專利名稱：靜態(tài)恒磁場在延長原代細胞維持時間中的應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及靜態(tài)恒磁場在延長原代細胞維持時間中的應(yīng)用，屬于細胞培養(yǎng)領(lǐng)域。
背景技術(shù)：
細胞體外培養(yǎng)是生物、醫(yī)學(xué)等多領(lǐng)域常用的研究工具，其中二倍體細胞、尤其原代 細胞的培養(yǎng)在相關(guān)領(lǐng)域中占有重要位置。目前，多數(shù)原代細胞傳代培養(yǎng)困難，甚至不能傳代 (人胚肺體外可傳代50 60代)，一般體外培養(yǎng)的原代細胞維持時間為10 20d，再久則 細胞衰老，失去應(yīng)用價值。因此，人們急需一種能夠延長細胞維持時間的方法。現(xiàn)有技術(shù)中，為了延長原代細胞存活時間，相關(guān)技術(shù)人員多采取降低培養(yǎng)溫度、降 低培養(yǎng)液中的營養(yǎng)成分(降低營養(yǎng)成分的培養(yǎng)液稱為維持液，比如含2%新生牛血清的MEM 培養(yǎng)基)等方法，未見有用靜態(tài)恒磁場延長原代細胞維持時間的報道。

發(fā)明內(nèi)容
針對上述現(xiàn)有技術(shù)，為解決體外培養(yǎng)的原代細胞維持時間短的缺陷，本發(fā)明提供 了一種解決方案，即利用磁場來延長原代細胞的維持時間，本發(fā)明的方法可使細胞維持時 間超過30d，且細胞長勢旺盛，甚至沿立壁體生長。應(yīng)用的方式為將細胞置于磁場中培養(yǎng)，磁場設(shè)置于貼近細胞的外壁上。具體為對于采用細胞培養(yǎng)板培養(yǎng)的細胞，則將磁場設(shè)置于細胞培養(yǎng)板的底部； 對于采用細胞培養(yǎng)瓶的細胞，則將磁場設(shè)置于細胞培養(yǎng)瓶的底部；對于采用轉(zhuǎn)瓶培養(yǎng)的細 胞，則將磁場設(shè)置于轉(zhuǎn)瓶外壁上(不妨礙轉(zhuǎn)動)。所述磁場為靜態(tài)恒磁場，磁力范圍為500 3000高斯。所述原代細胞為來源于包括人類的所有動物的組織細胞，比如肝細胞、腎細胞、晶 體細胞、睪丸細胞等。注意本發(fā)明的方法不適用于腫瘤細胞，因為腫瘤細胞往往表現(xiàn)為生長方式的改變。本發(fā)明采用在細胞培養(yǎng)環(huán)境中添加磁場的方式延長體外原代細胞的維持時間，可 使細胞維持時間超過30d，且細胞長勢旺盛，效果非常好。


圖1為人胚肺細胞的培養(yǎng)圖(200X)。
具體實施例方式下面結(jié)合實施例對本發(fā)明作進一步的說明。實施例1人胚肺細胞的培養(yǎng)1 原代人胚肺細胞的制備無菌條件下取胚胎肺組織，超凈臺中(局部百級)用 剪刀剪碎，加胰酶在37°C條件下消化20min，棄胰酶，加細胞培養(yǎng)液懸浮吹打，然后將懸浮液過100目紗網(wǎng)去掉組織塊，將濾液調(diào)整細胞濃度為105/ml，接種于細胞培養(yǎng)瓶中，置 37°C、5%二氧化碳、95%空氣環(huán)境中靜止培養(yǎng)，3日后長成單層，為原代人胚肺細胞。2:人胚肺細胞的傳代將已經(jīng)長成單層的人胚肺細胞用平衡鹽水洗3次，去掉未貼壁細胞和組織塊，加 0.125%胰酶在室溫條件下消化3min，棄胰酶，加細胞培養(yǎng)液吹打懸浮，然后以1 2比例分 瓶傳代，置37°C、5% 二氧化碳、95%空氣環(huán)境中靜止培養(yǎng)，3日后長成單層，為次代人胚肺 細胞。3:人胚肺細胞的維持將已經(jīng)長成單層的次代人胚肺細胞(4瓶)棄培養(yǎng)液，加含2%新生牛血清的MEM 加以維持，2瓶置入37°C、5%二氧化碳、95%空氣的靜態(tài)磁場(800高斯)的環(huán)境中靜止培 養(yǎng)，同時2瓶置無磁環(huán)境作為對照組(余條件相同)，20d時觀察細胞狀況(中間未更換或添 加新的培養(yǎng)液)，發(fā)現(xiàn)所有細胞培養(yǎng)液已變?yōu)闄幟庶S色，表明細胞處于酸性環(huán)境，對照組2 瓶細胞變得稀疏、脹大，出現(xiàn)遮光性顆粒，而磁場中2瓶細胞形態(tài)良好，繼續(xù)維持培養(yǎng)至35d 時終止試驗，觀察培養(yǎng)液呈黃色(PH呈酸性)，顯微鏡下觀察細胞呈纖維狀，平鋪排列呈致 密單層，未見明顯遮光性顆粒，無脫落，見圖1。表明靜態(tài)磁場環(huán)境延長了細胞存活時間。
權(quán)利要求
靜態(tài)恒磁場在延長原代細胞維持時間中的應(yīng)用。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的應(yīng)用，其特征在于，應(yīng)用方式為將細胞置于磁場中培養(yǎng)，磁 場設(shè)置于貼近細胞的外壁上。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的應(yīng)用，其特征在于對于采用細胞培養(yǎng)板培養(yǎng)的細胞，則將磁 場設(shè)置于細胞培養(yǎng)板的底部；對于采用細胞培養(yǎng)瓶的細胞，則將磁場設(shè)置于細胞培養(yǎng)瓶的 底部；對于采用轉(zhuǎn)瓶培養(yǎng)的細胞，則將磁場設(shè)置于轉(zhuǎn)瓶外壁上。
4.根據(jù)權(quán)利要求1或2或3所述的應(yīng)用，其特征在于所述磁場為永久磁場，磁力強度 為500 3000高斯。
5.根據(jù)權(quán)利要求1或2或3所述的應(yīng)用，其特征在于所述原代細胞為貼壁二倍體細胞。
6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的應(yīng)用，其特征在于所述原代細胞為人胚肺細胞。
全文摘要
本發(fā)明公開了靜態(tài)恒磁場在延長原代細胞維持時間中的應(yīng)用，應(yīng)用的方式為將細胞置于磁場中培養(yǎng)，磁場設(shè)置于貼近細胞的外壁上。具體為對于采用細胞培養(yǎng)板培養(yǎng)的細胞，則將磁場設(shè)置于細胞培養(yǎng)板的底部；對于采用細胞培養(yǎng)瓶的細胞，則將磁場設(shè)置于細胞培養(yǎng)瓶的底部；對于采用轉(zhuǎn)瓶培養(yǎng)的細胞，則將磁場設(shè)置于轉(zhuǎn)瓶外壁上。所述磁場為靜態(tài)恒磁場，磁力范圍為500～3000高斯。所述原代細胞為來源于包括人類的所有動物的組織細胞，比如肝細胞、腎細胞、晶體細胞、睪丸細胞等。本發(fā)明采用在細胞培養(yǎng)環(huán)境中添加磁場的方式延長體外原代細胞的維持時間，可使細胞維持時間超過30d，且細胞長勢旺盛，效果非常好。
文檔編號C12N13/00GK101892219SQ201010226998
公開日2010年11月24日 申請日期2010年7月15日 優(yōu)先權(quán)日2010年7月15日
發(fā)明者孟紅, 張子毅 申請人:孟紅;張子毅