專利名稱：皮膚及毛發(fā)顏色控制因子的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及角質(zhì)形成細(xì)胞(keratinocyte)中黑色素量的調(diào)節(jié)，以及皮膚或者毛發(fā)的顏色的控制。
背景技術(shù)：
作為決定皮膚或者毛發(fā)的顏色的因子，雖然報(bào)告有種種，但是認(rèn)為其中存在于表皮的黑色素的量或質(zhì)對(duì)皮膚或者毛發(fā)的顏色產(chǎn)生大的影響。即，皮膚或者毛發(fā)的顏色的形成受到由在黑色素細(xì)胞(melanocyte)中的被稱為黑素體(melanosome)的細(xì)胞小器官中制造的黑色素(melanin)向表皮或者毛囊的角質(zhì)形成細(xì)胞中傳送從而遍及表皮或者毛發(fā)整體的過(guò)程的很大影響。從很久以前就已知由該黑色素細(xì)胞產(chǎn)生的黑色素的產(chǎn)生量是與個(gè)體的皮膚或者毛發(fā)的顏色相關(guān)聯(lián)的因子?，F(xiàn)有的皮膚美白劑主要是以在黑色素細(xì)胞中的黑色素產(chǎn)生為目的而開(kāi)發(fā)的。例如，在非專利文獻(xiàn)I中，作為具有通過(guò)阻礙酪氨酸酶的酶活性而抑制黑色素產(chǎn)生的作用的皮膚美白劑，報(bào)告有抗壞血酸、熊果苷、曲酸等，其中，酪氨酸酶是有關(guān)從黑色素前體的酪氨酸轉(zhuǎn)化為黑色素的酶。另一方面，還報(bào)告有由皮膚顏色的不同而發(fā)現(xiàn)在黑色素細(xì)胞中黑色素的存在模式或者成熟狀態(tài)中的差異(非專利文獻(xiàn)2)。即，認(rèn)為在黑色素細(xì)胞中的黑色素動(dòng)態(tài)可能會(huì)在決定皮膚顏色中具有某些作用。在至今的報(bào)告中，啟示了感受器分子PAR-2參與黑色素細(xì)胞中黑色素的獲取(貪食)，以及通過(guò)調(diào)節(jié)其活性來(lái)控制皮膚顏色的可能性(非專利文獻(xiàn)3)。另外，還啟示了蛋白質(zhì)分子動(dòng)力蛋白(Dynein)或者動(dòng)力激活蛋白(Dynactin)參與黑色素傳送到黑色素細(xì)胞之后局部存在于該黑色素細(xì)胞內(nèi)(非專利文獻(xiàn)4和5)。進(jìn)一步，最近啟示了與稱作絲狀偽足(Filopodia)的細(xì)胞結(jié)構(gòu)的形成相關(guān)的蛋白質(zhì)分子MyoX參與從黑色素細(xì)胞傳送至角質(zhì)形成細(xì)胞、以及從角質(zhì)形成細(xì)胞傳送至角質(zhì)形成細(xì)胞的兩種黑色素傳送(非專利文獻(xiàn)6)。然而，關(guān)于在黑色素細(xì)胞中產(chǎn)生的黑色素(黑素體)通過(guò)角質(zhì)形成細(xì)胞來(lái)獲取、輸送、以及代謝的機(jī)理，尚未充分明確，也沒(méi)有驗(yàn)證其對(duì)于皮膚顏色的作用。另外，最近，還啟示了通過(guò)使用來(lái)自不同民族的角質(zhì)形成細(xì)胞進(jìn)行探討，在獲取的黑色素的代謝能中存在民族差異(非專利文獻(xiàn)7)。本論文報(bào)告了在表皮細(xì)胞獲取了用熒光物質(zhì)標(biāo)識(shí)的黑色素之后，根據(jù)表皮細(xì)胞內(nèi)的熒光消退的結(jié)果發(fā)現(xiàn)，黑色素在白人的表皮細(xì)胞中容易分解。然而，關(guān)于參與分解的機(jī)理或者特定的因子沒(méi)有任何提及。已知CLIP-170、RAB7B、Rubicon、RABllA和ATG7作為參與囊泡的輸送或者局部存在、或者囊泡的分解或者自噬的分子(非專利文獻(xiàn)8 16)。但是，角質(zhì)形成細(xì)胞內(nèi)的黑色素動(dòng)態(tài)，例如這些分子參與黑色素的獲取、輸送、局部存在或者存積、排出或者分解等迄今為止尚未明確。現(xiàn)有技術(shù)文獻(xiàn)非專利文獻(xiàn)

非專利文獻(xiàn)1:美白戰(zhàn)略(南江堂)IV.，美白劑的藥理和臨床，P95-116
非專利文獻(xiàn)2:Thong et al, (2003)Br J Dermatol 149:498-505非專利文獻(xiàn)3:Lin et al, (2008)Pigment Cell Melanoma Res21:172-183非專利文獻(xiàn)4:Byers et al, (2003) J Invest Dermatol 121:813-820非專利文獻(xiàn)5:Byers et al, (2007) J Invest Dermatol 127:1736-1744非專利文獻(xiàn)6:Singh et al, (2010)FASEB J24:3756-3769非專利文獻(xiàn)7:Ebanks et al, (2011) J Invest Dermatol 131:1226-1233非專利文獻(xiàn)8:Vaughan et al, (1999) J Cell Scill2:1437-1447非專利文獻(xiàn)9:Yang et al, (2004)Biochem Biophys Res Commun318:792-799非專利文獻(xiàn)10:Wang et al, (2007)Bloodll0:962_971非專利文獻(xiàn)11:Yao et al, (2009)J Immunoll83:1751-1758非專利文獻(xiàn)12:Progida et al, (2010) J Cell Scil23:1480-1491非專利文獻(xiàn)13:Matsunaga et al, (2009)Nat Cell Biolll: 385-396非專利文獻(xiàn)14:Bryant et al, (2010)Nat Cell Bioll2:1035-1045非專利文獻(xiàn)15: Ishida-Yamamoto et al, (2007) J InvestDermatol127:2166-2170
非專利文獻(xiàn)16:Komatsu et al, (2005) J Cell Bioll69:425_43
發(fā)明內(nèi)容
在一個(gè)實(shí)施方式中，本發(fā)明提供以下的一種角質(zhì)形成細(xì)胞中黑色素量調(diào)節(jié)劑的評(píng)價(jià)和/或選擇方法，其中，包括下述工序:向細(xì)胞給予被檢測(cè)物質(zhì)的工序；測(cè)定該細(xì)胞中選自ATG7、RAB11A、CLIP-170, Rubicon和RAB7B的基因中至少I種基因的表達(dá)的變化、或者由該基因編碼的分子中至少I種分子的表達(dá)或活性的變化的工序;基于該測(cè)定的結(jié)果，評(píng)價(jià)該被檢測(cè)物質(zhì)的黑色素量調(diào)節(jié)作用的工序；以及基于該評(píng)價(jià)的結(jié)果，選擇該被檢測(cè)物質(zhì)作為角質(zhì)形成細(xì)胞中黑色素量調(diào)節(jié)劑的工序。在其它實(shí)施方式中，本發(fā)明提供以下的一種皮膚或者毛發(fā)顏色控制劑的評(píng)價(jià)和/或選擇方法，其中，包括下述工序:向細(xì)胞給予被檢測(cè)物質(zhì)的工序；測(cè)定該細(xì)胞中選自ATG7、RAB11A、CLIP-170, Rubicon和RAB7B的基因中至少I種基因的表達(dá)的變化、或者由該基因編碼的分子中至少I種分子的表達(dá)或活性的變化的工序;基于該測(cè)定的結(jié)果，評(píng)價(jià)該被檢測(cè)物質(zhì)的皮膚或者毛發(fā)顏色控制作用的工序；以及基于該評(píng)價(jià)的結(jié)果，選擇該被檢測(cè)物質(zhì)作為皮膚或者毛發(fā)顏色控制劑的工序。進(jìn)一步在其它的實(shí)施方式中，本發(fā)明提供一種調(diào)節(jié)角質(zhì)形成細(xì)胞中黑色素量的方法，其中，包括對(duì)希望黑色素量調(diào)節(jié)的角質(zhì)形成細(xì)胞中選自ATG7、RAB11A、CLIP-170,Rubicon和RAB7B的基因中至少1種基因的表達(dá)或者由該基因編碼的分子中至少I種分子的表達(dá)或活性進(jìn)行調(diào)節(jié)的工序。進(jìn)一步在其它實(shí)施方式中，本發(fā)明提供一種控制被檢測(cè)體中皮膚或毛發(fā)顏色的方法，其中，包括對(duì)希望皮膚或毛發(fā)顏色控制的被檢測(cè)體的角質(zhì)形成細(xì)胞中選自ATG7、RAB11A.CLIP-170,Rubicon和RAB7B的基因中至少I種基因的表達(dá)或者由該基因編碼的分子中至少I種分子的表達(dá)或活性進(jìn)行調(diào)節(jié)的工序。另外在其它的實(shí)施方式中，本發(fā)明提供一種選自ATG7、RABllA、CLIP_170、Rubicon和RAB7B的基因或者由該基因編碼的分子在用于調(diào)節(jié)角質(zhì)形成細(xì)胞中黑色素量中的用途。另外在其它實(shí)施方式中，本發(fā)明提供一種選自ATG7、RAB11A、CLIP-170, Rubicon和RAB7B的基因或者由該基因編碼的分子在用于控制皮膚或者毛發(fā)顏色中的用途。 進(jìn)一步在一個(gè)實(shí)施方式中，本發(fā)明提供一種皮膚或毛發(fā)顏色控制基因，其特征為，所述皮膚或毛發(fā)顏色控制基因選自ATG7基因、RABllA基因、CLIP-170基因、Rubicon基因和RAB7B基因，并且與角質(zhì)形成細(xì)胞中黑色素量調(diào)節(jié)相關(guān)。


圖1為顯示在CLIP-170、RAB7B或者Rubicon基因的表達(dá)抑制后的角質(zhì)形成細(xì)胞中黑色素分布的顯微鏡圖像。A.左上:對(duì)照、右上:CLIP-170抑制、左下:RAB7B抑制、右下:Rubicon抑制。B.A中四方形所圍部分的放大圖像。圖2為CLIP-170、RAB7B或者Rubicon基因的表達(dá)抑制后的角質(zhì)形成細(xì)胞中黑色
素量變化。圖3為CLIP-170、RAB7B或者Rubicon基因的表達(dá)抑制后的角質(zhì)形成細(xì)胞中黑色素(黑素體)量變化:蛋白質(zhì)印跡(Western blotting)像。圖4為黑色素添加后RAB7B的表達(dá)變化。圖5為RABl IA或ATG7基因的表達(dá)抑制后的角質(zhì)形成細(xì)胞中黑色素(黑素體)量變化:蛋白質(zhì)印跡像。A:RAB11A表達(dá)抑制。B:ATG7表達(dá)抑制。圖6為皮膚中RABllA基因表達(dá)和皮膚顏色的相關(guān)性。A =RABllA基因表達(dá)量在民族間的比較。B =RABllA基因表達(dá)量和皮膚顏色(L*值)的相關(guān)性。
具體實(shí)施例方式本發(fā)明涉及參與角質(zhì)形成細(xì)胞中黑色素的局部存在、存積、排出或者分解，并且與角質(zhì)形成細(xì)胞中黑色素量調(diào)節(jié)、以及皮膚或者毛發(fā)顏色控制相關(guān)的因子。另外，本發(fā)明涉及使用該因子調(diào)節(jié)角質(zhì)形成細(xì)胞中黑色素量的方法；控制皮膚或者毛發(fā)顏色的方法；以及使用該因子評(píng)價(jià)和/或選擇角質(zhì)形成細(xì)胞中黑色素量調(diào)節(jié)劑、或者皮膚或者毛發(fā)顏色控制劑的方法。本發(fā)明者們?yōu)榱嗣鞔_皮膚或者毛發(fā)顏色與角質(zhì)形成細(xì)胞內(nèi)基因表達(dá)的關(guān)聯(lián)性，探索角質(zhì)形成細(xì)胞中黑色素量調(diào)節(jié)相關(guān)的基因，另外針對(duì)該基因表達(dá)對(duì)角質(zhì)形成細(xì)胞中黑色素動(dòng)態(tài)的影響進(jìn)行調(diào)查，結(jié)果發(fā)現(xiàn)角質(zhì)形成細(xì)胞中黑色素局部存在、存積、排出或者分解相關(guān)的幾個(gè)基因，并且這些的基因的表達(dá)量和皮膚顏色之間具有高的相關(guān)性。從這些結(jié)果，本發(fā)明者們發(fā)現(xiàn)如果利用該基因或者其表達(dá)產(chǎn)物，可以控制角質(zhì)形成細(xì)胞中黑色素量、或者皮膚或者毛發(fā)顏色。根據(jù)本發(fā)明，可以提供皮膚或者毛發(fā)顏色控制基因，其通過(guò)對(duì)角質(zhì)形成細(xì)胞中黑色素的局部存在、存積、排出分解產(chǎn)生影響而能夠控制皮膚或者毛發(fā)顏色。通過(guò)調(diào)節(jié)該基因或者其表達(dá)產(chǎn)物的表達(dá)或活性，可以調(diào)節(jié)角質(zhì)形成細(xì)胞中黑色素的量或者分布，控制皮膚或者毛發(fā)的顏色。另外該基因或者其表達(dá)產(chǎn)物，將其表達(dá)或活性作為指標(biāo)，可以評(píng)價(jià)和/或選擇能夠控制皮膚或者毛發(fā)顏色的素材，因此對(duì)于皮膚或者毛發(fā)顏色控制劑，例如美白劑、曬黑劑(tanning agent)、毛發(fā)染色劑或者漂白劑、黑發(fā)劑等的開(kāi)發(fā)有用。本發(fā)明提供選自ATG7基因、RABllA基因、CLIP-170基因、Rubicon基因以及RAB7B基因中的皮膚或者毛發(fā)顏色控制基因。上述所列舉的基因雖然按照下述表I在公知的數(shù)據(jù)庫(kù)中進(jìn)行登記，但是其參與角質(zhì)形成細(xì)胞內(nèi)的黑色素的動(dòng)態(tài)，例如黑色素的獲取、輸送、局部存在、存積、排出或者分解等是在現(xiàn)有技術(shù)中未知的。[表 I]
權(quán)利要求
1.一種角質(zhì)形成細(xì)胞中黑色素量調(diào)節(jié)劑的評(píng)價(jià)和/或選擇方法，其中， 包括下述工序: 向細(xì)胞給予被檢測(cè)物質(zhì)的工序； 測(cè)定該細(xì)胞中選自ATG7、RABl 1A、CLIP-170、Rubicon和RAB7B的基因中至少I種基因的表達(dá)的變化、或者由該基因編碼的分子中至少I種分子的表達(dá)或活性的變化的工序； 基于該測(cè)定的結(jié)果，評(píng)價(jià)該被檢測(cè)物質(zhì)的黑色素量調(diào)節(jié)作用的工序；以及 基于該評(píng)價(jià)的結(jié)果，選擇該被檢測(cè)物質(zhì)作為角質(zhì)形成細(xì)胞中黑色素量調(diào)節(jié)劑的工序。
2.如權(quán)利要求1所述的方法，其中， 在所述基因的表達(dá)或者所述分子的表達(dá)或活性被抑制的情況下，選擇所述被檢測(cè)物質(zhì)作為角質(zhì)形成細(xì)胞中黑色素量增加劑。
3.如權(quán)利要求1所述的方法，其中， 在所述基因的表達(dá)或者所述分子的表達(dá)或活性被增強(qiáng)的情況下，選擇所述被檢測(cè)物質(zhì)作為角質(zhì)形成細(xì)胞中黑色素量降低劑。
4.一種皮膚或者毛發(fā)顏色控制劑的評(píng)價(jià)和/或選擇方法，其中， 包括下述工序: 向細(xì)胞給予被檢測(cè)物質(zhì)的工序； 測(cè)定該細(xì)胞中選自ATG7、RABl 1A、CLIP-170、Rubicon和RAB7B的基因中至少I種基因的表達(dá)的變化、或者由該基因編碼的分子中至少I種分子的表達(dá)或活性的變化的工序； 基于該測(cè)定的結(jié)果，評(píng)價(jià)該被檢測(cè)物質(zhì)的皮膚或者毛發(fā)顏色控制作用的工序；以及 基于該評(píng)價(jià)的結(jié)果，選擇該被檢測(cè)物質(zhì)作為皮膚或者毛發(fā)顏色控制劑的工序。
5.如權(quán)利要求4所述的方法，其中， 在所述基因的表達(dá)或者所述分子的表達(dá)或活性被抑制的情況下，評(píng)價(jià)所述被檢測(cè)物質(zhì)具有使皮膚或毛發(fā)顏色暗色化的作用，選擇其作為皮膚或毛發(fā)的暗色化劑。
6.如權(quán)利要求4所述的方法，其中， 在所述基因的表達(dá)或者所述分子的表達(dá)或活性被增強(qiáng)的情況下，評(píng)價(jià)所述被檢測(cè)物質(zhì)具有使皮膚或者毛發(fā)顏色亮色化的作用，選擇其作為皮膚或毛發(fā)的亮色化劑。
7.一種調(diào)節(jié)角質(zhì)形成細(xì)胞中黑色素量的方法，其中， 包括對(duì)希望黑色素量調(diào)節(jié)的角質(zhì)形成細(xì)胞中選自ATG7、RAB11A、CLIP-170, Rubicon和RAB7B的基因中至少I種基因的表達(dá)或者由該基因編碼的分子中至少I種分子的表達(dá)或活性進(jìn)行調(diào)節(jié)的工序。
8.如權(quán)利要求7所述的方法，其中， 所述基因的表達(dá)或者所述分子的表達(dá)或活性被抑制，角質(zhì)形成細(xì)胞中黑色素量增加。
9.如權(quán)利要求7所述的方法，其中， 所述基因的表達(dá)或者所述分子的表達(dá)或活性被增強(qiáng)，角質(zhì)形成細(xì)胞中黑色素量減少。
10.一種控制被檢測(cè)體中皮膚或毛發(fā)顏色的方法，其中， 包括對(duì)希望皮膚或毛發(fā)顏色控制的被檢測(cè)體的角質(zhì)形成細(xì)胞中選自ATG7、RAB11A、CLIP-170, Rubicon和RAB7B的基因中至少I種基因的表達(dá)或者由該基因編碼的分子中至少I種分子的表達(dá)或活性進(jìn)行調(diào)節(jié)的工序。
11.如權(quán)利要求10所述的方法，其中，皮膚角質(zhì)形成細(xì)胞中所述基因的表達(dá)或者所述分子的表達(dá)或活性被抑制，皮膚顏色被暗色化。
12.如權(quán)利要求10所述的方法，其中， 在皮膚角質(zhì)形成細(xì)胞中所述基因的表達(dá)或者所述分子的表達(dá)或活性被增強(qiáng)，皮膚顏色被亮色化。
13.如權(quán)利要求10所述的方法，其中， 毛囊角質(zhì)形成細(xì)胞中所述基因的表達(dá)或者所述分子的表達(dá)或活性被抑制，毛發(fā)顏色被暗色化。
14.如權(quán)利要求10所述的方法，其中， 毛囊角質(zhì)形成細(xì)胞中所述基因的表達(dá)或者所述分子的表達(dá)或活性被增強(qiáng)，毛發(fā)顏色被亮色化。
15.如權(quán)利要求7 14中任一項(xiàng)所述的方法，其中， 所述方法是非治療性方法。
16.一種選自ATG7、RABl 1A、CLIP-170, Rubicon和RAB7B的基因或者由該基因編碼的分子在用于調(diào)節(jié)角質(zhì)形成細(xì)胞中黑色素量中的用途。
17.如權(quán)利要求16所述的用途，其中， 所述用途是用于使黑色素量增加或者減少的用途。
18.一種選自ATG7 、RABl 1A、CLIP-170、Rubicon和RAB7B的基因或者由該基因編碼的分子在用于控制皮膚或毛發(fā)顏色中的用途。
19.如權(quán)利要求22所述的用途，其中， 所述用途是用于使皮膚或毛發(fā)顏色暗色化或亮色化的用途。
20.如權(quán)利要求24所述的用途，其中， 所述用途是用于使皮膚或毛發(fā)顏色暗色化或亮色化的用途。
21.如權(quán)利要求16 20中任一項(xiàng)所述的用途，其中， 所述用途是非治療性用途。
22.一種皮膚或毛發(fā)顏色控制基因，其特征為， 所述皮膚或毛發(fā)顏色控制基因選自ATG7基因、RABllA基因、CLIP-170基因、Rubicon基因和RAB7B基因，并且與角質(zhì)形成細(xì)胞中黑色素量調(diào)節(jié)相關(guān)。
全文摘要
一種選自ATG7基因、RAB11A基因、CLIP-170基因、Rubicon基因和RAB7B基因的、與角質(zhì)形成細(xì)胞中黑色素量調(diào)節(jié)以及皮膚或毛發(fā)顏色控制相關(guān)的基因，以及由該基因編碼的分子。
文檔編號(hào)C12Q1/68GK103180441SQ20118005126
公開(kāi)日2013年6月26日 申請(qǐng)日期2011年10月31日 優(yōu)先權(quán)日2010年11月1日
發(fā)明者村瀬大樹(shù), 八谷輝 申請(qǐng)人:花王株式會(huì)社