專利名稱：多種細(xì)胞共培養(yǎng)支架的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種培養(yǎng)支架，特別是涉及一種多種細(xì)胞共培養(yǎng)支架。
背景技術(shù)：
細(xì)胞培養(yǎng)是將細(xì)胞置于體外條件下進(jìn)行生長和繁殖，具有可直接觀察活細(xì)胞的形態(tài)結(jié)構(gòu)和生命活動、直接觀察細(xì)胞的變化、易于提供大量生物性狀相似的實驗對象以及耗資少等優(yōu)點。細(xì)胞的體外培養(yǎng)可以是一種細(xì)胞單獨培養(yǎng)和多種細(xì)胞共同培養(yǎng)。一種細(xì)胞的單獨培養(yǎng)，這是目前在基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)及基礎(chǔ)與臨床相結(jié)合的研究中應(yīng)用最 為廣泛的方式，主要用于研究某一種細(xì)胞的形態(tài)學(xué)、基因及蛋白的表達(dá)以及在不同處理因素作用下發(fā)生的變化及其機制。雖然培養(yǎng)過程中細(xì)胞獨立生存于人工模擬的體內(nèi)環(huán)境，但該環(huán)境與真實的體內(nèi)環(huán)境相比仍有很大差異。為了能夠建立更類似于體內(nèi)環(huán)境的培養(yǎng)體系，盡可能使體外環(huán)境與體內(nèi)環(huán)境相吻合，從而使細(xì)胞間能相互溝通信息，相互支撐生長增殖，20世紀(jì)80年代后期，人們在原有細(xì)胞培養(yǎng)的基礎(chǔ)上發(fā)展出了細(xì)胞共培養(yǎng)技術(shù)。細(xì)胞共培養(yǎng)技術(shù)是將2種或2種以上的細(xì)胞共同培養(yǎng)于同一環(huán)境中的技術(shù)，由于其具有更好反映體內(nèi)環(huán)境的優(yōu)點，所以這種方法被越來越廣泛地應(yīng)用于現(xiàn)代細(xì)胞研究中。多種細(xì)胞共同培養(yǎng)，主要通過兩種方法建立直接共培養(yǎng)體系和間接共培養(yǎng)體系。直接共培養(yǎng)體系，是將2種或2種以上的細(xì)胞同時接種于同一培養(yǎng)容器內(nèi)，不同類型的細(xì)胞之間直接接觸，不可否認(rèn)，這種方式較一種細(xì)胞單獨培養(yǎng)能夠更好的反映體內(nèi)的環(huán)境，但是由于不同的細(xì)胞生長在同一細(xì)胞容器內(nèi)，無法分離各種細(xì)胞用于下一步的研究，限制了其應(yīng)用。間接共培養(yǎng)體系，即將2種或2種以上的細(xì)胞分別接種于不同的載體上，然后將不同載體置于同一培養(yǎng)環(huán)境中，使不同種類的細(xì)胞共處于同一種培養(yǎng)體系中而不直接接觸，可以分別收取不同種類的細(xì)胞用于下一步的研究，彌補了直接共培養(yǎng)體系的不足。目前已經(jīng)商品化的是可用于2種細(xì)胞共培養(yǎng)的體系，如美國康寧(corning)公司有商品化的各種規(guī)格的共培養(yǎng)體系(又稱transwell培養(yǎng)皿),而美國millipore公司則生產(chǎn)可適用于國內(nèi)外各家培養(yǎng)器皿生產(chǎn)公司的懸掛式小室，組裝成為共培養(yǎng)體系，這些商品化的共培養(yǎng)體系操作簡單，目前在研究中得到廣泛應(yīng)用。但是，由于在不同疾病的發(fā)生發(fā)展過程中，參與其中的細(xì)胞類型可能是許多種，而多種細(xì)胞之間復(fù)雜的相互作用是疾病產(chǎn)生的主要原因，國內(nèi)外研究者迫切需要能夠?qū)⒏嗉?xì)胞納入到同一種培養(yǎng)環(huán)境中，并且能夠分別對各種細(xì)胞類型進(jìn)行進(jìn)一步研究的共培養(yǎng)體系。另外，為適應(yīng)新化學(xué)物或產(chǎn)品快速增長的需求，迫切需要發(fā)展快速、高通量的毒性評價方法。常用的體外方法培養(yǎng)的細(xì)胞種類有限，研究者需要同時評價毒物對多種器官細(xì)胞的易感性和毒性作用，為滿足這一要求，美國的Li AP等用美國康寧公司的六孔板進(jìn)行了改進(jìn)，可以同時培養(yǎng)來自不同器官的6種細(xì)胞，稱為integrateddiscrete multiple organ co-culture (IdMOC ) plate,中文名稱為整體非連續(xù)性多器官共培養(yǎng)體系，此產(chǎn)品已申請專利(US 7186548B2, CHINA 626030)。但這一產(chǎn)品存在以下不足1)在培養(yǎng)板的一個大共培養(yǎng)孔中有6個小孔，每個小孔的高度只有0. 8毫米，且各個小孔之間距離太近，因此在操作時如果有輕微的晃動，一個小孔中的細(xì)胞可能會移動至另一小孔中，造成不同細(xì)胞之間的污染與混雜；而由于不能晃動，會導(dǎo)致細(xì)胞貼壁不均勻，出現(xiàn)中心細(xì)胞多，周圍細(xì)胞少的情況，影響細(xì)胞的生長；并且在收獲細(xì)胞時操作也有一定的難度；2)因為小孔的生長面積有限(每個小孔中最多只能容納300微升的液體)，不適合需要大量細(xì)胞的實驗；3)只適合貼壁細(xì)胞，不適合懸浮及半懸浮細(xì)胞的培養(yǎng)。綜上所述，目前已有的可多種細(xì)胞共同培養(yǎng)的體系IdMOC 有如下不足1)易造成不同細(xì)胞之間的污染與混雜；2)細(xì)胞貼壁不均勻；3)不適合需要大量細(xì)胞的實驗；4)只適合貼壁細(xì)胞，不適合懸浮及半懸浮細(xì)胞的培養(yǎng)；5)收獲細(xì)胞有一定難度。另外，IdMOC 體系主要用于評價毒物對多種器官細(xì)胞的易感性和毒性作用，難以滿足廣大研究者對于多種細(xì)胞共培養(yǎng)的不同需求。例如，在肝纖維化的發(fā)生過程中有三種細(xì)胞共同發(fā)揮著關(guān)鍵的作用肝細(xì)胞損傷、壞死，刺激和激活肝臟巨噬細(xì)胞(KupfTer細(xì)胞)，后者活化分泌細(xì)胞因子再激活肝臟星狀細(xì)胞并產(chǎn)生過量的細(xì)胞外基質(zhì)，細(xì)胞外基質(zhì)的過量堆積則引起肝纖維化的發(fā)生；另外，粘附分子在肝纖維化過程中也顯著上調(diào)，而其上調(diào)則與肝細(xì)胞和血竇內(nèi)皮細(xì)胞誘導(dǎo)表達(dá)Integrin家族中的層連蛋白受體相關(guān)。在其他疾病的發(fā)病機制中，也常有3種或3種以上(常為3到5種)關(guān)鍵細(xì)胞的相互作用參與其中，并且有多種細(xì)胞屬于懸浮或半懸浮生長細(xì)胞。因此，設(shè)計出易于操作、同時適用于貼壁細(xì)胞和懸浮細(xì)胞共同培養(yǎng)、適用于研·究者多種不同需要的培養(yǎng)體系是十分必要的。

發(fā)明內(nèi)容
為避免以上現(xiàn)有技術(shù)的不足，本發(fā)明提供一種多種細(xì)胞共培養(yǎng)支架，以解決一個可進(jìn)行多種細(xì)胞共同培養(yǎng)的培養(yǎng)體系。本發(fā)明的技術(shù)方案為
多種細(xì)胞共培養(yǎng)支架，該支架包括支架面和與所述支架面連接的支撐架，所述的支架面上開設(shè)有固定孔。所述的支架面邊緣處連接有支撐架。所述的固定孔的邊緣處設(shè)有開口槽。所述的固定孔至少為2個。所述的開口槽為3個。所述的支撐架的高度為為17-20_。多種細(xì)胞共培養(yǎng)裝置，該裝置包括培養(yǎng)皿和放置于培養(yǎng)皿中的多細(xì)胞共培養(yǎng)支架，該多細(xì)胞共培養(yǎng)支架包括支架面和與所述支架面連接的支撐架，所述的支架面上開設(shè)有固定孔。該裝置的固定孔的邊緣處設(shè)有開口槽。該裝置還包括有培養(yǎng)小室。所述的多細(xì)胞共培養(yǎng)支架的高度大于所述培養(yǎng)小室的高度，而小于所述的培養(yǎng)皿的高度。在進(jìn)行多種細(xì)胞共同培養(yǎng)時，將培養(yǎng)小室放到多細(xì)胞共培養(yǎng)支架上的固定孔上，培養(yǎng)小室的高度小于培養(yǎng)皿的高度，在培養(yǎng)支架的支撐下，培養(yǎng)小室的底部與培養(yǎng)皿容器的底部之間保持有一定的空間，各培養(yǎng)小室中的細(xì)胞能處于獨立培養(yǎng)環(huán)境的同時，又能置于一個大的培養(yǎng)體系中，且各種細(xì)胞彼此又不會直接接觸。
另一方面，當(dāng)進(jìn)行多細(xì)胞培養(yǎng)時，對培養(yǎng)小室進(jìn)行晃動操作時，由于培養(yǎng)小室?guī)в泄潭ㄑb置，該固定裝置與固定孔的開口槽匹配銜接，培養(yǎng)小室的位置能易于被固定而不至于滑動，以影響實驗結(jié)果。本發(fā)明具有如下優(yōu)點
1)可根據(jù)需要進(jìn)行3到5種細(xì)胞的共同培養(yǎng)；
2)可適用于多種貼壁細(xì)胞的共同培養(yǎng)；
3)適用于多種懸浮或半懸浮細(xì)胞的共同培養(yǎng)；
4)適用于貼壁細(xì)胞與懸浮或半懸浮細(xì)胞的共同培養(yǎng)；
5)各種細(xì)胞分別生長于不同的培養(yǎng)小室或培養(yǎng)皿內(nèi)，不會造成不同細(xì)胞之間的污染與混雜，易于收獲細(xì)胞；· 6)可以通過輕微振蕩培養(yǎng)小室混勻細(xì)胞，使細(xì)胞貼壁均勻。


圖I: 3孔共培養(yǎng)支架正面俯視 圖2:帶開口槽的3孔共培養(yǎng)支架正面俯視 圖3 :多細(xì)胞共培養(yǎng)裝置中的培養(yǎng)皿正視圖。
具體實施例方式下面結(jié)合附圖對本發(fā)明做進(jìn)一步詳述。實施例I
以3孔共培養(yǎng)支架對3種細(xì)胞的共培養(yǎng)為例
如圖I所示，一種多種細(xì)胞共培養(yǎng)支架，該支架包括支架面I和與所述支架面I連接的支撐架2，所述的支架面I上開設(shè)有固定孔3，所述的支架面I可以在邊緣處與所述的支撐架2連接。所述的固定孔為3個。所述的支撐架的高度為選17mm。如圖3所示為多細(xì)胞共培養(yǎng)裝置中的培養(yǎng)皿正視圖。一種多種細(xì)胞共培養(yǎng)裝置，該裝置包括培養(yǎng)皿4和放置于培養(yǎng)皿中的共培養(yǎng)支架，該共培養(yǎng)支架包括支架面和與所述支架面連接的支撐架，所述的支架面上開設(shè)有固定孔。該裝置還包括有培養(yǎng)小室。所述的培養(yǎng)小室為一小盒，且小盒的邊緣處設(shè)有與所述開口槽匹配的固定裝置。上述的培養(yǎng)皿可采用美國corning公司直徑10厘米,高度為2厘米或同等規(guī)格的培養(yǎng)皿；培養(yǎng)小室米用millipore公司懸掛式培養(yǎng)小室。由于本發(fā)明培養(yǎng)支架的支撐架的高度設(shè)計為17mm，因此將載有培養(yǎng)小室的培養(yǎng)支架放入培養(yǎng)皿中，該培養(yǎng)小室底部與培養(yǎng)皿底部留有一定距離，彼此之間不會直接接觸。所述的培養(yǎng)皿、共培養(yǎng)支架和懸掛式培養(yǎng)小室則成為一個可進(jìn)行多種細(xì)胞共同培養(yǎng)的共培養(yǎng)體系，每個懸掛式培養(yǎng)小室內(nèi)可分別加入不同種類的細(xì)胞(可為貼壁細(xì)胞或懸浮細(xì)胞)。以下對3種細(xì)胞共同培養(yǎng)進(jìn)行說明。首先，將3種不同種類的細(xì)胞(可為貼壁細(xì)胞或懸浮細(xì)胞)，如肝細(xì)胞、巨噬細(xì)胞和星狀細(xì)胞各放入共培養(yǎng)支架的培養(yǎng)小室中，再將該支架放入培養(yǎng)皿中，將整個共培養(yǎng)體系置于細(xì)胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)一段時間(6個小時或過夜培養(yǎng))，使貼壁細(xì)胞充分貼壁(每種細(xì)胞的生長特性不同導(dǎo)致貼壁時間有一定差異)。培養(yǎng)小室內(nèi)可加入2到3毫升的液體，以密度為I X IO7/毫升的細(xì)胞為例，可加入2至3 X IO7個細(xì)胞，適于需要大量細(xì)胞的實驗。此時各培養(yǎng)小室之間細(xì)胞獨立生長，培養(yǎng)液也不互相連通。其次，待貼壁細(xì)胞貼壁后，移除多余的培養(yǎng)液，在培養(yǎng)皿中加入新鮮培養(yǎng)液，高度使其能夠沒過懸掛式培養(yǎng)小室的底部。由于懸掛式培養(yǎng)小室的底部有不同大小的小孔，可允許液體自由通過，而細(xì)胞不能通過，因此，3種細(xì)胞即可通過培養(yǎng)液互相連通，處于同一生長環(huán)境中。此時定義為3種細(xì)胞共培養(yǎng)開始的時間，根據(jù)不同研究者的需求，在培養(yǎng)液中加入外源性干預(yù)因子。實驗結(jié)束后，根據(jù)研究者要求，可以收取共培養(yǎng)體系的上清，觀察共培養(yǎng)體系中分泌性蛋白的變化；將不同的懸掛式培養(yǎng)皿取出，分別收取3種不同細(xì)胞，用于下一步的實驗。實施例2
以3孔共培養(yǎng)支架對3種細(xì)胞的共培養(yǎng)為例
如圖2所示，一種多種細(xì)胞共培養(yǎng)支架，該支架包括支架面I和與所述支架面I連接的支撐架2，所述的支架面I上開設(shè)有固定孔3，所述的支架面I可以在邊緣處與所述的支撐架2連接。所述的固定孔3的邊緣處設(shè)有開口槽31。所述的固定孔3為3個。所述的開口槽31為3個。所述的支撐架的高度為為18mm。如圖3所示，一種多種細(xì)胞共培養(yǎng)裝置，該裝置包括培養(yǎng)皿4和放置于培養(yǎng)皿中的共培養(yǎng)支架，該共培養(yǎng)支架包括支架面和與所述支架面連接的支撐架，所述的支架面上開設(shè)有固定孔。所述的固定孔的邊緣處設(shè)有開口槽。該裝置還包括有培養(yǎng)小室。所述的培養(yǎng)小室為一小盒，且小盒的邊緣處設(shè)有與所述開口槽匹配的固定裝置。上述的培養(yǎng)皿可采用美國corning公司直徑10厘米,高度為2厘米或同等規(guī)格的培養(yǎng)皿；培養(yǎng)小室米用millipore公司懸掛式培養(yǎng)小室。由于本發(fā)明培養(yǎng)支架的支撐架的高度設(shè)計為18mm，因此將載有培養(yǎng)小室的培養(yǎng)支架放入培養(yǎng)皿中，該培養(yǎng)小室底部與培養(yǎng)皿底部留有一定距離，彼此之間不會直接接觸。所述的培養(yǎng)皿、共培養(yǎng)支架和懸掛式培養(yǎng)小室則成為一個可進(jìn)行多種細(xì)胞共同培養(yǎng)的共培養(yǎng)體系，每個懸掛式培養(yǎng)小室內(nèi)可分別加入不同種類的細(xì)胞(可為貼壁細(xì)胞或懸浮細(xì)胞)。以下對3種細(xì)胞共同培養(yǎng)進(jìn)行說明。首先，將3種不同種類的細(xì)胞(可為貼壁細(xì)胞或懸浮細(xì)胞)，如肝細(xì)胞、巨噬細(xì)胞和星狀細(xì)胞各放入共培養(yǎng)支架的培養(yǎng)小室中，再將該支架放入培養(yǎng)皿中，將整個共培養(yǎng)體系置于細(xì)胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)一段時間(6個小時或過夜培養(yǎng))，使貼壁細(xì)胞充分貼壁(每種細(xì)胞的生長特性不同導(dǎo)致貼壁時間有一定差異)。培養(yǎng)小室內(nèi)可加入2到3毫升的液體，以密度為I X IO7/毫升的細(xì)胞為例，可加入2至3 X IO7個細(xì)胞，適于需要大量細(xì)胞的實驗。此時各培養(yǎng)小室之間細(xì)胞獨立生長，培養(yǎng)液也不互相連通。其次，待貼壁細(xì)胞貼壁后，移除多余的培養(yǎng)液，在培養(yǎng)皿中加入新鮮培養(yǎng)液，高度使其能夠沒過懸掛式培養(yǎng)小室的底部。由于懸掛式培養(yǎng)小室的底部有不同大小的小孔，可允許液體自由通過，而細(xì)胞不能通過，因此，3種細(xì)胞即可通過培養(yǎng)液互相連通，處于同一生長環(huán)境中。此時定義為3種細(xì)胞共培養(yǎng)開始的時間，根據(jù)不同研究者的需求，在培養(yǎng)液中加入外源性干預(yù)因子。實驗結(jié)束后，根據(jù)研究者要求，可以收取共培養(yǎng)體系的上清，觀察共培養(yǎng)體系中分泌性蛋白的變化；將不同的懸掛式培養(yǎng)皿取出，分別收取3種不同細(xì)胞，用于下一步的實驗。
實施例3
以3孔共培養(yǎng)支架對4種細(xì)胞的共培養(yǎng)為例
如圖I所示，一種多種細(xì)胞共培養(yǎng)支架，該支架包括支架面I和與所述支架面I連接的支撐架2，所述的支架面I上開設(shè)有固定孔3，所述的支架面I可以在邊緣處與所述的支撐架2連接。所述的固定孔為3個。所述的支撐架2的高度為為19mm。如圖3所示，一種多種細(xì)胞共培養(yǎng)裝置，該裝置包括培養(yǎng)皿4和放置于培養(yǎng)皿中的共培養(yǎng)支架，該共培養(yǎng)支架包括支架面和與所述支架面連接的支撐架，所述的支架面上開設(shè)有固定孔。該裝置還包括有培養(yǎng)小室，所述的培養(yǎng)小室為一小盒，且小盒的邊緣處設(shè)有與所述開口槽匹配的固定裝置。上述的培養(yǎng)皿可采用美國corning公司直徑10厘米,高度為2厘米或同等規(guī)格的培養(yǎng)皿；培養(yǎng)小室米用millipore公司懸掛式培養(yǎng)小室。由于本發(fā)明培養(yǎng)支架的支撐架的 高度設(shè)計為19mm，因此將載有培養(yǎng)小室的培養(yǎng)支架放入培養(yǎng)皿中，該培養(yǎng)小室底部與培養(yǎng)皿底部留有一定距離，彼此之間不會直接接觸。所述的培養(yǎng)皿、共培養(yǎng)支架和懸掛式培養(yǎng)小室則成為一個可進(jìn)行多種細(xì)胞共同培養(yǎng)的共培養(yǎng)體系，每個懸掛式培養(yǎng)小室內(nèi)可分別加入不同種類的細(xì)胞(可為貼壁細(xì)胞或懸浮細(xì)胞)。以下對4種細(xì)胞共同培養(yǎng)進(jìn)行說明。首先，將3種不同種類的細(xì)胞(可為貼壁細(xì)胞或懸浮細(xì)胞)，如肝細(xì)胞、巨噬細(xì)胞和星狀細(xì)胞各放入共培養(yǎng)支架的培養(yǎng)小室中，再將該支架放入培養(yǎng)皿中，將整個共培養(yǎng)體系置于細(xì)胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)一段時間(6個小時或過夜培養(yǎng))，使貼壁細(xì)胞充分貼壁(每種細(xì)胞的生長特性不同導(dǎo)致貼壁時間有一定差異)。培養(yǎng)小室內(nèi)可加入2到3毫升的液體，以密度為I X IO7/毫升的細(xì)胞為例，可加入2至3 X IO7個細(xì)胞，適于需要大量細(xì)胞的實驗。此時各培養(yǎng)小室之間細(xì)胞獨立生長，培養(yǎng)液也不互相連通。其次，將第4種細(xì)胞血竇內(nèi)皮細(xì)胞(可為貼壁細(xì)胞或懸浮細(xì)胞)置于另一培養(yǎng)皿內(nèi)生長，使貼壁細(xì)胞充分貼壁(每種細(xì)胞的生長特性不同導(dǎo)致貼壁時間有一定差異)。再次，待貼壁細(xì)胞貼壁后，移除多余的培養(yǎng)液，將3孔共培養(yǎng)支架和生長有3種細(xì)胞的懸掛式培養(yǎng)小室組裝在生長有第4種細(xì)胞培養(yǎng)皿中，加入新鮮培養(yǎng)液，高度使其能夠沒過懸掛式培養(yǎng)小室的底部。由于懸掛式培養(yǎng)小室的底部有不同大小的小孔，可允許液體自由通過，而細(xì)胞不能通過，因此，4種細(xì)胞即可通過培養(yǎng)液互相連通，處于同一生長環(huán)境中。此時定義為4種細(xì)胞共培養(yǎng)開始的時間，根據(jù)不同研究者的需求，在培養(yǎng)液中加入外源性干預(yù)因子。實驗結(jié)束后，根據(jù)研究者要求，可以收取共培養(yǎng)體系的上清，觀察共培養(yǎng)體系中分泌性蛋白的變化；將不同的懸掛式培養(yǎng)皿取出，分別收取4種不同細(xì)胞，用于下一步的實驗。實施例4
以3孔共培養(yǎng)支架對4種細(xì)胞的共培養(yǎng)的為例
如圖2所示，一種多種細(xì)胞共培養(yǎng)支架，該支架包括支架面I和與所述支架面I連接的支撐架2，所述的支架面I上開設(shè)有固定孔3，所述的支架面I可以在邊緣處與所述的支撐架2連接。所述的固定孔3的邊緣處設(shè)有開口槽31。所述的固定孔為3個。所述的開口槽31為3個。所述的支撐架2的高度為為19mm。如圖3所示，一種多種細(xì)胞共培養(yǎng)裝置，該裝置包括培養(yǎng)皿4和放置于培養(yǎng)皿中的共培養(yǎng)支架，該共培養(yǎng)支架包括支架面和與所述支架面連接的支撐架，所述的支架面上開設(shè)有固定孔。所述的固定孔的邊緣處設(shè)有開口槽。該裝置還包括有培養(yǎng)小室。所述的培養(yǎng)小室為一小盒，且小盒的邊緣處設(shè)有與所述開口槽匹配的固定裝置。上述的培養(yǎng)皿可采用美國corning公司直徑10厘米,高度為2厘米或同等規(guī)格的培養(yǎng)皿；培養(yǎng)小室米用millipore公司懸掛式培養(yǎng)小室。由于本發(fā)明培養(yǎng)支架的支撐架的高度設(shè)計為19mm，因此將載有培養(yǎng)小室的培養(yǎng)支架放入培養(yǎng)皿中，該培養(yǎng)小室底部與培養(yǎng)皿底部留有一定距離，彼此之間不會直接接觸。所述的培養(yǎng)皿、共培養(yǎng)支架和懸掛式培養(yǎng)小室則成為一個可進(jìn)行多種細(xì)胞共同培養(yǎng)的共培養(yǎng)體系，每個懸掛式培養(yǎng)小室內(nèi)可分別加入不同種類的細(xì)胞(可為貼壁細(xì)胞或懸浮細(xì)胞)。以下對4種細(xì)胞共同培養(yǎng)進(jìn)行說明。首先，將3種不同種類的細(xì)胞(可為貼壁細(xì)胞或懸浮細(xì)胞)，如肝細(xì)胞、巨噬細(xì)胞和星狀細(xì)胞各放入共培養(yǎng)支架的培養(yǎng)小室中，再將該支架放入培養(yǎng)皿中，將整個共培養(yǎng)體系置于細(xì)胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)一段時間(6個小時或過夜培養(yǎng))，使貼壁細(xì)胞充分貼壁(每種細(xì)胞的生長特性不同導(dǎo)致貼壁時間有一定差異)。培養(yǎng)小室內(nèi)可加入2到3毫升的液體，以密度為 I X IO7/毫升的細(xì)胞為例，可加入2至3 X IO7個細(xì)胞，適于需要大量細(xì)胞的實驗。此時各培養(yǎng)小室之間細(xì)胞獨立生長，培養(yǎng)液也不互相連通。其次，將第4種細(xì)胞血竇內(nèi)皮細(xì)胞(可為貼壁細(xì)胞或懸浮細(xì)胞)置于另一培養(yǎng)皿內(nèi)生長，使貼壁細(xì)胞充分貼壁(每種細(xì)胞的生長特性不同導(dǎo)致貼壁時間有一定差異)。再次，待貼壁細(xì)胞貼壁后，移除多余的培養(yǎng)液，將3孔共培養(yǎng)支架和生長有3種細(xì)胞的懸掛式培養(yǎng)小室組裝在生長有第4種細(xì)胞培養(yǎng)皿中，加入新鮮培養(yǎng)液，高度使其能夠沒過懸掛式培養(yǎng)小室的底部。由于懸掛式培養(yǎng)小室的底部有不同大小的小孔，可允許液體自由通過，而細(xì)胞不能通過，因此，4種細(xì)胞即可通過培養(yǎng)液互相連通，處于同一生長環(huán)境中。此時定義為4種細(xì)胞共培養(yǎng)開始的時間，根據(jù)不同研究者的需求，在培養(yǎng)液中加入外源性干預(yù)因子。實驗結(jié)束后，根據(jù)研究者要求，可以收取共培養(yǎng)體系的上清，觀察共培養(yǎng)體系中分泌性蛋白的變化；將不同的懸掛式培養(yǎng)皿取出，分別收取4種不同細(xì)胞，用于下一步的實驗。與上述三孔共培養(yǎng)支架及共培養(yǎng)裝置類似，四孔共培養(yǎng)支架可應(yīng)用于4種或5種細(xì)胞的共同培養(yǎng)，本發(fā)明共培養(yǎng)支架與共培養(yǎng)裝置可拓展應(yīng)用于5種以上細(xì)胞的共同培養(yǎng)。顯然，本發(fā)明的上述實施例僅僅是為清楚地說明本發(fā)明所作的舉例，而并非是對本發(fā)明的實施方式的限定。對于所屬領(lǐng)域的普通技術(shù)人員來說，在上述說明的基礎(chǔ)上還可以做出其它不同形式的變化或變動。這里無法對所有的實施方式予以窮舉。凡是屬于本發(fā)明的技術(shù)方案所引伸出的顯而易見的變化或變動仍處于本發(fā)明的保護(hù)范圍之列。
權(quán)利要求
1.多種細(xì)胞共培養(yǎng)支架，其特征在于，該支架包括支架面和與所述支架面連接的支撐架，所述的支架面上開設(shè)有固定孔。
2.根據(jù)權(quán)利要求I所述的多種細(xì)胞共培養(yǎng)支架，其特征在于，所述的支架面邊緣處連接有支撐架。
3.根據(jù)權(quán)利要求I或2所述的多種細(xì)胞共培養(yǎng)支架，其特征在于，所述的固定孔的邊緣處設(shè)有開口槽。
4.根據(jù)權(quán)利要求I所述的多種細(xì)胞共培養(yǎng)支架，其特征在于，所述的固定孔至少為2個。
5.根據(jù)權(quán)利要求3所述的多種細(xì)胞共培養(yǎng)支架，其特征在于，所述的開口槽為3個。
6.根據(jù)權(quán)利要求I所述的多種細(xì)胞共培養(yǎng)支架，其特征在于，所述的支撐架的高度為為 17_20mm。
7.多種細(xì)胞共培養(yǎng)裝置，其特征在于，該裝置包括培養(yǎng)皿和放置于培養(yǎng)皿中的多細(xì)胞共培養(yǎng)支架，該多細(xì)胞共培養(yǎng)支架包括支架面和與所述支架面連接的支撐架，所述的支架面上開設(shè)有固定孔。
8.根據(jù)權(quán)利要求7所述的多種細(xì)胞共培養(yǎng)裝置，其特征在于，所述的固定孔的邊緣處設(shè)有開口槽。
9.根據(jù)權(quán)利要求8所述的多種細(xì)胞共培養(yǎng)裝置，其特征在于，該裝置還包括有培養(yǎng)小室。
10.根據(jù)權(quán)利要求8所述的多種細(xì)胞共培養(yǎng)裝置，其特征在于，所述的多細(xì)胞共培養(yǎng)支架的高度大于所述培養(yǎng)小室的高度，而小于所述的培養(yǎng)皿的高度。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種多種細(xì)胞共培養(yǎng)支架，該支架包括支架面和與所述支架面連接的支撐架，所述的支架面上開設(shè)有固定孔。所述的支架面邊緣處連接有支撐架。本發(fā)明可根據(jù)需要進(jìn)行3到5種細(xì)胞的共同培養(yǎng)，可適用于多種貼壁細(xì)胞、懸浮或半懸浮細(xì)胞的共同培養(yǎng)。各種細(xì)胞分別生長于不同的培養(yǎng)小室或培養(yǎng)皿內(nèi)，不會造成不同細(xì)胞之間的污染與混雜，易于收獲細(xì)胞。
文檔編號C12M3/00GK102952751SQ20111024202
公開日2013年3月6日 申請日期2011年8月23日 優(yōu)先權(quán)日2011年8月23日
發(fā)明者劉天會, 尤紅, 賈繼東, 朱圣韜, 王萍, 叢敏 申請人:首都醫(yī)科大學(xué)附屬北京友誼醫(yī)院