專利名稱：小麥漸滲系抗非生物脅迫基因Tamyb31及其應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于生物基因工程技術(shù)領(lǐng)域，尤其涉及抗非生物脅迫基因Tamyb31及其應(yīng)用。
背景技術(shù)：
據(jù)有關(guān)部門預(yù)計(jì)，2010年世界人口將達(dá)到70億，2039年將超過100億。與此相 反，世界上可供耕種土地則以每年38610方哩的速度減少。鹽漬化是土地退化的一個(gè)重要 原因。據(jù)統(tǒng)計(jì)，中國(guó)約有10%的耕地存在不同程度的鹽漬化，其中大部分是由自然條件引發(fā) 的，如長(zhǎng)時(shí)間風(fēng)化的巖石中Na+、Mg2+等鹽離子的積累，降雨帶來(lái)的鹽分等。干旱也是土地退 化的重要因素。干旱、半干旱區(qū)占全球陸地面積的33%，而我國(guó)則更為嚴(yán)重，已占全國(guó)陸地 面積的38%，達(dá)5. 7億畝。除了傳統(tǒng)育種方法外，利用基因工程和細(xì)胞工程等新技術(shù)可以快速穩(wěn)定地獲得具 有優(yōu)良抗鹽/旱能力的作物新品種。利用轉(zhuǎn)基因技術(shù)將新的抗鹽/旱功能基因轉(zhuǎn)入到作物 中，以此高效開發(fā)抗逆轉(zhuǎn)基因作物新品種，用于在鹽漬/干旱地區(qū)種植是一項(xiàng)具有廣闊應(yīng) 用前景的技術(shù)。其前提是，必須較系統(tǒng)地了解植物抗逆機(jī)制，分離高效的與抗逆旱相關(guān)的基 因。多年來(lái)，有關(guān)植物抗逆機(jī)制方面的研究已取得了較大的進(jìn)展，克隆了分生物脅迫 相關(guān)基因，為進(jìn)一步闡明植物抗逆的分子機(jī)制提供了理論線索和依據(jù)。一些實(shí)驗(yàn)表明，將植 物本身以及其他生物中與抗旱相關(guān)的基因轉(zhuǎn)入植物中，其異源轉(zhuǎn)錄和翻譯產(chǎn)物可以使轉(zhuǎn)基 因植物的抗旱能力發(fā)生改變。用于轉(zhuǎn)化的功能基因包括兩類一類基因轉(zhuǎn)化后可以直接提 高植物的抗逆能力，這可以通過被轉(zhuǎn)基因的過量表達(dá)或誘導(dǎo)型表達(dá)提高植物的抗逆能力； 另一類是通過抑制或誘導(dǎo)型抑制植株本身的組成型表達(dá)提高植物的抗逆能力。MYB蛋白是一類非常重要的轉(zhuǎn)錄因子，參與植物對(duì)多種非生物脅迫的響應(yīng)過程。近 年來(lái)已有試驗(yàn)表明，擬南芥中的MYB基因可以提高擬南芥的抗逆能力，但有關(guān)小麥MYB基因 在植物抗旱過程中的作用尚未見報(bào)道。

發(fā)明內(nèi)容
針對(duì)現(xiàn)有技術(shù)的不足，本發(fā)明的目的是提供一種抗逆基因——小麥漸滲系抗非生 物脅迫基因Tamyb31及其應(yīng)用。本發(fā)明的技術(shù)方案在于從小麥體細(xì)胞雜種漸滲系山融3號(hào)中分離得到了小麥MYB 等位變異基因——Tamyb31，并構(gòu)建雙子葉植物表達(dá)載體pSTART/Tamyb31轉(zhuǎn)化模式植物擬 南芥，以鑒定基因的功能并最終將該基因用于小麥等重要農(nóng)作物的轉(zhuǎn)化，提高農(nóng)作物的抗 逆性。本發(fā)明提供的小麥漸滲系抗逆基因名稱為小麥體細(xì)胞雜種漸滲系山融3號(hào)MYB基 因Tamyb31，所述基因cDNA的核苷酸序列如SEQ ID No. 1所示。本發(fā)明還提供了含上述抗逆基因Tamybl的植物表達(dá)載體pCAMBIA3301/Tamyb31。
本發(fā)明所述基因Tamyb31及含所述基因Tamybl的植物表達(dá)載體 PCAMBIA3301 (pSTART) /Tamybl在培育抗逆植物中的應(yīng)用。其中所述植物優(yōu)選是普通小麥或 擬南芥。將本發(fā)明所述基因?qū)胫参锛?xì)胞，使其在植物中過量表達(dá)就可以使轉(zhuǎn)基因植物獲 得抗逆能力。為了便于對(duì)轉(zhuǎn)基因植物或細(xì)胞系進(jìn)行篩選，可以對(duì)含有所述基因Tamyb31的 植物表達(dá)載體pSTART/Tamyb31進(jìn)行加工，如可以加入選擇標(biāo)記(⑶S等)或者具有抗性的 抗生素標(biāo)記物(潮霉素，卡那霉素，慶大霉素等)等。 本發(fā)明所述的基因可廣泛用于培育抗逆農(nóng)作物新品種，并可為深入闡明植物抗逆 機(jī)制提供理論依據(jù)。本發(fā)明的有益效果利用現(xiàn)有的植物基因工程技術(shù)，本發(fā)明首次克隆得到了小麥 漸滲系山融3號(hào)抗非生物脅迫新基因Tamyb31，并通過根瘤農(nóng)桿菌介導(dǎo)的方法將該基因轉(zhuǎn) 入擬南芥，經(jīng)過比較分析證明，轉(zhuǎn)基因植株的抗逆能力明顯增強(qiáng)。據(jù)此可通過過表達(dá)策略開 發(fā)和培育抗逆作物新品種。


圖lTamyb31基因全長(zhǎng)cDNA序列的擴(kuò)增結(jié)果其中Maker:DNA 分子量標(biāo)準(zhǔn)，λ DNA/EcoRI+HindIII (下同)。圖2Tamyb31在多種處理下山融3號(hào)中的半定量RT-PCR分析，不同發(fā)育時(shí)期 RT-PCR 分析。圖3Tamyb31轉(zhuǎn)基因擬南芥植株qPCR及southern鑒定。其中VC:空載體對(duì)照(下同)，3-21、4-21、6_10為1^11^31過表達(dá)系(下同)。圖4Tamyb31轉(zhuǎn)基因擬南芥植株在各種脅迫下種子的萌發(fā)率。圖5Tamyb31轉(zhuǎn)基因擬南芥植株在鹽/旱脅迫下表型。圖6Tamyb31轉(zhuǎn)基因擬南芥植株在LiCl/KCl/Mannitol脅迫下表型圖7Tamyb31轉(zhuǎn)基因擬南芥植株中脅迫標(biāo)記基因的qPCR結(jié)果。圖8Tamyb31轉(zhuǎn)基因小麥植株及檢測(cè)。圖 9PCAMBIA33Ol-Ubi 載體圖。
具體實(shí)施例方式實(shí)施例1、Tamyb31的克隆1.1山融3號(hào)RNA提取(1)將PEG滲透脅迫處理的組織材料放入液氮預(yù)冷的研缽中，在液氮中充分研磨 成粉末；(2)待液氮揮發(fā)干，立即轉(zhuǎn)移到2ml的離心管中，每IOOmg材料約加入Iml Trizol 提取液，劇烈振蕩使樣品充分裂解，室溫放置5分鐘；(3) 4"C，12000rpm 離心 15 分鐘；(4)用移液器小心將上層水相轉(zhuǎn)移至一個(gè)新的1. 5ml的離心管中，加入200 μ 1氯 仿(chloroform)，劇烈振蕩混勻15秒，室溫放置10分鐘； 醇(1 1體積)，充分混勻，-20 0C，沉淀30min或過夜；
(5) 4°C，12000rpm 離心 15 分鐘；(6)用移液器小心將上層水相轉(zhuǎn)移至一個(gè)新的1. 5ml的離心管中，加入500 μ 1的 異丙醇(1 1體積)，充分混勻，-20°C，沉淀30min或過夜；(7) 40C，12000rpm 離心 lOmin，小心棄去上清液；
(8) RNA沉淀用Iml的75%乙醇洗滌。4°C，8000rpm離心IOmin收集沉淀；(9)重復(fù)用75 %乙醇洗滌一次RNA沉淀；(10)去上清，RNA沉淀于無(wú)菌操作臺(tái)上晾干約10_15分鐘，RNA略顯透明，加入適 當(dāng)體積(30-50 μ 1)的RNase-free水充分溶解(可放于_80°C長(zhǎng)期保存)；(11)紫外分光光度計(jì)及1 % Agrose凝膠電泳檢測(cè)RNA濃度及質(zhì)量。注a)用紫外分光光度計(jì)檢測(cè)RNA的產(chǎn)量，在260nm處的吸光度，IOD = 40ug/ ml。根據(jù)在260nm和280nm處的吸光值，檢測(cè)RNA的純度，純RNA的0D26(1/0D28(1比值應(yīng)接近 2. O (比值最好在1. 9 2. 1之間)。b)用1 % Agrose凝膠電泳檢側(cè)RNA的質(zhì)量及大小。吸取Iul RNA力卩入3 μ 1的 RNase-free水，力卩1 μ 1上樣緩沖液65°C變性5分鐘。電泳后用EB染色，另取3μ 1的 IkbDNAMarker 作為對(duì)照。1.2cDNA 3'和5'末端第一鏈的快速擴(kuò)增5，和 3，RACE 第一鏈 cDNA 末端快速擴(kuò)增(Rapid Amplification of cDNAEnds, RACE)按 Clonetech 公司的 SMART RACE cDNA Amplification Kit 操作指南進(jìn)行。1.3 Tamyb315'和3’端克隆(1)根據(jù)基因芯片的檢測(cè)結(jié)果，獲得Tamybl的部分序列并按照SMART RACE cDNAAmplification Kit操作指南設(shè)計(jì)兩對(duì)基因特異引物(序列如下)Tamyb31-NT3 5‘ GAACCTCCACTGAGAAACATTACC3‘Tamyb31-NT7 5 ‘ GTTCCAATCTATGAGGGATACACGC3 ‘弓丨物序列Tamyb31-As 5' GATCAAGAACGTCTGGCACA 3，Tamyb31-S :5，GAGGCCATCGAGTAGTCAGC 3，；(2)按照 SMART RACE cDNAAmplification Kit 操作指南分別擴(kuò)增 Tamyb31 的 5， 和3’末端；(3)將5’和3’端序列拼接，分別在起始密碼上游和終止密碼下游設(shè)計(jì)引物(序列 如下)，以5’或3’ RACE產(chǎn)物為模板擴(kuò)增該基因全長(zhǎng)。引物 1 :ATGGTGAGGGCTCCTTGCTGC
引物 2 TTAAATCTGTGACAAACTCTGCA1. 4Tamybl 全長(zhǎng)克隆1.引物序列見1.3部分。2. PCR 反應(yīng)體系(20 μ L)IOXbuffer2μ 1模板(5，RACE產(chǎn)物)1 μ 1dNTPs (2. OmM each)0. 5 μ 1Primerl (5 μ Μ)1 μ 1Primer2 (5 μ Μ)1 μ 1
高保真Taq 酶(STRATAGEN，Cat No 600380) 0. 5 μ 1ddH2014 μ 13. PCR 反應(yīng)程序?yàn)?4°C預(yù)變性 5min ；94°C變性 45sec，57. 5°C復(fù)性 45sec，72°C延 伸45sec，循環(huán)35次；72°C延伸7min。4.擴(kuò)增片段的回收后與T載體連接、轉(zhuǎn)化大腸桿菌、選取陽(yáng)性克隆測(cè)序。結(jié)果見圖
Io實(shí)施例2、Tamyb31的表達(dá)分析2. 1脅迫下RNA的提取山融3號(hào)種子正常萌發(fā)，Hoagland培養(yǎng)液培養(yǎng)至株高約IOcm時(shí)(約3周時(shí)間) 開始進(jìn)行干旱控水、鹽脅迫(200mM NaCl)、ABA、GA、ACC, JA和SA處理。處理不同時(shí)間后， Trizol法提取幼苗根、葉RNA同上。2. 2逆轉(zhuǎn)錄獲得cDNA逆轉(zhuǎn)錄產(chǎn)生cDNA，按說明書操作。2.3PCR反應(yīng)及電泳(1)以cDNA為模板，進(jìn)行PCR反應(yīng)。引物如下5'端引物GATCAAGAACGTCTGGCACA3'端引物GAGGCCATCGAGTAGTCAGC(2) PCR 體系ddH2012. 6μ 1IOXTaq buff err (Mg2+free)2μ 1MgCl2(25mM)1. 2μ 1Primerl (5 μ Μ)1 μ 1Primer2 (5 μ Μ)1 μ 1dNTP (2mM each)1 μ 1Taq polymerase (5U/ μ 1)0. 2 μ 1模板(逆轉(zhuǎn)錄cDNA)1μ 1ToTal Volume20 μ 1(3) PCR 程序95°C 3min，25 30cycles 95°C 30s,60°C 30s, 72°C 60s ；72°C 5min。根據(jù)內(nèi)參Actin的擴(kuò)增情況確定PCR的循環(huán)數(shù)，調(diào)整cDNA模板的加入量。(4) 1.5%瓊脂糖凝膠電泳。結(jié)果見圖2。實(shí)施例3、植物表達(dá)載體的構(gòu)建(35S啟動(dòng)子)植物表達(dá)載體pStart是含有35S啟動(dòng)子和NPT II基因的雙元載體，在其多克隆位點(diǎn)上含有限制性內(nèi)切酶BamHI和SmaI的識(shí)別位點(diǎn)。據(jù)此在目的基因起始密碼上游和終 止密碼下游設(shè)計(jì)含BamHI和SmaI識(shí)別序列的引物，用高保真Taq酶擴(kuò)增目的基因，體系同 1. 4。用限制性內(nèi)切酶BamHI和SmaI對(duì)載體pStart和目的基因擴(kuò)增產(chǎn)物片斷分別進(jìn)行 酶切。完全酶切的載體在0.8%瓊脂糖凝膠上電泳分離后，經(jīng)膠回收，然后與酶切的目的基 因擴(kuò)增片段相連。
酶切體系，(1)質(zhì)粒BamHI單酶切IOXBuffer1 μ 1質(zhì)粒1 2 μ 1BamHI1 μ 1SmaI1 μ 1加ddH20至總體積20 μ 1 于37°C恒溫水浴鍋酶切2小時(shí)以上。酶切后以0. 5XTBE為電泳緩沖液，將酶切產(chǎn) 物進(jìn)行0. 8%瓊脂糖凝膠電泳。在紫外透射儀下用潔凈刀片切下pStart大片段和目的基因 條帶，回收。(2)回收的載體大片段的脫磷。(3)經(jīng)酶切的載體片段和目的基因片段以摩爾比1 4的比例進(jìn)行16°C連接過 夜。(4)連接產(chǎn)物熱激法轉(zhuǎn)化大腸桿菌DH5a感受態(tài)細(xì)胞，轉(zhuǎn)化菌在含Kan 50 μ g/ml的 LB固體平板上37°C培養(yǎng)16小時(shí)左右。(5)重組子的鑒定①載體特異引物的合成為了鑒定目的基因的插入方向，根據(jù)35S啟動(dòng)子序列設(shè)計(jì)一個(gè)載體特異引物，序 列如下:GTT GGG GTT TCTACA GGA CGT②重組質(zhì)粒的PCR驗(yàn)證挑取在kan培養(yǎng)基上的抗性單菌落分別接種于5ml含Kan的LB液體培養(yǎng)基中 37°C振蕩培養(yǎng)過夜，堿變性法提取質(zhì)粒，用載體特異引物和基因的下游引物進(jìn)行PCR擴(kuò)增， 體系同2. 3。PCR反應(yīng)條件如下預(yù)變性940C 3min，35個(gè)循環(huán)為-MV 30sec，55°C 30sec, 72°C lmin，最后，72°C延伸lOmin。PCR產(chǎn)物用1. 0%瓊脂糖凝膠電泳鑒定。③質(zhì)粒酶切鑒定提質(zhì)粒進(jìn)行BamHI和SmaI酶切，酶切體系同上。0. 8%瓊脂糖凝膠電泳，檢測(cè)是否 含有預(yù)期分子量大小的片段，驗(yàn)證載體的正確構(gòu)建。實(shí)施例4、農(nóng)桿菌感受態(tài)的制備與轉(zhuǎn)化4. 1農(nóng)桿菌AGL1/EHA105感受態(tài)的制備(1)從YEP平板(含50 μ g/ml利福平)上挑取根癌農(nóng)桿菌單菌落，接種于含 50 μ g/ml利福平的YEP液體培養(yǎng)基中，200rpm/min，28 °C培養(yǎng)過夜。(2)取2ml過夜培養(yǎng)液接種于50ml含相同抗生素的YEP液體培養(yǎng)基中在相同條件 下培養(yǎng)至OD6c 達(dá)0.5。(3)菌液冰浴 30min，4°C，5000rpm 離心 lOmin，收集菌體。(4)將菌體重懸于冰浴的IOml 0. 15mol/L的NaCl中，離心收集菌體。(5)再懸浮于Iml 20mmol/L冰預(yù)冷的CaC12溶液中，以200 μ 1/管將菌液分裝在 1. 5mlEppendorf管中，置液氮中速凍lmin，_70°C保存?zhèn)溆谩?. 2凍融法轉(zhuǎn)化根癌農(nóng)桿菌AGL1/EHA105(1)在室溫下融化兩管農(nóng)桿菌感受態(tài)細(xì)胞，分別加入Iyg表達(dá)載體質(zhì)粒DNA和1 μ g空載體，混勻后冰浴30min。(2)置液氮速凍Imin，迅速移至37°C溫浴3min。(3)加入無(wú)抗生素的YEP 800 μ 1，28°C震蕩培養(yǎng)3hr。(4) 7000rpm離心30s收集菌體，涂于含50 μ g/ml利福平、50 μ g/ml Kan的YEP平 板上，28°C倒置暗培養(yǎng)2-3天。4. 3菌體PCR鑒定菌體PCR方法及程序同上。 實(shí)施例5、擬南芥轉(zhuǎn)化及篩選5.1擬南芥種植取擬南芥(哥倫比亞野生型)種子，置于墊有濾紙的平皿內(nèi)，用少量蒸餾水潤(rùn)濕濾 紙，于4°C冰箱進(jìn)行春化處理，3-5天后播種于育苗盤內(nèi)，放置于人工氣候箱內(nèi)(16h光照， 220C /8h黑暗，18°C )，生長(zhǎng)6-8周后，待抽苔開花時(shí)用于轉(zhuǎn)化。5. 2擬南芥轉(zhuǎn)化(1)轉(zhuǎn)化前一天，取2ml活化的農(nóng)桿菌AGL 1加到含相應(yīng)抗生素的200ml YEP培養(yǎng) 基中，過夜培養(yǎng)至OD6tltl = 1.0-1.2。(2)離心收集菌體，并重懸于浸染液(5%蔗糖，0.04% Silwet L-77)中，使OD6tltl = 0. g。(3)將花序浸入浸染液30秒，其間前后擺動(dòng)花序，使花序上形成一層膜。(4)用保鮮膜覆蓋花序，暗培養(yǎng)一天后揭去保鮮膜，繼續(xù)置人工氣候箱使其生長(zhǎng)。(5)隔5-7天再用相同的方法浸染一次。(6)大約一個(gè)月后收獲種子。(7)空載體的轉(zhuǎn)化同上5. 3擬南芥轉(zhuǎn)化陽(yáng)性株系篩選(1)收獲的TO代種子消毒后(75%乙醇5min，清潔劑洗滌10-15min，無(wú)菌水沖洗 3-5次)，鋪于含50 μ g/mL Kan的MS篩選培養(yǎng)基上。(2)4°C春化48h，移到培養(yǎng)室(16h光照/8h黑暗，22°C恒溫)生長(zhǎng)7_10天。將抗 性綠色小苗移到土中繼續(xù)生長(zhǎng)。(3)等植物絕大多數(shù)花苞已經(jīng)結(jié)莢時(shí)，用小繩將植物單株綁起，以便單株收獲Tl 代種子。(4)重復(fù)步驟(1)_(3)，將單株收獲的Tl代種子繼續(xù)在含卡那的MS培養(yǎng)基上進(jìn)行 篩選，挑選抗性比為3 1的單插入獨(dú)立株系移栽，并單株收獲種子得到T2，繼續(xù)重復(fù)步驟 (1)_(3)，直至T2代單株種子在卡那抗性培養(yǎng)基上不再分離，至此得到純合的T2代植株用 于后續(xù)的進(jìn)一步研究。空載體純合體的篩選方法同上。(5)CTAB法提取野生型、空載體對(duì)照及不同轉(zhuǎn)基因株系的基因組DNA，提取相應(yīng)材 料的總RNA并逆轉(zhuǎn)錄合成cDNA。(6)PCR擴(kuò)增以上述不同材料的基因組DNA為模板，使用基因特異引物、空載體檢 測(cè)特異引物(35S啟動(dòng)子序列)，PCR反應(yīng)體系和反應(yīng)條件如前。(7)qPCR及Southern驗(yàn)證表明，Tamyb31在轉(zhuǎn)化植株中正常表達(dá)。結(jié)果見圖3。實(shí)施例6、轉(zhuǎn)Tamybl擬南芥脅迫抗性分析
6. 1萌發(fā)率測(cè)定將空載體對(duì)照、三個(gè)株系的轉(zhuǎn)Tamyb31擬南芥種子經(jīng)消毒(方法同上)后，鋪入含 有NaCl,ABA的MS培養(yǎng)基中，25°C培養(yǎng)，觀察萌發(fā)情況，子葉完全張開為萌發(fā)，萌發(fā)率的=子 葉展開的種子數(shù)/用于萌發(fā)試驗(yàn)的種子總數(shù)X 100%。結(jié)果見圖4。6. 2植株脅迫抗性分析(1)擬南芥種子消毒、萌發(fā)(方法同上)；(2)將萌發(fā)2天的幼苗轉(zhuǎn)移至含Mannitol、NaCl、KCl和LiCl的MS培養(yǎng)基中垂直 培養(yǎng)，觀察幼苗生長(zhǎng)差異。結(jié)果見圖5、6。(3)將土培3周左右的轉(zhuǎn)基因植株及對(duì)照控水10天再澆水使其恢復(fù)生長(zhǎng)3天，觀 察植株抗旱狀況。結(jié)果見圖5。6. 3轉(zhuǎn)Tamyb31擬南芥幼苗中抗旱相關(guān)Marker基因分析(1)擬南芥種子消毒、萌發(fā)、培養(yǎng)(方法同上)；(2)經(jīng)旱、ABA處理后的對(duì)照及轉(zhuǎn)基因株系，提取植株總RNA，逆轉(zhuǎn)錄形成cDNA，進(jìn) 行RT-PCR分析。方法同實(shí)施例2，結(jié)果見圖7。實(shí)施例7、轉(zhuǎn)Tamyb31小麥植株及檢測(cè)7. lTaMYB31-pCAMBIA3301 載體構(gòu)建TaMYB31-0RF 用 TaMYB31-CDS-3301_S(Sacl)和 TaMYB31-CDS-3301_As(BamHl)擴(kuò) 增后，連入pCAMBIA3301-ubi載體的Sacl和BamHl位點(diǎn)。轉(zhuǎn)化子通過測(cè)序鑒定。pCAMBIA3301_ubi 載體圖如圖 9。7. 2小麥轉(zhuǎn)化 將構(gòu)建好的載體轉(zhuǎn)入農(nóng)桿菌EHA105同實(shí)施例4。采用本實(shí)驗(yàn)室建立的生長(zhǎng)點(diǎn)轉(zhuǎn)化 小麥的專利方法轉(zhuǎn)化了小麥栽培品種濟(jì)麥21和濟(jì)南17。轉(zhuǎn)化幼苗在農(nóng)桿侵染后壯苗恢復(fù) 生長(zhǎng)1周，移栽至紙杯中，利用PCR鑒定陽(yáng)性植株，結(jié)果見圖8。
權(quán)利要求
一種小麥漸滲系抗非生物脅迫基因Tamyb31，其特征在于所述基因cDNA的核酸序列如SEQ ID No.1所示。
2.一種含有權(quán)利要求1所述基因Tamyb31的植物表達(dá)載體pSTART/Tamyb31。
3.權(quán)利要求1所述基因Tamyb31在培育抗非生物脅迫植物中的應(yīng)用。
4.權(quán)利要求2所述植物表達(dá)載體pSTART/Tamyb31在培育抗非生物脅迫植物中的應(yīng)用。
5.如權(quán)利要求3或4所述的應(yīng)用，其特征在于所述植物是普通小麥或擬南芥。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種小麥漸滲系抗非生物脅迫(鹽、旱等)新基因Tamyb31及含有所述基因Tamyb31的植物表達(dá)載體pStart/Tamyb31；本發(fā)明還公開了所述基因Tamyb31及含有所述基因Tamyb31的植物表達(dá)載體在培育抗非生物脅迫(鹽、旱等)中的應(yīng)用。實(shí)驗(yàn)證明，本發(fā)明所述過表達(dá)轉(zhuǎn)基因植株的抗非生物脅迫(鹽、旱等)能力明顯提高。
文檔編號(hào)C12N15/29GK101864430SQ20101020779
公開日2010年10月20日 申請(qǐng)日期2010年6月24日 優(yōu)先權(quán)日2010年6月24日
發(fā)明者呂建, 夏光敏 申請(qǐng)人:山東大學(xué)