專利名稱：含重組基因的酸性α-淀粉酶及其用途的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種含有重組基因的酸性α-淀粉酶及其用途，屬于微生物、酶工程技術(shù)領(lǐng)域。
背景技術(shù)：
淀粉是工業(yè)上制取葡萄糖和糊精的主要原料，目前工業(yè)上用淀粉制糖主要采用酶水解的方法。酶法制糖工藝一般采用兩步法，第一步用α-淀粉酶將淀粉水解成低分子量的糊精，第二步用糖化酶將糊精水解成葡萄糖。淀粉顆粒在冷水中形成乳濁液，絕大部分淀粉分子包裹在淀粉酶不能到達(dá)的晶體內(nèi)。當(dāng)加熱到60 70°C時(shí)，淀粉顆粒吸水膨脹，體積迅速增加，晶體結(jié)構(gòu)被破壞，顆粒外膜裂開，形成一種糊狀的粘稠液體，這一過程稱為糊化。 不同來源的淀粉的糊化溫度不同，但一般都在陽 80°C之間。淀粉糊化后，分子鏈直接暴露在酶分子的作用之下，分子鏈被迅速切斷、變短，最終形成低分子量的糊精，液體粘度急劇下降，這一過程被稱為液化。α-淀粉酶的作用特點(diǎn)是在淀粉分子鏈中間將α-1，4糖苷鍵切斷，而對(duì)于已經(jīng)形成的短鏈糊精一般并不能進(jìn)一步分解，將糊精分解為葡萄糖需要由糖化酶來完成。糖化酶的最適作用溫度、PH等均與淀粉酶不同，因此需調(diào)整ρΗ后才能進(jìn)入糖化過程。以上制糖工藝使用了兩種酶α-淀粉酶和糖化酶，因此常稱之為雙酶法制糖工藝。濃度較高的淀粉液糊化時(shí)，必須迅速液化，否則淀粉液的粘度急劇上升會(huì)使設(shè)備無法運(yùn)行，因此用于淀粉液化的淀粉酶必須至少能耐受淀粉糊化所需溫度。大部分的淀粉原料加水制成乳液時(shí)其PH —般在4. 5左右，而目前雙酶法制糖工藝中使用的糖化酶的最適ρΗ也是4. 5，因此淀粉液化工藝中淀粉酶的作用溫度如果也是4. 5左右則將為淀粉制糖工藝帶來很大的方便。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明要解決的技術(shù)問題是利用基因重組技術(shù)從酸性淀粉酶產(chǎn)生菌基因組DNA 中克隆淀粉酶編碼基因并確認(rèn)其功能，從而提供一種來源于芽孢桿菌的酸性α -淀粉酶編碼基因，并且利用基因重組技術(shù)生產(chǎn)出含有該重組基因的酸性α-淀粉酶，使之用于淀粉高效加工。本發(fā)明的技術(shù)解決方案是，一種含重組基因的酸性α-淀粉酶，其特征在于該酸性α-淀粉酶包含來源于芽孢桿菌的酸性α-淀粉酶編碼基因，所述芽孢桿菌是芽孢桿菌屬細(xì)菌Bacillus sp. 089，所述酸性α -淀粉酶編碼基因是amy089，其核苷酸序列為序列表中的SEQ ID NO :1，所述酸性α-淀粉酶的氨基酸序列為序列表中的SEQ ID NO :2。進(jìn)一步地，上述酸性α -淀粉酶編碼基因amy089與克隆載體pUC18組成的重組質(zhì)粒pUC-amy089的大腸桿菌轉(zhuǎn)化子是JM109/pUC_amy089。上述含重組基因的酸性α-淀粉酶的用途是，在淀粉加工過程中用于淀粉的液化，液化時(shí)PH為4. 5，溫度為65°C。本發(fā)明的有益效果是利用本發(fā)明獲得的酸性α -淀粉酶編碼基因構(gòu)建重組微生物，可實(shí)現(xiàn)酸性α-淀粉酶的高效率生產(chǎn)，該酸性α-淀粉酶在淀粉加工過程中具有液化淀粉的功能，因此，應(yīng)用本發(fā)明技術(shù)方案能夠大幅度提高淀粉的加工效率。
具體實(shí)施例方式本發(fā)明從自然界中篩選到一株具有淀粉降解能力的芽孢桿菌，其編號(hào)為Bacillus sp. 089，利用基因工程技術(shù)從Bacillus sp. 089基因組DNA中克隆出一條α -淀粉酶編碼基因，命名為amy089，其核苷酸序列為序列表中的SEQ IDNO :1，其編碼的酸性α-淀粉酶原酶的氨基酸序列為序列表中的SEQ ID NO :2，基因amy089與克隆載體pUC18組成的重組質(zhì)粒pUC-amy089的大腸桿菌轉(zhuǎn)化子，分類命名為JM109/pUC-amy089。所述酸性α -淀粉酶已經(jīng)經(jīng)過功能鑒定證實(shí)，它在最適作用溫度為65°C、最適作用pH為4. 5環(huán)境下的性能，適合淀粉液化工藝的要求。所述酸性α -淀粉酶編碼基因amy089的獲得方法如下(1)從自然界篩選產(chǎn)酸性α -淀粉酶的芽孢桿菌從自然界采集土樣，采用高溫處理殺死營(yíng)養(yǎng)體細(xì)胞，富集芽孢桿菌，然后在以淀粉為唯一碳源的培養(yǎng)基上富集產(chǎn)淀粉酶細(xì)菌，通過搖瓶培養(yǎng)和淀粉酶酶活檢測(cè)篩選產(chǎn)淀粉酶的細(xì)菌。用16s rDNA基因序列分析確認(rèn)所篩選微生物屬于芽孢桿菌屬，此輪工作選定芽孢桿菌Bacillus sp. 089為淀粉酶基因克隆研究的出發(fā)菌。(2)Bacillus sp. 089淀粉酶基因的克隆第一步bacillus sp. 089基因組文庫的構(gòu)建提取Bacillus sp. 089基因組DNA，用核酸內(nèi)切酶EcoR I酶切所獲得的基因組 DNA，葡聚糖凝膠電泳分離酶切產(chǎn)物，回收其中2. 0 5. Okb范圍內(nèi)的DNA片段。所回收片段與經(jīng)EcoR I酶切并經(jīng)堿性磷酸酶處理的大腸桿菌克隆載體pUC18連接，連接產(chǎn)物轉(zhuǎn)化大腸桿菌JM109，在含100μ g/mL氨芐青霉素的LB平板上篩選轉(zhuǎn)化子，收集總計(jì)約10000個(gè)轉(zhuǎn)化子，合并轉(zhuǎn)化子獲得Bacillus sp. 089基因組文庫。第二步酸性α -淀粉酶基因的克隆將上述基因組文庫適當(dāng)稀釋后涂布在含有2%淀粉的LB平板上，37°C培養(yǎng)M小時(shí)，總計(jì)在100塊平板上約獲得8，000個(gè)菌落。將上述平板上已經(jīng)形成的菌落編號(hào)并點(diǎn)種到另一塊添加2%可溶性淀粉的含氨芐青霉素的LB平板上，將原平板在4°C保藏，新點(diǎn)種獲得的平板在37°C培養(yǎng)M小時(shí)，形成菌落后放入60°C水浴鍋內(nèi)，培養(yǎng)M小時(shí)。將上述平板從水浴鍋中取出后室溫放置1小時(shí)左右，將碘液傾倒在平板表面，放置5分鐘后倒掉未被吸收的碘液，將平板放入4°C冰箱中放置1小時(shí)后取出觀察，在總計(jì)約8，000個(gè)菌落中有一個(gè)菌落的周圍形成無色透明圈。根據(jù)編號(hào)在原平板上找到對(duì)應(yīng)的菌落。該菌落的編號(hào)為038-41， 該菌落的轉(zhuǎn)化子所含質(zhì)粒命名為pUC-amy089。提取038-41轉(zhuǎn)化子中所含質(zhì)粒pUC-amy089，送上海生工生物工程公司測(cè)序。結(jié)果顯示，該重組質(zhì)粒含有一 2067bp的插入片段，含有一 1416bp的完整編碼區(qū)，將編碼區(qū)基因序列提交美國(guó)國(guó)家生物技術(shù)信息中心(www. ncbi. nlm. nih. gov)用blast軟件進(jìn)行序列比對(duì)，結(jié)果顯示，該序列與解淀粉芽孢桿菌淀粉酶基因相似性最高，相似性為73%。(3)Bacillus sp. 089 α -淀粉酶基因的表達(dá)與重組酶的應(yīng)用根據(jù)SEQ ID NO :1設(shè)計(jì)一對(duì)引物以擴(kuò)增Bacillus sp. 089淀粉酶編碼區(qū)基因。以pUC-amy089染色體DNA為模板，PCR擴(kuò)增獲得一 1. 4kb左右的DNA片段，擴(kuò)增片段純化后用 EcoR I和Ml I酶切后與經(jīng)同樣酶切的大腸桿菌表達(dá)載體pEtac連接，連接物轉(zhuǎn)化大腸桿菌JM109，在含50 μ g/mL卡那霉素的LB平板上篩選轉(zhuǎn)化子。任選4個(gè)轉(zhuǎn)化子，提取質(zhì)粒后用EcoR I和Ml I酶切質(zhì)粒并電泳鑒定，結(jié)果顯示，4個(gè)質(zhì)粒酶切后均產(chǎn)生兩條帶，一條為 5. 3kb與pETac載體大小相當(dāng)，另一條為1. 4kb與PCR獲得的Bacillus sp. 089 α -淀粉酶基因相當(dāng)，可見均為P^ac與所獲淀粉酶基因的重組質(zhì)粒。重組質(zhì)粒命名為pEtac-amy。任取上述轉(zhuǎn)化子一個(gè)，劃線分離后任取一個(gè)單菌落，接種含50 μ g/mL卡那霉素的LB液體培養(yǎng)基，37°C培養(yǎng)至培養(yǎng)液渾濁度為0D600 = 0. 8時(shí)加IPTG至終濃度為0. 5mg/ mL,繼續(xù)培養(yǎng)5小時(shí)。作為對(duì)照，空質(zhì)粒pEtac的轉(zhuǎn)化子也同樣接種液體LB培養(yǎng)基并用 IPTG誘導(dǎo)表達(dá)。誘導(dǎo)后的培養(yǎng)液用超聲波破碎細(xì)胞，破碎液檢測(cè)淀粉酶酶活。結(jié)果顯示， 含pEtac-amy的轉(zhuǎn)化子破碎液有明顯淀粉酶酶活。重組酶最適pH為4. 5，最適作用溫度為 65°C。含pKac空質(zhì)粒的轉(zhuǎn)化子破碎液沒有淀粉酶酶活，可見上述克隆得到的基因確實(shí)為 α -淀粉酶編碼基因?；騛my089與克隆載體pUC18組成的重組質(zhì)粒pUC-amy089的大腸桿菌轉(zhuǎn)化子，其分類命名為JM109/pUC-amy089。α -淀粉酶編碼基因amy089能用于在不同宿主細(xì)胞中進(jìn)行異源表達(dá)，表達(dá)產(chǎn)物用于淀粉液化。α -淀粉酶最適作用溫度為65°C，最適作用pH為4. 5，性能適合淀粉液化工藝的要求。 下面通過具體實(shí)例，對(duì)本發(fā)明技術(shù)內(nèi)容作進(jìn)一步的詳細(xì)描述。(一 )產(chǎn)酸性α -淀粉酶芽孢桿菌Bacillus sp. 089的獲得從自然界篩選產(chǎn)酸性α -淀粉酶的芽孢桿菌從無錫市大浮茶場(chǎng)附近采集PH值為 4左右的酸性土樣。在實(shí)驗(yàn)室中，將上述土樣放入燒杯中，加5倍雙蒸水，混勻后在100°C保溫1小時(shí)。取少量上述混合液涂布以淀粉為唯一碳源的固體培養(yǎng)基平板，37°C培養(yǎng)三天，共獲得976個(gè)菌落，顯微鏡觀察確定其中387株為桿狀細(xì)菌。將上述桿狀細(xì)菌的菌落分別劃線分離后以單菌落接種發(fā)酵培養(yǎng)基，搖瓶培養(yǎng)2天后取上清液檢測(cè)α -淀粉酶酶活，其中3 株菌培養(yǎng)液中檢測(cè)到明顯的α-淀粉酶活性。分別進(jìn)行細(xì)菌的16s rDNA基因序列分析，其中編號(hào)為089的細(xì)菌的16s rDNA基因部分序列為SEQ ID NO :3，利用BLAST軟件將SEQ ID NO 3與美國(guó)國(guó)家生物技術(shù)信息中心(www. ncbi. nlm. nih. gov，簡(jiǎn)稱NCBI)收錄的基因序列進(jìn)行比對(duì)，結(jié)果顯示SEQ ID NO :3與Bacillus cereusSBD2_l的16s rDNA基因序列(NCBI 登錄號(hào)HQ236041. 1)最為接近，相似性為87 %。根據(jù)以上實(shí)驗(yàn)結(jié)果，089細(xì)菌應(yīng)屬于芽孢桿菌屬，命名為Bacillussp. 089。Bacillus sp. 089被用于下一步實(shí)驗(yàn)。(二)Bacillus sp. 089 α -淀粉酶基因的克隆第一步bacillus sp. 089基因組文庫的構(gòu)建提取Bacillus sp. 089基因組DNA，用核酸內(nèi)切酶EcoR I酶切所獲得的基因組 DNA，葡聚糖凝膠電泳分離酶切產(chǎn)物，回收其中2. 0 5. Okb范圍內(nèi)的DNA片段。所回收片段與經(jīng)EcoR I酶切并經(jīng)堿性磷酸酶處理的大腸桿菌克隆載體pUC18連接，連接產(chǎn)物轉(zhuǎn)化大腸桿菌JM109，在含100 μ g/mL氨芐青霉素的LB平板上篩選轉(zhuǎn)化子，在所涂布的100塊LB 平板上，共計(jì)獲得約10000個(gè)轉(zhuǎn)化子菌落。在上述每個(gè)平板上傾倒約5mL LB液體培養(yǎng)基， 用ImL移液器吸取LB液體培養(yǎng)基對(duì)準(zhǔn)平板上的菌落進(jìn)行吹洗，將菌落洗下。最后將從平板上洗下的含有重組大腸桿菌的菌液收集合并即獲得Bacillus sp. 089基因組文庫。
第二步酸性α -淀粉酶基因的克隆將上述基因組文庫適當(dāng)稀釋后涂布在含有2%淀粉的LB平板上，37°C培養(yǎng)M小時(shí)，總計(jì)在100塊平板上約獲得8，000個(gè)菌落。將上述平板上已經(jīng)形成的菌落編號(hào)并點(diǎn)種到另一塊含氨芐青霉素的LB平板上，將原平板在4°C保藏，新點(diǎn)種獲得的平板在37°C培養(yǎng) 24小時(shí)，形成菌落后放入60°C水浴鍋內(nèi)，培養(yǎng)M小時(shí)。將上述平板從水浴鍋中取出后室溫放置1小時(shí)左右，將碘液傾倒在平板表面，放置5分鐘后倒掉未被吸收的碘液，將平板放入 4°C冰箱中放置1小時(shí)后取出觀察，在總計(jì)約8，000個(gè)菌落中有一個(gè)菌落的周圍形成無色透明圈。根據(jù)編號(hào)在原平板上找到對(duì)應(yīng)的菌落。該菌落的編號(hào)為038-41，該菌落的轉(zhuǎn)化子所含質(zhì)粒命名為pUC-amy089。提取038-41轉(zhuǎn)化子中所含質(zhì)粒pUC-amy089，送上海生工生物工程公司測(cè)序。結(jié)果顯示，該重組質(zhì)粒含有一 2067bp的插入片段，含有一 1416bp的完整編碼區(qū)，將上述1416 堿基片段的核苷酸序列提交美國(guó)國(guó)家生物技術(shù)信息中心(www.ncbi.nlm.nih. gov)用 blast軟件進(jìn)行序列比對(duì)，結(jié)果顯示，該序列與Bacillus amyloliquefaciens DSM7淀粉酶基因相似性最高，為73%。上述1416bp的完整編碼區(qū)序列為SEQ ID NO :1。Bacillus amyloliquefaciens DSM7淀粉酶基因在美國(guó)國(guó)家生物技術(shù)信息中心的序列登錄號(hào)為 FN597644。(三)Bacillussp. 089 α -淀粉酶基因的表達(dá)與重組酶的應(yīng)用根據(jù)SEQ ID NO :1設(shè)計(jì)一對(duì)引物以擴(kuò)增Bacillus sp. 089淀粉酶編碼區(qū)完整基因。引物序列如下5，-AATTGAATTCATGATGCAAAAACTAAAGCG-3，(SEQ ID NO 4)5，-AATTGTCGACTTATTTGACA TAAATAGAG-3，(SEQ ID NO 5)以pUC-amy089為模板，PCR擴(kuò)增獲得一 1. 4kb左右的DNA片段，擴(kuò)增片段純化后用EcoR I和Ml I酶切后與經(jīng)同樣酶切的大腸桿菌表達(dá)載體pEtac連接，連接物轉(zhuǎn)化大腸桿菌JM109，在含50 μ g/mL卡那霉素的LB平板上篩選轉(zhuǎn)化子。任選4個(gè)轉(zhuǎn)化子，提取質(zhì)粒后用EcoR I和Ml I酶切質(zhì)粒并電泳鑒定，結(jié)果顯示，4個(gè)質(zhì)粒酶切后均產(chǎn)生兩條帶，一條為5. 3kb與pEtac載體大小相當(dāng)，另一條為1.拋與PCR獲得的Bacillus sp. 089 α -淀粉酶基因相當(dāng)，可見均為P^ac與所獲淀粉酶基因的重組質(zhì)粒。重組質(zhì)粒命名為pEtac-amy。任取上述轉(zhuǎn)化子一個(gè)，劃線分離后任取一個(gè)單菌落，接種含50 μ g/mL卡那霉素的 LB液體培養(yǎng)基，37°C培養(yǎng)至培養(yǎng)液渾濁度為OD6tltl = 0. 8時(shí)加入IPTG至終濃度為0. 5mg/mL 加入IPTG至終濃度為0. 5mg/mL,繼續(xù)培養(yǎng)5小時(shí)。作為對(duì)照，空質(zhì)粒pETac的轉(zhuǎn)化子也同樣接種液體LB培養(yǎng)基并用IPTG誘導(dǎo)表達(dá)。誘導(dǎo)后的培養(yǎng)液用超聲波破碎細(xì)胞，破碎液檢測(cè)淀粉酶酶活。結(jié)果顯示，含PEtac-amy的轉(zhuǎn)化子破碎液有明顯淀粉酶酶活。重組酶最適 PH為4. 5，最適作用溫度為65°C。含pETac空質(zhì)粒的轉(zhuǎn)化子破碎液沒有淀粉酶酶活，可見上述克隆得到的基因確實(shí)為酸性α-淀粉酶編碼基因?；騛my089與克隆載體pUC18組成的重組質(zhì)粒pUC18-amy089的大腸桿菌轉(zhuǎn)化子，其分類命名為JM109/pMD_PA。(四)基因amy089的應(yīng)用α -淀粉酶編碼基因amy089能用于在不同宿主細(xì)胞中進(jìn)行異源表達(dá)，表達(dá)產(chǎn)物用于淀粉液化。α -淀粉酶最適作用溫度為65°C，最適作用pH為4. 5，性能適合淀粉液化工藝的要求。
材料和方法普通分子生物學(xué)方法除非提及，DNA操作和轉(zhuǎn)化按照標(biāo)準(zhǔn)的分子生物學(xué)方法進(jìn)行(Sambrook等1989分子克隆實(shí)驗(yàn)手冊(cè))。除非另外提及，PCR操作使用標(biāo)準(zhǔn)方法和PCR反應(yīng)數(shù)據(jù)進(jìn)行，可參見(Sambrook等 1989分子克隆實(shí)驗(yàn)手冊(cè))。DNA操作所使用的酶根據(jù)供應(yīng)商的說明書使用。引物均為本專利發(fā)明人設(shè)計(jì)并由上海生工生物工程有限公司合成?？寺≥d體pUC18為大連寶生物工程有限公司產(chǎn)品，產(chǎn)品編號(hào)為D506A。大腸桿菌JM109，大腸桿菌表達(dá)載體pEtac(沈微，王正祥，唐雪明等.古細(xì)菌 Pyrococcus furiosus高嗜熱α -淀粉酶基因在大腸桿菌中的分泌表達(dá).中國(guó)釀造， 2003，124(1) 12-14.)均由中國(guó)高校工業(yè)微生物資源與信息中心(http//www. cicim_cu. jiangnan. edu. cn) i^i"共。DNA操作使用的酶和試劑盒除非另外提及，所有DNA操作使用的酶，例如限制性內(nèi)切酶，連接酶等均為大連寶生物工程有限公司產(chǎn)品。PCR反應(yīng)使用的DNA聚合酶為大連寶生物工程有限公司產(chǎn)品h Taq，產(chǎn)品編號(hào)為DRR006A。所有DNA操作使用的酶在反應(yīng)時(shí)所使用的緩沖液均為購買酶時(shí)附贈(zèng)，緩沖液濃度均為反應(yīng)所需濃度的10倍。柱式DNA片段回收試劑盒以及從電泳凝膠中回收DNA片段的試劑盒均為大連寶生物工程有限公司產(chǎn)品，產(chǎn)品編號(hào)分別為DV807A和 DV805A, DNA純化以及從瓊脂糖凝膠中回收DNA的方法均按上述試劑盒說明書操作。細(xì)菌基因組DNA小量提取試劑盒為上海華舜生物工程有限公司產(chǎn)品，細(xì)菌基因組DNA提取方法按上述試劑盒說明書進(jìn)行。其它試劑可溶性淀粉為浙江菱湖淀粉廠產(chǎn)品，酵母氮基為Difco公司0/0型酵母氮基，該產(chǎn)品不含碳源和氨基酸。酶活檢測(cè)用的淀粉溶液均采用IOmM的磷酸緩沖液配制，磷酸緩沖液使用雙蒸水配制，不同PH的磷酸緩沖液按文獻(xiàn)(諸葛健王正祥編著工業(yè)微生物實(shí)驗(yàn)技術(shù)手冊(cè).北京中國(guó)輕工業(yè)出版社，1994 :682 683.)介紹的方法配制。誘導(dǎo)大腸桿菌基因表達(dá)使用的IPTG為寶生物工程有限公司產(chǎn)品，產(chǎn)品編號(hào)為D9030A。培養(yǎng)基LB在“Sambrook等1989分子克隆實(shí)驗(yàn)手冊(cè)”中描述。以淀粉為唯一碳源的固體培養(yǎng)基酵母氮基lg/L，淀粉2g/L，瓊脂粉15g/L，用雙蒸水配制；搖瓶發(fā)酵培養(yǎng)基酵母氮基lg/L，淀粉2g/L，(NH3) 2S04 0. lg/L，用雙蒸水配制。搖瓶培養(yǎng)均采用500mL三角瓶，在 37°C條件下按220r/min條件在恒溫?fù)u瓶柜中進(jìn)行。碘溶液按文獻(xiàn)[姜錫瑞等.新編酶制劑實(shí)用技術(shù)手冊(cè).2002，北京輕工業(yè)出版社]中第 398頁“稀碘液”配制。細(xì)菌的16s rDNA基因序列分析按文獻(xiàn)進(jìn)行[陳源源，牛丹丹，王正祥.一種快速鑒定細(xì)菌的方法.食品與發(fā)酵工業(yè)，2007，33 (5) 29-31]
淀粉酶酶活力測(cè)定按文獻(xiàn)[姜錫瑞等.新編酶制劑實(shí)用技術(shù)手冊(cè).2002,北京輕工業(yè)出版社]介紹的方法進(jìn)行。
權(quán)利要求
1.含重組基因的酸性α-淀粉酶，其特征在于該酸性α-淀粉酶包含來源于芽孢桿菌的酸性α-淀粉酶編碼基因，所述芽孢桿菌是芽孢桿菌屬細(xì)菌Bacillus sp.089，所述酸性α-淀粉酶編碼基因是amy089，其核苷酸序列為序列表中的SEQ ID NO :1，所述酸性 α -淀粉酶的氨基酸序列為序列表中的SEQ IDNO :2。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的含重組基因的酸性α-淀粉酶，其特征在于所述酸性α-淀粉酶編碼基因amy089與克隆載體pUC18組成的重組質(zhì)粒pUC-amy089的大腸桿菌轉(zhuǎn)化子是 JM109/pUC-amy089o
3.權(quán)利要求1所述的含重組基因的酸性α-淀粉酶的用途，其特征在于所述酸性 α -淀粉酶在淀粉加工過程中用于淀粉的液化，液化時(shí)PH為4. 5，溫度為65°C。
全文摘要
本發(fā)明揭示了一種來源于芽孢桿菌屬細(xì)菌Bacillus sp.089的酸性α-淀粉酶編碼基因amy089，其核苷酸序列為序列表中的SEQ ID NO1。利用基因amy089構(gòu)建的重組微生物表達(dá)產(chǎn)生的重組酸性α-淀粉酶，其氨基酸序列為序列表中的SEQ ID NO2。利用本發(fā)明獲得的酸性α-淀粉酶編碼基因構(gòu)建重組微生物，可實(shí)現(xiàn)酸性α-淀粉酶的高效率生產(chǎn)，該酸性α-淀粉酶在淀粉加工過程中具有液化淀粉的功能。
文檔編號(hào)C12N9/28GK102477437SQ20101056395
公開日2012年5月30日 申請(qǐng)日期2010年11月30日 優(yōu)先權(quán)日2010年11月30日
發(fā)明者王正祥 申請(qǐng)人:蘇州普瑞信生物技術(shù)有限公司