映體過量于式（Id2)和（Id4)的化合物的式（Idl)和 (Id3)的產(chǎn)物化合物，
其中R12如在權(quán)利要求24中所定義； 所述方法包括使式（lid)的底物化合物
在適當(dāng)?shù)姆磻?yīng)條件下在輔因子NADPH或NADH的存在下與權(quán)利要求7至9中任一項(xiàng)的 工程化酮還原酶多肽接觸。
32. 如權(quán)利要求30或31所述的方法，其中所述式（lid)的底物化合物包括式（Ildl) 和（IId2)的化合物的混合物
33. 如權(quán)利要求32所述的方法，其中所述混合物是式（Ildl)和（IId2)的化合物的外 消旋混合物。
34. 如權(quán)利要求24至33中任一項(xiàng)所述的方法，其中R12選自甲基、乙基、正丙基、異丙 基、丁基、異丁基、仲丁基、和叔丁基。
35. 如權(quán)利要求34所述的方法，其中R12是叔丁基。
36. 如權(quán)利要求31所述的方法，其中以相比于式（Id2)和（Id4)的化合物的至少50的 非對映體比形成所述式（Idl)和（Id3)的產(chǎn)物化合物，所述方法包括使所述式（lid)的底 物化合物在適當(dāng)?shù)姆磻?yīng)條件下在輔因子NADPH或NADH的存在下與權(quán)利要求9的工程化酮 還原酶多肽接觸。
37. -種用于制備非對映體過量于式（Ib3)的化合物的式（Ibl)的產(chǎn)物化合物的方法，
其中， R6、R7、R8、R9 和 R1CI 各自獨(dú)立地選自 H、鹵素、-COORa、-C(0)Rb、-OR。、-S02、-SR d、-S(O) R6、-NRfRg、--N02、-CN、烷基、雜烷基、環(huán)烷基、環(huán)烷基烷基、雜環(huán)烷基、雜環(huán)烷基烷 基、芳基、芳基烷基、雜芳基和雜芳基烷基，其中1?'妒、1^、1^、1^、1^、1^、妒和紀(jì)獨(dú)立地選自Η 和任選地取代的燒基、雜燒基、環(huán)燒基、環(huán)燒基燒基、雜環(huán)燒基、雜環(huán)燒基燒基、芳基、芳基燒 基、雜芳基、和雜芳基烷基； η為1至4, R11選自Η或任選地取代的烷基、雜烷基、環(huán)烷基、環(huán)烷基烷基、芳基、芳基烷基、雜芳基、 和雜芳基烷基；以及 R12選自Η、任選地取代的烷基、環(huán)烷基、雜環(huán)烷基、芳基、雜芳基和保護(hù)基團(tuán)； 所述方法包括使式（lib)的底物化合物
其中1?6、1?7、1?8、1?9、1? 1°、1?11、1?12和11如以上定義，在用于平衡式（11131)和（1此2)的底物 化合物的適當(dāng)?shù)姆磻?yīng)條件下在NADPH或NADH的存在下與權(quán)利要求7至9中任一項(xiàng)的工程 化酮還原酶接觸
38. 如權(quán)利要求37所述的方法，其中所述底物化合物（lib)包括式（Ilbl)和（IIb2) 的化合物的混合物。
39. 如權(quán)利要求38所述的方法，其中所述混合物包括式（Ilbl)和（IIb2)的化合物的 外消旋混合物。
40. 如權(quán)利要求37至39中任一項(xiàng)所述的方法，其中η為2。
41. 如權(quán)利要求37所述的方法，其中所述式（Ibl)的產(chǎn)物化合物包括式（Idl)的化合 物，并且形成非對映體過量于式（Id3)的化合物的式（Idl)的化合物，
所述方法包括使式（lid)的底物化合物
在用于平衡式（Ildl)和（IId2)的底物化合物的適當(dāng)?shù)姆磻?yīng)條件下在NADPH或NADH 的存在下與權(quán)利要求7至9中任一項(xiàng)的工程化酮還原酶接觸
42. 如權(quán)利要求41所述的方法，其中所述式（lid)的化合物包括式（Ildl)和（IId2) 的底物化合物的混合物。
43. 如權(quán)利要求42所述的方法，其中所述混合物包括式（Ildl)和（IId2)的底物化合 物的外消旋混合物。
44. 如權(quán)利要求37至43中任一項(xiàng)所述的方法，其中用于平衡底物化合物的反應(yīng)條件包 括約9至約12的pH和約45°C至約60°C的溫度。
45. 如權(quán)利要求41所述的方法，其中所述適當(dāng)?shù)姆磻?yīng)條件包括以下底物化合物載量 濃度：約 lg/L、約 10g/L、約 20g/L、約 40g/L、約 50g/L、約 75g/L、約 100g/L、約 125g/L、約 150g/L、約 175g/L、或約 200g/L。
46. 如權(quán)利要求41所述的方法，其中所述適當(dāng)?shù)姆磻?yīng)條件包括以下工程化酮還原酶多 肽濃度：約 20g/L、約 10g/L、約 5g/L、約 4g/L、約 2g/L、約 lg/L、約 0. 5g/L、約 0. 2g/L 或約 0.lg/L〇
47. 如權(quán)利要求21至46中任一項(xiàng)所述的方法，所述方法還包括用輔因子再生系統(tǒng)將 NAD+ 或 NADP+ 轉(zhuǎn)化為 NADH 或 NADPH。
48. 如權(quán)利要求47所述的方法，其中所述輔因子再生系統(tǒng)包括酮還原酶和仲醇。
49. 如權(quán)利要求48所述的方法，其中所述仲醇為異丙醇（IPA)。
50. 如權(quán)利要求49所述的方法，所述方法還包括除去由酮還原酶介導(dǎo)的將所述IPA至 丙酮的轉(zhuǎn)化形成的丙酮的步驟。
51. 如權(quán)利要求48所述的方法，其中所述輔因子再生系統(tǒng)的所述酮還原酶為權(quán)利要求 1至10中任一項(xiàng)所述的酮還原酶。
52. 如權(quán)利要求48所述的方法，其中所述輔因子再生系統(tǒng)的所述酮還原酶為與權(quán)利要 求1至10中任一項(xiàng)所述的酮還原酶不同的酮還原酶。
53. 如權(quán)利要求41所述的方法，其中所述反應(yīng)條件包括共溶劑系統(tǒng)，所述共溶劑系統(tǒng) 包括水性緩沖溶液和IPA，其中所述IPA濃度為約5% (v/v)、約10% (v/v)、約20% (v/v)、 約 30% (v/v)、約 40% (v/v)、約 45% (v/v)、約 50% (v/v)、約 55% (v/v)、約 60% (v/v)、 約 65% (v/v)、約 70% (v/v)、約 75% (v/v)、約 80% (v/v)、約 85% (v/v)、或約 90% (v/ v)。
54. 如權(quán)利要求21所述的方法，其中所述反應(yīng)條件包括： (a) 約lg/L至約10g/L的工程化酮還原酶多肽濃度； (b) 約50g/L至約200g/L的載量濃度下的底物化合物； (c) 約 0· lg/L 至約 0· 5g/L 的 NADP (H)濃度； (d) 水性緩沖液和約30 %至約70% (v/v)的IPA的共溶劑溶液；以及 (e) 35°C至約60°C的溫度。
55. 如權(quán)利要求21至54中任一項(xiàng)所述的方法，所述方法還包括選自以下的一個(gè)或多個(gè) 步驟：提取所述產(chǎn)物化合物；分離所述產(chǎn)物化合物；純化所述產(chǎn)物化合物；和結(jié)晶所述產(chǎn)物 化合物。
56. 如權(quán)利要求21至55中任一項(xiàng)所述的方法，其中所述式（II)的底物化合物是所述 化合物的氘化形式。
【文檔編號】C12P17/10GK104053771SQ201280067329
【公開日】2014年9月17日 申請日期:2012年11月14日 優(yōu)先權(quán)日:2011年11月18日
【發(fā)明者】法比安·卡比羅爾, 陳海濱, 阿努潘·茍呵爾, 史蒂文·J·科利爾, 德里克·史密斯, 波吉特·科斯耶克, 雅各布·杰恩 申請人:科德克希思公司