專(zhuān)利名稱(chēng)：一種重組豬囊尾蚴期特異性抗原cC1的高效可溶性表達(dá)方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及生物技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種重組豬囊尾蚴期特異性抗原cCl的高效可溶性表達(dá)方法。
背景技術(shù)：
豬囊尾蚴期特異性抗原cCl(cysticercus common antigen 1)是以囊蟲(chóng)病患者、 囊蟲(chóng)病病豬血清為探針從豬囊尾蚴cDNA文庫(kù)中篩選的具有高度特異性的人、豬共同抗原，該蛋白基因序列具有4個(gè)膜聯(lián)蛋白家族的保守序列，故將其歸屬于膜聯(lián)蛋白家族，又命名膜聯(lián)蛋白32(Armexins 32)或膜聯(lián)蛋白Bl (ArmexinsBl)(孫樹(shù)漢，王俊霞，陳蕊雯， 等.中國(guó)寄生蟲(chóng)學(xué)與寄生蟲(chóng)病雜志，1997，15(1) :15-20 ；顏宏利，孫樹(shù)漢，陳蕊雯.第二軍醫(yī)大學(xué)學(xué)報(bào)，2002，23 ) :381-383 ；Hongli Y, Shuhan S, Ruiwen C, et al. Mol Biochem Parasitol. 2002,119(1) :1_5 ；Zhang Y,Wang KH,Guo YJ,et al. Biol Chem. 2007，388(6) 601-610.)。該抗原可用作為人、豬囊尾蚴病的診斷性抗原，同時(shí)，它還是囊尾蚴病的一個(gè)較好的疫苗候選分子，對(duì)囊尾蚴病有較好的保護(hù)性(吳丹，郭瀛軍，林懿，等.第二軍醫(yī)大學(xué)學(xué)報(bào)，2000，21 (6) :508-510 ；Li DA, He Y, Guo YJ, et al. Vaccine. 2007,25(5) :932-938.)。 然而，無(wú)論是作為診斷性抗原或亞單位疫苗，穩(wěn)定高效的表達(dá)都是其有效應(yīng)用的重要前提。重組蛋白在大腸桿菌中能否表達(dá)及高表達(dá)受很多因素的影響，如大腸桿菌菌株、 原核表達(dá)載體、誘導(dǎo)時(shí)間和溫度以及誘導(dǎo)劑使用濃度等。曾有研究采用PGEX表達(dá)系統(tǒng)表達(dá)cCl融合蛋白，盡管亦可獲得較高的表達(dá)量，但其純化標(biāo)簽蛋白為日本血吸蟲(chóng)谷胱甘肽轉(zhuǎn)移酶(GST)，其分子量較大，對(duì)目的蛋白的結(jié)構(gòu)和功能可能產(chǎn)生較多影響，通常需要切除 (陳蕊雯，林懿，孫樹(shù)漢.中國(guó)寄生蟲(chóng)學(xué)與寄生蟲(chóng)病雜志，2000，18(1) :37-39.)。而且，在日本血吸蟲(chóng)流行區(qū)，人群中抗GST抗體陽(yáng)性者有較大比例，如用pGEX表達(dá)系統(tǒng)表達(dá)的cCl重組蛋白作為診斷用抗原，則必須切除融合和GST標(biāo)簽，否則，會(huì)引起交叉反應(yīng)，導(dǎo)致假陽(yáng)性結(jié)果的出現(xiàn)。而這勢(shì)必則增加了 cCl蛋白表達(dá)純化的難度和成本。為了獲得大量廉價(jià)高純度的重組cCl蛋白，zhang等曾嘗試用pJLA503表達(dá)系統(tǒng)表達(dá)非融合性cCl蛋白蛋白， 盡管其最終獲得了純度高達(dá)98%的cCl重組蛋白，但其需要2步色譜純化，且最終得率僅為cCl重組蛋白表達(dá)量的10%，而在該系統(tǒng)，cCl重組蛋白表達(dá)量則僅為總菌體蛋白量的 35. 2% (Zhang Y, Guo YJ, Sun SH, et al. Zhang Y, Guo YJ, Sun SH, et al. Protein Expr Purif. 2004,34(1) :68-74.)。因此，本領(lǐng)域迫切需要一種能夠穩(wěn)定高效表達(dá)可溶性的、易于純化的、對(duì)蛋白結(jié)構(gòu)功能影響不大的、與其他疾病標(biāo)志無(wú)交叉反應(yīng)的豬囊尾蚴期特異性抗原cCl的表達(dá)方法。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是提供一種重組豬囊尾蚴期特異性抗原cCl的高效可溶性表達(dá)方法，具體是將豬囊尾蚴期特異性抗原cCl基因插入pET28a載體，并轉(zhuǎn)化入宿主菌，獲得一種重組豬囊尾蚴期特異性抗原cCl表達(dá)菌株；繼而對(duì)誘導(dǎo)表達(dá)方法進(jìn)行選擇，獲得穩(wěn)定高效可溶性表達(dá)重組豬囊尾蚴期特異性抗原cCl的工藝方法。本發(fā)明提供了一種重組豬囊尾蚴期特異性抗原cCl的表達(dá)載體pET28a-cCl，該載體含有豬囊尾蚴期特異性抗原cCl基因，它插入載體pET28a。所述的表達(dá)載體pET28a-cCl的構(gòu)建根據(jù)豬囊尾蚴期特異性抗原cCl基因序列(SEQ ID NO. 1)合成2條引物(引物1 5' -GGATCCATGGCCTACTGTCGCTCC-3‘ (SEQ ID NO. 2)，引物 2 :5‘ -CTCGAGTTATGCAGGGCCG ATGAG-3' (SEQ ID NO. 3))，提取豬囊尾蚴總RNA，以RT-PCR擴(kuò)增出豬囊尾蚴期特異性抗原 cCl基因，將PCR產(chǎn)物和載體pET28a分別以BamHIJhoI酶切后，T4DNA連接酶連接，將豬囊尾蚴期特異性抗原cC 1基因插入載體pET28a的BamHI、BioI之間。上述PCR和酶切、連接反應(yīng)的方法在本領(lǐng)域是已知的，具體操作按相關(guān)試劑說(shuō)明書(shū)進(jìn)行。另一方面，本發(fā)明提供了一種重組豬囊尾蚴特異性抗原cCl的表達(dá)菌株，它含有表達(dá)載體pET28a-CCl。優(yōu)選地，該表達(dá)菌株的宿主菌為大腸桿菌。更優(yōu)選地，為大腸桿菌 BL21(DE3)。該表達(dá)菌株的制備方法，包括將上述表達(dá)載體pET28a-cCl轉(zhuǎn)化宿主菌的步驟。將表達(dá)載體轉(zhuǎn)化宿主菌的方法在本領(lǐng)域是已知的，例如電穿孔轉(zhuǎn)化法或熱激轉(zhuǎn)化感受態(tài)細(xì)胞法。宿主菌感受態(tài)細(xì)胞的制備按照《分子克隆實(shí)驗(yàn)指南》(第三版)的方法制備。由于培養(yǎng)和誘導(dǎo)表達(dá)條件對(duì)重組豬囊尾蚴特異性抗原cCl的表達(dá)有顯著影響，因此，本發(fā)明還提供了重組重組豬囊尾蚴特異性抗原cCl高效可溶性表達(dá)的方法，該方法通過(guò)培養(yǎng)上述表達(dá)菌株實(shí)現(xiàn)。在本發(fā)明中，提供了一種重組豬囊尾蚴特異性抗原cCl高效可溶性表達(dá)的方法， 該方法包括培養(yǎng)上述表達(dá)菌株的步驟，誘導(dǎo)溫度為30-37°C。在本發(fā)明中，提供了一種重組豬囊尾蚴特異性抗原cCl高效可溶性表達(dá)的方法， 該方法通過(guò)培養(yǎng)上述表達(dá)菌株實(shí)現(xiàn)，誘導(dǎo)劑異丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)的終濃度為 0. 05-1. Ommol/Lο 優(yōu)選的，IPTG 的終濃度為 0. 05-0. 5mmol/L。在本發(fā)明中，提供了一種重組豬囊尾蚴特異性抗原cCl高效可溶性表達(dá)的方法， 該方法通過(guò)培養(yǎng)上述表達(dá)菌株實(shí)現(xiàn)，用誘導(dǎo)劑IPTG誘導(dǎo)重組豬囊尾蚴特異性抗原cCl表達(dá)，誘導(dǎo)時(shí)間為2-12h。優(yōu)選地，誘導(dǎo)時(shí)間為6-10h。優(yōu)選地，本發(fā)明重組豬囊尾蚴特異性抗原cCl高效可溶性表達(dá)的方法為培養(yǎng)上述表達(dá)菌株，誘導(dǎo)溫度30-37°C，IPTG的終濃度為0. 05-0. 5mmol/L，誘導(dǎo)時(shí)間為6_10h。檢測(cè)表達(dá)蛋白的方法在本領(lǐng)域是公知的，例如用SDS-PAGE檢測(cè)目標(biāo)蛋白的表達(dá) 收獲菌體，破碎菌體，然后全菌破碎液、離心后上清(可溶性表達(dá))和沉淀(包涵體)分別進(jìn)行SDS-PAGE電泳，以凝膠自動(dòng)掃描密度定量分析表達(dá)量和可溶性表達(dá)產(chǎn)物的比例。利用本發(fā)明的表達(dá)菌株，采用優(yōu)選的表達(dá)方法，重組豬囊尾蚴特異性抗原cCl可獲得高效可溶性表達(dá)，外源蛋白可溶性表達(dá)量達(dá)菌體總蛋白的60% (圖2)。本發(fā)明的表達(dá)菌株表達(dá)重組豬囊尾蚴特異性抗原cCl具有良好的優(yōu)勢(shì)一是采用了 pET28a表達(dá)載體，是在大腸桿菌中克隆和表達(dá)重組蛋白的最強(qiáng)大系統(tǒng)之一，其純化標(biāo)簽為由6個(gè)組氨酸構(gòu)成HIS標(biāo)簽。由于表達(dá)的cCl蛋白帶有HIS純化標(biāo)簽，則很容易利用Ni+ 柱純化，獲得高純度的目標(biāo)蛋白。同時(shí)，HIS標(biāo)簽對(duì)目的蛋白空間結(jié)構(gòu)和功能影響小，而且可避免了 GST標(biāo)簽的與日本血吸蟲(chóng)感染者存在交叉反應(yīng)的問(wèn)題，無(wú)需進(jìn)行標(biāo)簽切除，更加經(jīng)濟(jì)實(shí)用。二是本發(fā)明優(yōu)選了 BL21(DH3)作為表達(dá)載體pET28a-cCl的表達(dá)菌株宿主菌，該菌株帶有谷胱甘肽還原酶和硫氧還原蛋白雙突變，有利于外源蛋白在細(xì)胞質(zhì)中二硫鍵的形成，增加外源蛋白的可溶性。本發(fā)明提供的帶有HIS標(biāo)簽的重組豬囊尾蚴特異性抗原cCl的高效可溶性表達(dá)方法，有效解決了現(xiàn)有技術(shù)中缺乏能夠穩(wěn)定高效表達(dá)可溶性的、易于純化的、對(duì)蛋白結(jié)構(gòu)功能影響不大的、與其他疾病標(biāo)志無(wú)交叉反應(yīng)的豬囊尾蚴期特異性抗原cCl的表達(dá)方法的問(wèn)題，為產(chǎn)業(yè)化生產(chǎn)重組豬囊尾蚴特異性抗原cCl奠定了基礎(chǔ)。


附圖IPCR產(chǎn)物瓊脂糖電泳圖。泳道M為DNA分子量標(biāo)準(zhǔn)；泳道1為PCR產(chǎn)物。附圖 2 大腸桿菌 E. coli BL21(pET-cCDSDS-PAGE 電泳圖。1 :E. coli BL21 (pET-cCl) (IPTG 誘導(dǎo)，沉淀)；2 E. coli BL21 (pET-cCl) (IPTG 誘導(dǎo)，上清)；3E. coli BL21(pET-cCl) (IPTG 誘導(dǎo)，全菌)；4 E. coli BL21 空菌；5 E. coli (pET-cCl)(未誘導(dǎo)，全菌)6 純化后的融合蛋白；M 蛋白質(zhì)分子量標(biāo)準(zhǔn)
具體實(shí)施例方式實(shí)施例1重組豬囊尾蚴期特異性抗原cCl表達(dá)載體pET28a-cCl的構(gòu)建根據(jù)豬囊尾蚴期特異性抗原cCl基因序列，合成2條引物，序列如下引物 1:5' -GGATCCATGGCCTACTGTCGCTCC-3 ‘ (SEQ ID NO. 2)(下劃線(xiàn)為 BamHI 酶切位點(diǎn))引物 2:5' -CTCGAGTTATGCAGGGCCGATGAG-3‘ (SEQ ID NO. 3)(下劃線(xiàn)為 XhoI 酶切位點(diǎn))取液氮凍存的囊尾蚴，按Trizol說(shuō)明書(shū)提取豬囊尾蚴總RNA。分別用紫外分光光度法測(cè)定總RNA的純度和濃度，1. 2% TBE瓊脂糖凝膠電泳鑒定RNA的質(zhì)量，選取高質(zhì)量的 RNA按照i^rmentase公司的RevertAid 第一鏈cDNA合成使用說(shuō)明書(shū)進(jìn)行逆轉(zhuǎn)錄。以合成的cDNA為模板，用自行設(shè)計(jì)的引物按下列條件進(jìn)行PCR擴(kuò)增94°C預(yù)變性5min，94°C變性 lmin，54°C退火lmin，72°C延伸lmin30s，30個(gè)循環(huán)，最后72°C延伸IOmin0擴(kuò)增產(chǎn)物以1% 瓊脂糖凝膠電泳鑒定。擴(kuò)增出一條約IOOObp的片段，與預(yù)期一致(圖1)。將PCR產(chǎn)物和載體 pED8a 分別以 BamHI、XhoI 酶切后，使用 TaKaRa DNA 連接試劑盒(TaKaRaDNA Ligation Kit)進(jìn)行連接，獲得重組表達(dá)載體pET28a-cCl。將上述載體用熱激法轉(zhuǎn)化至大腸桿菌DH5 α感受態(tài)細(xì)胞中。操作如下取1管大腸桿菌DH5 α感受態(tài)細(xì)胞(含100 μ 1菌液)，在冰上融化，將上述連接液加入大腸桿菌DH5 α 感受態(tài)細(xì)胞中，冰上放置30min，42°C水浴90s，冰上放置2-3min，加入900 μ 1 LB培養(yǎng)基 (其組成為胰蛋白胨、0. 5酵母提取物和NaCl)，轉(zhuǎn)移至37°C搖床中250r/min振蕩培養(yǎng)lh，然后涂布于含50mg/L卡那霉素的LB平板，37°C培養(yǎng)過(guò)夜；第二天挑選單克隆，轉(zhuǎn)接在含50mg/L卡那霉素的LB培養(yǎng)基中，37 °C振蕩培養(yǎng)過(guò)夜后，提取質(zhì)粒，酶切鑒定后，對(duì)核苷酸序列進(jìn)行測(cè)序，結(jié)果表明核苷酸序列和氨基酸序列的閱讀框完全正確。表明pET28a-cCl 表達(dá)載體構(gòu)建成功。實(shí)施例2重組豬囊尾蚴期特異性抗原cCl表達(dá)菌株的構(gòu)建與表達(dá)將重組載體pET28a-cCl用熱激法轉(zhuǎn)化至大腸桿菌BL21 (DE3)感受態(tài)細(xì)胞中(操作同實(shí)施例1)。第二天挑選單克隆，轉(zhuǎn)接在含50mg/L卡那霉素的LB培養(yǎng)基中，37°C振蕩培養(yǎng)過(guò)夜后，提取質(zhì)粒，酶切鑒定后進(jìn)行誘導(dǎo)表達(dá)。將含pET28a-cCl表達(dá)載體的單克隆菌 E. coli BL21-cCl含50mg/L卡那霉素的LB培養(yǎng)基中37°C振蕩培養(yǎng)約3小時(shí)至0D600為 0. 6，加入濃度為lmmol/L的IPTG誘導(dǎo)表達(dá)6h，離心收集菌體，經(jīng)超聲破碎后，分別對(duì)全菌、 上清及沉淀蛋白進(jìn)行SDS-PAGE分析，結(jié)果顯示在分子量40kd左右均有一條明顯的表達(dá)帶， 與預(yù)期的一致，表明構(gòu)建的表達(dá)菌株能夠高效可溶性表達(dá)重組重組豬囊尾蚴期特異性抗原 cCl ο實(shí)施例3溫度對(duì)重組豬囊尾蚴期特異性抗原cCl可溶性表達(dá)的影響將含pET28a_cCl表達(dá)載體的表達(dá)菌株E. coli BL21_cCl接種于5ml含50mg/L卡那霉素的LB培養(yǎng)基中，37°C振蕩培養(yǎng)過(guò)夜后，將菌液以1 100比例轉(zhuǎn)接于IOOml含50mg/ L卡那霉素的LB培養(yǎng)基中，37°C振蕩培養(yǎng)約3小時(shí)至0D600為0. 6，加入濃度為lmmol/L的 IPTG進(jìn)行誘導(dǎo)表達(dá)，誘導(dǎo)溫度分別為25°C、30°C、37°C，誘導(dǎo)表達(dá)Mi后，離心收集菌體，經(jīng)超聲破碎后，分別對(duì)全菌、上清及沉淀蛋白進(jìn)行SDS-PAGE分析離心收集菌體，經(jīng)超聲破碎后， 分別對(duì)全菌、上清及沉淀蛋白進(jìn)行SDS-PAGE分析，檢測(cè)重組豬囊尾蚴期特異性抗原cCl可溶性表達(dá)效果。經(jīng)凝膠自動(dòng)掃描密度分析，在25°C、30°C、37°C下誘導(dǎo)，表達(dá)的融合蛋白分別占總蛋白的39%、47%、52%，可溶性表達(dá)量占總表達(dá)量的75%,70%,73%o實(shí)施例4誘導(dǎo)劑濃度對(duì)重組豬囊尾蚴期特異性抗原cCl可溶性表達(dá)的影響將含pET28a-cCl表達(dá)載體的表達(dá)菌株E. coli BL21_cCl接種于5ml含50mg/L卡那霉素的LB培養(yǎng)基中，37°C振蕩培養(yǎng)過(guò)夜后，將菌液以1 100比例轉(zhuǎn)接于IOOml含50mg/ L卡那霉素的LB培養(yǎng)基中，37°C振蕩培養(yǎng)約3小時(shí)至0D600為0. 6時(shí)，向菌液中加入終濃度分別為 0. 01mmol/L、0. 05mmol/L、0. lmmol/L,0. 5mmol/L、lmmol/L 的 IPTG 進(jìn)行誘導(dǎo)表達(dá)， 誘導(dǎo)溫度分別為37°C，誘導(dǎo)表達(dá)他后，離心收集菌體，經(jīng)超聲破碎后，分別對(duì)全菌、上清及沉淀蛋白進(jìn)行SDS-PAGE分析離心收集菌體，經(jīng)超聲破碎后，分別對(duì)全菌、上清及沉淀蛋白進(jìn)行SDS-PAGE分析，檢測(cè)重組豬囊尾蚴期特異性抗原cCl可溶性表達(dá)效果。經(jīng)凝膠自動(dòng)掃描密度分析，在 0. 01mmol/L、0. 05mmol/L、0. lmmol/L,0. 5mmol/L、lmmol/L 的 IPTG 下誘導(dǎo)， 表達(dá)的融合蛋白分別占總蛋白的34%.72^^75%.75^^52%,可溶性表達(dá)量占總表達(dá)量的 88%、82%，80%，78%、73%。實(shí)施例5誘導(dǎo)時(shí)間對(duì)重組豬囊尾蚴期特異性抗原cCl可溶性表達(dá)的影響將含pET28a_cCl表達(dá)載體的表達(dá)菌株E. coli BL21_cCl接種于5ml含50mg/L卡那霉素的LB培養(yǎng)基中，37°C振蕩培養(yǎng)過(guò)夜后，將菌液以1 100比例轉(zhuǎn)接于含50mg/L卡那霉素的LB培養(yǎng)基中，37°C振蕩培養(yǎng)約3小時(shí)至0D600為0. 6，加入濃度為0. 05mmol/L的 IPTG進(jìn)行誘導(dǎo)表達(dá)，誘導(dǎo)溫度為37°C，分別于誘導(dǎo)表達(dá)ai、4h、Mi、8h、10h、IMi后，離心收集菌體，經(jīng)超聲破碎后，分別對(duì)全菌、上清及沉淀蛋白進(jìn)行SDS-PAGE分析離心收集菌體，經(jīng)超聲破碎后，分別對(duì)全菌、上清及沉淀蛋白進(jìn)行SDS-PAGE分析，檢測(cè)重組豬囊尾蚴期特異性抗原cCl可溶性表達(dá)效果。經(jīng)凝膠自動(dòng)掃描密度分析，誘導(dǎo)表達(dá)時(shí)間為ai、4hjh、8h、10h、16h時(shí)，表達(dá)的融合蛋白分別占總蛋白的35 %、48 %、75 %、73 %、70 %、38 %，可溶性表達(dá)量占總表達(dá)量的 85%,82%,80%,80%, 78%,64% ο實(shí)施例6重組豬囊尾蚴期特異性抗原cCl的高效可溶性表達(dá)將含pET28a_cCl表達(dá)載體的表達(dá)菌株E. coli BL21_cCl接種于5ml含50mg/L 卡那霉素的LB培養(yǎng)基中，37°C振蕩培養(yǎng)過(guò)夜后，將菌液以1 100比例轉(zhuǎn)接于含50mg/L 卡那霉素的LB培養(yǎng)基中，37°C振蕩培養(yǎng)約3小時(shí)至0D600為0. 6，加入濃度為0. 05mmol/ L的IPTG于37°C誘導(dǎo)表達(dá)他后，離心收集菌體，經(jīng)超聲破碎后，分別對(duì)全菌、上清及沉淀蛋白進(jìn)行SDS-PAGE分析離心收集菌體，經(jīng)超聲破碎后，分別對(duì)全菌、上清及沉淀蛋白進(jìn)行 SDS-PAGE分析，檢測(cè)重組豬囊尾蚴期特異性抗原cCl可溶性表達(dá)效果。經(jīng)凝膠自動(dòng)掃描密度分析，表達(dá)的融合蛋白占菌體總蛋白的72%，可溶性表達(dá)量占總表達(dá)量的83%，即可溶性表達(dá)的重組豬囊尾蚴期特異性抗原cCl占總菌體蛋白的60%。
權(quán)利要求
1.一種重組豬囊尾蚴期特異性抗原CCl的表達(dá)載體，其特征在于，該載體由豬囊尾蚴期特異性抗原cCl基因定向插入pET28a得到。
2.一種重組豬囊尾蚴期特異性抗原cCl的表達(dá)菌株，其特征在于，該菌株含有如權(quán)利要求1所述的表達(dá)載體。
3.如權(quán)利要求2所述的表達(dá)菌株，其特征在于，宿主菌為大腸桿菌BL21。
4.制備如權(quán)利要求2或3所述的表達(dá)菌株的方法，其特征在于，包括如下步驟將豬囊尾蚴期特異性抗原cCl基因插入載體pET28a構(gòu)建表達(dá)載體和將該表達(dá)載體轉(zhuǎn)化宿主菌。
5.如權(quán)利要求4所述的制備豬囊尾蚴期特異性抗原cCl表達(dá)菌株的方法，其特征在于， 提取豬囊尾蚴總RNA，采用RT-PCR擴(kuò)增出豬囊尾蚴期特異性抗原cCl基因，將PCR產(chǎn)物和載體pET28a分別以BamHI、XhoI酶切后，T4連接酶連接，將豬囊尾蚴期特異性抗原cCl基因插入載體pET28a的BamHI、BioI之間；將連接產(chǎn)物轉(zhuǎn)化宿主菌。
6.一種豬囊尾蚴期特異性抗原cCl的可溶性表達(dá)方法，包括培養(yǎng)如權(quán)利2或3所述的表達(dá)菌株，其特征在于，用終濃度為0. 05-0. 5mmol/L的IPTG誘導(dǎo)表達(dá)，誘導(dǎo)溫度為 30-37°C，誘導(dǎo)時(shí)間為6-10h。
全文摘要
本發(fā)明涉及生物技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種重組豬囊尾蚴期特異性抗原cC1的高效可溶性表達(dá)方法。本發(fā)明方法將豬囊尾蚴期特異性抗原cC1基因插入原核表達(dá)載體pET28a而構(gòu)建表達(dá)載體pEF28a-cC1，轉(zhuǎn)化大腸桿菌，從而建立了一種表達(dá)菌株。培養(yǎng)該表達(dá)菌株，用終濃度為0.05-0.5mmol/L的IPTG誘導(dǎo)，誘導(dǎo)溫度30-37℃，誘導(dǎo)時(shí)間6-10h，外源蛋白可溶性表達(dá)量可高達(dá)菌體總蛋白的60％，從而獲得穩(wěn)定高效可溶性表達(dá)重組豬囊尾蚴期特異性抗原cC1的工藝方法，為產(chǎn)業(yè)化生產(chǎn)重組豬囊尾蚴特異性抗原cC1奠定了基礎(chǔ)。
文檔編號(hào)C12N1/21GK102161999SQ20101010967
公開(kāi)日2011年8月24日 申請(qǐng)日期2010年2月20日 優(yōu)先權(quán)日2010年2月20日
發(fā)明者夏惠, 孫新, 崔琢, 方強(qiáng), 王雪梅, 駱江坤, 齊文娟 申請(qǐng)人:蚌埠醫(yī)學(xué)院