專利名稱：：蘇太豬抗f18大腸桿菌病新品系的培育方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明涉及優(yōu)質(zhì)高效蘇太豬抗F18大腸桿菌病新品系的培育方法，屬于動(dòng)物遺傳育種與繁殖、分子生物學(xué)
技術(shù)領(lǐng)域：
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背景技術(shù)：
：產(chǎn)腸毒素大腸桿菌(ETEC)是引起仔豬腹瀉的主要病原。其致病性決定于它們?cè)谒拗魃掀ぜ?xì)胞上的定居能力和產(chǎn)生腸毒素的能力，兩者缺一不可。依靠黏附素，ETEC特異性吸附在小腸上皮細(xì)胞表面，其產(chǎn)生的腸毒素進(jìn)入腸上皮細(xì)胞內(nèi)發(fā)揮病理效應(yīng)。F18大腸桿菌是目前在養(yǎng)豬業(yè)中發(fā)生最普遍、危害最大的腸毒素大腸桿菌病原之一。Vogeli等(1997)研究表明，F(xiàn)UT1基因是ETECF18受體蛋白基因，位于豬染色體6ql1區(qū)段，開放閱讀框(0RF)的長(zhǎng)度為1098bp;FUTI基因開放閱讀框架第307bp的G-A堿基轉(zhuǎn)換(M307G—A)導(dǎo)致其編碼產(chǎn)物-FUTl酶第103氨基酸由丙氨酸(Ala)替換為蘇氨酸(Thr)，改變了FUT1酶的活性，進(jìn)而阻抑了ETECF18對(duì)仔豬小腸的粘附。因此，F(xiàn)UT1基因型為AA型的豬抗大腸桿菌F18(ETECF18)的侵染，而AG與GG型豬對(duì)ETECF18易感。不同品系豬的FUT1基因突變的頻率不同，F(xiàn)UT1酶基因突變可以作為一個(gè)遺傳標(biāo)記，用于篩選對(duì)F18菌毛化大腸桿菌具抵抗力的新品系。Meijerink等(2000)對(duì)FUT1酶基因多態(tài)性作了深入研究，遺傳學(xué)和酶動(dòng)力學(xué)的研究結(jié)果都支持這樣一個(gè)結(jié)論，即FUT1酶的第103個(gè)氨基酸(即FUT1基因M307位點(diǎn))對(duì)小腸粘膜F18菌毛受體的表達(dá)具有重要的作用。這個(gè)突變改變了蛋白質(zhì)的構(gòu)象和功能，使得蘇氨酸(中性-極性)代替了丙氨酸(中性-非極性)，該基因的表達(dá)造成了紅細(xì)胞酶系統(tǒng)的改變，導(dǎo)致豬對(duì)F18黏附素的抗性和敏感性，AA基因型豬表現(xiàn)為抗性，GG基因型豬表現(xiàn)為敏感性，雜合子AG型也同樣為易感豬。本課題組已經(jīng)系統(tǒng)研究了國(guó)內(nèi)外部分豬種(其中包括18個(gè)國(guó)內(nèi)地方豬種、1個(gè)培育豬種和野豬)FUT1基因M307位點(diǎn)的多態(tài)性，發(fā)現(xiàn)群體中AA基因型(抗性型)個(gè)體占少數(shù)且只出現(xiàn)在外來豬種中。國(guó)內(nèi)許多學(xué)者如晏學(xué)明等(2003)、施啟順等(2002,2003)和劉月環(huán)(2001)等人，分別對(duì)杜洛克、皮特蘭、約克夏、長(zhǎng)白豬和漢普夏等5個(gè)外來豬種和幾十個(gè)國(guó)內(nèi)地方豬種FUT1基因M307位點(diǎn)的研究中發(fā)現(xiàn)，在所有的中國(guó)地方豬種中不僅也同樣均未檢測(cè)到AA型個(gè)體，也均未檢測(cè)到AG型個(gè)體，全部為GG型，呈極端偏態(tài)分布，這與本課題組研究的結(jié)果完全一致(吳圣龍等，2006;Baoeta1，2008)。蘇太豬，是以太湖豬為母本，杜洛克為父本，由蘇州市蘇太豬育種中心歷經(jīng)十五年培育成功的瘦肉型豬新品種，具有生產(chǎn)性能優(yōu)良、肉質(zhì)鮮美等優(yōu)點(diǎn)，受到了廣大飼養(yǎng)者和消費(fèi)者的歡迎。但是F18大腸桿菌等病原引起的腹瀉病和水腫也是在蘇太豬生產(chǎn)中常見的疾病之一。由于蘇太豬具有引進(jìn)豬種杜洛克的血統(tǒng)，推測(cè)在蘇太豬群體中應(yīng)該具有FUT1基因M307位點(diǎn)的多態(tài)性，因此利用FUT1基因標(biāo)記對(duì)蘇太豬核心群全面檢測(cè)基因型，結(jié)果在643頭蘇太豬母豬和17頭蘇太公豬分別存在65頭和3頭AG型個(gè)體；結(jié)合生產(chǎn)性能確定交配組合，組建了蘇太豬F18大腸桿菌抗病育種基礎(chǔ)群，并成功地建立了在菌體表面展示表達(dá)的F18黏附素體外黏附和黏附抑制試驗(yàn)系統(tǒng)，可以對(duì)豬不同抗病基因多態(tài)性與大腸桿菌F18抗性/易感性的相關(guān)性進(jìn)行準(zhǔn)確快速的分析鑒定，通過持續(xù)測(cè)定基礎(chǔ)群中AA基因型(抗性3型)的繁殖性能、生長(zhǎng)速度、瘦肉率、胴體品質(zhì)等性狀，建立若干家系，進(jìn)行選種和選配，通過4-5個(gè)世代的培育，最終培育出蘇太豬抗F18大腸桿菌病新品系，充分發(fā)揮蘇太豬的遺傳潛力和綜合經(jīng)濟(jì)效益。
發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明的目的是提供一種在蘇太豬中科學(xué)可行的抗F18大腸桿菌病新品系的培育方法，新品系豬具有抗斷奶仔豬腹瀉和水腫病、瘦肉率高、肉質(zhì)優(yōu)、飼料報(bào)酬高、產(chǎn)仔數(shù)多、抗應(yīng)激、適應(yīng)環(huán)境能力強(qiáng)的優(yōu)點(diǎn)，該方法還可以為國(guó)內(nèi)其他培育豬種的抗斷奶仔豬腹瀉和水腫病抗病育種提供指導(dǎo)。本發(fā)明的技術(shù)方案是利用FUT1基因標(biāo)記對(duì)蘇太豬核心群全面檢測(cè)基因型，利用在公豬和母豬中檢測(cè)到的AG型個(gè)體，結(jié)合生產(chǎn)性能確定交配組合，組建蘇太豬F18大腸桿菌抗病育種基礎(chǔ)群，并對(duì)抗性個(gè)體(AA基因型)大腸桿菌F18抗性/易感性進(jìn)行進(jìn)一步驗(yàn)證，對(duì)AA抗性型群體的繁殖性能、生長(zhǎng)速度、瘦肉率、胴體品質(zhì)等性狀持續(xù)進(jìn)行檢測(cè)和選擇，進(jìn)行分子標(biāo)記育種效率評(píng)估，建立MAS育種體系，并運(yùn)用BLUP模型進(jìn)行種豬的遺傳評(píng)估。群體繼代選育和分子標(biāo)記輔助選擇的方法，通過4-5個(gè)世代的培育，最終培育出蘇太豬抗F18大腸桿菌病新品系。所述的新品系培育方法包括以下步驟(1)以蘇太豬核心群中FUT1基因M307AG型個(gè)體為親本，雜交后代按常規(guī)選種標(biāo)準(zhǔn)選留后代個(gè)體，組建蘇太豬F18大腸桿菌抗病育種基礎(chǔ)群；(2)對(duì)基礎(chǔ)群中AA抗性型群體的繁殖性能、生長(zhǎng)速度、瘦肉率、胴體品質(zhì)等性狀進(jìn)行檢測(cè)和選擇，組建第一個(gè)世代；(3)用群體繼代選育和分子標(biāo)記輔助選擇的方法，經(jīng)過4-5個(gè)世代，逐步實(shí)現(xiàn)既定育種目標(biāo)，建立新品系核心群。所述抗F18大腸桿菌病新品系豬的性能指標(biāo)為抗病力抗斷奶仔豬腹瀉和水腫病，并具有很強(qiáng)的抗應(yīng)激能力和抗逆性。繁殖性能新品系豬總產(chǎn)仔數(shù)最高達(dá)到19頭，核心群經(jīng)產(chǎn)母豬產(chǎn)仔在14.5頭以上。生長(zhǎng)性能175日齡體重90Kg，料重比3.0:1。屠宰性能及肉質(zhì)胴體瘦肉率57%以上，肉質(zhì)優(yōu)良，肌內(nèi)脂肪>2.5%，無肉色蒼白、質(zhì)地松軟、切面滲出和深色、硬實(shí)、干燥肉，系水力《3%，大理石紋評(píng)分2.8-3.0，肉色評(píng)分3.0-4.O，屠宰后45分鐘內(nèi)測(cè)定的酸堿度在6.3-6.6之間，屠宰后24小時(shí)測(cè)定的酸堿度在5.4-5.8之間，嫩度《3.6%。本發(fā)明的有益技術(shù)效果主要體現(xiàn)在1)傳統(tǒng)的新品系培育技術(shù)，主要基于表型性狀進(jìn)行選擇，存在周期長(zhǎng)、遺傳進(jìn)展緩慢等缺點(diǎn)，本發(fā)明的培育技術(shù)將分子標(biāo)記輔助選擇和常規(guī)選種選育有機(jī)結(jié)合，克服了上述缺點(diǎn)，在仔豬初生時(shí)進(jìn)行耳號(hào)標(biāo)記時(shí)順帶收集耳組織樣本，利用有利分子遺傳標(biāo)記和常規(guī)育種值估計(jì)，確定分子綜合選擇指數(shù)，縮短世代間隔、加快育種進(jìn)程，首次在國(guó)內(nèi)培育豬種中培育出了抗F18大腸桿菌病新品系。2)本發(fā)明培育的新品系豬不僅抗斷奶仔豬腹瀉和水腫病，還具有瘦肉率高、肉質(zhì)優(yōu)、飼料報(bào)酬高、產(chǎn)仔數(shù)多、抗應(yīng)激、適應(yīng)環(huán)境能力強(qiáng)的優(yōu)點(diǎn)，可以直接用于優(yōu)質(zhì)瘦肉型商品豬生產(chǎn)，還可以組成雜交配套系的母系，同時(shí)該方法為國(guó)內(nèi)其他培育豬種的抗斷奶仔豬腹瀉和水腫病抗病育種提供了指導(dǎo)。圖1為蘇太豬F18大腸桿菌抗病育種基礎(chǔ)群FUT基因M307檢測(cè)結(jié)果。其中泳道1-5、8、10-12為GG型，泳道13、14為AA型，泳道6、7、9為AG型，M為pUC19DNA/MspI(HpaII)Marker。圖2為蘇太豬F18大腸桿菌抗病育種基礎(chǔ)群FUT基因M307的3種基因型大腸桿菌F18抗性/易感性驗(yàn)證結(jié)果。其中A是M307GG基因型斷奶仔豬小腸上皮細(xì)胞黏附表達(dá)F18ab菌毛的標(biāo)準(zhǔn)菌株107/86D是M307AG基因型斷奶仔豬小腸上皮細(xì)胞黏附表達(dá)F18ab菌毛的標(biāo)準(zhǔn)菌株107/86G是M307AA基因型斷奶仔豬小腸上皮細(xì)胞黏附表達(dá)F18ab菌毛的標(biāo)準(zhǔn)菌株107/86B是M307GG基因型斷奶仔豬小腸上皮細(xì)胞黏附誘導(dǎo)表達(dá)F18ab菌毛的重組大腸桿菌rE.colil534E是M307M基因型斷奶仔豬小腸上皮細(xì)胞黏附誘導(dǎo)表達(dá)F18ab菌毛的重組大腸桿菌rE.colil534H是M307AG基因型斷奶仔豬小腸上皮細(xì)胞黏附誘導(dǎo)表達(dá)F18ab菌毛的重組大腸桿菌rE.colil534C是M307GG基因型斷奶仔豬小腸上皮細(xì)胞黏附誘導(dǎo)表達(dá)F18abFedF亞單位的重組大腸桿菌pnirBMisL-fedFF是M307M基因型斷奶仔豬小腸上皮細(xì)胞黏附誘導(dǎo)表達(dá)F18abFedF亞單位的重組大腸桿菌pnirBMisL-fedFI是M307Ae基因型斷奶仔豬小腸上皮細(xì)胞黏附誘導(dǎo)表達(dá)F18abFedF亞單位的重組大腸桿菌pnirBMisL-fedF圖3是組建蘇太豬F18+大腸桿菌抗病育種基礎(chǔ)群雜交示意圖具體實(shí)施例方式1)利用FUT1基因標(biāo)記對(duì)蘇太豬核心群全面檢測(cè)基因型利用FUT1基因標(biāo)記對(duì)蘇太豬核心群(643頭蘇太豬母豬和17頭蘇太公豬)全面檢測(cè)基因型，在仔豬出生后正常進(jìn)行豬耳號(hào)標(biāo)記時(shí)每個(gè)個(gè)體留取耳組織塊約1.Og，放入1.5mL的Eppendoff管內(nèi)于冰盒中取回?fù)P州大學(xué)動(dòng)物遺傳育種與繁殖重點(diǎn)學(xué)科實(shí)驗(yàn)室備用。按常規(guī)酚-氯仿法提取DNA。根據(jù)已公布的豬FUT1基因序列L50534設(shè)計(jì)引物，上游引物為5'-CCAACGCCTCCGATTCCTGT-3'，下游引物為5'-GTGCATGGCAGGCTGGATGA-3'，預(yù)期擴(kuò)增片段為161bp。PCR擴(kuò)增反應(yīng)體系為20iiL:DNA模板1.0iiL(約100ng)，10XPCRbuffer2iiL，弓l物(10iimol/L)各1iiL，dNTP(2.5,1/L)1.5iiL，Taq酶(5U/iiL)0.2iiL，以及(1朋2013.3iiL。反應(yīng)條件樣品經(jīng)94t:變性5min后，按照下列程序進(jìn)行擴(kuò)增94°C40s，60。C40s，72。C45s，32個(gè)循環(huán)后，72。C延伸10min，4。C保存。酶切反應(yīng)體系為10iiL，包括PCR產(chǎn)物3iiL，限制性內(nèi)切酶Hin6I(5U/iiL)0.2iiL，10Xbuffer1iiL，ddH205.8iiL，置37t:恒溫反應(yīng)3h后，經(jīng)10%的聚丙烯酰胺凝膠電泳銀染分析。2)檢測(cè)到的AG型個(gè)體結(jié)合生產(chǎn)性能確定交配組合，組建了蘇太豬F18大腸桿菌抗病育種基礎(chǔ)群在643頭蘇太豬母豬和17頭蘇太公豬分別存在65頭和3頭AG型個(gè)體；結(jié)合生產(chǎn)性能確定交配組合，組建了蘇太豬F18+大腸桿菌抗病育種基礎(chǔ)群(圖3)。將蘇太豬F18+大腸桿菌抗病育種基礎(chǔ)群(Fl代)繼續(xù)進(jìn)行FUT1基因的基因型測(cè)定(圖l)，結(jié)合常規(guī)選種的標(biāo)準(zhǔn)，選留了576頭個(gè)體，并且在相同飼養(yǎng)管理環(huán)境條件下按家系分開飼養(yǎng)。3)對(duì)基礎(chǔ)群中AA基因型個(gè)體大腸桿菌F18抗性/易感性進(jìn)行進(jìn)一步驗(yàn)證將仔豬剖殺后，各取十二指腸、空腸腸段15cm立即放入預(yù)冷的Pm溶液中，每段腸管用PBR溶液輕柔沖洗三遍后，再用30mL預(yù)冷IPBR沖洗一遍，將腸道外翻后短暫地在IPBR溶液中清洗一下，然后轉(zhuǎn)移到盛有200mLIPBR溶液的燒杯中，于室溫下以100r/min的速度勻速攪拌10min。棄腸段，將燒杯中液體轉(zhuǎn)移至離心管，在(TC下，200g，離心10min。沉淀重新懸浮在PBR溶液中輕輕洗滌一次，再次離心，用預(yù)冷的MEM重新懸浮沉淀的細(xì)胞，將細(xì)胞濃度調(diào)整到106_107個(gè)細(xì)胞/ml。將987P和107/86標(biāo)準(zhǔn)株大腸桿菌的單個(gè)菌落分別接種到35mLLB培養(yǎng)基，37t:振蕩培養(yǎng)過夜(1618h)，次日將細(xì)菌用PBS反復(fù)離心洗滌3次，調(diào)整細(xì)菌濃度至約lX109CFU/mL。將重組菌rE.coli1534的單個(gè)菌落首先接種于含100yg/mL氨芐青霉素的35mlLB培養(yǎng)基，37t:振蕩培養(yǎng)過夜，次日取出50yL再接種于5mL含100yg/mL氨芐青霉素的LB培養(yǎng)基，37t:振蕩培養(yǎng)約2h，使細(xì)菌處于大約對(duì)數(shù)生長(zhǎng)中期，0De。。=0.5_0.7時(shí)，加入誘導(dǎo)劑100mmoL/LIPTG至終濃度為0.2mmol/L，37。C繼續(xù)培養(yǎng)3h后終止誘導(dǎo)，然后將細(xì)菌用PBS反復(fù)離心洗滌3次，調(diào)整細(xì)菌濃度至約1X109CFU/mL。將重組菌pnirBMisL-fedF的單個(gè)菌落接種于含100yg/mL氨節(jié)青霉素的5mlLB培養(yǎng)基，于37t:首先在有氧的環(huán)境中振蕩培養(yǎng)過夜，再置于厭氧罐中誘導(dǎo)表達(dá)6h，然后將細(xì)菌用PBS反復(fù)離心洗滌3次，調(diào)整細(xì)菌濃度至約IX109CFU/mL。上述培養(yǎng)的野生型大腸桿菌及誘導(dǎo)表達(dá)后的重組菌與相應(yīng)單克隆抗體或抗血清作玻板凝集試驗(yàn)，在確認(rèn)凝集試驗(yàn)陽(yáng)性，而陰性對(duì)照不凝集后，將上述細(xì)菌用于黏附和黏附抑制試驗(yàn)。分別取上述野生菌或誘導(dǎo)表達(dá)的重組菌菌液0.5mL，在其中添加終濃度為1%甘露糖于37。C作用30min后和0.5mL小腸上皮細(xì)胞混合，再于37。C孵育30min，1000r/min離心5min，用PBR溶液懸浮后取50yL滴于潔凈玻片上，自然干燥，火焰固定，用美蘭染色3-5min，油鏡觀察結(jié)果。發(fā)現(xiàn)M307M基因型3035日齡斷奶仔豬的小腸上皮細(xì)胞均不能與表達(dá)F18ab菌毛標(biāo)準(zhǔn)菌株107/86、誘導(dǎo)表達(dá)的重組大腸桿菌rE.colil534及誘導(dǎo)表達(dá)的重組大腸桿菌pnirBMisL-fedF發(fā)生黏附作用，為抗性型(見圖2)。4)對(duì)AA抗性型群體的早期生長(zhǎng)速度、繁殖性能、一般抗病力等性狀持續(xù)進(jìn)行檢測(cè)和選擇，組建第一個(gè)世代以AG和GG敏感型群體為對(duì)照，對(duì)AA抗性型群體初生重；35日齡斷奶重；60kg(后備豬)體長(zhǎng)、體高、后軀寬和背膘厚；繁殖性能已經(jīng)穩(wěn)定的第3和第4胎次的總產(chǎn)仔數(shù)(TNB);產(chǎn)活仔數(shù)(NBA)、初生窩重(BWL)、斷奶成活數(shù)(麗)及斷奶窩重(WWL);異嗜性粒細(xì)胞與淋巴細(xì)胞比率(Heterophil/Lymphocyte，H/L)、綿羊紅細(xì)胞(she印bloodredcell,SRBC)抗體滴度、紅細(xì)胞計(jì)數(shù)(RBC)、紅細(xì)胞壓積(HCT)、紅細(xì)胞平均體積(MCV)、紅細(xì)胞平均血紅蛋白含量(MCH)，紅細(xì)胞平均血紅蛋白濃度(MCHC)、血小板計(jì)數(shù)(PLT)、血小板平均體積(MPV)、血小板壓積(PCT)、血小板體積分布寬度(PDW)、紅細(xì)胞體積分布寬度(RDW)、血紅蛋白(HGB)、白細(xì)胞計(jì)數(shù)(WTBC)等指標(biāo)進(jìn)行持續(xù)測(cè)定，發(fā)現(xiàn)蘇太豬抗病育種基礎(chǔ)群中FUT1基因第307位點(diǎn)的AA基因型(大腸桿菌病抗性型)不僅對(duì)仔豬斷奶后水腫病和腹瀉病具有抗性，而且具有較高的早期生長(zhǎng)發(fā)育性能、繁殖性能和一般抗病力(見表1-表5)。表1蘇太豬F18+抗病育種基礎(chǔ)群FUT1基因與早期生長(zhǎng)發(fā)育的關(guān)系<table>tableseeoriginaldocumentpage7</column></row><table>注字母相同為差異不顯著，字母不同差異顯著表2蘇太豬F18+抗病育種基礎(chǔ)群FUT1基因與第3胎繁殖性能關(guān)系<table>tableseeoriginaldocumentpage7</column></row><table>注字母相同為差異不顯著，字母不同差異顯著表3蘇太豬F18+抗病育種基礎(chǔ)群FUT1基因與第4胎繁殖性能關(guān)系<table>tableseeoriginaldocumentpage7</column></row><table>注:字母相同為差異不顯著，字母不同差異顯著表4蘇太豬F18+抗病育種基礎(chǔ)群FUT1基因與血常規(guī)指標(biāo)關(guān)系指標(biāo)AA基因型AG基因型GG基因型紅細(xì)胞計(jì)數(shù)(RBC)7.213±1.0336.027±1.0097.475±1.195紅細(xì)胞壓積(HCT)37.183士2.12035.867±2.12036.400±3.672紅細(xì)胞平均體積(MCV)51.500±2.08349.550±3.40448.800±2.404紅細(xì)胞平均血紅蛋白含量(MCH)16.節(jié)1.08715.633±1.12914.95Ot0.778紅細(xì)胞平均血紅蛋白濃度(MCHC)313.50±9.39315.33±4.41307條1.41血小板計(jì)數(shù)(PLT)568.67±144.10494.67±251.58645.50±199.70血小板平均傳譯只(MPV)8.450±0.3278.383±0.4%8350±0.354血小板壓積(PCT)0.480±0.1180.415±0.1980.533±0.113血小板體積分布寬度(PDW)10.583±0.5]910.464±0.59510.35純636紅細(xì)胞體積分布寬度(RDW)17.917士1.29818.833±3.22419.700±2,968血紅蛋白(HGB)116.50±16.44a94.33±16.58b97.50±12.02b白細(xì)胞計(jì)數(shù)(WTBC)26.283土2.%4322.017±4.585b19.400l:4.071b注字母不同差異顯著表5蘇太豬F18+抗病育種基礎(chǔ)群FUT1基因與部分免疫的指標(biāo)關(guān)系基因型個(gè)體數(shù)H值L值H/L值SRBC抗體滴度(log2)AA13536.15±11.0670.68±11.000.56±0.32a1.46±U2AG35136.99±16.8968.21±14.520.69±0.59b1.60±1.28GG9037.45±17.1769.01±14.990.69±0.62b1.66±1.33注字母不同差異顯著5)將蘇太豬F18+大腸桿菌抗病育種基礎(chǔ)群繼續(xù)進(jìn)行FUT1基因的基因型測(cè)定，選留AA基因型個(gè)體，對(duì)AA抗性型群體的早期生長(zhǎng)速度、繁殖性能、一般抗病力等性狀進(jìn)行檢測(cè)和選擇，利用有利分子遺傳標(biāo)記和常規(guī)育種值估計(jì)，確定分子綜合選擇指數(shù)(I=MS+EBV，其中MS代表分子評(píng)分，EBV為估計(jì)育種值)，建立分子標(biāo)記輔助擇(MAS)體系。6)對(duì)試驗(yàn)豬實(shí)行五階段選擇，運(yùn)用BLUP模型進(jìn)行種豬的遺傳評(píng)估。測(cè)定的主要項(xiàng)目有生長(zhǎng)速度、活體膘厚、體尺、體型外貌評(píng)定、繁殖性能等，同時(shí)剔除出現(xiàn)遺傳損征的個(gè)體。通過測(cè)定和評(píng)定，選留符合育種目標(biāo)的個(gè)體。第一次選擇階段仔公豬在25日齡前初選，仔母豬在40日齡左右，體重約8-9Kg第二次選擇階段公豬在體重約17-18Kg，進(jìn)入測(cè)定站前選留，母豬在種豬出售前體重約20-25Kg之間進(jìn)行，選中母豬進(jìn)入測(cè)定站第三次選擇階段公豬達(dá)50Kg，母豬達(dá)60Kg體重時(shí)進(jìn)行第四次選擇($選擇)階段公豬體重達(dá)80Kg時(shí)(所有項(xiàng)目都測(cè)定結(jié)束)第五次選擇階段公母豬年齡一歲半，有2胎產(chǎn)仔成績(jī)7)公母豬根據(jù)綜合指數(shù)值及體質(zhì)外貌鑒定選留，公豬留種率約30%，母豬留種率約50%，即綜合指數(shù)在平均數(shù)以上部分。個(gè)別數(shù)量性狀表現(xiàn)很好，得分在單項(xiàng)總分的90%以上種豬也可入選(主要為綜合育種值及產(chǎn)仔數(shù)2項(xiàng))。8)每個(gè)世代選留公豬20頭，母豬100頭；母豬選留強(qiáng)度達(dá)到60:l，種公豬達(dá)到220:l，這樣就保證了十分優(yōu)秀的后備豬才能被留作種用。89)實(shí)行繼代選育與世代重疊相結(jié)合的選育方法。為了保留高繁殖力和提高生長(zhǎng)速度與瘦肉率，還采取了高強(qiáng)度的選留辦法，為此要擴(kuò)大每個(gè)世代的留種數(shù)量，做到有充分選擇余地。到后備母豬選定時(shí)，母親已繁殖第二胎，多了一胎的產(chǎn)仔信息，有利于選擇的正確度。10)采取綜合指數(shù)法進(jìn)行選擇。為了盡可能地客觀評(píng)定每一頭后備種豬的種用價(jià)值，采取綜合指數(shù)法對(duì)后備豬進(jìn)行選擇。反映瘦肉率和生長(zhǎng)速度的活體膘厚及日增重的綜合育種值在綜合指數(shù)中公豬占70%，母豬占55%，體長(zhǎng)、臀寬占10%，兩項(xiàng)合計(jì)分別占80%、65%，在綜合指數(shù)中占了很大比例，這為提高新品系豬瘦肉率、生長(zhǎng)速度創(chuàng)造了條件。11)每隔二個(gè)世代對(duì)后備豬同胞進(jìn)行屠宰，測(cè)定其瘦肉率、肉質(zhì)性狀和生長(zhǎng)速度、飼料報(bào)酬等，掌握選育進(jìn)展與效果，為該世代后備豬選留提供依據(jù)。12)在蘇太豬抗F18大腸桿菌病新品系的培育過程中，系統(tǒng)地開展了產(chǎn)仔數(shù)選擇方法、提高瘦肉率選擇方法、生長(zhǎng)發(fā)育性狀遺傳參數(shù)估測(cè)、180日齡體重遺傳趨勢(shì)分析、用BLUP法估計(jì)不同日齡體重的育種值、種質(zhì)特性研究、配套雜交組合篩選、窩產(chǎn)瘦肉量試驗(yàn)等配套技術(shù)，用群體繼代選育和分子標(biāo)記輔助選擇的方法，逐步實(shí)現(xiàn)既定育種目標(biāo)，抗病力抗斷奶仔豬腹瀉和水腫病，并具有很強(qiáng)的抗應(yīng)激能力和抗逆性；繁殖性能新品系豬總產(chǎn)仔數(shù)最高達(dá)到19頭，核心群經(jīng)產(chǎn)母豬產(chǎn)仔在14.5頭以上；生長(zhǎng)性能175日齡體重90Kg，料重比3.0:1;屠宰性能及肉質(zhì)胴體瘦肉率57%以上，肉質(zhì)優(yōu)良，肌內(nèi)脂肪^2.5%，無肉色蒼白、質(zhì)地松軟、切面滲出(PSE)和深色、硬實(shí)、干燥肉(DFD)，系水力(滴水損失)《3%，大理石紋評(píng)分2.8-3.0，肉色評(píng)分3.0-4.0，屠宰后45分鐘內(nèi)測(cè)定的酸堿度(PH45)在6.3-6.6之間，屠宰后24小時(shí)測(cè)定的酸堿度(PH)在5.4_5.8之間，嫩度《3.6%。建立的新品系核心群目前在600頭以上。9權(quán)利要求一種蘇太豬抗F18大腸桿菌病新品系的培育方法，其特征在于，該方法包括以下步驟(1)以蘇太豬核心群中FUT1基因M307AG型個(gè)體為親本，雜交后代按常規(guī)選種標(biāo)準(zhǔn)選留后代個(gè)體，組建蘇太豬F18大腸桿菌抗病育種基礎(chǔ)群；(2)對(duì)基礎(chǔ)群中AA抗性型群體的繁殖性能、生長(zhǎng)速度、瘦肉率、胴體品質(zhì)等性狀進(jìn)行檢測(cè)和選擇，組建第一個(gè)世代；(3)用群體繼代選育和分子標(biāo)記輔助選擇的方法，經(jīng)過4-5個(gè)世代，逐步實(shí)現(xiàn)既定育種目標(biāo)，建立新品系核心群。2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的蘇太豬抗F18大腸桿菌病新品系的培育方法，其特征在于步驟(1)所述的蘇太豬F18大腸桿菌抗病育種基礎(chǔ)群的組建方法具體是1)利用FUT1基因標(biāo)記對(duì)蘇太豬核心群全面檢測(cè)基因型根據(jù)已公布的豬FUT1基因序列L50534設(shè)計(jì)引物，上游引物為5'-CCAACGCCTCCGATTCCTGT-3'，下游引物為5'-GTGCATGGCAGGCTGGATGA-3'，預(yù)期擴(kuò)增片段為161bp，PCR產(chǎn)物經(jīng)10%的聚丙烯酰胺凝膠電泳銀染分析；2)利用檢測(cè)到的AG型個(gè)體為親本，結(jié)合生產(chǎn)性能確定交配組合進(jìn)行雜交，結(jié)合生產(chǎn)性能確定交配組合；3)對(duì)雜交后代大腸桿菌F18抗性/易感性進(jìn)行進(jìn)一步驗(yàn)證，結(jié)合常規(guī)選種的標(biāo)準(zhǔn)，選留后代個(gè)體，并且在相同飼養(yǎng)管理環(huán)境條件下按家系分開飼養(yǎng)，組建蘇太豬F18+大腸桿菌抗病育種基礎(chǔ)群。3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的蘇太豬抗F18大腸桿菌病新品系的培育方法，其特征在于步驟(2)第一世代的組建具體是1)將蘇太豬F18+大腸桿菌抗病育種基礎(chǔ)群繼續(xù)進(jìn)行FUT1基因的基因型測(cè)定，選留AA基因型個(gè)體，對(duì)AA抗性型群體的早期生長(zhǎng)速度、繁殖性能、一般抗病力等性狀進(jìn)行檢測(cè)和選擇，利用有利分子遺傳標(biāo)記和常規(guī)育種值估計(jì)，確定分子綜合選擇指數(shù)，建立MAS體系；2)對(duì)試驗(yàn)豬實(shí)行五階段選擇，運(yùn)用BLUP模型進(jìn)行種豬的遺傳評(píng)估測(cè)定的主要項(xiàng)目有生長(zhǎng)速度、活體膘厚、體尺、體型外貌評(píng)定、繁殖性能等，同時(shí)剔除出現(xiàn)遺傳損征的個(gè)體；通過測(cè)定和評(píng)定，選留符合育種目標(biāo)的個(gè)體；第一次選擇階段仔公豬在25日齡前初選，仔母豬在40日齡左右，體重約8-9Kg;第二次選擇階段公豬在體重約17-18Kg，進(jìn)入測(cè)定站前選留，母豬在種豬出售前體重約20-25Kg之間進(jìn)行，選中母豬進(jìn)入測(cè)定站；第三次選擇階段公豬達(dá)50Kg，母豬達(dá)60Kg體重時(shí)進(jìn)行；第四次選擇階段公豬體重達(dá)80Kg時(shí)；第五次選擇階段公母豬年齡一歲半，有2胎產(chǎn)仔成績(jī)；3)公母豬根據(jù)綜合指數(shù)值及體質(zhì)外貌鑒定選留，公豬留種率約30%，母豬留種率約50%，即綜合指數(shù)在平均數(shù)以上部分；個(gè)別數(shù)量性狀表現(xiàn)很好，得分在單項(xiàng)總分的90%以上種豬也可入選。全文摘要本發(fā)明涉及蘇太豬抗F18大腸桿菌病新品系的培育方法，具體是第一步利用FUT1基因標(biāo)記對(duì)蘇太豬核心群檢測(cè)基因型，選擇AG個(gè)體為親本進(jìn)行雜交，雜交后代組建為抗病育種基礎(chǔ)群；第二步選留基礎(chǔ)群中AA型個(gè)體，對(duì)AA型群體重要經(jīng)濟(jì)性狀進(jìn)行檢測(cè)和選擇，進(jìn)行分子標(biāo)記育種效率評(píng)估，同時(shí)運(yùn)用BLUP模型進(jìn)行種豬的遺傳評(píng)估，組建第一個(gè)世代；第三步采用常規(guī)育種技術(shù)并結(jié)合分子標(biāo)記輔助選擇進(jìn)行持續(xù)測(cè)定分析和世代選育提高，經(jīng)過4-5個(gè)世代，育成的新品系豬具有抗斷奶仔豬腹瀉和水腫病、瘦肉率高、肉質(zhì)優(yōu)、飼料報(bào)酬高、產(chǎn)仔數(shù)多、抗應(yīng)激、適應(yīng)環(huán)境能力強(qiáng)的優(yōu)點(diǎn)。本發(fā)明還可為其他培育豬種的抗斷奶仔豬腹瀉和水腫病抗病育種提供指導(dǎo)。文檔編號(hào)C12Q1/68GK101792798SQ20101001820公開日2010年8月4日申請(qǐng)日期2010年1月19日優(yōu)先權(quán)日2010年1月19日發(fā)明者劉楷,包文斌,華金第,葉蘭,吳圣龍,周洪貴,孫壽永,朱國(guó)強(qiáng),朱璟,潘章源,鞠慧萍,黃雪根申請(qǐng)人:揚(yáng)州大學(xué)