專利名稱：竹抗寒性鑒定與評價的方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種適用于不同竹種離體抗寒性鑒定與評價的技術(shù)體系，具體為竹抗 寒性鑒定與評價的方法。
背景技術(shù)：
以往竹的研究多集中在栽培和推廣上，對竹離體抗寒性鑒定和評價技術(shù)體系的研 究未見報道，由于竹子很難獲得種子，對竹子抗寒性的評價主要是針對自然條件下生長的 竹子，研究其與抗寒有關(guān)的單一生理生化指標(biāo)，而且個體生長不一致，不能從客觀上很好的 評價竹子的抗寒性，具有一定的局限性。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明正是針對以上技術(shù)問題，提供一種解決了竹難以應(yīng)用種子獲得生長一致的 小竹子進行抗寒性鑒定的竹抗寒性鑒定與評價的方法。本發(fā)明的具體技術(shù)方案如下竹抗寒性鑒定與評價的方法，包括以下步驟a)取同一竹齡且生長一致的30cm枝條為材料，洗凈擦干，石蠟封口，在低溫條件 下處理12h，以未經(jīng)處理的枝條為對照；b)將處理后的一部分葉片于液氮中速凍30min后保存于_80°C冰箱，另一部分葉 片用于電導(dǎo)率分析，每個樣品設(shè)置3次重復(fù)，測定處理后不同竹種的電導(dǎo)率、可溶性糖含 量、可溶性蛋白含量、丙二醛、脯氨酸、超氧化物歧化酶活性、過氧化物酶活性；c)按照灰色系統(tǒng)理論，以不同竹種的生理生化指標(biāo)及其抗寒隸屬函數(shù)均值為數(shù)據(jù) 集合，建立灰色系統(tǒng)，根據(jù)關(guān)聯(lián)分析公理計算各生理生化指標(biāo)與抗寒隸屬函數(shù)均值間關(guān)聯(lián) 系數(shù)，并據(jù)此對不同生理生化指標(biāo)對竹抗寒性的作用進行排序。其中隸屬函數(shù)值的計算方法如下 上式中X' 表示某竹種相應(yīng)指標(biāo)的抗寒隸屬函數(shù)值；XU表示某竹種相應(yīng)指標(biāo)的 測定值；Ximax和ximin分別代表相應(yīng)指標(biāo)的最大和最小測定值；$表示竹種的抗寒隸屬函數(shù) 均值；?。橹笜?biāo)數(shù)，凡指標(biāo)與抗寒性正相關(guān)則按公式(1)計算，反之按公式(2)計算。d)采用主成分分析的方法，對與竹子抗寒性密切相關(guān)的生理生化指標(biāo)，可溶性 糖含量、可溶性蛋白含量、丙二醛、脯氨酸、超氧化物歧化酶活性、過氧化物酶活性，利用 SPSS17軟件進行主成分分析，得到抗寒性評價的4個主成分后，即第一主成分為丙二醛和 可溶性蛋白含量；第二主成分為POD活性和脯氨酸含量；第三主成分為可溶性糖；第四主成 分為SOD活性。通過計算主成分與相應(yīng)的方差貢獻率乘積之和得到植株抗寒性的綜合評價，評價得分方法表示如下 竹抗寒性鑒定與評價的方法，包括a)電導(dǎo)率的測定取生長一致的竹葉葉片，用自來水輕輕沖洗除去表面站污物，用 蒸餾水漂洗1-2次，再用重蒸水沖洗1-2次，用紙巾輕輕吸干葉片表面水分，避開葉脈，用打 孔器打取等量圓片，混勻后稱取0. 5g，設(shè)置三次重復(fù)，分別放入裝有20ml重蒸水的試管中， 浸沒樣品，用真空泵抽真空lOmin，25°C、150r min—1震蕩12h，用電導(dǎo)儀(EUTECH Con51型) 測定浸泡液電導(dǎo)率R，再加上試管塞，在水浴鍋煮沸l(wèi)Omin，將組織全部殺死，冷卻至室溫后 在同樣條件下測定溶液的電導(dǎo)率R1，計算出電解質(zhì)滲出率來表示該樣品經(jīng)低溫處理后細胞 質(zhì)膜的透性。相對電導(dǎo)率=R/RlxlOO%。b)可溶性糖含量的測定采用蒽酮比色法。c)可溶性蛋白含量的測定采用考馬斯亮藍G-250染色法。d)丙二醛(MDA)的測定采用硫代巴比妥酸(TBA)法。e)脯氨酸的測定采用酸性茚三酮法。f)超氧化物歧化酶(SOD)活性的測定采用氮藍四唑(NBT)還原法。g)過氧化物酶(POD)活性的測定采用愈創(chuàng)木酚法。本發(fā)明的技術(shù)效果表現(xiàn)在適用于不同竹種離體抗寒性鑒定與評價的技術(shù)體系， 解決了竹難以應(yīng)用種子獲得生長一致的小竹子進行抗寒性鑒定的難題。
具體實施例方式下面結(jié)合具體實施方式
對本發(fā)明作進一步說明實施例竹抗寒性鑒定與評價的方法，包括以下步驟a)取同一竹齡且生長一致的30cm枝條為材料，洗凈擦干，石蠟封口，在低溫條件 下處理12h，以未經(jīng)處理的枝條為對照；b)將處理后的一部分葉片于液氮中速凍30min后保存于_80°C冰箱，另一部分葉 片用于電導(dǎo)率分析，每個樣品設(shè)置3次重復(fù)，測定處理后不同竹種的電導(dǎo)率、可溶性糖含 量、可溶性蛋白含量、丙二醛、脯氨酸、超氧化物歧化酶活性、過氧化物酶活性；c)按照灰色系統(tǒng)理論，以不同竹種的生理生化指標(biāo)及其抗寒隸屬函數(shù)均值為數(shù)據(jù) 集合，建立灰色系統(tǒng)，根據(jù)關(guān)聯(lián)分析公理計算各生理生化指標(biāo)與抗寒隸屬函數(shù)均值間關(guān)聯(lián) 系數(shù)，并據(jù)此對不同生理生化指標(biāo)對竹抗寒性的作用進行排序。其中隸屬函數(shù)值的計算方法如下XI =H (2)
L 」y V"VwVV
巧=丄￡《(3)
n M 上式中V 表示某竹種相應(yīng)指標(biāo)的抗寒隸屬函數(shù)值；xu表示某竹種相應(yīng)指標(biāo)的 測定值；Ximax和ximin分別代表相應(yīng)指標(biāo)的最大和最小測定值；$表示竹種的抗寒隸屬函數(shù) 均值；！！為指標(biāo)數(shù)，凡指標(biāo)與抗寒性正相關(guān)則按公式(1)計算，反之按公式(2)計算。
4
d)采用主成分分析的方法，對與竹子抗寒性密切相關(guān)的生理生化指標(biāo)，可溶性 糖含量、可溶性蛋白含量、丙二醛、脯氨酸、超氧化物歧化酶活性、過氧化物酶活性，利用 SPSS17軟件進行主成分分析，得到抗寒性評價的4個主成分后，即第一主成分為丙二醛和 可溶性蛋白含量；第二主成分為POD活性和脯氨酸含量；第三主成分為可溶性糖；第四主成 分為SOD活性。通過計算主成分與相應(yīng)的方差貢獻率乘積之和得到植株抗寒性的綜合評 價，評價得分方法表示如下F = 0. 3345 !+0. 1948F2+0. 1129F3+0. 1011F4竹抗寒性鑒定與評價的方法，包括a)電導(dǎo)率的測定取生長一致的竹葉葉片，用自來水輕輕沖洗除去表面站污物，用 蒸餾水漂洗1-2次，再用重蒸水沖洗1-2次，用紙巾輕輕吸干葉片表面水分，避開葉脈，用打 孔器打取等量圓片，混勻后稱取0. 5g，設(shè)置三次重復(fù)，分別放入裝有20ml重蒸水的試管中， 浸沒樣品，用真空泵抽真空lOmin，25°C、150r min—1震蕩12h，用電導(dǎo)儀(EUTECH Con51型) 測定浸泡液電導(dǎo)率R，再加上試管塞，在水浴鍋煮沸l(wèi)Omin，將組織全部殺死，冷卻至室溫后 在同樣條件下測定溶液的電導(dǎo)率R1，計算出電解質(zhì)滲出率來表示該樣品經(jīng)低溫處理后細胞 質(zhì)膜的透性。相對電導(dǎo)率=R/Rlxl00%。b)可溶性糖含量的測定采用蒽酮比色法。c)可溶性蛋白含量的測定采用考馬斯亮藍G-250染色法。d)丙二醛(MDA)的測定采用硫代巴比妥酸(TBA)法。e)脯氨酸的測定采用酸性茚三酮法。f)超氧化物歧化酶(SOD)活性的測定采用氮藍四唑(NBT)還原法。g)過氧化物酶(P0D)活性的測定采用愈創(chuàng)木酚法。竹抗寒性鑒定與評價的方法適用于不同竹種離體抗寒性鑒定與評價的技術(shù)體系， 解決了竹難以應(yīng)用種子獲得生長一致的小竹子進行抗寒性鑒定的難題。
權(quán)利要求
竹抗寒性鑒定與評價的方法，其特征在于包括以下步驟a)取同一竹齡且生長一致的30cm枝條為材料，洗凈擦干，石蠟封口，在低溫條件下處理12h，以未經(jīng)處理的枝條為對照；b)將處理后的一部分葉片于液氮中速凍30min后保存于-80℃冰箱，另一部分葉片用于電導(dǎo)率分析，每個樣品設(shè)置3次重復(fù)，測定處理后不同竹種的電導(dǎo)率、可溶性糖含量、可溶性蛋白含量、丙二醛、脯氨酸、超氧化物歧化酶活性、過氧化物酶活性；c)按照灰色系統(tǒng)理論，以不同竹種的生理生化指標(biāo)及其抗寒隸屬函數(shù)均值為數(shù)據(jù)集合，建立灰色系統(tǒng)，根據(jù)關(guān)聯(lián)分析公理計算各生理生化指標(biāo)與抗寒隸屬函數(shù)均值間關(guān)聯(lián)系數(shù)，并據(jù)此對不同生理生化指標(biāo)對竹抗寒性的作用進行排序。其中隸屬函數(shù)值的計算方法如下 <mrow><msubsup> <mi>X</mi> <mi>ij</mi> <mo>&prime;</mo></msubsup><mo>=</mo><mfrac> <mrow><msub> <mi>X</mi> <mi>ij</mi></msub><mo>-</mo><msub> <mi>X</mi> <mrow><mi>i</mi><mi>min</mi> </mrow></msub> </mrow> <mrow><msub> <mi>X</mi> <mrow><mi>i</mi><mi>max</mi> </mrow></msub><mo>-</mo><msub> <mi>X</mi> <mrow><mi>i</mi><mi>min</mi> </mrow></msub> </mrow></mfrac><mo>-</mo><mo>-</mo><mo>-</mo><mrow> <mo>(</mo> <mn>1</mn> <mo>)</mo></mrow> </mrow> <mrow><msubsup> <mi>X</mi> <mi>ij</mi> <mo>&prime;</mo></msubsup><mo>=</mo><mn>1</mn><mo>-</mo><mfrac> <mrow><msub> <mi>X</mi> <mi>ij</mi></msub><mo>-</mo><msub> <mi>X</mi> <mrow><mi>i</mi><mi>min</mi> </mrow></msub> </mrow> <mrow><msub> <mi>X</mi> <mrow><mi>i</mi><mi>max</mi> </mrow></msub><mo>-</mo><msub> <mi>X</mi> <mrow><mi>i</mi><mi>min</mi> </mrow></msub> </mrow></mfrac><mo>-</mo><mo>-</mo><mo>-</mo><mrow> <mo>(</mo> <mn>2</mn> <mo>)</mo></mrow> </mrow> <mrow><msubsup> <mover><mi>X</mi><mo>&OverBar;</mo> </mover> <mi>ij</mi> <mo>&prime;</mo></msubsup><mo>=</mo><mfrac> <mn>1</mn> <mi>n</mi></mfrac><munderover> <mi>&Sigma;</mi> <mrow><mi>j</mi><mo>=</mo><mn>1</mn> </mrow> <mi>n</mi></munderover><msubsup> <mi>X</mi> <mi>ij</mi> <mo>&prime;</mo></msubsup><mo>-</mo><mo>-</mo><mo>-</mo><mrow> <mo>(</mo> <mn>3</mn> <mo>)</mo></mrow> </mrow>上式中X′ij表示某竹種相應(yīng)指標(biāo)的抗寒隸屬函數(shù)值；Xij表示某竹種相應(yīng)指標(biāo)的測定值；Ximax和Ximin分別代表相應(yīng)指標(biāo)的最大和最小測定值；表示竹種的抗寒隸屬函數(shù)均值；n為指標(biāo)數(shù)，凡指標(biāo)與抗寒性正相關(guān)則按公式(1)計算，反之按公式(2)計算。d)采用主成分分析的方法，對與竹子抗寒性密切相關(guān)的生理生化指標(biāo)，可溶性糖含量、可溶性蛋白含量、丙二醛、脯氨酸、超氧化物歧化酶活性、過氧化物酶活性，利用SPSS17軟件進行主成分分析，得到抗寒性評價的4個主成分后，即第一主成分為丙二醛和可溶性蛋白含量；第二主成分為POD活性和脯氨酸含量；第三主成分為可溶性糖；第四主成分為SOD活性。通過計算主成分與相應(yīng)的方差貢獻率乘積之和得到植株抗寒性的綜合評價，評價得分方法表示如下F＝0.3345F1+0.1948F2+0.1129F3+0.1011F4。F2009102163873C0000014.tif
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的竹抗寒性鑒定與評價的方法，其特征在于a)電導(dǎo)率的測定取生長一致的竹葉葉片，用自來水輕輕沖洗除去表面站污物，用蒸餾 水漂洗1-2次，再用重蒸水沖洗1-2次，用紙巾輕輕吸干葉片表面水分，避開葉脈，用打孔器 打取等量圓片，混勻后稱取0. 5g，設(shè)置三次重復(fù)，分別放入裝有20ml重蒸水的試管中，浸沒 樣品，用真空泵抽真空10min，25°C、150r min—1震蕩12h，用電導(dǎo)儀(EUTECH Con51型)測 定浸泡液電導(dǎo)率R，再加上試管塞，在水浴鍋煮沸l(wèi)Omin，將組織全部殺死，冷卻至室溫后在 同樣條件下測定溶液的電導(dǎo)率R1，計算出電解質(zhì)滲出率來表示該樣品經(jīng)低溫處理后細胞質(zhì) 膜的透性。相對電導(dǎo)率=R/Rlxl00%。b)可溶性糖含量的測定采用蒽酮比色法。c)可溶性蛋白含量的測定采用考馬斯亮藍G-250染色法。d)丙二醛(MDA)的測定采用硫代巴比妥酸(TBA)法。e)脯氨酸的測定采用酸性茚三酮法。f)超氧化物歧化酶(SOD)活性的測定采用氮藍四唑(NBT)還原法。g)過氧化物酶(POD)活性的測定采用愈創(chuàng)木酚法。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種適用于不同竹種離體抗寒性鑒定與評價的技術(shù)體系，具體為竹抗寒性鑒定與評價的方法。竹抗寒性鑒定與評價的方法，其特征在于包括以下步驟a)取同一竹齡且生長一致的30cm枝條對照；b)將處理后的一部分葉片于液氮中速凍30min后保存于-80℃冰箱等竹抗寒性鑒定與評價的方法，其特征在于a)電導(dǎo)率的測定b)可溶性糖含量的測定；c)可溶性蛋白含量的測定d)丙二醛(MDA)的測定e)脯氨酸的測定f)超氧化物歧化酶(SOD)活性的測定g)過氧化物酶(POD)活性的測定法。
文檔編號C12Q1/28GK101852757SQ20091021638
公開日2010年10月6日 申請日期2009年11月27日 優(yōu)先權(quán)日2009年11月27日
發(fā)明者任鵬, 盧學(xué)琴, 曹穎, 段寧, 胡尚連, 陳珂 申請人:胡尚連