專利名稱：通過添加槐糖脂進(jìn)行誘導(dǎo)發(fā)酵生產(chǎn)纖維素酶的方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種發(fā)酵生產(chǎn)纖維素酶的方法，特別涉及一種通過添加槐糖脂進(jìn)行誘導(dǎo)發(fā)酵生產(chǎn)纖維素酶的方法。
背景技術(shù)：
纖維素酶是一組可以把固體纖維素水解為葡萄糖的酶類，水解得到的葡萄糖又可以作為生產(chǎn)許多發(fā)酵產(chǎn)品的底物，其中包括可再生的替代資源燃料乙醇。大規(guī)模廉價(jià)生產(chǎn)纖維素酶對(duì)于經(jīng)濟(jì)的進(jìn)行木質(zhì)纖維素的精制工藝非常重要。許多物質(zhì)如纖維素、羧甲基纖維素、各種纖維素水解物、乳糖、槐糖、半乳糖等都被認(rèn)為是生物合成纖維素酶的潛在誘導(dǎo)物。其中，乳糖是現(xiàn)今認(rèn)為的最經(jīng)濟(jì)可行的工業(yè)化纖維素酶生產(chǎn)誘導(dǎo)物。槐糖很早就被認(rèn)為是合成纖維素酶的最有效的可溶性誘導(dǎo)物，但是槐糖價(jià)格非常
曰蟲 P卩貝?；碧侵且活惿锉砻婊钚詣?，包含一個(gè)槐糖，槐糖通過糖苷鍵與羥基脂肪酸相連。這種糖脂可由酵母菌以適當(dāng)比例的葡萄糖和脂類為底物大量生產(chǎn)(大于120g/L)。國外研究表明，利用槐糖脂誘導(dǎo)生產(chǎn)纖維素酶是可行的。因此，提供一種制備簡單，效果顯著的通過添加槐糖脂進(jìn)行誘導(dǎo)發(fā)酵生產(chǎn)纖維素酶的方法，是該領(lǐng)域科研開發(fā)人員需要研究解決的一大課題。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于克服上述不足之處，提供一種制備簡單，效果顯著的通過添加槐糖脂進(jìn)行誘導(dǎo)發(fā)酵生產(chǎn)纖維素酶的方法。為實(shí)現(xiàn)纖維素酶合成的有效誘導(dǎo)，同時(shí)降低誘導(dǎo)物生產(chǎn)成本的目的，本發(fā)明使用槐糖脂作為纖維素酶生產(chǎn)的誘導(dǎo)物。為實(shí)現(xiàn)上述目的本發(fā)明所采用的實(shí)施方式如下
一種通過添加槐糖脂進(jìn)行誘導(dǎo)發(fā)酵生產(chǎn)纖維素酶的方法，其特征在于實(shí)施步驟如下
(1)種子培養(yǎng)
種子培養(yǎng)基組成包括，單位1L:纖維素10g，酵母抽提物10g，甘油10g，(NH4)2SO4 1.4 g, KH2PO4 2g, CaCl2 · 2H20 0. 4g, MgSO4 · 7H20 0. 3 g, FeSO4 · 7H20 0. 005 g, CoCl2 · 6H20 0. 0037 g, MnSO4 · H2O 0. 0016g, ZnSO4 · 7H20 0. 0014 g，用蒸餾水定容至 1L, pH 值 5· 0 ；所用菌種里氏木霉TJZKBI0956 ；首先將培養(yǎng)好的里氏木霉菌種接種到滅過菌的種子培養(yǎng)基中，在28-30°C培養(yǎng)，培養(yǎng)時(shí)間為68-72h，即得種子液；
(2)發(fā)酵培養(yǎng)基滅菌
發(fā)酵培養(yǎng)基經(jīng)121°C，20min滅菌后，pH為5. 0，冷卻至28-30°C ；發(fā)酵培養(yǎng)基組成包括，單位 IL 纖維素 50g，酵母抽提物 10g, (NH4)2SO4 1. 4 g，KH2PO4 2g，CaCl2 · 2H20 0. 4g， MgSO4 · 7H20 0. 3 g, FeSO4 · 7H20 0. 005 g, CoCl2 · 6H20 0. 0037 g, MnSO4 · H2O 0. 0016g, ZnSO4 · 7H20 0. 0014 g，用蒸餾水定容至 1L，pH 值 5· 0 ；(3)發(fā)酵
將種子液以5%-10%的接種量轉(zhuǎn)移至滅菌后的5L發(fā)酵罐中，發(fā)酵罐的裝液量為3L，控制發(fā)酵溫度為28-30°C，pH5. 0，發(fā)酵40h后每隔2h取樣測定菌體濃度；
(4)槐糖脂滅菌
分別使用發(fā)酵制備的純度為95%的槐糖脂和濃度為150g/L的槐糖脂發(fā)酵液作為誘導(dǎo)劑，均用自來水溶解分別配制成終濃度為10g/L的溶液，在121°C滅菌20min后，冷卻至 28-30 0C ；
(5)槐糖脂誘導(dǎo)
發(fā)酵罐經(jīng)45-48h發(fā)酵后，菌體達(dá)到對(duì)數(shù)生長后期，此時(shí)一次性添加槐糖脂溶液至發(fā)酵液中，使其終濃度為lg/L，或者進(jìn)行間歇性補(bǔ)加，連續(xù)補(bǔ)加3d，一天中分四次補(bǔ)加槐糖脂， 每次間隔時(shí)間均為2h，每天補(bǔ)加槐糖脂的間隔時(shí)間為16h，使發(fā)酵液中槐糖脂的終濃度為 lg/L ；
(6)纖維素酶粗提取
整個(gè)發(fā)酵時(shí)間持續(xù)6d，發(fā)酵結(jié)束后發(fā)酵液經(jīng)過濾布過濾，濾液經(jīng)過0. IMpa, 55°C減壓濃縮，后進(jìn)行噴粉干燥，噴粉時(shí)進(jìn)料口溫度為135°C，出料口溫度為60°C，得到纖維素酶粗制品；纖維素酶的活力使用濾紙酶活(FPA)測定法測定，酶活為5000-5100國際單位(IU)。本發(fā)明的有益效果是本發(fā)明采用添加槐糖脂進(jìn)行誘導(dǎo)發(fā)酵生產(chǎn)纖維素酶的方法，有效的誘導(dǎo)了纖維素酶的合成，其誘導(dǎo)效率是乳糖誘導(dǎo)效率的10倍，并且獲得了較高的纖維素酶活，使纖維素酶的生產(chǎn)成本至少降低了 50%。本發(fā)明工藝簡單，效果非常顯著； 比傳統(tǒng)纖維素酶的生產(chǎn)方法的效率提高了 10倍，同時(shí)使生產(chǎn)成本降低了 50%。
具體實(shí)施例方式以下結(jié)合較佳實(shí)施例，對(duì)依據(jù)本發(fā)明提供的具體實(shí)施方式
詳述如下 實(shí)施例1
(1)種子培養(yǎng)
種子培養(yǎng)基組成包括，單位1L:纖維素10g，酵母抽提物10g，甘油10g，(NH4)2SO4 1.4 g, KH2PO4 2g, CaCl2 · 2H20 0. 4g, MgSO4 · 7H20 0. 3 g, FeSO4 · 7H20 0. 005 g, CoCl2 · 6H20 0. 0037 g, MnSO4 · H2O 0. 0016g, ZnSO4 · 7H20 0. 0014 g，用蒸餾水定容至 1L, pH 值 5· 0 ；所用菌種里氏木霉TJZKBI0956 ；首先將培養(yǎng)好的里氏木霉菌種接種到滅過菌的種子培養(yǎng)基中，在30°C培養(yǎng)，培養(yǎng)時(shí)間為68h，即得種子液；
(2)發(fā)酵培養(yǎng)基滅菌
發(fā)酵培養(yǎng)基經(jīng)121°C，20min滅菌后，pH為5. 0，冷卻至30°C ；發(fā)酵培養(yǎng)基組成包括，單位 IL 纖維素 50g，酵母抽提物 10g，(NH4)2SO4 1.4 g，KH2PO4 2g，CaCl2 ·2Η20 0. 4g, MgSO4 ·7Η20 0. 3 g, FeSO4 · 7Η20 0. 005 g, CoCl2 · 6Η20 0. 0037 g, MnSO4 · H2O 0. 0016g, ZnSO4 · 7Η20 0. 0014 g，用蒸餾水定容至1L，pH值5. 0 ；
(3)發(fā)酵
將種子液以5%接種量轉(zhuǎn)移至滅菌后的5L發(fā)酵罐中，發(fā)酵罐的裝液量為3L，控制發(fā)酵溫度為30°C，pH5. 0，發(fā)酵40h后每隔2h取樣測定菌體濃度；
(4)槐糖脂滅菌將上述純度為95%的槐糖脂用自來水溶解，配制成終濃度為10g/L的溶液，在121°C滅菌20min后，冷卻至30 V備用。(5)槐糖脂誘導(dǎo)
發(fā)酵罐經(jīng)48h發(fā)酵后，菌體達(dá)到對(duì)數(shù)生長后期，此時(shí)一次性添加槐糖脂溶液300mL至發(fā)酵液中，使其終濃度為lg/L。(6)纖維素酶粗提取
整個(gè)發(fā)酵時(shí)間持續(xù)6d，發(fā)酵結(jié)束后發(fā)酵液經(jīng)過濾布過濾，濾液經(jīng)過0. IMpa, 55°C減壓濃縮，后進(jìn)行噴粉干燥，噴粉時(shí)進(jìn)料口溫度為135°C，出料口溫度為60°C，得到纖維素酶粗制品。纖維素酶的活力使用濾紙酶活(FPA)測定法測定，酶活為5040 IU0實(shí)施例2 (1)種子培養(yǎng)
種子培養(yǎng)基組成包括，單位1L:纖維素10g，酵母抽提物10g，甘油10g，(NH4)2SO4 1.4 g, KH2PO4 2g, CaCl2 · 2H20 0. 4g, MgSO4 · 7H20 0. 3 g, FeSO4 · 7H20 0. 005 g, CoCl2 · 6H20 0. 0037 g, MnSO4 · H2O 0. 0016g, ZnSO4 · 7H20 0. 0014 g，用蒸餾水定容至 1L, pH 值 5· 0 ；所用菌種里氏木霉TJZKBI0956 ；首先將培養(yǎng)好的里氏木霉菌種接種到滅過菌的種子培養(yǎng)基中，在30°C培養(yǎng)，培養(yǎng)時(shí)間為68h，即得種子液。(2)發(fā)酵培養(yǎng)基滅菌
發(fā)酵培養(yǎng)基經(jīng)121°C，20min滅菌后，pH為5. 0，冷卻至30°C ；發(fā)酵培養(yǎng)基組成包括，單位 IL 纖維素 50g，酵母抽提物 10g, (NH4)2SO4 1. 4 g,KH2PO4 2g, CaCl2 ·2Η20 0. 4g,MgSO4 ·7Η20 0. 3 g, FeSO4 · 7Η20 0. 005 g, CoCl2 · 6Η20 0. 0037 g, MnSO4 · H2O 0. 0016g, ZnSO4 · 7Η20 0.0014 g，用蒸餾水定容至lL，pH值5. 0。(3)發(fā)酵
將種子液以5%接種量轉(zhuǎn)移至滅菌后的5L發(fā)酵罐中，發(fā)酵罐的裝液量為3L，控制發(fā)酵溫度為30°C，pH5. 0，發(fā)酵40h后每隔2h取樣測定菌體濃度。(4)槐糖脂滅菌
將上述濃度為150g/L的槐糖脂發(fā)酵液，用自來水配制成終濃度為10g/L的溶液，在 121°C滅菌20min后，冷卻至30°C。(5)槐糖脂誘導(dǎo)
發(fā)酵罐經(jīng)48h發(fā)酵后，菌體達(dá)到對(duì)數(shù)生長后期，此時(shí)一次性添加上述滅菌的槐糖脂發(fā)酵液溶液300mL至發(fā)酵液中，其終濃度為lg/L。(6)纖維素酶粗提取
發(fā)酵持續(xù)6d后結(jié)束，發(fā)酵液經(jīng)過濾布過濾，濾液經(jīng)過0. IMpa, 55°C減壓濃縮，后進(jìn)行噴粉干燥，噴粉時(shí)進(jìn)料口溫度為135°C，出料口溫度為60°C，得到纖維素酶粗制品。纖維素酶的活力使用濾紙酶活(FPA)測定法測定，酶活為5000 IU0其它同實(shí)施例1。實(shí)施例3 (1)種子培養(yǎng)
種子培養(yǎng)基組成包括，單位1L:纖維素10g，酵母抽提物10g，甘油10g，(NH4)2SO4 1.4 g, KH2PO4 2g, CaCl2 · 2H20 0. 4g, MgSO4 · 7H20 0. 3 g, FeSO4 · 7H20 0. 005 g, CoCl2 · 6H200. 0037 g, MnSO4 · H2O 0. 0016g, ZnSO4 · 7H20 0. 0014 g，用蒸餾水定容至 1L, pH 值 5. 0 ；所用菌種里氏木霉TJZKBI0956 ；首先將培養(yǎng)好的里氏木霉菌種接種到滅過菌的種子培養(yǎng)基中，在28°C培養(yǎng)，培養(yǎng)時(shí)間為72h，即得種子液。(2)發(fā)酵培養(yǎng)基滅菌
發(fā)酵培養(yǎng)基經(jīng)121°C，20min滅菌后，pH為5. 0，冷卻至28 °C ；發(fā)酵培養(yǎng)基組成包括，單位 IL 纖維素 50g，酵母抽提物 10g, (NH4)2SO4 1. 4 g,KH2PO4 2g, CaCl2 ·2Η20 0. 4g,MgSO4 ·7Η20 0. 3 g, FeSO4 · 7Η20 0. 005 g, CoCl2 · 6Η20 0. 0037 g, MnSO4 · H2O 0. 0016g, ZnSO4 · 7Η20 0.0014 g，用蒸餾水定容至lL，pH值5. 0。(3)發(fā)酵
將種子液以5%接種量轉(zhuǎn)移至滅菌后的5L發(fā)酵罐中，發(fā)酵罐的裝液量為3L，控制發(fā)酵溫度為28°C，pH5. 0，發(fā)酵40h后每隔2h取樣測定菌體濃度。(4)槐糖脂滅菌
將上述濃度為150g/L的槐糖脂發(fā)酵液，用自來水配制成終濃度為10g/L的溶液，在 121°C滅菌20min后，冷卻至28°C。(5)槐糖脂誘導(dǎo)
發(fā)酵罐經(jīng)48h發(fā)酵后，菌體達(dá)到對(duì)數(shù)生長后期，此時(shí)補(bǔ)加上述無菌的槐糖脂發(fā)酵液溶液25mL，其終濃度為0. 25g/3L，間隔2h后再次補(bǔ)加相同量的槐糖脂發(fā)酵液，共補(bǔ)加四次，每次間隔時(shí)間均為2h ；第二天和第三天再次以同樣方法補(bǔ)加槐糖脂發(fā)酵液，每天補(bǔ)加的間隔時(shí)間為16h，最終使發(fā)酵液中槐糖脂的終濃度為lg/L。(6)纖維素酶粗提取
發(fā)酵持續(xù)6d后結(jié)束，發(fā)酵液經(jīng)過濾布過濾，濾液經(jīng)過0. IMpa, 55°C減壓濃縮，后進(jìn)行噴粉干燥，噴粉時(shí)進(jìn)料口溫度為135°C，出料口溫度為60°C，得到纖維素酶粗制品。纖維素酶的活力使用濾紙酶活(FPA)測定法測定，酶活為5080 IU0其它同實(shí)施例1。實(shí)施例4 (1)種子培養(yǎng)
種子培養(yǎng)基組成包括，單位1L:纖維素10g，酵母抽提物10g，甘油10g，(NH4)2SO4 1.4 g, KH2PO4 2g, CaCl2 · 2H20 0. 4g, MgSO4 · 7H20 0. 3 g, FeSO4 · 7H20 0. 005 g, CoCl2 · 6H20 0. 0037 g, MnSO4 · H2O 0. 0016g, ZnSO4 · 7H20 0. 0014 g，用蒸餾水定容至 1L, pH 值 5· 0 ；所用菌種里氏木霉TJZKBI0956 ；首先將培養(yǎng)好的里氏木霉菌種接種到滅過菌的種子培養(yǎng)基中，在28°C培養(yǎng)，培養(yǎng)時(shí)間為72h，即得種子液。(2)發(fā)酵培養(yǎng)基滅菌
發(fā)酵培養(yǎng)基經(jīng)121°C，20min滅菌后，pH為5. 0，冷卻至28 °C ；發(fā)酵培養(yǎng)基組成包括，單位 IL 纖維素 50g，酵母抽提物 10g, (NH4)2SO4 1. 4 g, KH2PO4 2g, CaCl2 ·2Η20 0. 4g,MgSO4 ·7Η20 0. 3 g, FeSO4 · 7Η20 0. 005 g, CoCl2 · 6Η20 0. 0037 g, MnSO4 · H2O 0. 0016g, ZnSO4 · 7Η20 0.0014 g，用蒸餾水定容至lL，pH值5. 0。(3)發(fā)酵
將種子液以10%接種量轉(zhuǎn)移至滅菌后的5L發(fā)酵罐中，發(fā)酵罐的裝液量為3L，控制發(fā)酵溫度為28°C，pH5. 0，發(fā)酵40h后每隔2h取樣測定菌體濃度。
(4)槐糖脂滅菌
將上述純度為95%的槐糖脂用自來水溶解，配制成終濃度為10g/L的溶液，在121°C滅菌20min后，冷卻至28 V備用。(5)槐糖脂誘導(dǎo)
發(fā)酵罐經(jīng)45h發(fā)酵后，菌體達(dá)到對(duì)數(shù)生長后期，此時(shí)補(bǔ)加上述無菌槐糖脂水溶液25mL 至發(fā)酵液中槐糖脂的終濃度為0. 25g/3L，間隔2h后再次補(bǔ)加相同量的槐糖脂水溶液，共補(bǔ)加四次，每次間隔時(shí)間均為2h ；第二天和第三天再次以同樣方法補(bǔ)加槐糖脂水溶液，每天補(bǔ)加的間隔時(shí)間為16h，最終使發(fā)酵液中槐糖脂的終濃度為lg/L。(6)纖維素酶粗提取
發(fā)酵持續(xù)6d后結(jié)束，發(fā)酵液經(jīng)過濾布過濾，濾液經(jīng)過0. IMpa, 55°C減壓濃縮，后進(jìn)行噴粉干燥，噴粉時(shí)進(jìn)料口溫度為135°C，出料口溫度為60°C，得到纖維素酶粗制品。纖維素酶的活力使用濾紙酶活(FPA)測定法測定，酶活為5100 IU0其它同實(shí)施例1。實(shí)施例5 (1)種子培養(yǎng)
種子培養(yǎng)基組成包括，單位1L:纖維素10g，酵母抽提物10g，甘油10g，(NH4)2SO4 1.4 g, KH2PO4 2g, CaCl2 · 2H20 0. 4g, MgSO4 · 7H20 0. 3 g, FeSO4 · 7H20 0. 005 g, CoCl2 · 6H20 0. 0037 g, MnSO4 · H2O 0. 0016g, ZnSO4 · 7H20 0. 0014 g，用蒸餾水定容至 1L, pH 值 5· 0 ；所用菌種里氏木霉TJZKBI0956 ；首先將培養(yǎng)好的里氏木霉菌種接種到滅過菌的種子培養(yǎng)基中，在28°C培養(yǎng)，培養(yǎng)時(shí)間為72h，即得種子液。(2)發(fā)酵培養(yǎng)基滅菌
發(fā)酵培養(yǎng)基經(jīng)121°C，20min滅菌后，pH為5. 0，冷卻至28 °C ；發(fā)酵培養(yǎng)基組成包括，單位 IL 纖維素 50g，酵母抽提物 10g, (NH4)2SO4 1. 4 g,KH2PO4 2g, CaCl2 ·2Η20 0. 4g,MgSO4 ·7Η20 0. 3 g, FeSO4 · 7Η20 0. 005 g, CoCl2 · 6Η20 0. 0037 g, MnSO4 · H2O 0. 0016g, ZnSO4 · 7Η20 0.0014 g，用蒸餾水定容至lL，pH值5. 0。(3)發(fā)酵
將種子液以10%接種量轉(zhuǎn)移至滅菌后的5L發(fā)酵罐中，發(fā)酵罐的裝液量為3L，控制發(fā)酵溫度為28°C，pH5. 0，發(fā)酵40h后每隔2h取樣測定菌體濃度。(4)槐糖脂滅菌
將上述濃度為150g/L的槐糖脂發(fā)酵液，用自來水配制成終濃度為10g/L的溶液，在 121°C滅菌20min后，冷卻至28°C。(5)槐糖脂誘導(dǎo)
發(fā)酵罐經(jīng)48h發(fā)酵后，菌體達(dá)到對(duì)數(shù)生長后期，此時(shí)一次性添加上述滅菌的槐糖脂發(fā)酵液溶液300mL至發(fā)酵液中，其終濃度為lg/L。(6)纖維素酶活測定
發(fā)酵持續(xù)6d后結(jié)束，發(fā)酵液經(jīng)過濾布過濾，濾液經(jīng)過0. IMpa, 55°C減壓濃縮，后進(jìn)行噴粉干燥，噴粉時(shí)進(jìn)料口溫度為135°C，出料口溫度為60°C，得到纖維素酶粗制品。纖維素酶的活力使用濾紙酶活(FPA)測定法測定，酶活為5060 IU0其它同實(shí)施例1。
上述參照實(shí)施例對(duì)通過添加槐糖脂進(jìn)行誘導(dǎo)發(fā)酵生產(chǎn)纖維素酶的方法進(jìn)行的詳細(xì)描述，是說明性的而不是限定性的，可根據(jù)所限定范圍例舉出若干個(gè)實(shí)施例，因此在不脫離本發(fā)明總體構(gòu)思下的變化和修改，應(yīng)屬本發(fā)明的保護(hù)范圍之內(nèi)。
權(quán)利要求
1. 一種通過添加槐糖脂進(jìn)行誘導(dǎo)發(fā)酵生產(chǎn)纖維素酶的方法，其特征在于實(shí)施步驟如下(1)種子培養(yǎng)種子培養(yǎng)基組成包括，單位1L:纖維素10g，酵母抽提物10g，甘油10g，(NH4)2SO4 1.4 g, KH2PO4 2g, CaCl2 · 2H20 0. 4g, MgSO4 · 7H20 0. 3 g, FeSO4 · 7H20 0. 005 g, CoCl2 · 6H20 0. 0037 g, MnSO4 · H2O 0. 0016g, ZnSO4 · 7H20 0. 0014 g，用蒸餾水定容至 1L, pH 值 5· 0 ；所用菌種里氏木霉TJZKBI0956 ；首先將培養(yǎng)好的里氏木霉菌種接種到滅過菌的種子培養(yǎng)基中，在28-30°C培養(yǎng)，培養(yǎng)時(shí)間為68-72h，即得種子液；(2)發(fā)酵培養(yǎng)基滅菌發(fā)酵培養(yǎng)基經(jīng)121°C，20min滅菌后，pH為5. 0，冷卻至28-30°C ；發(fā)酵培養(yǎng)基組成包括，單位 IL 纖維素 50g，酵母抽提物 10g, (NH4)2SO4 1. 4 g，KH2PO4 2g，CaCl2 · 2H20 0. 4g， MgSO4 · 7H20 0. 3 g, FeSO4 · 7H20 0. 005 g, CoCl2 · 6H20 0. 0037 g, MnSO4 · H2O 0. 0016g, ZnSO4 · 7H20 0. 0014 g，用蒸餾水定容至 1L，pH 值 5· 0 ；(3)發(fā)酵將種子液以5%-10%的接種量轉(zhuǎn)移至滅菌后的5L發(fā)酵罐中，發(fā)酵罐的裝液量為3L，控制發(fā)酵溫度為28-30°C，ρΗ5. 0，發(fā)酵40h后每隔2h取樣測定菌體濃度；(4)槐糖脂滅菌分別使用發(fā)酵制備的純度為95%的槐糖脂和濃度為150g/L的槐糖脂發(fā)酵液作為誘導(dǎo)劑，均用自來水溶解分別配制成終濃度為10g/L的溶液，在121°C滅菌20min后，冷卻至 28-30 0C ；(5)槐糖脂誘導(dǎo)發(fā)酵罐經(jīng)45-48h發(fā)酵后，菌體達(dá)到對(duì)數(shù)生長后期，此時(shí)一次性添加槐糖脂溶液至發(fā)酵液中，使其終濃度為lg/L，或者進(jìn)行間歇性補(bǔ)加，連續(xù)補(bǔ)加3d，一天中分四次補(bǔ)加槐糖脂， 每次間隔時(shí)間均為2h，每天補(bǔ)加槐糖脂的間隔時(shí)間為16h，使發(fā)酵液中槐糖脂的終濃度為 lg/L；(6)纖維素酶粗提取整個(gè)發(fā)酵時(shí)間持續(xù)6d，發(fā)酵結(jié)束后發(fā)酵液經(jīng)過濾布過濾，濾液經(jīng)過0. IMpa, 55°C減壓濃縮，后進(jìn)行噴粉干燥，噴粉時(shí)進(jìn)料口溫度為135°C，出料口溫度為60°C，得到纖維素酶粗制品；纖維素酶的活力使用濾紙酶活(FPA)測定法測定，酶活為5000-5100 IU0
全文摘要
本發(fā)明涉及一種通過添加槐糖脂進(jìn)行誘導(dǎo)發(fā)酵生產(chǎn)纖維素酶的方法，實(shí)施步驟如下(1)種子培養(yǎng)；首先將培養(yǎng)好的里氏木霉菌種接種到滅過菌的種子培養(yǎng)基中，在28-30℃培養(yǎng)，培養(yǎng)時(shí)間為68-72h；(2)發(fā)酵培養(yǎng)基滅菌；發(fā)酵培養(yǎng)基經(jīng)121℃，20min滅菌后，pH為5.0，冷卻至28-30℃；(3)發(fā)酵；將種子液以5%-10%的接種量轉(zhuǎn)移至滅菌后的5L發(fā)酵罐中，發(fā)酵罐的裝液量為3L，控制發(fā)酵溫度為28-30℃，pH5.0，發(fā)酵40h后每隔2h取樣測定菌體濃度；(4)槐糖脂滅菌；(5)槐糖脂誘導(dǎo)；(6)纖維素酶粗提取。本發(fā)明采用添加槐糖脂進(jìn)行誘導(dǎo)發(fā)酵生產(chǎn)纖維素酶的方法，有效的誘導(dǎo)了纖維素酶的合成，獲得了較高的纖維素酶活，降低了生產(chǎn)纖維素酶的成本。
文檔編號(hào)C12N9/42GK102250859SQ201110206118
公開日2011年11月23日 申請日期2011年7月22日 優(yōu)先權(quán)日2011年7月22日
發(fā)明者劉云, 國華, 徐勇虎, 李睿穎, 王曉瓊, 胡婭君, 范婷, 韓慧 申請人:天津?qū)嵃l(fā)中科百奧工業(yè)生物技術(shù)有限公司