專利名稱：用于預(yù)測尿道下裂易感性的基因芯片的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種用于預(yù)測疾病易感性的基因芯片，具體講是一種用于預(yù)測尿道下裂易感性的基因芯片。
背景技術(shù)：
尿道下裂是睪丸發(fā)育不全綜合癥的一種，它是男性泌尿生殖系統(tǒng)最常見的畸形之一，因為尿道褶不完全融合或尿道融合的發(fā)育停止，導(dǎo)致尿道沿陰莖腹側(cè)異常開裂，尿道開裂部位可能位于陰莖頭部、陰莖甚至陰囊或會陰的更后端，它屬于常見的陰莖先天性發(fā)育不全。尿道下裂的發(fā)病率在不同國家和人種之間各有不同，但總體來說在全世界范圍內(nèi)均呈上升趨勢，目前亞洲、歐洲和北美的男嬰患病率介于0.3%和0.8%之間。近年來，隨著外科技術(shù)和器械的進(jìn)步，對于尿道下裂的治療也有明顯進(jìn)展。雖然大多數(shù)患有此癥的兒童在出生后可進(jìn)行尿道修復(fù)手術(shù)，但是在以后的生活中患者仍有可能遇上一系列社會和生殖問題，因此人們對尿道下裂的發(fā)病原因也更加關(guān)注。目前的研究仍然無法對尿道下裂的病因?qū)W作清晰的闡述，從大量的調(diào)查數(shù)據(jù)來看，中早期的尿道下裂均表現(xiàn)為家族性疾病，這揭示了尿道下裂的病因?qū)W研究中遺傳性因素的重要性。研究人員試圖從分子水平解釋此類先天性發(fā)育畸形疾病的發(fā)生，以便從其發(fā)生之始便進(jìn)行干預(yù)。尿道下裂可能與隱睪在病因上存在共同的致病因素，臨床上一般認(rèn)為尿道下裂是性別分化和發(fā)育異常綜合癥的一種表現(xiàn)，是一種不同程度的性別發(fā)育畸形。總體上來說，尿道下裂是一種經(jīng)遺傳和環(huán)境因素等多因子影響的先天性身體機能紊亂。男性泌尿生殖系統(tǒng)的發(fā)育是一個綜合過程，包括遺傳編碼、細(xì)胞分化、旁分泌和自分泌調(diào)節(jié)的激素信號傳導(dǎo)、酶活性和按預(yù)定順序進(jìn)行的組織重塑等，這些過程都以時間和濃度依賴的方式發(fā)生。其中，雄激素和雌激素之間的平衡對于男性生殖系統(tǒng)的正常發(fā)育尤為重要。男嬰尿道和外部生殖系統(tǒng)的發(fā)育是一個雄激素依賴的過程，雄激素的合成和代謝異?？赡軙?dǎo)致異常的生殖系統(tǒng)發(fā)育。陰莖的完整器官形成大約在胚胎第46周完成，它不僅受到胎兒睪丸發(fā)育的影響， 也受胎盤促性腺激素的調(diào)控，胎兒睪丸發(fā)育不全、雄激素作用失調(diào)所導(dǎo)致的尿道溝不能閉合是尿道下裂產(chǎn)生的原因。男嬰外部生殖器官正常表型的發(fā)育需要這些器官組織的原始細(xì)胞內(nèi)睪酮(T)和二氫睪酮(DHT)之間的轉(zhuǎn)化。其中17 β-羥類固醇脫氫酶3(17 β HSD3，由 HSD17B3編碼)和類固醇5 α -還原酶II (由SRD5A2編碼)與此類雄激素的合成和代謝相關(guān)。HSD17B3基因位于染色體9q22上，它包括11個外顯子。在睪丸內(nèi)，17 β HSD3同工酶催化C19-類固醇雄留烯二酮轉(zhuǎn)化為生物學(xué)活性更大的雄激素睪酮(T)。17 β HSD3的異常會導(dǎo)致睪酮分泌水平或者生物活性的改變，從而影響睪丸的功能。HSD17B3基因的多個SNP (單核苷酸多態(tài)性)位點與尿道下裂有關(guān)，尿道下裂可能由HSD17B3基因的突變引起，導(dǎo)致男嬰體內(nèi)17i3HSD3同工酶存在缺陷，進(jìn)而影響睪酮的分泌量和生物活性。SRD5A2基因位于染色體2p23上，長約1401Λ，包含5個外顯子和4個內(nèi)含子。它編碼的類固醇5 α -還原酶II為含有259個氨基酸的疏水蛋白，與男性性別分化相關(guān)。類固醇5 α -還原酶II將外周靶組織分泌的雄激素睪酮(T)轉(zhuǎn)變?yōu)槎洳G酮(DHT)，二氫睪酮(DHT)進(jìn)一步刺激陰莖完整器官的形成。而SRD5A2的多態(tài)性變異體影響了 5 α -還原酶 II的活性，至今發(fā)現(xiàn)該基因近30種突變，包括堿基缺失、點突變、移碼突變等，最多見的突變位點是第4外顯子，其次是第1、5外顯子。突變基因編碼的酶活性下降，導(dǎo)致對底物雄激素親和力下降和二氫睪酮的水平不足，可能導(dǎo)致尿道下裂等缺陷。此外，在胎兒期、圍產(chǎn)期母體及胎兒環(huán)境外源性雌激素物質(zhì)暴露增加可能干擾了正常的內(nèi)分泌功能，影響睪丸間質(zhì)細(xì)胞(Leydig cells)及支持細(xì)胞(Sertoli cells)的發(fā)育，從而也會導(dǎo)致了尿道下裂發(fā)生率的增高。導(dǎo)致尿道下裂發(fā)病的外源性雌激素效應(yīng)與外源性雌激素的量、性質(zhì)、作用時期及基因易感性有關(guān)。外源性雌激素通過雌激素受體其作用，因此基因易感性主要由雌激素受體的易感性決定，從根本上來說雌激素受體基因的多態(tài)性決定了其對雌激素相關(guān)疾病的易感性。雌激素受體α基因(即ESRl基因)、雌激素受體β基因(即ESR2基因)和活性轉(zhuǎn)錄因子3基因(即ATF3基因)都是調(diào)節(jié)外源性雌激素作用的重要基因，在人尿道下裂組織中表達(dá)水平明顯上調(diào)。ESRl基因位于第6號染色體上，由8個外顯子和7個內(nèi)含子組成，長約四5吐，它編碼含有595個氨基酸的蛋白質(zhì)雌激素受體α (ERa )，ERa的分子量約為66kD。ESR2基因位于14號染色體上，長約1111Λ，它編碼含有485個氨基酸的蛋白質(zhì)雌激素受體β (ER^), ER^的分子量約為M.3kD。雌激素與ERa或偶聯(lián)，提高雌激素受體的信號傳導(dǎo)，激活雌激素應(yīng)答基因。而過量的雌激素效應(yīng)可以抑制腦垂體促性腺激素的產(chǎn)生和雄激素的分泌，而雄激素對睪丸發(fā)育和尿道形成有重要促進(jìn)作用，因此雌激素受體的大量表達(dá)，使得在外源性激素作用下，尿道下裂更易發(fā)生。雌激素受體基因存在多態(tài)性和變異，且多態(tài)性多為功能性，不同的雌激素受體等位基因型有可能決定不同個體間雌激素受體的表達(dá)水平和功能，進(jìn)而影響雌激素受體調(diào)節(jié)基因表達(dá)和雌激素受體信號傳導(dǎo)途徑中各種因子的生物學(xué)作用。ATF3基因編碼活性轉(zhuǎn)錄因子3 (ATF!3)，是一種雌激素應(yīng)答基因，它編碼的ATF3是含亮氨酸拉鏈結(jié)構(gòu)的轉(zhuǎn)錄因子ATF/CREB家族成員，分子量為21kD。該基因在大部分正常細(xì)胞中呈低濃度穩(wěn)態(tài)表達(dá)，廣泛參與機體穩(wěn)態(tài)維持、創(chuàng)傷愈合、細(xì)胞黏附、腫瘤形成、凋亡以及信號傳導(dǎo)等生理和病理過程。該基因的啟動子含有雌激素結(jié)合點，可被雌激素激活，存在多態(tài)性和變異，在尿道下裂組織中表達(dá)水平明顯上調(diào)。此外，尿道下裂的發(fā)病機理可能還包括其他許多致病因素，例如DGKK基因的多個 SNP位點突變也是將近三分之一的尿道下裂病例的致病因素之一。DGKK基因位于X染色體上，該基因含有20個多態(tài)性位點，大部分SNP位點相互之間為穩(wěn)定的連鎖不平衡狀態(tài)。DGKK 基因編碼人類II型甘油二酯激酶κ，甘油二酯激酶調(diào)節(jié)兩種信號類脂——甘油二酯和磷脂酸之間的平衡，因而在信號轉(zhuǎn)導(dǎo)中起重要作用。DGKK mRNA在睪丸和胎盤中最為富集，而帶有風(fēng)險等位基因的患者的包皮皮膚組織中，DGKK的表達(dá)水平有所下調(diào)。尿道下裂的發(fā)生是一個非常復(fù)雜的過程，受到多個蛋白和基因的共同影響，不同的易感基因之間可能存在相互作用。其中任何一個酶的改變都可能影響疾病的易感性，某一易感基因?qū)δ虻老铝训挠绊懣赡軙捎谄渌虻淖饔枚淖?。如果同時對多種易感基因的多個SNP位點進(jìn)行分析，則有助于闡明各種易感基因之間的相互作用機制及其對尿道下裂的影響。傳統(tǒng)的基因檢測疾病的方法受到方法和思路的限制，往往只能對一到兩個基因的多態(tài)性進(jìn)行分析，只能覆蓋一部分患病風(fēng)險人群，對由于其他基因上的SNP位點造成的疾病患病風(fēng)險不能及時預(yù)警，檢測準(zhǔn)確性因此會大幅降低，無法較為全面的檢測疾病的易感情況。目前國內(nèi)外尚未有對尿道下裂的多個易感基因的多個SNP位點進(jìn)行同時檢測的基因芯片，一般檢測疾病的易感性均采用直接測序法，雖然準(zhǔn)確率較高，但是其成本高、無法批量檢測，不能滿足大規(guī)?；蚝Y選的要求。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明所要解決的技術(shù)問題是克服現(xiàn)有技術(shù)的缺陷，提供一種用于預(yù)測尿道下裂易感性的基因芯片，此基因芯片可確立SNP模式和尿道下裂易感性的對應(yīng)關(guān)系，迅速便捷地對普通人群進(jìn)行篩查，準(zhǔn)確率高，成本較低，可用于批量檢測，能充分滿足大規(guī)?；蚝Y選的要求。為解決上述技術(shù)問題，本發(fā)明用于預(yù)測尿道下裂易感性的基因芯片，它包括以 DGKK、ESRl、ESR2、ATF3、SRD5A2、HSD17B3基因為檢測位點的寡核苷酸探針和對應(yīng)的特異性引物，所述特異性引物的5’端預(yù)先均用信號物質(zhì)進(jìn)行標(biāo)記。作為優(yōu)選，所述寡核苷酸探針是針對DGKK基因的rsl934177位點，ESRl基因的 rs693^02 位點、rs9340799 位點和 rs2234693 位點，ESR2 基因的 rs2987983 位點、rsl0483774位點和rs944050位點，ATF3基因的rsl 1119982位點，SRD5A2基因的 rsl21434251 位點、rs523349 位點、rs9282858 位點和 rs28383048 位點，HSD17B3 基因的 rs2066479位點而設(shè)計，所述特異性引物能特異性擴增出包括上述SNP位點的DNA片段。作為進(jìn)一步優(yōu)選，所述寡核苷酸探針具有SEQ ID NO. 1-N0. 104所示的核苷酸序列。作為進(jìn)一步優(yōu)選，所述特異性引物具有SEQ ID NO. 105-N0. 1 所示的核苷酸序列。作為優(yōu)選，所述特異性引物的5’端預(yù)先均用熒光素、同位素、生物素或地高辛進(jìn)行標(biāo)記。作為優(yōu)選，所述基因芯片還包括固相載體，所述固相載體為經(jīng)過表面化學(xué)基團(tuán)修飾的玻璃基質(zhì)，所述寡核苷酸探針的末端帶有修飾氨基，所述玻璃基質(zhì)的化學(xué)基團(tuán)可與寡核苷酸探針的修飾氨基共價結(jié)合。作為改進(jìn)，所述基因芯片還包括一個陰性對照樣本和一個陽性對照樣本。作為改進(jìn)，所述基因芯片還包括雜交盒和雜交液。作為進(jìn)一步改進(jìn)，所述基因芯片還包括DNA取樣試劑、PCR擴增試劑和PCR產(chǎn)物純化試劑。本發(fā)明的用于預(yù)測尿道下裂易感性的基因芯片的使用方法為(1)使用所述DNA取樣試劑提取患者DNA ;(幻使用所述特異性引物和所述PCR擴增試劑擴增包括目標(biāo)SNP位點的DNA片段；C3)將同一樣本的各個PCR擴增產(chǎn)物混合，加入雜交液后與所述芯片雜交； (4)使用掃描儀掃描雜交信號。上述技術(shù)方案中的DNA提取、PCR擴增、PCR產(chǎn)物純化和基因芯片等均為常規(guī)的分子生物學(xué)技術(shù)。基因芯片技術(shù)是近年迅速發(fā)展起來的一項前沿分子生物學(xué)技術(shù)，它又被稱為DNA 芯片或DNA微陣列，是生物芯片的一種。它通過與計算機圖像分析的有機結(jié)合，在一次實驗中可對樣品中靶分子的質(zhì)量或數(shù)量進(jìn)行快速、準(zhǔn)確、高效的檢測。具體來說，基因芯片是指將大量人工合成的或應(yīng)用常規(guī)分子生物學(xué)技術(shù)獲得的核酸片段作為探針，所述探針包含特定的核苷酸序列，采用微量點樣等方法，使所述探針按照特定的排列方式和特定的手段固化于支持物(如玻片、硅片、塑料片、聚丙烯酰胺凝膠篇或尼龍膜等載體)的表面，形成密集二維分子排列。然后與已標(biāo)記的待測生物樣品中靶分子進(jìn)行雜交，通過特定的掃描儀如光學(xué)掃描儀、激光共聚焦掃描儀或電荷偶聯(lián)攝影相機(CCD)對雜交信號進(jìn)行快速、并行、高效地分析，從而判斷樣品中靶分子的數(shù)量和質(zhì)量。本發(fā)明的芯片中包含與尿道下裂易感性檢測相關(guān)的目的基因和用于質(zhì)控的基因，基因芯片的結(jié)構(gòu)以及制造方法可以參閱CN 2457166A、CN1341752A、CN1616178A、 US5445934、US5532U8等公開的方法，可方便地根據(jù)使用者的要求制出所需芯片，所述基因芯片的制作步驟簡潔方便、成本較低。PCR (即聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)，Polymerase Chain Reaction)是最常用的分子生物學(xué)技術(shù)之一，是由體外酶催化擴增特異DNA的一種方法。典型的PCR —般包括高溫使模板DNA 變性、引物和模板退火、引物沿模板延伸三步反應(yīng)組成的循環(huán)，經(jīng)過上述多次循環(huán)反應(yīng)，使目的DNA得以迅速大量擴增。本發(fā)明的寡核苷酸探針根據(jù)尿道下裂相關(guān)基因的各SNP位點和側(cè)翼序列設(shè)計，針對每個SNP位點，正反2條DNA鏈共設(shè)計8條探針；然后再根據(jù)SNP位點兩端的更遠(yuǎn)側(cè)翼序列設(shè)計用于PCR擴增的上下游引物，對每對引物之一的5’端預(yù)先進(jìn)行信號標(biāo)記，所述標(biāo)記優(yōu)選為熒光標(biāo)記、同位素標(biāo)記、生物素標(biāo)記或地高辛標(biāo)記。本領(lǐng)域技術(shù)人員可以通過本領(lǐng)域常規(guī)方法進(jìn)行探針合成，并進(jìn)行氨基修飾或信號標(biāo)記，然后提取待檢測樣品的DNA，用針對每個待檢測SNP位點設(shè)計的上下游引物對進(jìn)行 PCR擴增，使得微量待檢測樣品的DNA大量擴增，并在擴增過程中引入熒光標(biāo)記等信號標(biāo)記。擴增后含有信號標(biāo)記物的待測樣品核酸靶分子通過堿基互補配對原則與芯片上的寡核苷酸探針雜交，此后進(jìn)行芯片掃描，獲得每個位點的信號，對雜交信號強弱和有無進(jìn)行分析，即可判斷樣品中靶基因的數(shù)量和性質(zhì)。本發(fā)明采用PCR擴增和基因芯片相結(jié)合的技術(shù)， 使得檢測的靈敏度高、通量大。上述DNA提取試劑、PCR擴增試劑、PCR產(chǎn)物純化試劑、雜交試劑均可以使用本領(lǐng)域技術(shù)人員所熟知的在這些操作過程中需使用的各種試劑，這些試劑必要時可以包括在基因芯片試劑中，也可以將其配方列在基因芯片試劑的說明書中，由使用者按照說明書中的指示自行配制。因此，本發(fā)明的用于預(yù)測尿道下裂易感性的基因芯片，與現(xiàn)有技術(shù)相比，具有以下優(yōu)點
(1)設(shè)計了檢測尿道下裂易感性的基因芯片系統(tǒng)，確立SNP模式和尿道下裂易感性的對應(yīng)關(guān)系；(2)針對尿道下裂不同的患病途徑檢測多個相關(guān)的基因及其多態(tài)性位點，能更準(zhǔn)確全面地預(yù)測受檢者不同患病途徑的患病風(fēng)險，可迅速便捷地對普通人群進(jìn)行篩查，在疾病發(fā)生早期就預(yù)測出尿道下裂易感性，從而通過各種治療方法盡早干預(yù)，減輕甚至消除尿道下裂對兒童的不良影響；(3)準(zhǔn)確率高，成本較低，可用于批量檢測，能充分滿足大規(guī)?；蚝Y選的要求；(4)芯片制作的步驟簡潔方便，檢測靈敏度高，通量大。
具體實施例方式下面結(jié)合具體實施例對本發(fā)明作進(jìn)一步詳細(xì)的說明，但本發(fā)明的內(nèi)容并不局限于以下實施例，相同領(lǐng)域的技術(shù)人員可以在本發(fā)明的技術(shù)方案框架內(nèi)提出其他的實施例，但這些實施例均包括在本發(fā)明的保護(hù)范圍內(nèi)。下列實施例中未注明具體條件的實施放大，通常按照常規(guī)條件，或按照廠商所建議的條件。本發(fā)明用于預(yù)測尿道下裂易感性的基因芯片，它包括以DGKK、ESRU ESR2、ATF3、 SRD5A2、HSD17B3基因為檢測位點的寡核苷酸探針和對應(yīng)的特異性引物，所述特異性引物的 5’端預(yù)先均用信號物質(zhì)進(jìn)行標(biāo)記。作為優(yōu)選，所述寡核苷酸探針是針對DGKK基因的rsl934177位點，ESRl基因的 rs693^02 位點、rs9340799 位點和 rs2234693 位點，ESR2 基因的 rs2987983 位點、rsl0483774位點和rs944050位點，ATF3基因的rsl 1119982位點，SRD5A2基因的 rsl21434251 位點、rs523349 位點、rs9282858 位點和 rs28383048 位點，HSD17B3 基因的 rs2066479位點而設(shè)計，所述特異性引物能特異性擴增出包括上述SNP位點的DNA片段。作為進(jìn)一步優(yōu)選，所述寡核苷酸探針具有SEQ ID NO. 14-N0. 117所示的核苷酸序列。作為進(jìn)一步優(yōu)選，所述特異性引物具有SEQ ID NO. 118-N0. 139所示的核苷酸序列。作為優(yōu)選，所述特異性引物的5’端預(yù)先均用熒光素、同位素、生物素或地高辛進(jìn)行標(biāo)記。作為優(yōu)選，所述基因芯片還包括固相載體，所述固相載體為經(jīng)過表面化學(xué)基團(tuán)修飾的玻璃基質(zhì)，所述寡核苷酸探針的末端帶有修飾氨基，所述玻璃基質(zhì)的化學(xué)基團(tuán)可與寡核苷酸探針的修飾氨基共價結(jié)合。作為改進(jìn)，所述基因芯片還包括一個陰性對照樣本和一個陽性對照樣本。作為改進(jìn)，所述基因芯片還包括雜交盒和雜交液。作為進(jìn)一步改進(jìn)，所述基因芯片還包括DNA取樣試劑、PCR擴增試劑和PCR產(chǎn)物純化試劑。本發(fā)明的用于預(yù)測尿道下裂易感性的基因芯片的使用方法為(1)使用所述DNA 取樣試劑提取患者DNA ;(幻使用所述特異性引物和所述PCR擴增試劑擴增包括目標(biāo)SNP位點的DNA片段；C3)將同一樣本的各個PCR擴增產(chǎn)物混合，加入雜交液后與所述芯片雜交；(4)使用掃描儀掃描雜交信號。本實施例選取與尿道下裂易感性相關(guān)的DGKK、ESR1、ESR2、ATF3、SRD5A2、HSD17B3 基因上的13個SNP位點，根據(jù)這13個SNP位點及其側(cè)翼序列設(shè)計寡核苷酸探針和對應(yīng)的特異性引物，針對每個SNP位點設(shè)計4對寡核苷酸探針，即正反兩條DNA鏈共設(shè)計8條寡核苷酸探針。有兩對特異性引物可擴增出同時包括上述兩個SNP位點在內(nèi)的DNA片段，因此共設(shè)計了 11對特異性引物，可擴增出包括上述13個SNP位點在內(nèi)的DNA片段。具體來說，基因芯片的制備方法可按照如下步驟進(jìn)行原料準(zhǔn)備——醛基芯片(高分子三維基片D，廠商Capitalbio，規(guī)格為75. 5*25. 2*1. 0)基因芯片點樣液(Capitalbio，5ml)或2*Spoting Solution 等1、寡核苷酸探針序列設(shè)計如序列表所述，按照本領(lǐng)域技術(shù)人員熟知的方法合成5’ 端氨基標(biāo)記探針，所述寡核苷酸探針與各SNP位點的對應(yīng)關(guān)系如下所示
權(quán)利要求
1.一種用于預(yù)測尿道下裂易感性的基因芯片，其特征在于它包括以DGKK、ESRU ESR2、ATF3、SRD5A2、HSD17B3基因為檢測位點的寡核苷酸探針和對應(yīng)的特異性引物，，所述特異性引物的5’端預(yù)先均用信號物質(zhì)進(jìn)行標(biāo)記。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的用于預(yù)測尿道下裂易感性的基因芯片，其特征在于所述寡核苷酸探針是針對DGKK基因的rsl934177位點，ESRl基因的rs693^02位點、rs9340799 位點和rs2234693位點，ESR2基因的rs2987983位點、rsl0483774位點和rs944050位點， ATF3 基因的 rsl 1119982 位點，SRD5A2 基因的 rsl21434251 位點、rs523349 位點、位點和rd8383048位點，HSD17B3基因的rs2066479位點而設(shè)計，所述特異性引物能特異性擴增出包括上述SNP位點的DNA片段。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的用于預(yù)測尿道下裂易感性的基因芯片，其特征在于所述寡核苷酸探針具有SEQ ID NO. 1-N0. 104所示的核苷酸序列。
4.根據(jù)權(quán)利要求2所述的用于預(yù)測尿道下裂易感性的基因芯片，其特征在于所述特異性引物具有SEQ ID NO. 105-N0. 1 所示的核苷酸序列。
5.根據(jù)權(quán)利要求1-4任一項所述的用于預(yù)測尿道下裂易感性的基因芯片，其特征在于所述特異性引物的5’端預(yù)先均用熒光素、同位素、生物素或地高辛進(jìn)行標(biāo)記。
6.根據(jù)權(quán)利要求1-4任一項所述的用于預(yù)測尿道下裂易感性的基因芯片，其特征在于所述基因芯片還包括固相載體，所述固相載體為經(jīng)過表面化學(xué)基團(tuán)修飾的玻璃基質(zhì)，所述寡核苷酸探針的末端帶有修飾氨基，所述玻璃基質(zhì)的化學(xué)基團(tuán)可與寡核苷酸探針的修飾氨基共價結(jié)合。
7.根據(jù)權(quán)利要求1-4任一項所述的用于預(yù)測尿道下裂易感性的基因芯片，其特征在于所述基因芯片還包括一個陰性對照樣本和一個陽性對照樣本。
8.根據(jù)權(quán)利要求1-4任一項所述的用于預(yù)測尿道下裂易感性的基因芯片，其特征在于所述基因芯片還包括雜交盒和雜交液。
9.根據(jù)權(quán)利要求8所述的用于預(yù)測尿道下裂易感性的基因芯片，其特征在于所述基因芯片還包括DNA取樣試劑、PCR擴增試劑和PCR產(chǎn)物純化試劑。
10.一種權(quán)利要求9所述的基因芯片的使用方法，其特征在于所述方法為(1)使用所述DNA取樣試劑提取患者DNA ;(幻使用所述特異性引物和所述PCR擴增試劑擴增包括目標(biāo) SNP位點的DNA片段；(3)將同一樣本的各個PCR擴增產(chǎn)物混合，加入雜交液后與所述芯片雜交；(4)使用掃描儀掃描雜交信號。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種用于預(yù)測尿道下裂易感性的基因芯片，它包括以DGKK、ESR1、ESR2、ATF3、SRD5A2、HSD17B3基因為檢測位點的寡核苷酸探針和對應(yīng)的特異性引物，所述特異性引物的5’端預(yù)先均用信號物質(zhì)進(jìn)行標(biāo)記。本發(fā)明的基因芯片可確立SNP模式和尿道下裂易感性的對應(yīng)關(guān)系，迅速便捷地對普通人群進(jìn)行篩查，準(zhǔn)確率高，成本較低，可用于批量檢測，能充分滿足大規(guī)模基因篩選的要求。
文檔編號C12Q1/68GK102417926SQ20111027534
公開日2012年4月18日 申請日期2011年9月16日 優(yōu)先權(quán)日2011年9月16日
發(fā)明者孫早, 徐珊, 王海勇, 符偉紅, 金濤, 陳艷麗 申請人:杭州博泰基因技術(shù)有限公司