專(zhuān)利名稱：斑馬魚(yú)測(cè)試水質(zhì)及其毒性的用途和方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及毒性檢測(cè)領(lǐng)域，具體涉及一種斑馬魚(yú)測(cè)試水質(zhì)及其毒性的用途和方法。
背景技術(shù)：
水在環(huán)境作用下所表現(xiàn)出來(lái)的綜合特征，即水的物理性質(zhì)和化學(xué)成分。自然界中的水，是由各種物質(zhì)(溶解性和非溶解性物質(zhì))所組成的極其復(fù)雜的綜合體。水中含有的溶解物質(zhì)，直接影響天然水的許多性質(zhì)，使水質(zhì)有優(yōu)劣之分。對(duì)日益惡化的水源污染問(wèn)題，自來(lái)水廠所采取的方式便是加入大量超過(guò)標(biāo)準(zhǔn)的氯(漂白粉)來(lái)消毒殺菌。加氯雖然能夠殺死水中的各種病菌，但它一旦與水中的有機(jī)物結(jié)合，會(huì)因余氯或漂白粉的作用，產(chǎn)生大量有機(jī)氯化物(如三氯甲烷、二溴氯甲烷)，危害人體 健康。有機(jī)氯化物在動(dòng)物體系的試驗(yàn)中已被確認(rèn)為致癌物質(zhì)。簡(jiǎn)單地檢測(cè)水質(zhì)的方法例如I. PH值試紙，標(biāo)準(zhǔn)小于不小于7. 5且不大于8. 5，色度(鉬鈷色度單位)，比色法，自制標(biāo)準(zhǔn)液，標(biāo)準(zhǔn)小于15，渾濁度(NTU-散射濁度單位)比色法，自制標(biāo)準(zhǔn)液，標(biāo)準(zhǔn)小于1，臭和味標(biāo)準(zhǔn)無(wú)異臭、異味，肉眼可見(jiàn)物標(biāo)準(zhǔn):無(wú)生活飲用水的水質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)有很多，例如感官性狀，化學(xué)指標(biāo)，毒理學(xué)指標(biāo)，細(xì)菌學(xué)指標(biāo)，放射性指標(biāo)等。具體的，例如臭和味，濁度，水溫，氨氮、硝酸鹽氮、亞硝酸鹽氮、氏氮、總氮，正磷酸鹽、總磷，pH值，無(wú)機(jī)鹽如鈉，鉀，鈣，錳，鎂等，重金屬如鉛、汞、砷等，有機(jī)物化學(xué)需氧量(C0D)、生化需氧量(BOD)、高錳酸鉀指數(shù)、總有機(jī)碳(TOC)、有色可溶性有機(jī)物(CDOM)，溶解有機(jī)碳(DOC)，致癌物如二噁英，微生物如大腸桿菌、隱孢子蟲(chóng)、蘭伯氏鞭毛蟲(chóng)
坐寸ο目前的測(cè)試水質(zhì)的指標(biāo)過(guò)多，而且工程比較大，而且對(duì)于很多未知的危害因素?zé)o法預(yù)期測(cè)量，所以急需一種能夠快速測(cè)量水質(zhì)是否滿足飲用水的要求。本發(fā)明發(fā)明人在科研過(guò)程中，有了一個(gè)驚奇的發(fā)現(xiàn)，即當(dāng)使用特殊的胚胎培養(yǎng)液培養(yǎng)斑馬魚(yú)時(shí)，在培養(yǎng)液中加入需要檢測(cè)的水源，能夠使胚胎對(duì)水質(zhì)的不良反應(yīng)在較短的時(shí)間內(nèi)表現(xiàn)出來(lái)，大大縮短了檢測(cè)周期。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明所要解決的技術(shù)問(wèn)題提供一種斑馬魚(yú)測(cè)試水質(zhì)及其毒性的用途和方法。為了解決上述問(wèn)題，本發(fā)明采用以下的技術(shù)方案。本發(fā)明提供一種斑馬魚(yú)測(cè)試水質(zhì)及其毒性的用途和方法，其特征在于包含如下步驟配制胚胎培養(yǎng)液，然后向胚胎培養(yǎng)液中加入待測(cè)水源，待測(cè)水源的加入體積與胚胎培養(yǎng)液的體積比為I : 3，用加入了待測(cè)水源的胚胎培養(yǎng)液培養(yǎng)斑馬魚(yú)胚胎，然后在12-24小時(shí)觀察記錄斑馬魚(yú)胚胎發(fā)育的畸形率和死亡率，來(lái)判斷待測(cè)水源對(duì)胚胎的毒性。其中胚胎培養(yǎng)液用pH為6. 7-8. 5的弱堿性水直接配制，胚胎培養(yǎng)液中含有5mM NaCUO. 17mMKCl、0· 43mM CaCl2 和 O. 33mM MgSO4。上述方法中，斑馬魚(yú)胚胎通過(guò)如下方法選擇采卵前一天將性成熟的斑馬魚(yú)，按雌雄為I : 2的比例放入配缸內(nèi)并隔開(kāi)，次日上午9:00自然交配并收集受精卵，用胚胎培養(yǎng)液清洗兩次收集得到的受精卵，并去除雜質(zhì)和壞卵，之后后置于胚胎培養(yǎng)液中，29. 3°C進(jìn)行控光培養(yǎng)；當(dāng)2hpf時(shí)，在顯微鏡下挑選來(lái)自同一親本、正常發(fā)育比率達(dá)85%以上且發(fā)育時(shí)期一致的斑馬魚(yú)胚胎。上述方法中，培養(yǎng)斑馬魚(yú)胚胎的方法如下將斑馬魚(yú)胚胎用胚胎培養(yǎng)液清洗兩次，然后移入24孔板的樣孔中，每孔20枚，每孔滴加加入了待測(cè)水源的胚胎培養(yǎng)液，每孔4ml，隨后加蓋封閉，置于培養(yǎng)箱中，在29. 3°C培養(yǎng)斑馬魚(yú)胚胎。上述方法中，觀察記錄的時(shí)間是培養(yǎng)后第12、18、24小時(shí)，記錄畸形率和死亡率。
上述方法中，pH為7. 0-7. 8，優(yōu)選地，pH為7. 2?；问侵赴唏R魚(yú)體型與正常的相同培養(yǎng)時(shí)間單用胚胎培養(yǎng)液培養(yǎng)的斑馬魚(yú)體型有差異。死亡是指用攪拌棒觸碰斑馬魚(yú)尾部時(shí)斑馬魚(yú)沒(méi)有任何反應(yīng)。上述方法中，所述的待測(cè)水源為任何需要測(cè)量其對(duì)生物毒性的水源，優(yōu)選地，待測(cè)水源為天然泉水、河水、飲用水、工廠污水等，尤其優(yōu)選地是含有重金屬鉛和鉻超標(biāo)的待測(cè)水源，二氯甲烷或甲苯超標(biāo)的水源。本發(fā)明還提供了斑馬魚(yú)用于測(cè)試待測(cè)水源毒性的用途，其特征在于向胚胎培養(yǎng)液中加入待測(cè)水源，待測(cè)水源的加入體積與胚胎培養(yǎng)液的體積比為I : 3，用加入了待測(cè)水源的胚胎培養(yǎng)液培養(yǎng)斑馬魚(yú)胚胎，然后在12-24小時(shí)觀察記錄斑馬魚(yú)胚胎發(fā)育的畸形率和死亡率，來(lái)判斷待測(cè)水源對(duì)胚胎的毒性，其中胚胎培養(yǎng)液用pH為6. 7-8. 5的弱堿性水直接配制，胚胎培養(yǎng)液中含有 5mM NaCl.O. 17mM KCl、0· 43mM CaCl2 和 0. 33mM MgSO4。本發(fā)明配制胚胎培養(yǎng)液所用的氯化鈉、氯化鉀、氯化鈣、硫酸鎂以及弱堿性水等均為市購(gòu)，其中無(wú)機(jī)鹽均為AR級(jí)；需要特別說(shuō)明的是，弱堿性水可以采用任何通過(guò)光電催化電解水獲得的弱堿性水，該弱堿性水的PH為6. 7-8. 5，可以通過(guò)市場(chǎng)上的弱堿性水制備裝置制備，也可以自行通過(guò)電解的方式制備，需要注意的是本發(fā)明的弱堿性水并不是通過(guò)在水中加入化學(xué)物質(zhì)制備得到的弱堿性水，任何通過(guò)加入化學(xué)物質(zhì)到水中制備的弱堿性水不是本發(fā)明所說(shuō)的弱堿性水。弱堿性水的PH可以在制備中調(diào)節(jié)，而不是通過(guò)加入化學(xué)物質(zhì)調(diào)節(jié)pH。本發(fā)明的有益效果本發(fā)明使用弱堿性水配制的胚胎培養(yǎng)液來(lái)作為測(cè)試待測(cè)水源毒性的培養(yǎng)液，其不僅因?yàn)榕囵B(yǎng)液中的水為弱堿性水，還因?yàn)榕囵B(yǎng)液中的無(wú)機(jī)鹽的特定組成，使得斑馬魚(yú)胚胎能夠快速測(cè)試待測(cè)水源的綜合毒性，縮短了檢測(cè)周期。
具體實(shí)施例方式為了理解本發(fā)明，下面以實(shí)施例進(jìn)一步說(shuō)明本發(fā)明，但本發(fā)明并不限制于此。實(shí)施例I最佳胚胎培養(yǎng)液的篩選I. I不同配方的胚胎培養(yǎng)液的配制及培養(yǎng)斑馬魚(yú)的效果A用普通水配制包含以下濃度無(wú)機(jī)鹽的胚胎培養(yǎng)液，調(diào)節(jié)pH為7. 2，培養(yǎng)斑馬魚(yú)胚胎72小時(shí)，觀察斑馬魚(yú)的透明度和存活率。具體結(jié)果見(jiàn)表I :表I普通水配制的胚胎培養(yǎng)液對(duì)斑馬魚(yú)胚胎的影響
權(quán)利要求
1.一種斑馬魚(yú)測(cè)試水質(zhì)及其毒性的方法，其特征在于包含如下步驟 配制胚胎培養(yǎng)液，然后向胚胎培養(yǎng)液中加入待測(cè)水源，待測(cè)水源的加入體積與胚胎培養(yǎng)液的體積比為I : 3，用加入了待測(cè)水源的胚胎培養(yǎng)液培養(yǎng)斑馬魚(yú)胚胎，然后在12-24小時(shí)觀察記錄斑馬魚(yú)胚胎發(fā)育的畸形率和死亡率，來(lái)判斷待測(cè)水源對(duì)胚胎的毒性。
2.根據(jù)權(quán)利要求I所述的方法，其中胚胎培養(yǎng)液用PH為6.7-8. 5的弱堿性水直接配制，胚胎培養(yǎng)液中含有 5mM NaCl、O. 17mM KCl、O. 43mM CaCl2 和 O. 33mM MgSO4。
3.根據(jù)權(quán)利要求I或2所述的方法，其中斑馬魚(yú)胚胎通過(guò)如下方法選擇 采卵前一天將性成熟的斑馬魚(yú)，按雌雄為I : 2的比例放入配缸內(nèi)并隔開(kāi)，次日上午9:00自然交配并收集受精卵,用胚胎培養(yǎng)液清洗兩次收集得到的受精卵，并去除雜質(zhì)和壞卵，之后后置于胚胎培養(yǎng)液中，29. 3°C進(jìn)行控光培養(yǎng)；當(dāng)2hpf時(shí),在顯微鏡下挑選來(lái)自同一親本、正常發(fā)育比率達(dá)85%以上且發(fā)育時(shí)期一致的斑馬魚(yú)胚胎。
4.根據(jù)權(quán)利要求1-3任一項(xiàng)所述的方法，其中培養(yǎng)斑馬魚(yú)胚胎的方法如下將斑馬魚(yú)胚胎用胚胎培養(yǎng)液清洗兩次，然后移入24孔板的樣孔中，每孔20枚，每孔滴加加入了待測(cè)水源的胚胎培養(yǎng)液，每孔4ml，隨后加蓋封閉，置于培養(yǎng)箱中，在29. 3°C培養(yǎng)斑馬魚(yú)胚胎。
5.根據(jù)權(quán)利要求1-4任一項(xiàng)所述的方法，其中觀察記錄的時(shí)間是培養(yǎng)后第12、18、24小時(shí),記錄畸形率和死亡率。
6.根據(jù)權(quán)利要求1-5任一項(xiàng)所述的方法，其中pH為7.0-7. 8。
7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的方法，其中pH為7.2。
8.根據(jù)權(quán)利要求1-7任一項(xiàng)所述的方法，其中待測(cè)水源為任何需要測(cè)量其對(duì)生物毒性的水源。
9.斑馬魚(yú)用于測(cè)試待測(cè)水源毒性的用途，其特征在于向胚胎培養(yǎng)液中加入待測(cè)水源，待測(cè)水源的加入體積與胚胎培養(yǎng)液的體積比為I : 3，用加入了待測(cè)水源的胚胎培養(yǎng)液培養(yǎng)斑馬魚(yú)胚胎，然后在12-24小時(shí)觀察記錄斑馬魚(yú)胚胎發(fā)育的畸形率和死亡率，來(lái)判斷待測(cè)水源對(duì)胚胎的毒性，其中胚胎培養(yǎng)液用PH為6. 7-8. 5的弱堿性水直接配制，胚胎培養(yǎng)液中含有 5mM NaCl、O. 17mM KCl、O. 43mM CaCl 2 和 O. 33mM MgSO4。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種斑馬魚(yú)測(cè)試水質(zhì)及其毒性的用途和方法，其特征在于方法包含如下步驟配制胚胎培養(yǎng)液，然后向胚胎培養(yǎng)液中加入待測(cè)水源，待測(cè)水源的加入體積與胚胎培養(yǎng)液的體積比為1∶3，用加入了待測(cè)水源的胚胎培養(yǎng)液培養(yǎng)斑馬魚(yú)胚胎，然后在12-24小時(shí)觀察記錄斑馬魚(yú)胚胎發(fā)育的畸形率和死亡率，來(lái)判斷待測(cè)水源對(duì)胚胎的毒性。其中胚胎培養(yǎng)液用pH為6.7-8.5的弱堿性水直接配制，胚胎培養(yǎng)液中含有5mM NaCl、0.17mM KCl、0.43mM CaCl2和0.33mMMgSO4。本發(fā)明使用弱堿性水配制的胚胎培養(yǎng)液使得斑馬魚(yú)胚胎能夠快速測(cè)試待測(cè)水源的綜合毒性，縮短了檢測(cè)周期。
文檔編號(hào)C12Q1/02GK102899383SQ20121045390
公開(kāi)日2013年1月30日 申請(qǐng)日期2012年11月13日 優(yōu)先權(quán)日2012年11月13日
發(fā)明者陳 峰 申請(qǐng)人:中國(guó)科學(xué)院華南植物園, 陳 峰