專利名稱：*蛋白胨和脂肪酶活性的制作方法
月示蛋白胨和脂肪酶活性
概括而言，本發(fā)明涉及含有脂質(zhì)成分的食品組合物領(lǐng)域。本發(fā)明的實(shí)施方案涉及組合物和延遲從所消耗產(chǎn)品中攝取脂肪的用途。例如，本發(fā)明涉及特定的月示蛋白胨成分及其延遲脂肪水解的用途。脂肪/油對(duì)在腸腔內(nèi)在腸上皮細(xì)胞的刷狀緣膜處吸收而言是生物可利用之前必須被脂肪酶經(jīng)酶促水解。飲食脂肪主要由三酰甘油(占多數(shù)，約95%)組成。通過脂肪酶的酶促作用，三酰甘油(TAG)最終被水解成易于被身體吸收的游離脂肪酸(FFA)和單酸甘油酯(MG)。由于脂肪酶的水溶性以及脂肪和油的低的親水強(qiáng)度，脂肪酶催化的反應(yīng)在油/水界面發(fā)生。過度的脂質(zhì)吸收將最終導(dǎo)致超重和肥胖和因而還導(dǎo)致代謝紊亂。根據(jù)Journal ofEpidemiology and Community Health中出版的研究預(yù)測(cè)，到2012年,僅在英國將有三分之一的成年人(或一千三百萬人)肥胖。為了降低當(dāng)消耗脂肪性食品組合物或飲料時(shí)體重增加和最終肥胖的風(fēng)險(xiǎn)，所期望的是有這樣一種可用的方法，它將允許其延遲從所消耗食品中吸收脂肪，同時(shí)維持令人愉快的口感和味道以及食品中的脂質(zhì)成分所帶來的健康益處。Cartier等人已經(jīng)描述了如下事實(shí)富含PP3組分的來自奶的常規(guī)麻蛋白胨降低了奶的天然脂解，而缺乏PP3的相同成分促進(jìn)了奶脂解(1990，J.Dairy Sci 731173-1177)。Girardet還描述了現(xiàn)有技術(shù)狀態(tài)中來自奶的PP3對(duì)豬的胰脂肪酶和對(duì)奶內(nèi)源性脂肪酶的影響。他們做出如下結(jié)論P(yáng)P3成分對(duì)脂肪酶活性沒有直接影響，但是對(duì)油/水界面更具有表面活性，通過競(jìng)爭(zhēng)機(jī)制防止脂肪酶吸收(1993，J. Dairy Sci 76:2156-2163)。眾所周知，發(fā)泡是乳蛋白質(zhì)的典型特征。但是，即使在除去酪蛋白、α-乳清蛋白和β -乳球蛋白后，奶仍然具有相當(dāng)大的表面活性(R. Aschaffenburg, J. DairyRes. 14 (1945)，316-328)。剩余的成分含有I示蛋白胨成分(PPf)，后者包含大量的表面活性組分。PPf表示未清楚表征的蛋白質(zhì)化合物的不均勻混合物，它由Girardet等人，J. Dairy Res. 63 (1996)，333-350在主題綜述中進(jìn)行了概括，其引入本文作為參考。描述了 PPf中的多種蛋白質(zhì)，例如對(duì)大腸桿菌(Escherichia coli)的腸毒素具有結(jié)合親和性的兩種糖蛋白ppl6k和pp20k。經(jīng)鑒別，它們分別是α-乳清蛋白和β -乳球蛋白的糖基化形式。在通過十二烷基硫酸鈉聚丙烯酰胺凝膠電泳(SDS-PAGE)檢測(cè)到的較大蛋白質(zhì)中有骨橋蛋白(它是一種酸性60kDa磷酸糖蛋白)和88kDa乳鐵蛋白。主要PPf組分(稱為組分3、5和8(PP3、PP5和PP8))在奶樣品中的量與其纖溶酶活動(dòng)相關(guān)。以下組分是對(duì)酪蛋白進(jìn)行纖溶酶活動(dòng)的結(jié)果ΡΡ5或i3-CN-5P f (1-105/7 ；來自酪蛋白的N-端肽1-105和1-107)，PP8-快或P-CN-4P f (1-28 ; β-酪蛋白的N-端肽 1-28)。組分 ΡΡ8-慢和 β -CN-IP f (29-105/7 ； β -酪蛋白的 N-端肽 29-105 和 29-107)是難以通過電泳遷移率來區(qū)分的單獨(dú)實(shí)體。通過以下觀察結(jié)果說明了 ΡΡ3組分的不均勻分子結(jié)構(gòu)。ΡΡ3磷酸糖蛋白形成尺寸為163kDa(于pH 8. 6通過超速離心法測(cè)得)的復(fù)合物，采用5M-胍可以將該復(fù)合物分離為具有40kDa的表觀MW的亞基。當(dāng)在二硫鍵還原劑2-巰基乙醇的存在下進(jìn)行SDS-PAGE時(shí)顯示存在分別為24. 6-33. 4kDa和17-20. 9kDa的兩種主要糖蛋白組分。事實(shí)上總是觀察到表觀分子量為28kDa和ISkDa的主要糖蛋白并發(fā)現(xiàn)與IlkDa的條帶相關(guān)。當(dāng)通過二維聚丙烯酰胺凝膠電泳(2D-PAGE)分離時(shí)，它們分別顯示為4和2個(gè)點(diǎn)，具有pH4. 9至6. I的表觀等電點(diǎn)。所述復(fù)合物由與分子量為約7kDa的非糖基化多肽聯(lián)合的分子量為28kDa、18kDa和IlkDa的糖蛋白組成。通過用刀豆球 蛋白A(ConA)進(jìn)行凝集素親和色譜法分離顯示出11_、18-和28kDa糖蛋白的復(fù)合物行為。IlkDa糖蛋白不與ConA結(jié)合，而較大的18和28kDa形式分布在非結(jié)合成分(稱為糖蛋白口口18_和口口28_)和結(jié)合成分(稱為糖蛋白ppl8+和pp28+)之間。在本領(lǐng)域通常由脫脂奶獲得PPf。牛奶含有約4重量％脂肪、約3. 5重量％蛋白質(zhì)、約O. 6重量％乳清蛋白和約O. 003重量％萬示蛋白胨。但是，按照本領(lǐng)域的現(xiàn)有狀態(tài)對(duì)PPf進(jìn)行的分離涉及熱處理(例如，于90°C 10分鐘)和將奶明顯酸化以通過沉淀/離心除去酪蛋白和變性的乳清蛋白。這種常規(guī)方法昂貴且在工業(yè)規(guī)模下不適用。特別是，本領(lǐng)域狀態(tài)中的酸化步驟通常在相對(duì)不特定、但是低的pH值下進(jìn)行。這將導(dǎo)致乳蛋白質(zhì)大量凝固。奶中存在的蛋白質(zhì)有超過90%在這些條件下將凝固。如果欲進(jìn)行麻蛋白胨成分的大規(guī)模純化，則這些凝固蛋白質(zhì)的除去產(chǎn)生了嚴(yán)重的困難。因此，本發(fā)明的目標(biāo)是提供這樣一種含有脂質(zhì)成分的食品組合物，它顯示出游離脂肪酸和/或單酸甘油酯被身體的攝取延遲和可以容易地以工業(yè)規(guī)模制備。本發(fā)明人驚奇地發(fā)現(xiàn)，他們可以通過獨(dú)立權(quán)利要求的主題解決該目標(biāo)。本發(fā)明人之前能夠提供與本領(lǐng)域已知那些相比有改進(jìn)的月示蛋白胨成分。這種改進(jìn)的月示蛋白胨成分可以如專利申請(qǐng)EP 08101805. 3中所述來獲得，該專利申請(qǐng)引入本文作為參考。與本領(lǐng)域已知的月示蛋白胨成分相反，這種改進(jìn)的月示蛋白胨成分的制備在工業(yè)上是適用的，因?yàn)楸苊饬嗽谒峄襟E期間的顯著蛋白質(zhì)凝固。在熱處理之前精確調(diào)節(jié)PH值(±0. IpH單位)導(dǎo)致形成了直徑小于Iym的球形乳清蛋白顆粒，而不是現(xiàn)有技術(shù)中的大塊蛋白質(zhì)集合物。從月示蛋白胨成分中除去這些球形乳清蛋白顆粒比現(xiàn)有技術(shù)中的大塊蛋白質(zhì)沉淀物容易得多。而且，這種所得的月示蛋白胨成分表現(xiàn)出改進(jìn)的熱穩(wěn)定性。另外，它可以與現(xiàn)今本領(lǐng)域常規(guī)得到的月示蛋-白胨成分同樣良好地用于穩(wěn)定油/水界面。此外，本發(fā)明人能夠證明與本領(lǐng)域目前所提出的相反，月示蛋白胨成分不僅當(dāng)存在于油-水界面時(shí)能夠延遲脂解，而且當(dāng)存在于本體相(bulk phase)時(shí)也如此。欲用于本發(fā)明的月示蛋白胨成分在油和水之間的邊界處抑制脂肪酶作用，從而阻止或至少延遲脂解、即由三酰甘油(TAG)生成游離脂肪酸(FFA)和單酸甘油酯(MAG)。當(dāng)月示蛋白胨成分存在于水本體相中時(shí)，它也抑制脂肪酶作用，因此在水本體相中也延遲由三酰甘油(TAG)產(chǎn)生游離脂肪酸(FFA)和單酸甘油酯(MAG)。重要的是，本發(fā)明人能夠證明就延遲脂肪吸收而言，添加月示蛋白胨成分產(chǎn)生了比其它蛋白質(zhì)成分如β_乳球蛋白、β_酪蛋白和乳清蛋白分離物顯著得多的作用。
例如，可以將本發(fā)明的月示蛋白胨成分加入到食品的水性本體相中。也可以將本發(fā)明的月示蛋白胨成分加入到0/W乳劑的水性本體相中以進(jìn)一步延遲已經(jīng)被包覆的油滴的消化，其中所存在的包覆層含有乳化劑。這種乳化劑可以是低和/或高分子量乳化劑。例如，可以使用表面活性劑、蛋白質(zhì)和/或多糖。
通過飲食脂質(zhì)的體外模擬消化試驗(yàn)已經(jīng)獲得了所述作用的證據(jù)。本發(fā)明的月示蛋白胨成分當(dāng)存在于本體相時(shí)以及當(dāng)作為油滴的包覆層存在時(shí)就減慢脂質(zhì)水解而言是有效的。因此，本發(fā)明的一項(xiàng)實(shí)施方案是月示蛋白胨在制備表現(xiàn)出延遲的脂質(zhì)消化的含有脂質(zhì)的食品中的用途，其中所述月示蛋白胨可通過包括如下步驟的方法獲得-將脫礦物質(zhì)的水性天然蛋白質(zhì)分散液的pH調(diào)節(jié)至約5.6至8. 4或調(diào)節(jié)至約3. 5至 5.0 ;-將水性天然蛋白質(zhì)分散液加熱至約70_95°C達(dá)約10秒至60分鐘；-在加熱之后，從水性蛋白質(zhì)分散液中除去至少一部分所形成的直徑為至少IOOnm的固體大分子量聚集物；和-收集分散液的剩余液體部分。本發(fā)明的另一項(xiàng)實(shí)施方案是包含月示蛋白胨成分和至少一種脂質(zhì)的食品，其中所述的月示蛋白胨成分可通過包括如下步驟的方法獲得-將礦物質(zhì)含量減少至少25%的水性天然蛋白質(zhì)分散液的pH調(diào)節(jié)至5.6至8. 4的PH或調(diào)節(jié)至3. 5至5. O的pH ;-將水性天然蛋白質(zhì)分散液加熱至約70_95°C達(dá)約10秒至60分鐘；-在加熱之后，從水性蛋白質(zhì)分散液中除去至少90重量％的所形成的直徑為至少IOOnm的固體大分子量聚集物；和-收集分散液的剩余液體部分；其中食品中的所述月示蛋白胨成分和所述至少一種脂質(zhì)至少部分地作為包含至少一層包覆層的包衣油滴被提供，其中至少一層包覆層含有月示蛋白胨。本發(fā)明中的至少一種脂質(zhì)和/或油/脂肪可以是任意種類的食用油。如果一種材料被批準(zhǔn)用于人或動(dòng)物消耗，則被認(rèn)為是可食用的。例如，所述油和/或脂肪可以選自中鏈三酸甘油酯(MCT)、乳脂、亞麻籽油、桐油、大豆油、橄欖油、棕櫚油、葵花油、胡桃油、杏仁油、花生油、榛子油、eno oil、月見草油、櫻桃核油、葡萄籽油、芝麻油、玉蜀黍油、菜籽油、棉籽油、米糠油、玉米油、黑麥油、小麥胚芽油、鱷梨油、山茶油、澳洲堅(jiān)果油、沙丁魚油、鯖魚油、鯡魚油、鱈魚肝油和蠔油、杏子油、紅花油、菜籽油、羽扇豆油、桃油、番茄油、亞麻籽油、柑桔油或其組合。可通過所述方法獲得的改進(jìn)的月示蛋白胨成分可以由脫礦物質(zhì)的蛋白質(zhì)成分來制備，例如由脫礦物質(zhì)的球狀蛋白質(zhì)成分、特別是由乳清蛋白濃縮物(WPC)或乳清蛋白分離物(WPI)來制備。乳清是一種便宜的原料，通常是廢棄產(chǎn)品、例如生產(chǎn)奶酪的廢棄產(chǎn)品。奶酪制備方法需要添加凝乳酶(一種使奶凝固的蛋白水解酶)，引起分離為凝乳(將來的奶酪)和可溶性乳清成分。乳清可以包括來自牛類動(dòng)物或水?；蛘呔d羊或山羊或馬或駱駝來源的乳清或其混合物。而且，由于WPI幾乎不含脂肪，所以在PPf制備過程中脂肪除去變成是廢棄的，由此簡(jiǎn)化了工藝和另外防止了 PPf被污染。欲用于本發(fā)明的豚蛋白胨成分可以是減少了 β -乳球蛋白的和脫礦物質(zhì)的?！懊摰V物質(zhì)”對(duì)于本發(fā)明的目標(biāo)而言是指與甜或酸乳清相比，礦物質(zhì)含量減少了至少25%、優(yōu)選至少50%、更優(yōu)選至少75%。甜或酸乳清的干物質(zhì)平均含有8. 8%礦物質(zhì)，包括 O. 9%鈣、O. 8%鈉、2. 2% 鉀、O. 1%鎂、O. 7%磷和 2. 0%氯。在本發(fā)明的上下文中，“減少了 β_乳球蛋白的”是指與β_乳球蛋白相對(duì)于天然球狀蛋白質(zhì)溶液中的蛋白質(zhì)總重量而言的重量含量相比，β_乳球蛋白相對(duì)于提取物中的蛋白質(zhì)總重量而言的重量含量為最多70%、優(yōu)選最多50%、甚至更優(yōu)選最多20%。因此，減少了乳球蛋白的提取物包含在天然球狀蛋白質(zhì)溶液中存在的乳球蛋白的量的最多70重量％、優(yōu)選最多50重量％、甚至更優(yōu)選最多20重量％。欲用于本發(fā)明的月示蛋白胨成分還可以富含α-乳清蛋白。富含α-乳清蛋白是指與α-乳清蛋白相對(duì)于初始的天然球狀蛋白質(zhì)分散液中的蛋白質(zhì)總重量而言的重量含量相比，α -乳清蛋白相對(duì)于提取物中的蛋白質(zhì)總重量而言的重量含量增加到至少I. 2倍、優(yōu)選至少I. 5倍、甚至更優(yōu)選至少2倍。在產(chǎn)生本發(fā)明的月示蛋白胨成分的方法中，將脫礦物質(zhì)的水性天然蛋白質(zhì)分散液的pH調(diào)節(jié)到約5. 6至8. 4或調(diào)節(jié)到約3. 5至5. O。更精確而言，可以將pH調(diào)節(jié)到約3. 5-5. 0，或調(diào)節(jié)到約5. 6-6. 4、優(yōu)選約5. 8-6. 0，或調(diào)節(jié)到約7. 5-8. 4、優(yōu)選約7. 6-8. 0，或調(diào)節(jié)到約6. 4-7. 4、優(yōu)選約6. 6-7. 2。在導(dǎo)致本發(fā)明的深入試驗(yàn)中，本發(fā)明人出人意料地注意到當(dāng)在熱處理之前將pH調(diào)節(jié)到非常精確的pH值(±0. IpH單位)時(shí)，得到了乳清蛋白聚集物的球狀顆粒，它們具有小于Ιμπι的直徑。發(fā)現(xiàn)最佳pH值取決于原料如WPI的濃度和組成。這種方法的優(yōu)點(diǎn)是在沒有任何機(jī)械應(yīng)激如剪切的情況下產(chǎn)生乳清蛋白顆粒。所得的顆粒使得易于從本發(fā)明的含PPf的成分中除去形成這些顆粒的化合物。發(fā)現(xiàn)pH和離子強(qiáng)度是所提出方法的兩個(gè)重要因素。因此，廣泛透析了的樣品(它大大減少了游離陽離子如Ca++、K+、Na+和Mg++)在應(yīng)用了所述熱處理之后在低于5. 4的PH下傾向于產(chǎn)生凝乳，在超過6. 8的pH下傾向于產(chǎn)生可溶性乳清蛋白聚集物。因此，只有相當(dāng)窄范圍的pH值提供了在制備欲用于本發(fā)明的麻蛋白胨成分中易于在工業(yè)上除去的固體乳清蛋白顆粒類型。通過應(yīng)用對(duì)稱地位于乳清的等電pH以下的pH值、即從3. 5至5. O產(chǎn)生了類似的
乳清蛋白顆粒。對(duì)于低濃度(對(duì)于IOOg初始乳清蛋白粉而言低于O. 2g)的二價(jià)陽離子而言，如果在5. 6至6. 4、更優(yōu)選5. 8至6. O的pH范圍內(nèi)調(diào)節(jié)pH，則得到帶負(fù)電荷的乳清顆粒。根據(jù)乳清蛋白來源(例如WPC或WPI)的礦物質(zhì)含量，pH可以增加至8. 4。特別地，可以從7. 5至8. 4、優(yōu)選從7. 6至8. O調(diào)節(jié)pH，以在大量游離礦物質(zhì)的存在下獲得帶負(fù)電荷的顆粒?？梢詮?. 4至7. 4、優(yōu)選從6. 6至7. 2調(diào)節(jié)pH，以在中等濃度的游離礦物質(zhì)的存在下獲得帶負(fù)電荷的顆粒。如果在IOOg天然蛋白質(zhì)粉中存在低于2g的游離礦物質(zhì)，則該游離礦物質(zhì)濃度被認(rèn)為是低的。如果在IOOg天然蛋白質(zhì)粉中存在2g至5g的游離礦物質(zhì)，則該游離礦物質(zhì)濃度被認(rèn)為是中等的。如果在IOOg天然蛋白質(zhì)粉中存在高于5g的游離礦物質(zhì)，則該游離礦物質(zhì)濃度被認(rèn)為是聞的。當(dāng)然，顆粒電荷也可以用作從欲用于本發(fā)明的月示蛋白胨成分中分離這些顆粒的工具。
通常可以通過添加酸來調(diào)節(jié)pH，所述酸優(yōu)選是食品級(jí)的，例如鹽酸、磷酸、乙酸、檸檬酸、葡糖酸或乳酸。當(dāng)?shù)V物質(zhì)含量是高的時(shí)，通常通過添加堿性溶液來調(diào)節(jié)PH，所述堿性溶液優(yōu)選是食品級(jí)的，例如氫氧化鈉、氫氧化鉀或氫氧化銨。對(duì)于本發(fā)明的方法，優(yōu)選基本上不含鹽的水性天然乳清蛋白分散液?！盎旧喜缓}”是指對(duì)于約4wt%的蛋白質(zhì)濃度而言鹽含量為lg/L或以下。例如，水性乳清蛋白溶液可以含有其總干質(zhì)量的2. 5wt%的二價(jià)陽離子，更優(yōu)選低于2wt%?；谌芤旱目傊亓?，天然蛋白質(zhì)、優(yōu)選天然球狀蛋白質(zhì)、甚至更優(yōu)選乳清蛋白以約O. Iwt %至12wt%、優(yōu)選約O. Iwt %至8wt%、更優(yōu)選約O. 2wt%至7wt%、甚至更優(yōu)選約Iwt%至5wt%的量存在于水性天然蛋白質(zhì)分散液中。在本發(fā)明的方法中，如果水性天然乳清蛋白分散液被加熱約15分鐘至約85°C，則是優(yōu)選的。原則上，在加熱之后，可以通過本領(lǐng)域已知的任意方式從水性乳清蛋白分散液中除去所形成的直徑為至少IOOnm的固體大分子量聚集物。但是，大分子量聚集物的除去優(yōu)選可以通過沉降、離心、過濾、微孔過濾或這些方法的組合來進(jìn)行。該除去步驟可以伴隨有另外的pH調(diào)節(jié)。沉降的優(yōu)點(diǎn)是所需實(shí)驗(yàn)設(shè)備最少和它能夠以最少的能量輸入進(jìn)行。離心是一種快速、但是涉及能量輸入的方法。連續(xù)離心是已經(jīng)在工廠中使用的方法，例如用于生產(chǎn)白色奶酪。過濾和微孔過濾良好地適用于大規(guī)模生產(chǎn)，并且在除去大分子量聚集物方面是非
?？煽康?。通過將這些方法中的數(shù)種合并，可以將它們各自的優(yōu)點(diǎn)結(jié)合。例如，通過應(yīng)用最后的微孔過濾方法步驟，可以實(shí)現(xiàn)基本上完全除去直徑為至少IOOnm的大分子量聚集物。在加熱之后，從水性乳清蛋白分散液中除去優(yōu)選至少90wt%、更優(yōu)選95wt%、最優(yōu)選至少99wt%和理想地100wt%的直徑為至少IOOnm的固體大分子量聚集物。本發(fā)明的方法還可以另外包括超濾和/或蒸發(fā)步驟。超濾是利用流體靜壓將液體壓過半滲透膜的膜過濾技術(shù)。混懸的固體和高分子量溶質(zhì)被保留，而水和低分子量溶質(zhì)穿過膜。在工業(yè)和研究中使用這種分離方法來純化和濃縮含有大分子量分子(IO3-IO6Da)、尤其是蛋白質(zhì)的溶液。超濾的優(yōu)點(diǎn)是在工業(yè)環(huán)境中良好地建立，允許有效、同時(shí)溫和地分離大分子量蛋白質(zhì)，這防止了應(yīng)激引起的蛋白質(zhì)變性。
蒸發(fā)是一種允許濃縮蛋白質(zhì)溶液的溫和方法。蒸發(fā)可以例如通過加熱、例如加熱到至少40°C或優(yōu)選加熱到至少60°C來引起。例如，基于總組合物的重量，可以將包含PPf的組合物干燥至含水量降低到低于10wt%、優(yōu)選低于5wt%、甚至更優(yōu)選低于2wt%。這種干燥步驟的優(yōu)點(diǎn)是所得的月示蛋白胨成分可以以高濃度儲(chǔ)存，這減輕了組合物的重量且同時(shí)維持了其全部活性。通過蒸發(fā)提供的低水分活度還確保了產(chǎn)品具有較高的穩(wěn)定性?？赏ㄟ^上述方法獲得的月示蛋白胨成分具有如下的以總氨基酸組成的百分比表示的氨基酸組成約 6-9% ASP、約 4-7% THR、約 4-7% SER,^ 22-25% GLU、約 9-12% PRO、約 0-3 % GLY、約 I. 5-4. 5 % ALA、約 4-7 % VAL,約 0-2CYS、約 1-4 % MET、約 4-7 % ILE、約7. 5-10. 5% LEU、約 0-3% TYR、約 6. 7-9. 7% LYS、約 I. 5-4. 5% HIS、約 1-4% ARG。這種氨基酸組成與通過常規(guī)方法獲得的PPf的典型組成不同。
在表I中提供了對(duì)應(yīng)于常規(guī)方法(樣品I)和PPf (欲用于本發(fā)明，樣品2)的典型PPf-氨基酸組成并可以進(jìn)行比較。按照Paquet, D. Nejjar, Y. , & Linden, G. (1988) ；Study of a hydrophobicprotein fraction isolated from milk proteose-peptone. Journal of Dairy Science，71，1464-1471)、采用常規(guī)方法由與樣品2相同的WPI制得了樣品I。簡(jiǎn)言之，使用Prolacta 90作為原料。將Prolacta 90 (428g含84%蛋白質(zhì)的粉末Nx6. 38)在5升組11^級(jí)!120中重構(gòu)。測(cè)得該溶液的pH為6. 43，然后通過添加約15mLIN NaOH調(diào)節(jié)到pH 7.00。將上述溶液的體積調(diào)整到6升(最終蛋白質(zhì)濃度為6% (w/w)),均勻分配到6個(gè)IL-瓶中，將這些瓶子在設(shè)定在93°C的水浴中放置30分鐘以使蛋白質(zhì)變性。在20分鐘溫育后，瓶子內(nèi)部達(dá)到90°C的溫度。在溫育結(jié)束時(shí)，將這些瓶子置于冰浴中并冷卻至20°C。通過將pH調(diào)至4.6進(jìn)行蛋白質(zhì)化合物的等電沉淀。實(shí)際上，將3個(gè)IL-瓶中的內(nèi)容物合并(pH 7. 17)，用約88mL IN HCl將pH調(diào)至4. 6。對(duì)其它3個(gè)IL-瓶進(jìn)行相同的處理。將所得的兩份酸化溶液合并，于4°C儲(chǔ)存18小時(shí)，均勻分配到6個(gè)IL-塑料瓶中。將瓶子離心(于6°C和5000rpm/7200g達(dá)60分鐘，配有H 6000A轉(zhuǎn)子的Sorval RC3CPlus)后，回收含有PPf的上清液。然后，在2小時(shí)期間在半飽和(313g/L)下進(jìn)行PPf的硫酸銨沉淀。在離心(于6°C和5000rpm達(dá)60分鐘，使用Sorval RC3C Plus)后回收沉淀物，合并，并重新分散于350mL 1^11^級(jí)!120中。使用MW截留為1000的Spectrapor透析袋(Spectrum Laboratories inc.)對(duì)抗22L Milli-Q級(jí)H2O對(duì)混池的混懸液/溶液進(jìn)行4次透析。在透析后，將含有PPf的提取物進(jìn)行離心(于6°C和5000rpm達(dá)60分鐘)，將上清液過濾(0. 22 μ m 濾器,來自 Millipore 的 GP Stericup Express plus )并冷凍干燥。PPf的收率是由360g總?cè)榍宓鞍纵d量獲得6g(l. 6% )。例如，以下兩個(gè)標(biāo)準(zhǔn)允許區(qū)分現(xiàn)有技術(shù)得到的PPf和本發(fā)明中所述的改進(jìn)的月示蛋白胨成分氨基酸組成(表I)和通過2D-PAGE確定的蛋白質(zhì)組成(圖I和2)。表I :常規(guī)PPf (樣品I)和欲用于本發(fā)明的改進(jìn)的月系蛋白胨成分(樣品2)的氨基酸組成，以每IOOg粉末中各氨基酸的g表示，或者以總氨基酸組成的百分比表示。
權(quán)利要求
1.包含月示蛋白胨成分和至少一種脂質(zhì)的食品，其中所述的月示蛋白胨成分可通過包括如下步驟的方法獲得 -將礦物質(zhì)含量減少至少25%的水性天然蛋白質(zhì)分散液的pH調(diào)節(jié)至5. 6至8. 4的pH或調(diào)節(jié)至3. 5至5. O的pH ; -將水性天然蛋白質(zhì)分散液加熱至約70-95°C達(dá)約10秒至60分鐘； -在加熱之后，從水性蛋白質(zhì)分散液中除去至少90重量％的所形成的直徑為至少IOOnm的固體大分子量聚集物；和-收集分散液的剩余液體部分； 其中食品中的所述月示蛋白胨成分和所述至少一種脂質(zhì)至少部分地作為包含至少一層包覆層的包衣油滴被提供，其中至少一層包覆層含有月示蛋白胨。
2.根據(jù)權(quán)利要求I的食品，其中所述的月系蛋白胨成分和所述的至少一種脂質(zhì)以I: 2至I : 2000、優(yōu)選I : 10至I : 100的重量比提供。
3.根據(jù)權(quán)利要求1-2任一項(xiàng)的食品，其中含有月示蛋白胨的包覆層是外包覆層。
4.根據(jù)權(quán)利要求1-3任一項(xiàng)的食品，包含至少一層另外的含有至少一種蛋白質(zhì)成分的包覆層。
5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的食品，其中在所述的至少一層另外的包覆層中所含的蛋白質(zhì)成分選自￠-乳球蛋白、乳清蛋白分離物或￠-酪蛋白。
6.根據(jù)權(quán)利要求1-5任一項(xiàng)的食品，其中所述的包覆油滴具有0.1-100 iim、優(yōu)選1-50 u m的直徑。
7.根據(jù)權(quán)利要求1-6任一項(xiàng)的食品，其中所述的包覆油滴具有I: 2至I : 2000的油與月示蛋白胨的重量比。
8.根據(jù)權(quán)利要求1-7任一項(xiàng)的食品，其中所述食品中的脂質(zhì)有至少50重量％作為包覆油滴被提供。
9.根據(jù)前述權(quán)利要求任一項(xiàng)的食品，其中所述示蛋白胨和所述脂質(zhì)至少部分地以乳劑形式提供。
10.用于在人和/或動(dòng)物中支持體重減輕和/或體重維持的前述權(quán)利要求任一項(xiàng)的食品。
11.用于治療或預(yù)防肥胖的前述權(quán)利要求任一項(xiàng)的食品。
12.用于治療或預(yù)防代謝紊亂的前述權(quán)利要求任一項(xiàng)的食品。
13.根據(jù)權(quán)利要求12的食品，其中代謝紊亂選自糖尿病、高血壓和心血管疾病。
全文摘要
概括而言，本發(fā)明涉及含有脂質(zhì)成分的食品和飲料組合物領(lǐng)域。本發(fā)明的實(shí)施方案涉及組合物和延遲從所消耗產(chǎn)品中攝取脂肪的用途。例如，本發(fā)明涉及特定的蛋白胨成分及其延遲脂肪水解的用途。
文檔編號(hào)A23J3/08GK102639012SQ201080036515
公開日2012年8月15日 申請(qǐng)日期2010年8月10日 優(yōu)先權(quán)日2009年8月19日
發(fā)明者C·J·E·施密特, C·泰德斯基, E·科羅杰伊奇克, L·J·R·博韋托, S·阿奎斯塔帕切, T·拉布, V·克萊蒙特 申請(qǐng)人:雀巢產(chǎn)品技術(shù)援助有限公司