專利名稱：一種不動桿菌及其復合菌劑的應用的制作方法
技術領域：
本發(fā)明屬于微生物菌劑技術領域，尤其涉及一種不動桿菌及其復合菌劑的應用。
背景技術：
近年來，由于城市和工業(yè)的迅速發(fā)展，以及農(nóng)業(yè)上廣泛施用化肥，大量污水排入水 體中，使很多水體富營養(yǎng)化。目前，治理水體富營養(yǎng)化的措施主要包括傳統(tǒng)的營養(yǎng)鹽控制 措施；對外源性污染采取截污、污水改道和污水除磷等；對內(nèi)源性污染采取清淤挖泥、營養(yǎng) 鹽鈍化、底層曝氣和稀釋沖刷等一系列措施；化學藥品殺藻、機械撈藻等直接除藻措施；以 浮游動物、魚類和水生高等植物控制水體營養(yǎng)鹽及浮游植物的生物調(diào)控措施。一些研究者 對活性炭吸附、光降解與光催化氧化、臭氧氧化、化學藥劑氧化、膜過濾等技術進行了研究， 但到目前為止尚無有效應用技術。隨著水產(chǎn)養(yǎng)殖業(yè)的快速發(fā)展及集約化養(yǎng)殖水平的提高，水產(chǎn)養(yǎng)殖病害日趨嚴重。 水產(chǎn)養(yǎng)殖業(yè)仍沿襲以往的靜水池塘養(yǎng)殖為主，且大部分為高密度單一品種養(yǎng)殖，切斷了自 然生態(tài)體系的食物鏈循環(huán)，養(yǎng)殖對象的殘剩飼料、排泄物等大量有機物失去了被其它生物 利用的機會，其中的蛋白質及核酸會慢慢分解，產(chǎn)生大量氨等含氮有害物質，過多的氨氮積 累引起魚、蝦病害、死亡和水體的富營養(yǎng)化，為養(yǎng)殖業(yè)帶來巨大的損失。在水產(chǎn)養(yǎng)殖過程中， 池塘水體富營養(yǎng)化現(xiàn)象出現(xiàn)頻繁，嚴重的出現(xiàn)水華。例如在蝦苗期，投喂的餌料絕大部分不 能被蝦苗攝食而流失于水體或沉積到池底，在合適的外界環(huán)境下，有害藻類就會過量繁殖， 最終可能導致水體老化，水生生態(tài)結構破壞，病害暴發(fā)。水體中存在著大量的微生物，既存在有益微生物也存在有害微生物，有益微生物 占據(jù)優(yōu)勢則會凈化水體，促進水產(chǎn)動物的健康生長。近年來，人們開始嘗試在養(yǎng)殖生產(chǎn)中使 用有益微生物菌制劑，以改善水體生態(tài)環(huán)境。目前世界許多國家和地區(qū)如巴西、日本、韓國 等，對有效微生物群技術在農(nóng)業(yè)、畜牧業(yè)和水產(chǎn)養(yǎng)殖上的應用進行了研究。有效微生物群是 從自然界篩選出各種有益微生物，用特定的方法混合培養(yǎng)所形成的微生物復合體系，有效 降解去除水體中一些有害化因子，維護水體中正常浮游生物的種群數(shù)量和結構，使水體自 然生態(tài)將得到平衡。有效微生物群技術在環(huán)保方面的研究工作起步較晚，近幾年來逐步開 始應用在凈化城市生活污水對河流和湖泊的污染及固體廢棄物除臭方面。在養(yǎng)殖水體中 應用的如中科院淡水漁業(yè)研究中心將光合細菌用于鰻池水質凈化和對蝦養(yǎng)殖，大連水產(chǎn)學 院利用光合細菌凈化蝦池水質，黑龍江水產(chǎn)所利用光合細菌降解氨氮；仇麗等利用枯草芽 孢桿菌改善中華絨螯蟹人工育苗水質。光合細菌施放于池塘中，能消除水體中的氨氮、硫化氫、有機酸等有害物質，改善 水體質量，平衡酸堿度，但對于進入水體中的大量大分子有機物質，如養(yǎng)殖動物的排泄物、 殘存飼料、浮游生物殘體等卻無法分解利用；而枯草芽孢桿菌、地衣芽孢桿菌等這類菌株， 它們能分泌多種胞外酶，把大分子有機物質分解成小分子有機物，再進一步礦化生成無機 鹽類，加快了有機物的分解速度，目前絕大部分養(yǎng)殖業(yè)者采用潑灑光合細菌等方法應對，但 總的來說產(chǎn)品還有局限性，不夠完善。
水華產(chǎn)生的主要原因是水質富營養(yǎng)化，我們從富營養(yǎng)化蝦塘底泥中分離純化出一 株不動桿菌菌株，與光合菌、芽孢菌復合制備一種包含多種高效活菌的復合微生物菌劑，可 有效降解或去除水體中一些有害化因子，維護水體中正常浮游生物的種群數(shù)量和結構，使 水體自然生態(tài)得到平衡，是治理湖泊、養(yǎng)殖水體的一種比較有效的方法，同時微生物制劑具 有投加量小，操作簡便，無毒副作用及經(jīng)濟合理等特點，可以較低的成本有效地抑制藻類的 生長，使水體透明度提高，防止水華的發(fā)生。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是克服現(xiàn)有技術的不足，提供一種不動桿菌及其復合菌劑的應用。不動桿菌(AcinetcAacter sp. ) ZJTK-006是從富營養(yǎng)化養(yǎng)殖塘底泥中分離純化得 到的純菌株，保存在中國專利局指定的保藏單位中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生 物中心，保藏日為2009年11月16日，保藏編號為=CGMCCNo. 3452。所述的不動桿菌ZJTK-006的16SrDNA具有SEQIDNo. 1的序列。不動桿菌 (Acinetobacter sp.) ZJTK-006用于制備微生物復合菌劑。所述的微生物復合菌劑的制備 方法為將不動桿菌(Acinetobacter sp. )ZJTK-006與枯草芽孢桿菌(Bacilluscereus)As 1. 1414、沼澤紅假單胞菌(lihodopseudomonas palustris)As 1. 2181，經(jīng)分別培養(yǎng)后，按其 培養(yǎng)物以113的體積比例配比均勻混合制成的微生物復合菌劑。微生物復合菌劑用 于富營養(yǎng)化養(yǎng)殖水體中的氨氮、葉綠素a處理?？莶菅挎邨U菌(Bacillus cereus)As 1. 1414及沼澤紅假單胞菌 (Rhodopseudomonas palustris)As 1. 2181來源于中國普通微生物菌種保藏中心。本發(fā)明與現(xiàn)有技術相比具有的有益效果本發(fā)明的不動桿菌(Acinetobactersp. )ZJTK_006CGMCCNo. 3452、枯草芽孢桿菌、 沼澤紅假單胞菌分別按各自的培養(yǎng)條件進行培養(yǎng)，然后按1 1 3的體積比例配比均勻 混合制成的微生物復合菌劑，能夠適應高密度養(yǎng)殖富營養(yǎng)化水體的氨氮處理。這些菌株單 獨使用時，雖然具有一定的去除氨氮能力，但是效果不是很明顯，本發(fā)明由于菌株之間具有 協(xié)同互補作用，產(chǎn)生了與其單獨作用意想不到的效果，同時比枯草芽孢桿菌、沼澤紅假單胞 菌混合使用時的去除氨氮、葉綠素a效果更好。微生物復合菌劑可使水體中的菌相與藻相 達到平衡，維持穩(wěn)定良好水質條件，使富營養(yǎng)化氨氮養(yǎng)殖水體得到凈化處理，還有一定的去 除葉綠素a的作用，對富營養(yǎng)化水體葉綠素a含量的降低和水體透明度的提高有明顯的效^ ο


圖1為不動桿菌ZJTK-006革蘭氏染色照片；圖2為不動桿菌ZJTK-006CGMCCNo. 3452的電鏡照片；圖3為實施例5水體氨氮變化趨勢；圖4為實施例5水體葉綠素a變化趨勢。
具體實施例方式不動桿菌(AcinetcAacter sp. ) ZJTK-006是從富營養(yǎng)化養(yǎng)殖塘底泥中分離純化得到的純菌株，保存在中國專利局指定的保藏單位中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生 物中心，保藏日為2009年11月16日，保藏編號為=CGMCCNo. 3452。所述的不動桿菌ZJTK-006的16SrDNA具有SEQIDNo. 1的序列。不動桿菌 (Acinetobacter sp.) ZJTK-006用于制備微生物復合菌劑。所述的微生物復合菌劑的制備 方法為將不動桿菌(Acinetobacter sp. )ZJTK-006與枯草芽孢桿菌(Bacilluscereus)As 1. 1414、沼澤紅假單胞菌(lihodopseudomonas palustris)As 1. 2181，經(jīng)分別培養(yǎng)后，按其 培養(yǎng)物以113的體積比例配比均勻混合制成的微生物復合菌劑。微生物復合菌劑用 于富營養(yǎng)化養(yǎng)殖水體中的氨氮、葉綠素a處理?？莶菅挎邨U菌(Bacillus cereus)As 1. 1414及沼澤紅假單胞菌 (Rhodopseudomonas palustris)As 1. 2181來源于中國普通微生物菌種保藏中心。實施例1分別采集富營養(yǎng)化養(yǎng)殖塘水體及底泥，接種到液體基礎培養(yǎng)基中，于32-35°C，搖 床轉速150r/min下培養(yǎng)2天，以水體中的氨氮值為指標，將氨氮降低明顯的液體培養(yǎng)混合 微生物稀釋涂布于固體基礎培養(yǎng)基上，以上操作重復二次，挑取長勢良好的單菌落，作為初 篩菌。將初篩菌株接種在液體分離培養(yǎng)基中，于32-35°C，搖床轉速150r/min下進行培養(yǎng) 3-4天，測定MC-LR的含量，確定菌株降解MC-LR的能力強弱，挑選氨氮降低明顯同時又對 MC-LR具有一定降解作用的菌落劃單菌落純化兩次，即得到所篩選菌株ZJTK-006。基礎培養(yǎng)基:Na2HP042. 4g, ΚΗ2Ρ042· 6g, NaClO. 328g, MgSO4 · 7H20 0. 5g, CaCl2 · 2H20 0. 013g，NH4Cll. Og，葡萄糖2g，加水溶解，補充蒸餾水至1000ml, PH7. 2-7. 5(固體需加2% 瓊脂)。分離培養(yǎng)基:Na2HP042.4g, ΚΗ2Ρ042· 6g, NaClO. 328g, MgSO4 · 7H200. 5g, CaCl2 · 2H200. 013g, MC-LRO. 005g，加水溶解，補充蒸餾水至 1000ml，PH7. 2-7. 5。培養(yǎng)溫度32-37 °C，適宜溫度32-35 °C，震蕩培養(yǎng)。實施例2本發(fā)明分離出一株不動桿菌(AcinetcAacter sp. ) ZJTK-006，根據(jù)其形態(tài)特征及 基于16SrDNA序列的系統(tǒng)進化分析對其進行鑒定。其特征在于它是從富營養(yǎng)水塘底泥中分 離純化得到的純菌株，其16SrDNA具有SEQIDNo. 1的序列，保存在中國專利局指定的保藏單 位中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心，保存編號為CGMCCNo. 3452。(1)不動桿菌(Acinetobacter sp. ) ZJTK-006的形態(tài)及理化特征形態(tài)特征近球形短桿菌，0. 5-1. OymXO. 6-1. 6 μ m,不產(chǎn)芽孢，革蘭氏染色陰性，偶爾脫色 困難，(見圖)；菌落呈乳白色，圓形，邊緣整齊。理化特征該菌株專性好氧，接觸酶陽性，氧化酶陰性，不能進行葡萄糖發(fā)酵，不能利用乙醇 發(fā)酵，V. P.試驗陽性，不具運動性，明膠水解陰性，檸檬酸鹽利用陽性，葡萄糖產(chǎn)酸陰性， 丙二酸鹽陽性，L-苯丙氨酸陽性，化能異養(yǎng)。依據(jù)《伯杰細菌分類手冊》提供的鑒定方法和上述試驗結果表明，可初步判定為不 動桿菌屬的菌株。
(2) 16S rDNA序列的系統(tǒng)進化分析測定不動桿菌16S rDNA部分序列。下表在本發(fā)明所述的依據(jù)不動桿菌序列從GeneBank中調(diào)出的部分相關菌株的 16SrDNA序列的登錄號。
權利要求
1.一種不動桿菌(AcinetcAacter sp.) ZJTK-006，其特征在于它是從富營養(yǎng)化養(yǎng)殖塘 底泥中分離純化得到的純菌株，保存在中國專利局指定的保藏單位中國微生物菌種保藏管 理委員會普通微生物中心，保存編號為CGMCCNo. 3452。
2.根據(jù)權利要求1所述的一種不動桿菌(AcinetcAactersp.) ZJTK-006，其特征在于 所述的不動桿菌ZJTK-006的16SrDNA具有SEQIDNo. 1的序列。
3.一種不動桿菌(AcinetcAacter sp.) ZJTK-006的應用，其特征在于用于制備微生物 復合菌劑。
4.根據(jù)權利要求3所述的一種不動桿菌(AcinetcAactersp.) ZJTK-006的應用，其特 征在于所述的微生物復合菌劑的制備方法為將不動桿菌(AcinetcAactersp.)ZJTK-006 與枯草芽孢桿菌(Bacillus cereus)As 1· 1414、沼澤紅假單胞菌(Rhodopseudomonas palustris)As 1. 2181，經(jīng)分別培養(yǎng)后，按其培養(yǎng)物以1 1 3的體積比例配比均勻混合 制成的微生物復合菌劑。
5.一種微生物復合菌劑的應用，其特征在于用于富營養(yǎng)化養(yǎng)殖水體中的氨氮、葉綠素 a處理。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種不動桿菌及其復合菌劑的應用。該菌劑涉及不動桿菌(Acinetobacter sp.)ZJTK-006、枯草芽孢桿菌、沼澤紅假單胞菌共3種菌株，這些菌株經(jīng)培養(yǎng)后，按其培養(yǎng)物以1∶1∶3的體積比例配比組成微生物復合菌劑，其中不動桿菌ZJTK-006保存編號為CGMCCNo.3452。本發(fā)明制備的菌劑適用于富營養(yǎng)化及高密度養(yǎng)殖水體中的氨氮和葉綠素a的去除處理，能形成良好的微生態(tài)體系，促進整體水體生態(tài)系統(tǒng)的修復。
文檔編號C12R1/01GK102146347SQ20091015571
公開日2011年8月10日 申請日期2009年12月18日 優(yōu)先權日2009年12月18日
發(fā)明者葉俊英, 邱曉力, 郭紅櫻, 陳歡 申請人:浙江天科高新技術發(fā)展有限公司