專利名稱:用于治療過敏的熱致死菌株的食品組合物以及醫(yī)藥組合物的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域:
本發(fā)明涉及ー種食品組合物以及醫(yī)藥組合物,特別是ー種包含用于治療過敏的具有免疫活性的熱致死菌株的食品組合物以及醫(yī)藥組合物。
背景技術(shù):
一般食用含乳酸菌(LAB)的產(chǎn)品僅具有調(diào)整腸道的健康效果,雖然有數(shù)以萬計的乳酸菌菌株存在于自然界,但僅有少數(shù)乳酸菌株具有抗過敏的特質(zhì)。少數(shù)這些細(xì)菌株所具有的耐酸與耐膽鹽能力、吸附黏膜表皮細(xì)胞的能力以及在通過腸胃道后仍可存活的能力等特性,是篩選有促進(jìn)健康效果的菌株時的重要依據(jù)。時至今日,僅有少數(shù)幾株經(jīng)證明其具有抗過敏健康效果的乳酸菌菌株被確認(rèn)出來,而乳酸菌對身體健康的功能在于菌株(strain)的特異性而非菌種(species),此種對于人的身體健康有特殊功效的菌株稱為功能性益生菌(Guidelines for the evaluation of probiotics in food ;Report of joint FAO/WHOworking group on drafting guidelines for the evaluation of probiotics in food ;London Ontario,Canada April 30and May I,2002 :1_7)。益生菌與免疫反應(yīng)之間的關(guān)系,約從公元2000年開始被集中性的大量研究直到今日。益生菌大都為革蘭氏陽性菌,從體外進(jìn)入體內(nèi)后,附著于人體的黏膜細(xì)胞上方,與樹突狀細(xì)胞及巨噬細(xì)胞的類鐸受體結(jié)合。每種類鐸受體所辨識的物質(zhì)皆不盡相同,除了在細(xì)胞表面的類鐸受體較易辨識多糖體物質(zhì),如肽聚糖或是脂多糖等,也有細(xì)胞內(nèi)的胞內(nèi)類鐸受體,只為辨識菌體內(nèi)物質(zhì),如細(xì)胞質(zhì)蛋白或是遺傳物質(zhì)脫氧核糖核酸鏈等。菌體所包含的物質(zhì)與類鐸受體作用后,會使樹突狀細(xì)胞或巨噬細(xì)胞成熟化,并分泌相關(guān)的細(xì)胞激素來刺激免疫反應(yīng)的運行。目前在研究上發(fā)現(xiàn),益生菌影響免疫反應(yīng)最典型的現(xiàn)象即為刺激第一型輔助型T細(xì)胞的活化,第二個現(xiàn)象則為第一型調(diào)節(jié)型T細(xì)胞的成熟。此兩個不同的途徑,在樹突狀細(xì)胞或巨噬細(xì)胞被刺激分泌的細(xì)胞激素就已經(jīng)有所區(qū)別。在前者,此兩種抗原呈現(xiàn)細(xì)胞所分泌的細(xì)胞激素大多為前發(fā)炎細(xì)胞激素,如IL-12、IFN-Y , TNF-α等;后者分泌的細(xì)胞激素多數(shù)為抗發(fā)炎細(xì)胞激素,如IL-10。國內(nèi)外有許多乳酸菌與過敏反應(yīng)有關(guān)的文獻(xiàn)報導(dǎo)。在針對乳酸菌減低過敏的能力進(jìn)行動物試驗的研究方面,熱致死的乳酸菌L. plantarum L-137所作的動物試驗?zāi)軌蛘T導(dǎo)DBA/2鼠的巨噬細(xì)胞與脾臟細(xì)胞產(chǎn)生IL-12及IFN-Y,并且能抑制已具酪蛋白(casein)專ー性的IgE及對酪蛋白專ー性的IgGl抗體(Murosaki,1998)。針對OVA-TCR-Tg鼠喂食L. casei Shirota四周,增加脾臟細(xì)胞分泌IFN-Y和IL-12,降低分泌IL-4和IL_5 (Shidaet al. ,2002)。OVA致敏BALB/c鼠喂食乳酸菌Lactobacillus發(fā)酵奶27天,可降低血清中具有 OVA 特異性 IgE(Ishida et al. ,2003) C3H/Hej 鼠經(jīng) OVA 與霍亂毒素(choleratoxin)致敏,喂食B. bifidum BGN4、L. casei 911,可使血清中具OVA特異性IgE、IgA及總IgE、IgGl降低(Kim et al.,2005),這些文獻(xiàn)證實在過敏模式的動物試驗上,喂食乳酸菌能夠降低血清中IgE的含量,藉此改善過敏的情形。乳酸菌在臨床實驗上,具有過敏疾病的患者確實能改善過敏反應(yīng),合并服用干燥的乳酸菌L. rhamnosus及L. reuteri六周,對過敏疾病有益處,以問卷調(diào)查家長評估益生菌對一至十三歲兒童異位性皮膚炎,發(fā)現(xiàn)56%的兒童異位性皮膚炎有改善(Rosenfeldt etal. , 2003) ο Ishida (2005)學(xué)者針對四十九位過敏性鼻炎患者,飲用L. acidophilus strainL-92,也發(fā)現(xiàn)過敏癥狀獲得改善。服用L fermentum VRI 003 PCCTM八周,五十三位具有異位性皮膚炎癥狀的小孩可以增加PBMC細(xì)胞產(chǎn)生IFN- Y,并改善過敏情形(Prescott etal.,2005)。F5lster-Holst (2006)等學(xué)者研究指出針對五十四位具有異位性皮膚炎患者所作的試驗,給予服用L. rhamnosus strain GG及安·劑后,能有效改善過敏癥狀。具抗過敏功效性的活體乳酸菌,其保存必須藉由冷藏或冷凍的方式,才能使其抗過敏活性不至于因長時間在室溫存放而降低。而具有免疫活性的熱致死菌株,經(jīng)由特定溫度熱致死后,可以解決一般抗過敏益生菌產(chǎn)品在常溫保存上的問題。
發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明一方面廣義的包括熱致死的糞腸球菌(Enterococcus faecalis) YM-73菌 株,中國典型培養(yǎng)物保藏中心保藏編號CCTCC NO M 2011123以及生理上可接受的賦形劑或稀釋劑所組成的組合物。在另ー項具體實施例中,增強抗過敏能力的生理上可接受的同種或突變種的熱致死糞腸球菌YM-73菌株,中國典型培養(yǎng)物保藏中心保藏編號CCTCC NO M 2011123。又,另ー項具體實施例中,本發(fā)明可廣義的包括經(jīng)由促進(jìn)白細(xì)胞介素-12 (IL-12)或干擾素Y調(diào)控Thl型免疫反應(yīng)而抑制免疫球蛋白IgE,改善Th2型免疫反應(yīng)過剩的過敏現(xiàn)象,其是對哺乳動物給予可達(dá)到刺激Thl型免疫效果劑量的熱致死糞腸球菌YM-73菌株,中國典型培養(yǎng)物保藏中心保藏編號CCTCC NO M 2011123。本發(fā)明亦可廣義的包括本發(fā)明說明書中分開或總合說明的部分、構(gòu)成要件與特征,及任何包含該等部分、構(gòu)成要件與特征中任何一者或更多者的任何或全部組合,且若本文所述及的明確完整事物已于與本發(fā)明有關(guān)的相關(guān)技術(shù)中出現(xiàn)已知的同等物時,所述已知的同等物將如同獨立事項并入本文中。
圖I顯示,當(dāng)分別以IO6至IO8個Cfu糞腸球菌YM-73菌株CCTCC NO M 2011123的活菌及兩種熱致死條件處理的菌體與IO5至IO7個人外周血單個核細(xì)胞(PBMC)分別共同培養(yǎng)48小時,收取細(xì)胞上清液,以酶聯(lián)免疫分析法檢測干擾素Y (IFN-gamma)在上清液中的含量。其中以實驗背景值(Cell only)為負(fù)對照組,以發(fā)表多數(shù)文獻(xiàn)證明其有抗過敏功效的乳酸菌(Lactobacillus rhamnosus GG BCRC 16000)的活菌及相同熱致死條件處理的菌體為功能性對照組,PHA(Phytohemagglutinin)為正對照組,檢測干擾素Y受刺激濃度。結(jié)果顯示兩種熱致死條件處理的糞腸球菌YM-73菌株可以顯著的刺激人外周血單個核細(xì)胞(PBMC)分泌干擾素 Y 與對照組(Lactobacillus rhamnosus GG BCRC 16000)有顯著性差異。55°C 80°C的熱致死溫度下,糞腸球菌YM-73菌株比對照組(Lactobacillusrhamnosus GG BCRC 16000)的刺激量高出36倍;90°C 120°C的熱致死溫度下,糞腸球菌YM-73菌株比對照組(Lactobacillus rhamnosus GG BCRC 16000)的刺激量高出15倍(PBMC)。
圖2顯示,當(dāng)分別以熱致死IO6至IO8個cfu糞腸球菌YM-73菌株CCTCC NO:M 2011123的活菌及兩種熱致死條件處理的菌體與IO5至IO7個人外周血單個核細(xì)胞(PBMC)分別共同培養(yǎng)48小時,收取細(xì)胞上清液,以酶聯(lián)免疫分析法檢測白細(xì)胞介素12p70(IL-12p70)在上清液中的含量。其中以實驗背景值(Cell only)為負(fù)對照組,以發(fā)表多數(shù)文獻(xiàn)證明其有抗過敏功效的乳酸菌(Lactobacillus rhamnosus GG BCRC 16000)的活菌及相同熱致死條件處理的菌體為功能性對照組,PHA (Phytohemagglutinin)為正對照組,檢測白細(xì)胞介素12p70(IL-12p70)受刺激濃度。結(jié)果顯示兩種熱致死條件處理的糞腸球菌YM-73菌株可以顯著的刺激人外周血單個核細(xì)胞(PBMC)分泌白細(xì)胞介素12p70與對照組(Lactobacillus rhamnosus GG BCRC 16000)有顯著性差異。55°C 80°C 的熱致死溫度下,幾腸球菌YM-73菌株比對照組(Lactobacillus rhamnosus GG BCRC 16000)的刺激量高出50倍;90°C 120°C的熱致死溫度下,糞腸球菌YM-73菌株比對照組(Lactobacillusrhamnosus GG BCRC 16000)的刺激量高出 18 倍。圖3顯示,當(dāng)分別以熱致死IO6至IO8個cfu糞腸球菌YM-73菌株CCTCC NO M2011123的活菌及兩種熱致死條件處理的菌體與IO5至IO7個人外周血單個核細(xì)胞(PBMC)分別共同培養(yǎng)48小時,收取細(xì)胞上清液,以酶聯(lián)免疫分析法檢測白細(xì)胞介素13(IL-13)在上清液中的含量。其中以實驗背景值(Cell only)為負(fù)對照組,以發(fā)表多數(shù)文獻(xiàn)證明其有抗過敏功效的乳酸菌(Lactobacillus rhamnosus GG BCRC 16000)的活菌及相同熱致死條件處理的菌體為功能性對照組,PHA(Phytohemagglutinin)為正對照組,檢測白細(xì)胞介素13(IL-13)受刺激濃度。結(jié)果顯示兩種熱致死條件處理的糞腸球菌YM-73菌株可以顯著的刺激人外周血單個核細(xì)胞(PBMC)降低分泌白細(xì)胞介素13,與正對照組(PHA)有顯著性差異。55°C 80°C的熱致死溫度下,糞腸球菌YM-73菌株比對照組(Lactobacillusrhamnosus GG BCRC 16000)的刺激量下降6倍;90°C 120°C的熱致死溫度下,糞腸球菌YM-73菌株比對照組(Lactobacillus rhamnosus GG BCRC 16000)的刺激量也下降近6倍。圖4顯示,A圖為55°C 80°C條件下熱致死糞腸球菌YM-73菌株冷凍干燥成菌粉,在FE-SEM下放大50000倍觀察;B圖為90°C 120°C條件下熱致死糞腸球菌YM-73菌株冷凍干燥成菌粉,在FE-SEM下放大50000倍觀察;C圖為糞腸球菌YM-73菌株的活性菌體冷凍干燥成菌粉,在FE-SEM下放大50000倍觀察。從A圖與C圖比較中可以發(fā)現(xiàn),在55°C 80°C條件下熱致死糞腸球菌YM-73菌株后,菌株表面的皺折變多,菌體變得更加集中;而B圖與C圖的比較,發(fā)現(xiàn)糞腸球菌YM-73菌株被破壞,且有破裂的菌體。因此在此兩熱致死溫度下,菌體刺激免疫細(xì)胞產(chǎn)生Thl細(xì)胞激素的能力比活性菌體增強約4. 6倍。圖5顯示,依據(jù)Jacobsen等學(xué)者(1999)的分析方法,當(dāng)每個視野的平均菌數(shù)少于40時,判定為不附著(nonadhesive);當(dāng)每個視野的平均菌數(shù)介于41至100時,判定為附著(adhesive);當(dāng)姆個視野的平均菌數(shù)大于100時,判定為強烈附著(strongly adhesive)。顯示糞腸球菌YM-73菌株CCTCC NO M 2011123的活性菌體及55°C 80°C條件熱致死后的菌體判定為“附著”;90°C 120°C條件熱致死后的菌體判定為“不附著”。
具體實施例方式本發(fā)明可廣義的包括熱致死的糞腸球菌(Enterococcus faecalis) YM-73菌株,中國典型培養(yǎng)物保藏中心保藏編號CCTCC NO M 2011123。
許多文獻(xiàn)指出増加第一型T細(xì)胞細(xì)胞激素包括白細(xì)胞介素(IL-12)、干擾素
Y(IFN-gamma)的分泌增加,可以有效改善過敏癥狀;進(jìn)ー步的研究也指出特定的乳酸菌菌株和樹突狀細(xì)胞上類鐸受體(Toll-like receptor)結(jié)合,活化細(xì)胞內(nèi)的轉(zhuǎn)譯蛋白移至核內(nèi)而釋放大量細(xì)胞激素,屬于先天免疫的ー環(huán),因此某些特定的乳酸菌菌種借由其細(xì)胞壁多糖類物質(zhì)如peptidoglycan、polysaccharide等,經(jīng)先天免疫系統(tǒng),確實能活化體內(nèi)T細(xì)胞的發(fā)育。本發(fā)明所述的菌株的冷凍干燥培養(yǎng)物已保藏在中國典型培養(yǎng)物保藏中心(CCTCC),地址為中國武漢。保藏的詳細(xì)資料如表I所示表I
權(quán)利要求
1.一種食品組合物,其特征在于,包含 刺激免疫細(xì)胞分泌抗過敏相關(guān)細(xì)胞激素的熱致死糞腸球菌(Enterococcus faecalis)YM-73,中國典型培養(yǎng)物保藏中心保藏編號CCTCC NO M 2011123 ;以及生理上可接受的賦形劑或稀釋劑。
2.如權(quán)利要求I所述的食品組合物,其特征在于,該熱致死溫度為55°C 80°C。
3.如權(quán)利要求I所述的食品組合物,其特征在于,該熱致死溫度為90°C 120°C。
4.如權(quán)利要求I所述的食品組合物,其特征在于,該賦形劑或稀釋劑為一種食品。
5.如權(quán)利要求4所述的食品組合物,其特征在于,該食品包含發(fā)酵乳、酸奶、奶酪、乳制飲品乳粉、茶、咖啡或以上的組合。
6.一種用于治療過敏的醫(yī)藥組合物,包含 刺激免疫細(xì)胞分泌抗過敏相關(guān)細(xì)胞激素的熱致死糞腸球菌(Enterococcus faecalis)YM-73,中國典型培養(yǎng)物保藏中心保藏編號CCTCC NO M 2011123 ;以及醫(yī)藥上可接受的賦形劑或稀釋劑。
7.如權(quán)利要求6所述的用于抗過敏的醫(yī)藥組合物,其特征在于,該熱致死溫度為55 80°C。
8.如權(quán)利要求6所述的用于抗過敏的醫(yī)藥組合物,其特征在于,該熱致死溫度為90°C 120°C。
全文摘要
本發(fā)明涉及具有免疫活性的熱致死菌株及含過去未知可用于增進(jìn)它治療過敏能力的該熱致死菌株的新穎組合物,該組合物可以食品或醫(yī)藥組合物的形式存在。其中亦說明如何篩選測定該熱致死乳酸菌株組合物而增進(jìn)Th1型免疫能力藉此降低因過敏而反應(yīng)過度的Th2型的免疫反應(yīng)的方法。
文檔編號A23L1/30GK102835667SQ201110179140
公開日2012年12月26日 申請日期2011年6月20日 優(yōu)先權(quán)日2011年6月20日
發(fā)明者謝佩珊, 蔡宜鈞, 郭仲偉, 林美吟, 莊家如 申請人:豐華生物科技股份有限公司