專利名稱：：用于浸提可可矢車菊苷配質(zhì)的改進(jìn)方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明涉及用于從可可固體浸提可可多酚的改進(jìn)方法，可可多酚包括兒茶素、表兒茶素和可可矢車菊苷配質(zhì)低聚物。已知經(jīng)常服用食用多酚是有益的，這些多酚在多種水果和蔬菜中很常見。紅酒、綠茶和可可全都經(jīng)過(guò)驗(yàn)證富含多酚，而且在工業(yè)化國(guó)家中已經(jīng)發(fā)現(xiàn)，經(jīng)常飲用紅酒和綠茶均與心臟病死亡成負(fù)相關(guān)。
背景技術(shù)：
：眾所周知的是，可可多酚對(duì)于發(fā)酵和焙烤過(guò)的可可豆中產(chǎn)生香味發(fā)揮著顯著的作用。傳統(tǒng)上可可中的苦澀味是由于可可豆中存在著黃嘌呤生物堿和多酚。因此，多年以來(lái)已經(jīng)開發(fā)出了各種方法來(lái)浸提可可多酚，以證實(shí)其存在、定制其含量并且鑒別之?？煽啥喾又饕强煽墒杠嚲哲张滟|(zhì)。但是，迄今為止尚沒(méi)有優(yōu)化出任何浸提方法來(lái)獲得高可可矢車菊苷配質(zhì)含量的浸提物。目前已知可可矢車菊苷配質(zhì)低聚物在結(jié)構(gòu)和功能之間表現(xiàn)出明確的關(guān)系，就是說(shuō)各個(gè)低聚物，或者含有尺寸類似的各種低聚物的級(jí)分，表現(xiàn)出特定的不受其他低聚物影響的生物功能。因此，重要的是確保所采用的浸提方法不僅能最大可能地增溶可可多酚，而且要能有效地浸提出可可豆中所有存在的可可多酚低聚物。利用水或有機(jī)溶劑，或者水與有機(jī)溶劑的混合物來(lái)浸提可可豆，可以除去黃嘌呤生物堿(主要是咖啡因和可可堿)以及其他產(chǎn)生令人不快的苦味的可溶性可可豆成分。在這些苦味的可溶性成分中包括矢車菊苷配質(zhì)。美國(guó)專利1，750,795(1926年授予Defren)公開了通過(guò)將可可豆浸泡在60°C水中然后丟棄水并焙烤可可豆來(lái)除去“大部分可溶性可可豆苦味成分”的方法。已經(jīng)采用熱水處理法來(lái)除去黃嘌呤以提供無(wú)刺激性的可可豆。參見美國(guó)專利4，407，834“可可脫可可堿的方法”(1983年6月28日授權(quán)給Chiovini等人)和美國(guó)專利4，755，391“從可可物質(zhì)中除去甲基黃嘌呤的方法”(1988年7月5日授權(quán)給Chiovini等人)。可可浸提物可以通過(guò)以水和/或醇浸提可可固體來(lái)進(jìn)行制備，該可可固體是由發(fā)酵過(guò)、傳統(tǒng)焙烤過(guò)的可可豆或可可粒制造的。Osakabe等人采用了無(wú)水或者去離子水大于40%ν/ν的含水乙醇在室溫下制備了粗多酚浸提物。參見日本專利94-64717“預(yù)防胃潰瘍用的食品或飲品”(1995年10月4日)。Zieglader等人采用甲醇在室溫下從可可豆中浸提多酚。參見“可可的抗氧化作用”(Rev.Choc.Confect.Bak,8:3_6，1983)，其公開了甲醇浸提物的制備。該浸提物含有“單體單寧母體(兒茶素、花色素和其可溶性縮合物)”。其可用作保存油以防止其氧化的添加齊IJ。Griffiths等人采用了也是在室溫下獲得的甲醇浸提物從成熟的可可粒獲得多酚浸提物，該浸提物可用于研究可可和其他植物中植物性多酚的特性。參見“可可屬種子多酚的對(duì)比性研究”，(BiochemicalJ.74=362-365,1960)。Rigaud等人從凍干的可可豆和葡萄籽制造浸提物，并且指出使用甲醇作為溶劑排除了高級(jí)低聚物的存在。參見“從可可豆和葡萄籽用正相高效液相色譜法分離矢車菊苷配質(zhì)”(J.Chromatography654=255-60,1993)。Jalal和Collin從可可植物的不同部位制備浸提物以分析在該植物每個(gè)部位中存在的多酚。浸提采用70%的冷甲醇進(jìn)行，然后是乙酸乙酯。參見“可可成熟植株、秧苗和組織培養(yǎng)物的多酚”(Phytochemistry,161377-1380，1977)。丙酮/水也已經(jīng)用于浸提可可豆。Clapperton等人報(bào)道了采用冷的70%丙酮來(lái)浸提從發(fā)酵過(guò)的可可豆制造的脫脂可可粉。參見“多酚和可可香精，Groupe多酚”(第XVI屆Intern.Conf.，Lisbon,Portugal，7月13-16日，1992年)。Rigaud合并了乙醇第一浸提物與采用60%丙酮/水混合物的第二浸提物。參見“從可可豆和葡萄籽用正相高效液相色譜法分離矢車菊苷配質(zhì)”(J.Chromatography,654=255-60,1993)。傳統(tǒng)上，處理和加工可可豆的目的是最大限度降低多酚給可可豆帶來(lái)的苦味，結(jié)果是降低了可可豆中多酚的含量。顯著降低多酚含量的兩種方式是，可可豆的帶殼發(fā)酵以及焙烤發(fā)酵過(guò)的可可豆以破殼并且輔助脫殼過(guò)程。Zieglader等人報(bào)道了由發(fā)酵過(guò)的可可豆制造的浸提物與由未發(fā)酵的可可豆制造的浸提物相比其抗氧化活性有所損失，并且認(rèn)為抗氧化能力的下降與發(fā)酵過(guò)的可可豆浸提物中多酚含量降低相關(guān)。所有前述浸提方法都采用發(fā)酵過(guò)的可可豆來(lái)進(jìn)行，并且在許多情況下也對(duì)可可豆進(jìn)行焙烤。因此，矢車菊苷配質(zhì)的產(chǎn)率比未發(fā)酵可可豆浸提物中所發(fā)現(xiàn)的要低得多。在最初的溶劑浸提步驟之后進(jìn)行乙酸乙酯浸提步驟，已經(jīng)成為慣例。參見Forsyth和Roberts，“可可多酚物質(zhì)3.可可無(wú)色花青素的結(jié)構(gòu)”，Biochem.J.74，374-378，1960；Thompson等人，“植物性矢車菊苷配質(zhì)。第I部分，前言；自然界中植物性矢車菊苷配質(zhì)的分離、結(jié)構(gòu)以及分布”，J.Chem.Soc.PerkinI，卷11，1387-99，1972Jalal和Collins,“可可成株、秧苗以及培養(yǎng)物的多酚”，Phytochemistry,161377-1380，1977；“類黃酮”，J.B.Harborne主編，ChapmanandHallLtd.，London,1988，其中的第2章，Porter等人，"Flavans和原花色素”；美國(guó)專利5，554，645(1994年10月3日授權(quán)給Romanczyk等人)。其效果是制造了含有單體和低級(jí)低聚物，而不含高級(jí)低聚物或者非常少的浸提物。參見LeeA.“蘋果汁的酚類低分子和高分子矢車菊苷配質(zhì)”，J.Sci.FdAgric.29，471-477，1978?？煽啥乖诮嶂笆欠窠?jīng)過(guò)脫脂對(duì)多酚的浸提產(chǎn)率有影響。如果可可豆未經(jīng)過(guò)脫脂，那么可可豆中的脂肪就會(huì)干擾溶劑的增溶作用，并且多酚產(chǎn)率會(huì)顯著降低(Lazarus等人，“類黃酮和其他多酚”，MethodsinEnzymology系列，LesterPacker主編，AcademicPress,NewYork,出版中)?？煽山嵛锟梢詮挠晌窗l(fā)酵或發(fā)酵過(guò)的曬干可可豆制備的可可固體進(jìn)行制備?？煽啥菇?jīng)過(guò)研磨、脫脂和浸提。采用了70%丙酮/30%去離子水的混合物，然后是70%甲醇浸提以及兩次氯仿浸提。然后是乙酸乙酯浸提，添加水并且除去乙酸乙酯。或者，可可豆經(jīng)過(guò)70%丙酮浸提。在兩種情況下，浸提均在室溫下進(jìn)行并且冷凍干燥該含水的浸提物。參見美國(guó)專利5，554，645(1994年10月3日授權(quán)給L.Romanczyk等人)以及WO98/09533,1998年3月12日公開。而且，可可浸提物可以從部分脫脂的可可固體進(jìn)行制備，該可可固體是由未經(jīng)過(guò)焙烤的可可豆制備的。所得到的可可固體，無(wú)論是從發(fā)酵、發(fā)酵不足還是未發(fā)酵的可可粒而來(lái)，與由常規(guī)焙烤的可可豆或可可粒制備的可可固體相比，均具有較高的可可多酚含量，即可可矢車菊苷配質(zhì)含量。參見美國(guó)專利6，015，913(2000年1月18日授權(quán)給K.S.Kealey等人)。脫脂、冷凍干燥、未發(fā)酵的可可豆含有約2%的黃嘌呤生物堿，而常規(guī)加工的可可豆則含有更高的量?？煽蓧A是咖啡因的降解產(chǎn)物，二者均是眾所周知的神經(jīng)系統(tǒng)刺激物。過(guò)量攝入黃嘌呤生物堿被視為有害的。因此，在某些情況下，希望制備不含黃嘌呤生物堿的可可浸提物。因此，需要的是從可可固體中浸提出可可矢車菊苷配質(zhì)的改進(jìn)方法，并且在某些情況下使可可浸提物脫咖啡因和脫可可堿
發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明提供了從由未焙烤的可可豆制備的部分或全脫脂的可可固體浸提可可多酚的改進(jìn)方法，可可多酚包括兒茶素、表兒茶素和可可矢車菊苷配質(zhì)低聚物。該改進(jìn)方法包含在常壓下或壓力下以能夠增溶多酚的酸化溶劑或者含有該溶劑的酸化水溶液進(jìn)行浸提。優(yōu)選向該溶劑或溶劑水溶液中添加其量足以使PH值從約6.5降低至約2約4的酸。優(yōu)選食用的或生理可接受的酸。可可固體由未發(fā)酵、發(fā)酵不足或發(fā)酵過(guò)的可可豆制備。有機(jī)溶劑可以選自低級(jí)烷基醇、低級(jí)烷基酮以及低級(jí)烷基乙酸酯。適宜的溶劑包括甲醇、乙醇、異丙醇、丙酮、乙酸甲酯和乙酸乙酯。溶劑水溶液優(yōu)選僅含有最高約50體積％的水；雖然也可以含有更多量的水，但是隨著水含量增多浸提效率會(huì)降低。優(yōu)選的含水有機(jī)溶劑包括約50%約70%異丙醇、約80%約100%丙酮和約80%約95%乙醇。單獨(dú)使用乙醇優(yōu)先地浸提七聚物以上的可可矢車菊苷配質(zhì)低聚物。約80%異丙醇與約20%水的混合物優(yōu)先地浸提單體以及最高至六聚物的低聚物，并且包括六聚物。本發(fā)明也提供了從由未焙烤的可可豆制備的部分脫脂或全脫脂可可固體浸提可可多酚的方法，可可多酚包括兒茶素、表兒茶素和可可矢車菊苷配質(zhì)低聚物。該方法包含在常壓下或壓力下以能夠增溶可可多酚的非酸化有機(jī)溶劑浸提可可固體的步驟。可可豆優(yōu)選未發(fā)酵或發(fā)酵不足的可可豆；雖然也可以采用發(fā)酵過(guò)的可可豆，但是浸提物中高級(jí)低聚物的含量會(huì)較少。發(fā)酵不足可可豆典型地其發(fā)酵系數(shù)(factor)為275或更低。優(yōu)選的發(fā)酵不足可可豆包括深藍(lán)灰色、紫色或紫棕色可可豆，或者深藍(lán)灰色與紫色可可豆、紫色與棕色可可豆或者深藍(lán)灰色、紫色與棕色可可豆的混合物。未發(fā)酵或發(fā)酵不足可可豆含有至少約1重量％至最高約15-17重量％的總可可矢車菊苷配質(zhì)/g脫脂可可固體，典型地約4-7%。溶劑可以選自低級(jí)烷基醇、低級(jí)烷基酮以及低級(jí)烷基乙酸酯。適宜的溶劑是甲醇、乙醇、異丙醇、丙酮、乙酸甲酯和乙酸乙酯。溶劑水溶液可以含有最高約50體積％的水；雖然也可以存在更多量的水，但是所浸提的可可多酚的總量卻會(huì)不隨之而提高。優(yōu)選的溶劑包括50%-60%丙酮和100%乙醇。浸提可以在從0°C至高達(dá)所用溶劑或溶劑水溶液沸點(diǎn)的溫度下在所用的浸提壓力下進(jìn)行。如果溶劑是甲醇，浸提優(yōu)選在室溫下進(jìn)行。如果溶劑是乙醇，浸提優(yōu)選在約20°C約50°C下進(jìn)行。如果溶劑是異丙醇，浸提優(yōu)選在約70°C下進(jìn)行。如果溶劑是丙酮水溶液，浸提優(yōu)選在約50°C至溶液沸點(diǎn)下進(jìn)行。在前述方法中，如果采用的是酸化溶劑或溶劑水溶液，優(yōu)選較低的浸提溫度。如果采用的是非酸化溶劑或溶劑水溶液，可以采用較高的浸提溫度。本發(fā)明也提供了從部分或全脫脂可可固體中選擇性浸提低分子量可可矢車菊苷配質(zhì)低聚物的方法。所采用的溶劑是優(yōu)先浸提低級(jí)低聚物的溶劑，比如乙酸甲酯或乙酸乙酯?？煽啥箖?yōu)選是未發(fā)酵或發(fā)酵不足的可可豆；但是，發(fā)酵過(guò)的可可豆也可以采用。浸提優(yōu)選在約20°C約50°C下進(jìn)行。所得到的可可浸提物基本上由單體、二聚物和三聚物構(gòu)成。本發(fā)明也提供了從由未焙烤的可可豆制備的部分脫脂或全脫脂可可固體中選擇性浸提較高分子量可可矢車菊苷配質(zhì)低聚物的方法。該方法包含以下步驟(a)以乙酸乙酯浸提可可固體；(b)回收浸提的可可固體；(c)以高級(jí)低聚物的良溶劑來(lái)浸提回收的可可固體，比如丙酮、乙醇以及其與最高50%水的混合物；(d)分離可可固體與可可浸提物；并且(e)任選干燥可可浸提物。浸提優(yōu)選在約20°C約50°C下進(jìn)行?？煽啥箖?yōu)選未發(fā)酵或發(fā)酵不足的可可豆；但是，發(fā)酵過(guò)的可可豆也可以采用。可可浸提物基本上由至少是四聚物和高級(jí)低聚物構(gòu)成。本發(fā)明進(jìn)一步提供了在常壓或壓力下采用適于增溶可可矢車菊苷配質(zhì)的溶劑或者該溶劑水溶液從部分脫脂或全脫脂可可固體中浸提可可多酚的連續(xù)方法，可可多酚包括兒茶素、表兒茶素和可可矢車菊苷配質(zhì)低聚物。該方法包含以下步驟(a)使一系列填充了含有不同量可可多酚的可可固體的室與按逆流方向流動(dòng)的溶劑接觸，并且(b)循環(huán)可可浸提物?？梢愿稍镌撘后w可可浸提物。優(yōu)選的溶劑包括低級(jí)烷基醇、低級(jí)烷基酮以及低級(jí)烷基乙酸酯。適宜的低級(jí)烷基醇是甲醇、乙醇和異丙醇。優(yōu)選乙醇。適宜的低級(jí)烷基酮是丙酮。適宜的低級(jí)烷基乙酸酯是乙酸甲酯和乙酸乙酯。優(yōu)選循環(huán)可可浸提物直到基本上不再有任何可可多酚從可可固體中浸提為止，可可多酚包括表兒茶素、兒茶素和/或可可矢車菊苷配質(zhì)。如果溶劑是醇類，那么可可浸提物可以用作液體浸提物，稱為“酊劑”，如果除去了溶劑就可以作為水溶液，或者在除去溶劑或溶劑和水之后就成為水溶性的干粉了。如果采用了溶劑，那么通過(guò)閃蒸出溶劑來(lái)干燥可可浸提物。如果采用的是溶劑水溶液，通過(guò)在干燥含水浸提物之前閃蒸出溶劑，就可以干燥可可浸提物。含水浸提物可以通過(guò)冷凍干燥、噴霧干燥、急驟干燥或者轉(zhuǎn)鼓式干燥來(lái)進(jìn)行干燥。本發(fā)明提供了從由可可豆制備的部分脫脂或全脫脂可可固體回收可可矢車菊苷配質(zhì)和可可堿的方法。該方法包含以下步驟(a)以乙醇在約50°C約70°C下浸提可可固體，(b)冷卻乙醇浸提物，冷卻溫度和時(shí)間均要足以使可可堿沉淀，(c)分離沉淀的可可堿，并且(d)任選從浸提物中除去乙醇以回收干燥的可可矢車菊苷配質(zhì)?？煽啥箖?yōu)選未經(jīng)過(guò)焙烤的未發(fā)酵或發(fā)酵不足的可可豆；但是，也可以采用發(fā)酵過(guò)的可可豆以及發(fā)酵并焙烤過(guò)的可可豆。本發(fā)明也提供了最大限度地降低從部分脫脂或全脫脂可可固體浸提得到的可可矢車菊苷配質(zhì)中可可堿含量的方法。該方法包含以下步驟(a)以異丙醇浸提可可固體以得到含有可可矢車菊苷配質(zhì)和可可堿的醇浸提物，(b)冷卻醇浸提物，冷卻溫度和時(shí)間均要足以使可可堿沉淀，并且(c)分離可可堿與醇浸提物。在前述方法中，冷卻在0°C約5°C下進(jìn)行最長(zhǎng)約12小時(shí)，而分離步驟則通過(guò)過(guò)濾浸提物、離心浸提物、或者使可可堿吸收在適宜的吸收劑上來(lái)進(jìn)行。圖1(a)是曲線圖，其表示采用100%乙醇作為浸提溶劑時(shí)溫度0°C、20°C、50°C和70°C對(duì)單體、五聚物以及十聚物的低聚物回收率的影響。圖1(b)是曲線圖，其表示采用100%異丙醇作為浸提溶劑時(shí)溫度0°C、20°C、50°C和70°C對(duì)單體、五聚物以及十聚物的低聚物百分回收率的影響。圖1(c)是曲線圖，其表示采用100%甲醇作為浸提溶劑時(shí)溫度0°C、20°C、50°C和70°C對(duì)單體、五聚物以及十聚物的低聚物百分回收率的影響。圖2是曲線圖，表示丙酮和乙醇在浸提高級(jí)低聚物方面最為有效?；厥章室詷?biāo)準(zhǔn)丙酮水乙酸(7029.50.5v/v)百分產(chǎn)率表示。圖3是曲線圖，表示發(fā)酵和可可豆加工對(duì)采用丙酮水乙酸作為浸提溶劑時(shí)浸提得到的單體和矢車菊苷配質(zhì)低聚物量的影響。結(jié)果以從未發(fā)酵可可豆獲得的百分產(chǎn)率表7J\ο圖4是曲線圖，表示發(fā)酵和可可豆加工對(duì)采用沸水作為浸提溶劑時(shí)浸提得到的單體和矢車菊苷配質(zhì)低聚物量的影響。結(jié)果以從未發(fā)酵可可豆獲得的百分產(chǎn)率表示。圖5是從可可豆浸提多酚的方法流程示意圖。圖6是流程示意圖，表示使可可浸提物脫可可堿的方法。含可可堿的溶劑蒸汽通過(guò)三路閥流向冷卻板左側(cè)。液流然后切換至右側(cè)。然后從左側(cè)排空溶劑。打開冷凝器的左側(cè)門并且從冷凝器板上刮掉粗的可可固體堿或者以溶劑沖洗而以液體形式回收之。在右側(cè)重復(fù)相同的步驟。回收溶劑。圖7是曲線圖，對(duì)比了通過(guò)在50°C下以乙酸乙酯浸提由未發(fā)酵可可豆制備的可可固體而制備的浸提物與隨后以丙酮水乙酸(7029.50.5)浸提該乙酸乙酯浸提過(guò)且干燥過(guò)的可可固體而制備的浸提物其二者的可可固體低聚物分布型。百分回收率與從未發(fā)酵可可豆獲得的可可固體的丙酮水乙酸(7029.50.5)浸提物進(jìn)行了對(duì)比。圖8對(duì)比了采用80%乙醇20%水作為溶劑時(shí)從由發(fā)酵和發(fā)酵不足可可豆制備的可可固體所達(dá)到的單體和低聚物產(chǎn)率。具體實(shí)施例方式可可多酚包括可可矢車菊苷配質(zhì)，其可以從各種可可屬基因型通過(guò)本文以下所述方法獲得。單體包括(+)兒茶素、(-)_表兒茶素以及其各自的差向異構(gòu)體(即，(-)_兒茶素和(+)_表兒茶素)。可可浸提物中已經(jīng)經(jīng)過(guò)鑒別的矢車菊苷配質(zhì)低聚物包括二聚物至十八聚物。低聚物可以是線性或支化的。線性48低聚物的結(jié)構(gòu)如下<formula>formulaseeoriginaldocumentpage9</formula>其中χ是0-16的整數(shù)。支化低聚物具有如下結(jié)構(gòu)<formula>formulaseeoriginaldocumentpage10</formula>其中a和b獨(dú)立地是0-15的整數(shù)。通過(guò)碳氧氧化性偶合反應(yīng)形成第二個(gè)界于類黃酮之間的鍵而形成A型低聚物，從而也可以產(chǎn)生矢車菊苷配質(zhì)低聚物的結(jié)構(gòu)變體，參見以下(“類黃酮”，J.B.Harborne主編，ChapmanandHallLtd.，London，1988，其中的第2章，Porter等人，“Flavans和原花色素”；Porter，MethodsinPlantBiochemistry，第I卷，植物性酷類，Dey禾口Harborne主編；AcademicPress=SanDiego,Ca，1989)。由于該轉(zhuǎn)化反應(yīng)的復(fù)雜性，A型原花色素不象單鍵低聚物那樣經(jīng)常遇到<formula>formulaseeoriginaldocumentpage10</formula>基于其色彩，可可豆可分為四種主要棕色(全發(fā)酵)、紫色/棕色、紫色(發(fā)酵不足)以及深藍(lán)灰色(未發(fā)酵)。用于最大限度浸提可可矢車菊苷配質(zhì)的可可固體優(yōu)選由未發(fā)酵或發(fā)酵不足的可可豆制備(即，深藍(lán)灰色可可豆、紫色可可豆、深藍(lán)灰色與紫色可可豆的混合物、紫色和棕色可可豆的混合物、或者深藍(lán)灰色、紫色和棕色可可豆的混合物)?？煽啥垢鼉?yōu)選深藍(lán)灰色和/或紫色的。未發(fā)酵可可豆比發(fā)酵過(guò)的可可豆具有更高含量的可可多酚(Kim和Keeney，J.FoodSci.491090，1984；Porter等人，“可可多酚主要類黃酮以及某些次要代謝物的鑒定”，Phytochemistry，第30卷，第5號(hào)，1657-1663，1991)。當(dāng)可可豆的發(fā)酵系數(shù)小于等于275時(shí)，可可豆或其混合物的可可多酚含量比較高。“發(fā)酵系數(shù)”采用用以表征可可豆發(fā)酵度的分級(jí)系統(tǒng)來(lái)確定。比如，深藍(lán)灰色可可豆指定為1、紫色可可豆為2、紫色/棕色可可豆為3而棕色可可豆為4。落入每個(gè)范圍之內(nèi)的可可豆百分?jǐn)?shù)乘以其加權(quán)值。因此，對(duì)于某一100%棕色可可豆樣品其“發(fā)酵系數(shù)”是100X4或者400，而對(duì)于100%紫色可可豆樣品就是100X2或者200。50%深藍(lán)灰色可可豆和50%紫色可可豆樣品其發(fā)酵系數(shù)就是150[(50X1)+(50X2)]?；谌撝煽晒腆w的重量，未發(fā)酵或發(fā)酵不足可可豆優(yōu)選含有至少1重量％的總可可矢車菊苷配質(zhì)，優(yōu)選3-7重量％，更優(yōu)選7-12重量％，并且最優(yōu)選13-17重量％。制備適用于浸提的可可物料的方法參見美國(guó)專利5，554，645(1996年9月10日授權(quán)給Romanczyk等人)。將收割的可可豆莢剝開并且取出帶果肉的可可豆以進(jìn)行冷凍干燥。從冷凍干燥的物料上手工除去果肉并且將可可豆進(jìn)行如下操作。首先將冷凍干燥的可可豆手工脫殼并且以TEKMAR磨機(jī)研磨成細(xì)粉狀物料。然后將得到的物料通過(guò)Soxhlet浸提法采用比如再蒸餾己烷作為溶劑脫脂一整夜。在室溫下經(jīng)真空從脫脂的物料中除去殘留的溶齊IJ?；蛘?，在阻滯發(fā)酵的條件下曬干可可豆并且將可可豆機(jī)械干燥然后脫殼。通過(guò)加工可可豆或可可粒而不進(jìn)行焙烤步驟，然后將可可豆研磨成巧克力液并且回收部分脫脂的可可固體，或者將焙烤過(guò)的可可豆或可可粒螺桿壓榨成部分脫脂的可可固體而不進(jìn)行研磨步驟，就可以獲得可可多酚含量更高，即可可矢車菊苷配質(zhì)含量高的部分脫脂或全脫脂可可固體。如果該方法中采用了發(fā)酵不足的可可豆，那么就可以獲得甚至更高水平的矢車菊苷配質(zhì)。該方法保留了可可多酚，因?yàn)樗÷粤顺Ｒ?guī)的焙烤步驟。該方法基本上由以下步驟構(gòu)成(a)將可可豆加熱到剛好足以使含濕量降低到約3重量％并且使可可豆殼松脫的豆內(nèi)溫度，典型地采用紅外加熱設(shè)備進(jìn)行約34分鐘；(b)從可可殼中揚(yáng)出可可粒；(c)螺桿壓榨可可粒；并且(d)回收可可脂以及部分脫脂的可可固體，該可可固體含有包括可可矢車菊苷配質(zhì)的可可多酚。在進(jìn)行加熱步驟之前可可豆任選清洗，比如在空氣流化床密度分離機(jī)中?？煽啥箖?yōu)選加熱到豆內(nèi)溫度為約100°C約110°C，更優(yōu)選低于約105°C。揚(yáng)制可以在空氣流化床密度分離機(jī)中進(jìn)行。前述加熱可可豆以降低含濕量并且使可可殼松脫的方法參見美國(guó)專利6，015，913(2000年1月18日授權(quán)給Kealey等人)。豆內(nèi)溫度(IBT)可以通過(guò)以可可豆(約80-100個(gè)可可豆)填充保溫容器比如保溫瓶的方式進(jìn)行測(cè)量。為了在從加熱裝置轉(zhuǎn)移至保溫瓶過(guò)程中保持可可豆的溫度，將保溫容器進(jìn)行適當(dāng)密封以保持其中樣品的溫度。將溫度計(jì)插入填充有豆的保溫容器中并且相對(duì)于保溫瓶中的豆平衡溫度計(jì)的溫度。溫度計(jì)讀數(shù)即豆的IBT溫度。IBT也可以視為豆的平衡物料溫度。在本發(fā)明全文中，適用如下的定義。本文所用的“高級(jí)低聚物”包括矢車菊苷配質(zhì)六聚物至十聚物或者更高聚物，而“低級(jí)低聚物”指的是從二聚物開始的矢車菊苷配質(zhì)并且包括五聚物。本文所用的“可可浸提物，，是這種浸提物，其含有從研磨可可豆，優(yōu)選脫殼可可豆，通過(guò)以溶劑或溶劑水溶液打漿脫脂可可固體并且除去可可固體以回收液體浸提物而浸提得到的未指定化合物混合物。液體浸提物可以通過(guò)現(xiàn)有技術(shù)熟練人員已知的常規(guī)方法進(jìn)行干燥。浸提方法包含以下步驟以適當(dāng)?shù)娜軇┗蚝芤捍驖{部分脫脂或全脫脂可可固體以增溶可可多酚、分離浸提過(guò)的可可固體與溶劑相，比如通過(guò)離心，并且任選除去溶劑。浸提方法優(yōu)選是連續(xù)的方法。所用的溶劑可以是能夠增溶可可固體中存在的表兒茶素和兒茶素單體和可可矢車菊苷配質(zhì)低聚物的溶劑，優(yōu)選食品級(jí)溶劑。溶劑優(yōu)選選自低級(jí)醇比如甲醇、乙醇和異丙醇，乙酸酯比如乙酸甲酯或乙酯，以及丙酮。溶劑可以采用水溶液或未稀釋的形式。令人驚奇的是，優(yōu)選的水稀釋度隨著所用溶劑的不同而不同。將溶劑或溶劑水溶液的pH值酸化成約2約4可以提高或降低矢車菊苷配質(zhì)的浸提效率，取決于浸提程序中所用的溶劑。溶劑或溶劑水溶液中有或無(wú)0.5%乙酸對(duì)浸提效率有可變的影響，取決于所采用的溶劑以及溶劑濃度。浸提過(guò)程中所用的酸可以是任何非無(wú)機(jī)酸。優(yōu)選的酸是食品級(jí)或生理可接受的酸比如甲酸、檸檬酸、磷酸和乙酸。如果浸提在較高的溫度下進(jìn)行，則不優(yōu)選酸?？煽山嵛锟梢赃M(jìn)行脫可可堿和脫咖啡因處理，而且這些甲基黃嘌呤可以回收和純化。優(yōu)選的溶劑根據(jù)可可堿是丟棄還是回收而有所不同。如果可可堿被丟棄，低溫下最好的浸提溶劑是異丙醇。但是，如果欲回收可可堿以進(jìn)行純化，最好的溶劑是乙醇并且浸提應(yīng)該在50-70°C下進(jìn)行。除去甲基黃嘌呤的理想條件必須與浸提矢車菊苷配質(zhì)的理想條件取得均衡，以便提供高效簡(jiǎn)便的用于制造不含可可堿的可可多酚浸提物的方法?；蛘?，可以采用凝膠滲透色譜法從浸提物中除去甲基黃嘌呤，參見美國(guó)專利5，554，645(1996年9月10日授權(quán)給Romanczyk等人)。簡(jiǎn)而言之，部分純化方法采用液體色譜在S印hadexLH20(28X2.5cm)上進(jìn)行。通過(guò)向去離子水中的步驟梯度來(lái)輔助分離。起始梯度組合物從去離子水中的15%甲醇開始，然后每隔30分鐘依次是去離子水中的25%甲醇、去離子水中的35%甲醇、去離子水中的70%甲醇并且最終是100%甲醇。收集咖啡因和可可堿洗脫液之后的流出物作為單一的級(jí)分，它是不含黃嘌呤生物堿的原始浸提物的細(xì)級(jí)分。也可以通過(guò)將甲基黃嘌呤吸收到固體吸收劑上，然后從吸收劑上徹底沖洗掉基本上不含咖啡因和可可堿的浸提物，由此從可可浸提物中除去甲基黃嘌呤。在該方法中可以采用各種固體吸收劑，比如高分子樹脂以及活性炭。吸收劑優(yōu)選在水中基本上是中性的。中性樹脂吸收劑的實(shí)例是半煅燒樹脂XE-340(Rohm&Haas制造)。通過(guò)酸洗熱活化的炭然后以水漂洗至中性或者以堿水中和酸活化碳然后以水漂洗至中性，就可以獲得中性的活性炭。脫脂可可固體的溶劑浸提可以采用間歇法或連續(xù)法進(jìn)行，優(yōu)選逆流方法。在間歇法中，需要大的溶劑與固體比以從可可固體中浸提出可可多酚。另外，一般需要幾個(gè)相繼的浸提步驟來(lái)浸提出所有存在的可可多酚，包括矢車菊苷配質(zhì)。優(yōu)選的浸提方法是連續(xù)的逆流式浸提方法。在該方法中，浸提效率和方法的成本效益得到優(yōu)化，使其可以針對(duì)生產(chǎn)目的進(jìn)行放大。利用溶劑通過(guò)可可固體的連續(xù)逆流流動(dòng)就可以大大降低溶劑固體比，因?yàn)槿軇┛梢赃B續(xù)地循環(huán)。另外，由于溶劑連續(xù)流過(guò)可可固體，沒(méi)有必要進(jìn)行雙溶劑浸提操作或者以含水溶劑洗滌固體以確保所有的矢車菊苷配質(zhì)均已從可可固體中浸提出來(lái)。如下文所述，矢車菊苷配質(zhì)的浸提效率根據(jù)所用溶劑的不同而有很大差異。而且，令人驚奇地發(fā)現(xiàn)，某些溶劑優(yōu)先浸提高級(jí)低聚物，而其他溶劑則優(yōu)先浸提單體和低級(jí)低聚物。所用溶劑的類型，無(wú)論該溶劑是否是含水溶液，浸提溫度以及其他因素均可以影響高或低分子量矢車菊苷配質(zhì)低聚物的選擇性浸提。通過(guò)以兩種獨(dú)立的溶劑先后對(duì)同一可可粉進(jìn)行浸提，其一浸提單體和低級(jí)低聚物而另一種浸提高級(jí)低聚物，就有可能在同一浸提程序中獲得獨(dú)立的矢車菊苷配質(zhì)級(jí)分而不必將浸提物處以復(fù)雜的分離方法以分離高級(jí)和低級(jí)低聚物。因此，本發(fā)明的進(jìn)一步的實(shí)施方案是從可可固體在大規(guī)模的一步法中選擇性地浸提低聚物的方法，該方法避免了色譜分離低聚物時(shí)又貴又復(fù)雜的方法。實(shí)驗(yàn)程序?qū)φ战嵛镌谌缦碌膶?shí)施例中，所有的溶劑浸提物均與對(duì)照浸提物進(jìn)行對(duì)比，該對(duì)照浸提物是通過(guò)浸提采用實(shí)施例1部分A所述程序制備的未發(fā)酵、冷凍干燥的脫脂可可豆而制備的。所用的溶劑是70%丙酮、29.5%水和0.5%乙酸的混合物。所有的水溶液均以％(ν/ν)表示。以IOOml該溶劑混合物打漿IOg脫脂可可物料并且在50°C聲波破碎5-10分鐘。漿液在4°C下以3000XG離心分離15分鐘并且使上層清液通過(guò)玻璃棉。粗矢車菊苷配質(zhì)的產(chǎn)率為15-20%ο矢車菊苷配質(zhì)低聚物的分離和定量在以下的實(shí)施例中，采用以下所述的分析方法來(lái)分離和按聚合度來(lái)定量可可浸提物中的單體和矢車菊苷配質(zhì)低聚物。以下所述用以鑒別可可浸提物中矢車菊苷配質(zhì)低聚物的方法基于HammerstoneJ.F.等人，“采用高效液相色譜/質(zhì)譜鑒別可可(可可屬)中的矢車菊苷配質(zhì)和巧克力”，J.Ag.FoodChem.；1999;47(10)490-496所報(bào)道的研究工作。采用以下所述的分析方法來(lái)定量研究據(jù)報(bào)道含有各種類型的原花色素的食品和飲料樣品，參見LazarusS.A.等人的“食品和飲料中原花色素的高效液相色譜/質(zhì)譜分析”，J.Ag.FoodChem.；1999；47(9)；3693-3701。Lazarus等人(1999)的方法所報(bào)道的分析法采用了熒光檢測(cè)法，因?yàn)樗x擇性較高并且靈敏度也較高。樣品采用AdamsonG.E.等人的“定量可可和巧克力樣品中的矢車菊苷配質(zhì)的HPLC方法并且使之與總抗氧化能力相關(guān)”，J.Ag.FoodChem.；1999；47(10)；4184-4188所報(bào)道的分析方法進(jìn)行分析。然后將樣品直接與對(duì)照浸提物進(jìn)行對(duì)比，以便對(duì)比對(duì)照浸提物中的單體和矢車菊苷配質(zhì)低聚物來(lái)精確地確定其單體和矢車菊苷配質(zhì)低聚物的水平。浸提物中矢車菊苷配質(zhì)單體和低聚物的總量也可以采用Adamson等人所報(bào)道的方法確定。但是，樣品與每種單體和低聚物的標(biāo)準(zhǔn)混合儲(chǔ)液對(duì)比，而不是將樣品的水平與對(duì)照浸提物進(jìn)行對(duì)比，這樣就可以計(jì)算出浸提物中存在的每種矢車菊苷配質(zhì)的絕對(duì)量。通過(guò)Adamson等人所報(bào)道的方法可以制得單體和矢車菊苷配質(zhì)低聚物的標(biāo)準(zhǔn)混合儲(chǔ)液以及校正曲線。實(shí)施例實(shí)施例1該實(shí)施例描述了含有不同量可可多酚的可可粉的制備。部分A—由冷凍干燥的可可豆制造制備脫脂可可物料的方法參見美國(guó)專利5，554，645(1996年9月10日授權(quán)給Romanczyk)0除非另有說(shuō)明，所用的可可豆是未發(fā)酵的Sulawesi可可豆。按照如下方式加工之。將收割的可可豆莢剝開并且取出帶果肉的可可豆以進(jìn)行冷凍干燥。從冷凍干燥的物料上手工除去果肉并且將可可豆進(jìn)行如下操作。首先將冷凍干燥的可可豆手工脫殼并且以TEKMAR磨機(jī)研磨成細(xì)粉狀物料。然后將得到的物料通過(guò)Soxhlet浸提法采用再蒸餾己烷作為溶劑脫脂一整夜。在室溫下經(jīng)真空從脫脂的物料中除去殘留的溶劑。部分B——由焙烤的可可豆制備采用WestAfrican可可豆通過(guò)常規(guī)方法來(lái)制備可可粉，該方法包含以下步驟焙烤可可豆，使豆內(nèi)溫度為95°C160°C，從焙烤過(guò)的可可豆中揚(yáng)出可可粒、將焙烤過(guò)的可可粒研磨成巧克力液，壓榨巧克力液以提取出可可脂，然后回收可可脂和部分脫脂的可可固體?？煽晒腆w可以采用己烷作為溶劑進(jìn)一步脫脂，如之前部分A所述。部分C——由未焙烤的可可豆制備通過(guò)將曬干的未發(fā)酵Sulawesi可可豆加工成可可固體而不進(jìn)行可可豆或可可粒的焙烤步驟并且根據(jù)需要不進(jìn)行將可可豆研磨成巧克力液的步驟，即螺桿壓榨可可豆以提供可可脂和部分脫脂的可可固體，就可以獲得可可多酚含量高，即可可矢車菊苷配質(zhì)含量高的部分脫脂的可可固體。可可多酚得以保留，因?yàn)槭÷粤顺Ｒ?guī)的焙烤步驟。該方法包括以下步驟(a)將可可豆加熱到剛好足以使含濕量降低到約3重量％并且使可可豆殼松脫的豆內(nèi)溫度；(b)從可可殼中揚(yáng)出可可粒；(c)螺桿壓榨可可粒；并且(d)回收可可脂以及部分脫脂的可可固體，該可可固體含有包括可可矢車菊苷配質(zhì)的可可多酚。加熱典型地在紅外加熱設(shè)備中進(jìn)行約34分鐘。在進(jìn)行加熱步驟之前可可豆任選清洗，比如在空氣流化床密度分離機(jī)中?？煽啥箖?yōu)選加熱到豆內(nèi)溫度為約100°C約110°C，更優(yōu)選低于約105°C。揚(yáng)制可以在空氣流化床密度分離機(jī)中進(jìn)行。前述加熱可可豆以降低含濕量并且使可可殼松脫的方法參見美國(guó)專利6，015，913(2000年1月18日授權(quán))。實(shí)施例2在該實(shí)施例中，研究了各種溶劑和含水溶劑在50°C時(shí)的效率。浸提所用的溶劑是不同的，溶劑的PH值也是如此。浸提物進(jìn)行了對(duì)比以便評(píng)價(jià)不同溶劑的效率。采用由實(shí)施例1部分A所述的未發(fā)酵、冷凍干燥的脫脂可可豆制備的可可固體來(lái)制備浸提物。以IOOml溶劑將IOg脫脂可可物料在50°C下打漿5-10分鐘。對(duì)于酸化的溶齊U，向溶劑和含水溶劑中添加0.5%的乙酸。所用的溶劑是乙醇、甲醇、異丙醇和丙酮。溶劑與水的百分比是不同的。在室溫下以3000XG離心漿液5分鐘，然后使上清液通過(guò)0.45μm濾器。采用前述的分析方法來(lái)確定矢車菊苷配質(zhì)的浸提量以及可可浸提物的低聚物分布型。每種低聚物的檢測(cè)量表示為與采用前述對(duì)照浸提物經(jīng)浸提得到的同一低聚物的量的百分比。異丙醇異丙醇的結(jié)果表示在表1(酸化)和2(未酸化)中。表1-酸化異丙醇<table>tableseeoriginaldocumentpage15</column></row><table>表2-未酸化異丙醇<table>tableseeoriginaldocumentpage15</column></row><table>對(duì)于含水異丙醇而言，在任何稀釋度下隨著低聚物尺寸的提高，所浸提的矢車菊苷配質(zhì)會(huì)顯著減少。80%異丙醇和20%水溶液的效率最低。50%、60%和70%異丙醇溶液對(duì)于除十聚物以外的所有低聚物都是最為有效的，100%異丙醇對(duì)十聚物最為有效。應(yīng)該指出，對(duì)于單體和低級(jí)低聚物(最高五聚物)而言，50-70%異丙醇溶液的效率是80%和100%異丙醇效率的兩倍以上。結(jié)果表明，添加酸在全部水稀釋度(50%、40%、30%和20%水)下均可在總體上提高低聚物的浸提。但是，向80%異丙醇中添加酸的效果是使所浸提的低級(jí)低聚物的量加倍，但卻并沒(méi)有顯著改變所浸提的高級(jí)低聚物的量。甲醇甲醇的結(jié)果表示在表3(酸化)和表4(未酸化)中。表3-酸化甲醇<table>tableseeoriginaldocumentpage16</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage17</column></row><table>表6-未酸化丙酮<table>tableseeoriginaldocumentpage17</column></row><table>對(duì)于較低的丙酮濃度(50和60%)而言，浸提效率隨著低聚物尺寸的增加而提高。對(duì)于80%和100%丙酮而言，浸提效率隨著低聚物尺寸的增大而降低。乙醇的結(jié)果表示在表7(酸化)和表8(未酸化)中。表7-酸化乙醇<table>tableseeoriginaldocumentpage17</column></row><table>表8<table>tableseeoriginaldocumentpage17</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage18</column></row><table>結(jié)果表明，乙醇好于含水乙醇并且酸化的乙醇好于未酸化的乙醇。數(shù)據(jù)也表明，在采用70%和80%乙醇時(shí)，對(duì)低級(jí)低聚物的浸提最好，而在采用100%乙醇時(shí)，對(duì)高級(jí)低聚物的浸提會(huì)增強(qiáng)。對(duì)于五聚物以上的低聚物，隨著低聚物尺寸的增加，醇濃度越低其效率就越低。因此，是選用100%溶劑還是選用含水溶劑混合物將取決于可可浸提物中所希望的矢車菊苷配質(zhì)低聚物分布型。實(shí)施例3進(jìn)行試驗(yàn)來(lái)確定溫度對(duì)采用甲醇、乙醇和異丙醇浸提可可矢車菊苷配質(zhì)的影響。按照前述進(jìn)行浸提，只是溫度為0°C、20°C、5(TC和70°C，甲醇除外，因?yàn)槠浞悬c(diǎn)為64°C。結(jié)果表示在表9-11中。表9-100%異丙醇<table>tableseeoriginaldocumentpage18</column></row><table>表10-100%甲醇<table>tableseeoriginaldocumentpage18</column></row><table>表11-100%乙醇<table>tableseeoriginaldocumentpage19</column></row><table>在采用100%異丙醇時(shí)，隨著浸提溫度的升高所有矢車菊苷配質(zhì)低聚物的浸提效率均有顯著提高(見圖lb)。在采用100%乙醇時(shí)，直至50°C時(shí)所有低聚物的浸提效率均有提高(見圖1A)。在采用100%甲醇時(shí)，溫度的影響隨著低聚物尺寸的不同而不同。比如，單體的產(chǎn)率不受溫度影響，二聚物至七聚物的產(chǎn)率隨著溫度從0°C升高至20°C而有所提高；而在溫度從0°C升高至20°C時(shí)，高級(jí)低聚物(八聚物十聚物)的產(chǎn)率有顯著提高，但在超過(guò)20°C之后，產(chǎn)率降低(見圖Ic)。溶劑效率的總體對(duì)比見圖2。為每種溶劑選擇了能獲得最佳矢車菊苷配質(zhì)總產(chǎn)率的稀釋度。從圖中可以看出，單體與最高至七聚物的低聚物其產(chǎn)率的差異在各個(gè)溶劑之間并沒(méi)有太大的差別。但是，對(duì)于高級(jí)低聚物而言，很清楚地看到，某些溶劑優(yōu)先浸提低級(jí)低聚物，而其他溶劑則優(yōu)先浸提高級(jí)低聚物。比如，異丙醇是單體和低級(jí)低聚物極其有效的溶齊U，但是對(duì)于高級(jí)低聚物，其效率則顯著降低。相反地，乙醇在浸提單體和低聚物時(shí)是效率最低的溶劑，但是在浸提高級(jí)低聚物時(shí)卻相當(dāng)有效。實(shí)施例4在該實(shí)施例中，研究了發(fā)酵對(duì)矢車菊苷配質(zhì)產(chǎn)率的影響。研究了如下各組可可豆其矢車菊苷配質(zhì)回收水平的差異1)未發(fā)酵可可豆，按照實(shí)施例1部分A的方法進(jìn)行過(guò)冷凍干燥和研磨；2)發(fā)酵可可豆，采用與未發(fā)酵可可豆所用相同的方法加工成可可固體。對(duì)于大多數(shù)可可豆類型而言，實(shí)現(xiàn)正常發(fā)酵所需的時(shí)間量根據(jù)可可豆莢質(zhì)量大小以及豆莢翻動(dòng)次數(shù)的不同而不同?？煽啥馆p微發(fā)酵需要約3天，完全發(fā)酵需要57天，而8天之后可可豆就過(guò)發(fā)酵了。第三組可可豆未經(jīng)過(guò)發(fā)酵并且未經(jīng)過(guò)焙烤。從豆莢中取出可可豆、曬干并且按照美國(guó)專利6，015，913(授權(quán)于Kealey等人)所述方法進(jìn)行加工。通過(guò)加熱可可豆來(lái)除去殼，加熱時(shí)間和溫度僅足以降低含濕量并且使可可殼松脫以便能夠在揚(yáng)制步驟中使殼與可可粒分離。然后將可可豆通過(guò)實(shí)施例1的方法變成粉末。采用“對(duì)照”浸提方法來(lái)浸提可可矢車菊苷配質(zhì)，在該方法中溶劑是70%丙酮、29.5%水和0.5%乙酸的混合物。采用前述的分析程序確定每個(gè)浸提物中存在的每種矢車菊苷配質(zhì)單體和低聚物的量。如圖3所示，來(lái)自發(fā)酵過(guò)的可可豆的浸提物所含的可可矢車菊苷配質(zhì)比由未發(fā)酵可可豆制備的浸提物少75100%。矢車菊苷配質(zhì)的相對(duì)損失隨著低聚物尺寸的增加而提高。加熱可可豆來(lái)除殼(如美國(guó)專利6，015，913的方法)也會(huì)降低浸提物中的可可矢車菊苷配質(zhì)水平。來(lái)自加熱過(guò)的可可豆的可可浸提物所含的矢車菊苷配質(zhì)低聚物水平是來(lái)自未發(fā)酵、手工脫殼可可豆的可可浸提物所含水平的10-50%。結(jié)果表明，可可豆的發(fā)酵和隨后的加工對(duì)浸提物中矢車菊苷配質(zhì)含量的影響要顯著高于所選溶劑類型的影響。實(shí)施例5采用相同的可可豆組重復(fù)實(shí)施例4的試驗(yàn)，只是改變了浸提方法，采用的是沸水作為溶劑。從圖4可以看到，使用沸水作為溶劑顯著降低了可可矢車菊苷配質(zhì)的總體產(chǎn)率。損失隨著低聚物尺寸的增大而提高，以至于采用熱水將無(wú)法浸提到高級(jí)低聚物。實(shí)施例6該實(shí)施例是對(duì)比實(shí)施例，其重復(fù)了由MeijiSeikaKaishaLtd.所擁有的一組日本專利申請(qǐng)和專利所述的浸提方法，其中熱的含水乙醇是優(yōu)選的溶劑。參見日本專利9206026，1997年8月12日公開；日本專利727894，1995年10月24日公開；日本專利9224606,1997年9月2日公開。在這些申請(qǐng)中，并沒(méi)有公開如果可可豆經(jīng)過(guò)發(fā)酵和焙烤將會(huì)如何。假設(shè)，對(duì)可可豆進(jìn)行“常規(guī)”發(fā)酵然后焙烤并揚(yáng)制可可豆以回收脫殼的可可豆。如之前所述，發(fā)酵和焙烤會(huì)使可可豆中所能提供的矢車菊苷配質(zhì)資源耗盡。進(jìn)行試驗(yàn)以對(duì)比浸提物的矢車菊苷配質(zhì)量和低聚物分布型，這些浸提物是采用按照美國(guó)專利6，015，913(Kealey等人)所述程序加工過(guò)的(a)發(fā)酵過(guò)的、(b)發(fā)酵不足的以及(c)未發(fā)酵的未焙烤可可豆進(jìn)行浸提時(shí)獲得的。可可固體由三組可可豆通過(guò)實(shí)施例1部分A所述方法制備。每個(gè)組制備兩個(gè)浸提物。第一浸提物采用丙酮/水/乙酸(70%/29.5%/0.5%)標(biāo)準(zhǔn)溶劑混合物在50°C下制備。第二浸提物采用80%乙醇和20%水的混合物作為溶劑在80°C下制備。含水乙醇浸提物中存在的每種低聚物的量表示為標(biāo)準(zhǔn)丙酮/水/乙酸浸提物中存在的低聚物量的百分比。結(jié)果見表12。表12<table>tableseeoriginaldocumentpage20</column></row><table>結(jié)果表明，當(dāng)采用發(fā)酵過(guò)的可可豆進(jìn)行浸提時(shí)，矢車菊苷配質(zhì)的產(chǎn)率會(huì)顯著降低。而且，在來(lái)自發(fā)酵可可豆的浸提物中實(shí)際上不存在高級(jí)低聚物。使用100%乙醇作為溶劑可以獲得極高的九聚物和十聚物產(chǎn)率(相比標(biāo)準(zhǔn)溶劑的100%，九聚物為103%而低聚物為110%)。相比標(biāo)準(zhǔn)溶劑的100%，以80%乙醇進(jìn)行浸提則得到低得多的產(chǎn)率(九聚物為37%，十聚物為18%)。實(shí)施例7采用逆流式浸提方法從可可粉浸提可可矢車菊苷配質(zhì)在連續(xù)的逆流式浸提方法中，使有機(jī)溶劑或含水有機(jī)溶劑通過(guò)包含多個(gè)室的浸提系統(tǒng)，這些室中含有部分脫脂的可可固體。有機(jī)溶劑或含水有機(jī)溶劑混合物在含有浸提度最大的可可固體批料的室處進(jìn)入該浸提系統(tǒng)，流過(guò)各連續(xù)室中所含的越來(lái)越新鮮的可可固體批料，并且最終從含有最新鮮可可固體批料的室處排出。因此，溶劑和待浸提固體彼此按逆流方式移動(dòng)通過(guò)浸提系統(tǒng)。進(jìn)入含有浸提度最大的可可固體的室中的溶劑混合物，其溫度在常壓下可以是約20°C約100°C，優(yōu)選約50°C約95°C，如果浸提在壓力下進(jìn)行則可能會(huì)更高。溶劑應(yīng)該處于液相，而不是氣相，因此反應(yīng)溫度必須低于溶劑的沸點(diǎn)否則反應(yīng)必須在加壓容器中進(jìn)行。因?yàn)榍笆鲩g歇方法中獲得的試驗(yàn)數(shù)據(jù)表明浸提方法在較高溫度下進(jìn)行更為有效，因此優(yōu)選在較高壓力下進(jìn)行逆流式浸提。選擇室的數(shù)目和循環(huán)時(shí)間，以便從可可固體獲得最高的矢車菊苷配質(zhì)浸提產(chǎn)率。通過(guò)在連續(xù)的逆流式系統(tǒng)中循環(huán)浸提物可以濃縮浸提物的矢車菊苷配質(zhì)含量。在這種系統(tǒng)中，浸提物連續(xù)通過(guò)一系列的室。定期地從系統(tǒng)中取出含有浸提度最大的可可固體的室，并且加入一個(gè)含有新鮮可可固體的室。該系列中室的最佳數(shù)目以及每個(gè)循環(huán)的長(zhǎng)度隨著可可固體的粒度和浸提參數(shù)比如溫度和壓力的不同而變化。確定理想條件的方法是本領(lǐng)域熟練人員所熟知的。參見“化工單元操作”，第3版，第7章，McCabeW.和SmithJ.主編，McGrawHill，在此就其參考引入。實(shí)施例8按照其尺寸選擇性浸提矢車菊苷配質(zhì)低聚物該實(shí)施例說(shuō)明了如何通過(guò)選用優(yōu)先增溶某些矢車菊苷配質(zhì)低聚物的溶劑來(lái)獲得主要含有高分子量可可矢車菊苷配質(zhì)低聚物或者主要含有低分子量可可矢車菊苷配質(zhì)低聚物的浸提物。以100%乙酸乙酯在50°C下浸提Ig通過(guò)實(shí)施例1所述方法從未發(fā)酵可可豆獲得的可可粉三次?；旌辖嵛锊⑶以谡婵障滦D(zhuǎn)蒸發(fā)濃縮至干。以IOml標(biāo)準(zhǔn)丙酮/水/乙酸(70%/29.5%/0.5%)溶劑再生該干浸提物、純化并且按照之前所述分析低聚物含量。然后將乙酸乙酯浸提過(guò)的可可固體在真空烘箱中干燥過(guò)夜以除去任何殘留的溶劑。以標(biāo)準(zhǔn)丙酮/水/乙酸溶劑(70%/29.5%/0.5%)在50°C下浸提該干燥的固體、純化，然后按照之前所述分析其低聚物含量。兩個(gè)浸提物的低聚物含量均表示為采用標(biāo)準(zhǔn)丙酮/水/乙酸溶劑(70%/29.5%/0.5%)在50°C下由未發(fā)酵可可豆制備的浸提物的低聚物含量的百分比。結(jié)果表示在表13中。表13<table>tableseeoriginaldocumentpage22</column></row><table>從表13和圖7可以看出，采用乙酸乙酯作為溶劑可以獲得只含有單體和低級(jí)低聚物的浸提物，所有的高級(jí)低聚物都留在浸提過(guò)的可可固體中。然后采用標(biāo)準(zhǔn)丙酮/水/乙酸溶劑(70%/29.5%/0.5%)或者100%乙醇可以有效地浸提出高級(jí)低聚物。實(shí)施例7可可浸提物的脫可可堿在這些試驗(yàn)中，在不同溫度下采用不同的溶劑從可可固體中浸提可可矢車菊苷配質(zhì)。然后分析浸提物以確定可可浸提物中存在的咖啡因和可可堿的量。所用的溶劑是異丙醇、乙醇和甲醇。浸提在0°C、20°C、50°C和70°C下采用實(shí)施例1所述的方法進(jìn)行。結(jié)果表示在表14中。表14<table>tableseeoriginaldocumentpage22</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage23</column></row><table>在采用乙醇作為溶劑時(shí)可可堿的產(chǎn)率最高，而在采用異丙醇作為溶劑時(shí)其產(chǎn)率最低。產(chǎn)率隨著溫度的升高而提高。結(jié)果表明，可可堿最易溶解于乙醇中而最不易溶解于異丙醇中，并且溶解度隨著溫度而提高。為了達(dá)到可可堿最低的浸提，并且因此而有利于從浸提物中除去之，理想的浸提是采用異丙醇在最低溫度下進(jìn)行。由此實(shí)現(xiàn)矢車菊苷配質(zhì)的浸提。然后通過(guò)使浸提物在約0-40C冷卻過(guò)夜而使可可堿從浸提物中沉淀出來(lái)并且通過(guò)過(guò)濾浸提物而回收之。為了從可可豆中回收最大量的可可堿，理想的浸提是采用乙醇在50_70°C下進(jìn)行。浸提之后，將乙醇浸提物冷卻到0-5°C，從而沉淀出可可堿。通過(guò)過(guò)濾、接觸式(contiguous)離心機(jī)離心或者吸附到中性吸收劑上隨后進(jìn)行洗脫，就可分離出可可堿。優(yōu)選通過(guò)使含可可堿的溶劑蒸汽輸送通過(guò)處于密閉櫥內(nèi)的冷卻板系統(tǒng)(如圖6所示意)的方式來(lái)收集粗固體。然后從系統(tǒng)中排出溶劑并且回收以做進(jìn)一步的利用。同時(shí)，從冷卻板上刮掉粗可可堿，并且將其溶解在水溶液中。通過(guò)重結(jié)晶可可堿、干燥晶體并且將其再次溶解在去離子的二次蒸餾水中而獲得純化的藥品級(jí)可可堿。雖然就此已經(jīng)詳細(xì)地描述了本發(fā)明的優(yōu)選實(shí)施方案，但是要知道本發(fā)明由附錄的權(quán)利要求所限定而不是由之前描述中所給出的具體細(xì)節(jié)所限定，在不背離本發(fā)明精神或范圍的情況下可以對(duì)這些具體細(xì)節(jié)作出許多明顯的變型實(shí)施方案。權(quán)利要求從部分或全脫脂可可固體浸提可可多酚的改進(jìn)方法，包含以能夠增溶可可多酚的酸化溶劑浸提可可固體。2.權(quán)利要求1的方法，其中酸化溶劑是酸化的含水溶劑。3.從部分或全脫脂可可固體浸提包括含量提高的高級(jí)矢車菊苷配質(zhì)低聚物的可可矢車菊苷配質(zhì)低聚物的改進(jìn)方法，包含以甲醇、乙醇或異丁醇浸提可可固體。4.權(quán)利要求1或2的方法，其中可可多酚包括兒茶素、表兒茶素和可可矢車菊苷配質(zhì)低聚物。5.權(quán)利要求1、2或3的方法，其中可可固體由未經(jīng)焙烤的可可豆制備。6.權(quán)利要求5的方法，其中可可豆是未發(fā)酵或發(fā)酵不足的可可豆。7.權(quán)利要求6的方法，其中發(fā)酵不足的可可豆其發(fā)酵系數(shù)為275或更低。8.權(quán)利要求6的方法，其中可可豆是深藍(lán)灰色可可豆、紫色可可豆或者紫棕色可可豆，或者是深藍(lán)灰色可可豆與紫色可可豆的混合物、紫色可可豆與棕色可可豆的混合物或者深藍(lán)灰色可可豆、紫色可可豆和棕色可可豆的混合物。9.權(quán)利要求1或2的方法，其中溶劑被酸化至pH值約2約4。10.權(quán)利要求8的方法，其中酸是食用酸或者生理可接受的酸。11.權(quán)利要求1的方法，其中有機(jī)溶劑是甲醇、乙醇、異丙醇、丙酮、乙酸甲酯或乙酸乙酯。12.權(quán)利要求2的方法，其中有機(jī)溶劑是甲醇、乙醇、異丙醇、乙酸甲酯或乙酸乙酯。13.權(quán)利要求12的方法，其中酸化溶劑是乙醇。14.權(quán)利要求2的方法，其中酸化的含水溶劑含有最多約50%的水。15.權(quán)利要求2的方法，其中酸化的含水溶劑是約95%乙醇和約5%水、約50%約70%異丙醇和約30%約50%水，或者約80%丙酮和約20%水。16.權(quán)利要求2的方法，其中含水溶劑是約80%異丙醇和約20%水的混合物。17.權(quán)利要求1、2或3的方法，其中浸提在0°C至所用溶劑沸點(diǎn)的溫度下進(jìn)行。18.權(quán)利要求1、2或3的方法，其中浸提在約20°C約50°C下進(jìn)行。19.權(quán)利要求1、2或3的方法，其中浸提在壓力下進(jìn)行。20.權(quán)利要求1的方法，其中溶劑是甲醇而浸提在室溫下進(jìn)行，其中溶劑是乙醇而浸提在約20°C約50°C下進(jìn)行，并且其中溶劑是異丙醇而浸提在約70°C下進(jìn)行。21.從部分或全脫脂可可固體選擇性浸提低分子量可可矢車菊苷配質(zhì)低聚物的方法，包含以乙酸甲酯或乙酸乙酯浸提可可固體的步驟。22.通過(guò)權(quán)利要求21的方法獲得的可可浸提物。23.從部分脫脂或全脫脂可可固體選擇性浸提較高分子量可可矢車菊苷配質(zhì)低聚物的方法，包含以下步驟(a)以乙酸乙酯浸提可可固體；(b)回收浸提過(guò)的可可固體；(c)以丙酮、乙醇或其含水混合物浸提回收的可可固體；(d)分離可可固體與可可浸提物；并且(e)任選干燥可可浸提物。24.通過(guò)權(quán)利要求23的方法獲得的可可浸提物。25.采用適于增溶可可矢車菊苷配質(zhì)的溶劑或者含水溶劑從部分脫脂或全脫脂可可固體中浸提可可多酚的連續(xù)方法，其包含以下步驟(a)使一系列含有可可固體的室與按逆流方向流動(dòng)的溶劑接觸，(b)回收可可浸提物，并且(c)循環(huán)可可浸提物。26.權(quán)利要求25的方法，其中可可多酚包括兒茶素、表兒茶素和可可矢車菊苷配質(zhì)低聚物。27.權(quán)利要求25的方法，其中該方法在壓力下進(jìn)行。28.權(quán)利要求25的方法，其中浸提在0°C至所用溶劑沸點(diǎn)的溫度下進(jìn)行。29.權(quán)利要求25的方法，其中溶劑是低級(jí)烷基醇、低級(jí)烷基酮或者低級(jí)烷基乙酸酯，或者含水溶劑是低級(jí)烷基醇、低級(jí)烷基酮或者低級(jí)烷基乙酸酯和最高約50%水。30.權(quán)利要求29的方法，其中溶劑是約95%乙醇和約5%水。31.權(quán)利要求25的方法，其中循環(huán)可可浸提物直到基本上不再有任何可可多酚從可可固體中浸提為止。32.權(quán)利要求25的方法，其中在循環(huán)結(jié)束之后，通過(guò)閃蒸出溶劑并且通過(guò)冷凍干燥、噴霧干燥、急驟干燥或者轉(zhuǎn)鼓式干燥除去浸提物中任何存在的水而干燥浸提物。33.從由未焙烤的可可豆制備的部分脫脂或全脫脂可可固體回收可可矢車菊苷配質(zhì)和可可堿的方法，包含以下步驟(a)以乙醇在約50°C約70°C下浸提可可固體，(b)冷卻乙醇浸提物，冷卻溫度和時(shí)間均要足以使可可堿沉淀，(c)分離沉淀的可可堿，并且(d)從浸提物中除去乙醇以回收干燥的可可矢車菊苷配質(zhì)。34.通過(guò)權(quán)利要求33的方法獲得的可可浸提物。35.最大限度地降低從由未焙烤的可可豆制備的部分脫脂或全脫脂可可固體經(jīng)浸提得到的可可矢車菊苷配質(zhì)中可可堿量的方法，包含以下步驟(a)以異丙醇浸提可可固體以得到含有可可矢車菊苷配質(zhì)和可可堿的醇浸提物，(b)冷卻醇浸提物，冷卻溫度和時(shí)間均要足以使可可堿沉淀，并且(c)分離可可堿與醇浸提物。36.權(quán)利要求33或35的方法，其中冷卻在0°C約5°C下進(jìn)行約1小時(shí)約12小時(shí)并且其中分離步驟通過(guò)過(guò)濾浸提物、離心浸提物、或者使可可堿吸收在基質(zhì)上的方式進(jìn)行。37.通過(guò)權(quán)利要求35的方法獲得的可可浸提物。全文摘要本發(fā)明涉及用于浸提可可矢車菊苷配質(zhì)的改進(jìn)方法。具體地，通過(guò)以能增溶矢車菊苷配質(zhì)的溶劑或含水溶劑浸提脫脂可可豆而制造了富含矢車菊苷配質(zhì)低聚物的可可浸提物。浸提物中矢車菊苷配質(zhì)的產(chǎn)率隨著所用可可豆、所用溶劑、所用溶劑的pH值以及浸提溫度的不同而不同?？蓛?yōu)化浸提參數(shù)來(lái)提高矢車菊苷配質(zhì)的產(chǎn)率并且實(shí)現(xiàn)有選擇性地浸提較高或較低分子量的低聚物。優(yōu)選的浸提方法是逆流式溶劑浸提方法，可可浸提物在其中循環(huán)。文檔編號(hào)A23G1/30GK101817849SQ20101017610公開日2010年9月1日申請(qǐng)日期2001年6月11日優(yōu)先權(quán)日2000年6月9日發(fā)明者J·F·小哈默斯通,M·J·基梅爾申請(qǐng)人:馬爾斯公司