專(zhuān)利名稱(chēng)：一種多菌靈降解菌及其應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種細(xì)菌，尤其涉及一種多菌靈降解菌及其應(yīng)用。
背景技術(shù)：
多菌靈是一種高效低毒的光譜內(nèi)吸性殺菌劑，對(duì)葡萄胞菌、鐮刀菌等引起的真菌 病害具有很好的保護(hù)和治療作用，廣泛應(yīng)用于水稻、棉花、蔬菜、果樹(shù)、藥材等病害的防治。多菌靈在我國(guó)農(nóng)業(yè)生產(chǎn)上得到廣泛應(yīng)用的同時(shí)，它在環(huán)境中的殘留引起環(huán)境污染 問(wèn)題也日趨嚴(yán)重。因其化學(xué)性質(zhì)穩(wěn)定，在環(huán)境中半衰期較長(zhǎng)(3-6個(gè)月)，易產(chǎn)生積累效應(yīng)， 對(duì)微生物、植物、動(dòng)物以及人體產(chǎn)生危害。研究表明，多菌靈能能引起肝病，還能導(dǎo)致染色體 畸變，干擾哺乳動(dòng)物的內(nèi)分泌，并對(duì)精母細(xì)胞的減數(shù)分裂產(chǎn)生影響。多菌靈很難被水解、熱解和光解等物理方法分解，在生態(tài)系統(tǒng)中，微生物對(duì)農(nóng)藥的 分解起著重要作用。因此尋找多菌靈的高效降解菌對(duì)于消除多菌靈的環(huán)境污染具有重要的 現(xiàn)實(shí)意義。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明提供了一種降解速度快、降解效率高的多菌靈降解菌。一種多菌靈降解菌，經(jīng)鑒定命名為假單胞菌(Pseudomonas sp.)CBW，保藏于中 國(guó)典型培養(yǎng)物保藏中心(地址為湖北省武漢市珞珈山武漢大學(xué)保藏中心)，保藏日期為 2009年11月4日，保藏號(hào)為CCTCC No.M209251。該菌株16S rDNA的Genbank登陸號(hào)為 GQ454926。該菌株主要生物學(xué)特征為革蘭氏反應(yīng)陰性，菌體桿狀，無(wú)鞭毛，大小約為 (0. 5 μ m 0. 8 μ m) X (1. 5 μ m 2 μ m)(圖1)，接觸酶陽(yáng)性，氧化酶陽(yáng)性。本發(fā)明還提供了一種含有上述多菌靈降解菌的菌劑，該菌劑的制備方法就是將上 述菌種與常規(guī)的附加劑混合均勻后制成水劑。本發(fā)明多菌靈降解菌對(duì)多菌靈降解效率高，降解速度快，可有效修復(fù)多菌靈在土 壤中的污染。


圖1為多菌靈降解菌CBW的電鏡照片。圖2為本發(fā)明多菌靈降解菌對(duì)不同濃度的多菌靈的降解曲線圖。
具體實(shí)施例方式培養(yǎng)基無(wú)機(jī)鹽培養(yǎng)基=MgSO4· 7H20 0. 4g、FeSO4 · 7H20 0. 02g、K2HPO4O. 2g、(NH4)2SO4O. 2g、 CaSO4O. 08g、去離子水lOOOmL，混合攪拌均勻，調(diào)節(jié)pH值為7. 0，高壓蒸汽滅菌(121 °C， 20min)制得。
分離純化培養(yǎng)基在無(wú)機(jī)鹽培養(yǎng)基中添加20g瓊脂，高壓蒸汽滅菌(12rC，20min) 制得。普通培養(yǎng)基牛肉膏10g、蛋白胨5. 0g、氯化鈉10. 0g、去離子水IOOOmL,混合攪拌 均勻，調(diào)節(jié)PH值為7.0，高壓蒸汽滅菌(121°C，20min)制得。菌種分離純化(1)取浙江大學(xué)華家池校區(qū)蚯蚓地土壤5g置于IOOmL三角瓶中，加入50mL無(wú)機(jī) 鹽培養(yǎng)基，加入多菌靈5mg，置于搖床(30°C，150rpm)中振蕩培養(yǎng)一周。取ImL懸浮液接種 于30mL以10mg/L的多菌靈為唯一碳源和能源的無(wú)機(jī)鹽培養(yǎng)基中，振蕩培養(yǎng)一周(30°C， 150rpm)。同樣條件培養(yǎng)3次，每次培養(yǎng)均取前一次的培養(yǎng)液作為接種液。(2)將最后一次獲得的培養(yǎng)液稀釋(10_5)后于含20mg/L多菌靈的分離純化培養(yǎng) 基劃線分離篩選，挑取單菌落接種于含10mg/L多菌靈的無(wú)機(jī)鹽培養(yǎng)基中，置于搖床(30°C， 150rpm)中振蕩培養(yǎng)，觀察菌的生長(zhǎng)并測(cè)定多菌靈的降解情況。重復(fù)上述過(guò)程純化3次，選 取能在含多菌靈的無(wú)機(jī)鹽培養(yǎng)基中生長(zhǎng)并且能快速降解多菌靈的單菌落進(jìn)行鑒定。菌種保 存于斜面培養(yǎng)基上，所用培養(yǎng)基為普通培養(yǎng)基。鑒定命名上述分離純化獲得菌株的主要生物學(xué)特征為革蘭氏反應(yīng)陰性，菌體桿狀，無(wú)鞭 毛，大小約為(0. 5 μ m 0. 8 μ m) X (1. 5 μ m 2. 0 μ m)(圖1)，接觸酶陽(yáng)性，氧化酶陽(yáng)性。 最適生長(zhǎng)條件為pH = 7. 0，溫度30°C。 其詳細(xì)的生理特性如下表1所示+ 生長(zhǎng)良好，-不生長(zhǎng)；+W 生長(zhǎng)緩慢+II+IIIIIII+++I++++++++I+I++I+血染 H 麵 I Q縣截廛經(jīng)-α-奪由-百mmmi彐 I Q猶截蟹_-α染 H■■M奪由■班雜奪由畝瀣 H W 郟琥珀酰胺酸瑚■鹙M - 綱M-α綱Μ- 鹙具镅鹙M - U ￥-τ■鹙場(chǎng)- ■鷥奮U ￥-1-驅(qū)鷥具縣輯勁勘鄱鰣萊+I+++I+IIIII++I+++++++++++++++血麵截蟹莘染 I Q染 I截 余-α染 H SJ 較截廛經(jīng)-α- DI B染 I Q I截畓 I蜜 扭 I Q截蟹具-α■ 7萊奪迓-d■丄H FTH^ 畫(huà) I d腳Ifi-DI J Q瀣 H EEH 獅 I QHm^mmn^M -ι■鹙芴-α■鹙芴- ■鹙踅- -E I J Q+I+I++III+II++++II+II++I+++++血mMm暴08 ^Td瑚截 余α-奪镅7 -N瑚截廛經(jīng)-α-奪镅7 -N麵繼翬咢P·mmmmmm -α染 H 細(xì) 汝 I QN]驅(qū)截 -α■親截 余-α■截廛經(jīng)-α瑚截廛經(jīng)-α■截廛經(jīng)-α■丄奪迓“D■丄奪迓-百■丄奪迓-λmnw -ι■鷥職- -奢迓瀣 U ΨΚ IL-鳥(niǎo)氨酸■鹙 Μ -
權(quán)利要求
一種降解多菌靈的假單胞菌(Pseudomonas sp.)CBW，保藏號(hào)為CCTCC No.M 209251。
2.一種含有權(quán)利要求1所述的假單胞菌CBW的菌劑。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的菌劑，其特征在于所述菌劑為假單胞菌CBW溶于 Na2HPO4-NaH2PO4緩沖液制得的菌懸液。
全文摘要
本發(fā)明公開(kāi)了一種多菌靈降解菌及其應(yīng)用，該多菌靈降解菌為假單胞菌(Pseudomonas sp.)CBW，保藏號(hào)為CCTCC No.M 209251。本發(fā)明菌株對(duì)多菌靈降解效率高，降解速度快，可有效修復(fù)多菌靈在土壤中的污染。
文檔編號(hào)C12N1/20GK101955893SQ200910153928
公開(kāi)日2011年1月26日 申請(qǐng)日期2009年11月27日 優(yōu)先權(quán)日2009年11月27日
發(fā)明者王一奇, 虞云龍, 高春明 申請(qǐng)人:浙江大學(xué)