專利名稱：一種spop基因的原位雜交檢測試劑盒及其檢測方法和應(yīng)用的制作方法
一種SPOP基因的原位雜交檢測試劑盒及其檢測方法和應(yīng)
用
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種試劑盒，具體地說關(guān)于一種SPOP基因的原位雜交檢測試劑盒及 其檢測方法和應(yīng)用
背景技術(shù)：
腎癌又稱腎細(xì)胞癌，起源于腎小管上皮細(xì)胞，可發(fā)生于腎實質(zhì)的任何部位，但以 上、下級為多見，少數(shù)侵及全腎；左、右腎發(fā)病機(jī)會均等，雙側(cè)病變占 2%。腎癌患者的 主訴和臨床表現(xiàn)多變，容易誤診為其他疾病。腎位置隱蔽，與外界主要的聯(lián)系是尿，因此血 尿是發(fā)現(xiàn)腎癌最常見的病狀，但血尿的出現(xiàn)必須在腫瘤侵入腎盂后方有可能，因此已是晚 期病狀。腎癌從癌前變到形成癌癥，需要幾年時間，如何做到早期檢測、診斷、預(yù)后的檢測 及診治后的復(fù)發(fā)、轉(zhuǎn)移早期檢出是降低腎癌發(fā)病率和死亡率的關(guān)鍵。有人以果蠅為模型，通過肢體發(fā)育的網(wǎng)絡(luò)分析，利用系統(tǒng)生物學(xué)的方法發(fā)現(xiàn)了一 個可以用于診斷腎癌的蛋白質(zhì)SP0P，研究發(fā)現(xiàn)SPOP在腎癌的第一大亞類透明腎細(xì)胞癌(占 所有腎癌的75%)過度表達(dá)。這一分子標(biāo)記物可作為制備非常專一和敏感的分子探針。醫(yī) 生可以通過探測蛋白質(zhì)SPOP在組織中的表達(dá)量，來確定病人是否患有腎癌。對于癌癥發(fā)生 擴(kuò)散，但并不知道癌癥源組織的病人，醫(yī)生也能通過SPOP的表達(dá)量來確定病人癌癥的源頭 是否是腎癌。學(xué)者研究了兩個在果蠅肢節(jié)發(fā)育中起核心作用的轉(zhuǎn)錄因子FTZ和EVE的作 用。從全基因組水平上，研究了 FTZ和EVE對基因的調(diào)控。然后進(jìn)一步結(jié)合生物信息學(xué)的 方法，整合了已有的蛋白質(zhì)和蛋白質(zhì)相互結(jié)合的數(shù)據(jù)庫，組成了一個龐大的發(fā)育網(wǎng)絡(luò)，最后 又通過數(shù)據(jù)檢索的方法從現(xiàn)有的文章提中提取數(shù)據(jù)添加到果蠅發(fā)育網(wǎng)絡(luò)里，最終的網(wǎng)絡(luò)包 含4084個元素(基因或蛋白)、6648個相互作用。根據(jù)元素和網(wǎng)絡(luò)中別的元素間的距離、 基因的保守性等標(biāo)準(zhǔn)，通過對網(wǎng)絡(luò)的分析，發(fā)現(xiàn)果蠅的SPOP(D-SPOP)是網(wǎng)絡(luò)中的第一重要 的因子。D-SPOP與人的SPOP的氨基酸序列79%—致。通過進(jìn)一步的分析，發(fā)現(xiàn)SPOP不僅 調(diào)控果蠅的發(fā)育、同時還可能參與人類癌癥，因為它調(diào)控著在癌癥中有重要作用的JNK信 號通路。研究者將注意力從果蠅中轉(zhuǎn)移到人類癌癥里，通過對18中常見癌癥的快速掃描， 我們發(fā)現(xiàn)在人的腎癌中，85%的腎癌是SPOP陽性而所有的正常腎組織都是SPOP陰性。當(dāng) 他們進(jìn)一步深入研究300多個腎癌病人，發(fā)現(xiàn)77%腎癌病人的癌組織SPOP呈陽性，而正常 腎組織全都是陰性。而在腎癌的第一大亞類透明腎細(xì)胞癌中，99%的病人癌組織SPOP過量 表達(dá)。檢測SPOP的表達(dá)量，發(fā)現(xiàn)有幾例病人是透明腎細(xì)胞癌，而在病理報告中卻錯誤的被 診斷為別的亞類的腎癌。更為重要的是SPOP還可以對不知源發(fā)部位的癌癥病人，確定癌癥 的源發(fā)部位是否是腎癌。隨著分子生物技術(shù)日益完善，功能基因組學(xué)， 癌癥基因組學(xué)等研究的深入展開，至 今，我們已有可能在基因水平上做更精確的早期診斷，在癌變前期或癌細(xì)胞形成(單克隆 時)就能做到早期預(yù)測診斷。
原位雜交技術(shù)(in situ hybridization)是將分子生物學(xué)與細(xì)胞化學(xué)技術(shù)結(jié)合起 來，以標(biāo)記的核酸分子為探針，在組織細(xì)胞原位檢測特異性核酸分子的技術(shù)。其原理是使含 有特異序列、經(jīng)過標(biāo)記的核酸單鏈(即探針)，在適宜條件下與組織細(xì)胞中的互補核酸單鏈 即靶核酸發(fā)生雜交，再以放射自顯影或免疫細(xì)胞化學(xué)方法對標(biāo)記探針進(jìn)行探測，從而在細(xì) 胞原位顯示特異的DNA或RNA分子。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是針對現(xiàn)有技術(shù)中的不足，提供一種SPOP基因的原位雜交檢測試 劑盒的用途。本發(fā)明的再一個目的是，提供一種SPOP基因的原位雜交檢測試劑盒。本發(fā)明的另一個目的是，提供一種SPOP基因的原位雜交檢測方法。為實現(xiàn)上述目的，本發(fā)明采取的技術(shù)方案是一種SPOP基因的原位雜交檢測試劑盒在制備檢測腎癌疾病藥物中的應(yīng)用，所 述的試劑盒包括雜交探針、標(biāo)記物，所述的雜交探針序列如SEQ ID NO. 1所示，序列號 NM-001007226，核苷序列 3105bp mRNA，位于染色體 17q21. 33”，CDS 472...... 1596bp。所述的雜交探針序列如SEQ ID NO. 1所示的RNA序列。所述的標(biāo)記物選自放射性核素或非放射性標(biāo)記物。所述的放射性核素選自3H、35S、125I或32P中的一種。所述的非放射性標(biāo)記物選自生物素、地高辛、堿性磷酸酶、辣根過氧化酶或熒光素 中的一種。所述的非放射性標(biāo)記物優(yōu)選自地高辛。所述的試劑盒還包括增效劑，所述的增效劑是堿性磷酸酶抗體。為實現(xiàn)上述第二個目的，本發(fā)明采取的技術(shù)方案是一種SPOP基因的原位雜交檢測試劑盒，包括雜交探針、標(biāo)記物，其中所述的雜交 探針序列如SEQ ID NO. 1所示，所述的標(biāo)記物選自放射性核素或非放射性標(biāo)記物。為實現(xiàn)上述第三個目的，本發(fā)明采取的技術(shù)方案是一種SPOP基因的原位雜交檢測方法，該方法包括以下步驟a、將試劑盒中的雜交探針與底物中待測RNA接觸，形成雜交復(fù)合體；b、檢測a步驟得到的雜交復(fù)合體。所述的a步驟中形成雜交復(fù)合體的條件為核酸雜交的溫度為42°C ；核酸雜交的 時間為16-24小時，所述的底物選用血液細(xì)胞標(biāo)本或組織細(xì)胞標(biāo)本。本發(fā)明的診斷試劑盒的組份是由雜交探針，雜交液，顯色劑，增效劑等組成。本試 劑盒的核酸雜交原理是分子生物學(xué)業(yè)內(nèi)人士均熟知，具體操作步驟是標(biāo)本處理、預(yù)雜交、雜 交、免疫組化染色、鏡下進(jìn)行定量分析、結(jié)果報告，其中雜交的具體步驟包括儀器操作1).將待測標(biāo)本放入反應(yīng)槽中；2).儀器自動棄去液體，自動加消化液；3).儀器自動棄去液體，自動后固定；4).儀器自動棄去液體，自動預(yù)雜交(42°C )；
5).儀器自動棄去液體，自動清洗；6).儀器自動棄去液體，自動雜交(42°C )；7).儀器自動棄去液體，自動清洗；8).儀器自動棄去液體，自動與DIG抗體培養(yǎng)(室溫)；9).儀器自動棄去液體，自動清洗，顯色；10).取出封片鏡檢。

本發(fā)明優(yōu)點在于1、本發(fā)明提供的試劑盒具有靈敏度高、特異性強(qiáng)的特點。2、本發(fā)明的檢測方法操作方便、簡單，能在區(qū)級以上醫(yī)院普遍使用和推廣。3、本發(fā)明的臨床意義是更早期跟蹤檢測腎癌發(fā)生動態(tài)過程，以及用于腎癌預(yù)防醫(yī) 學(xué)的檢測和篩選工具。本發(fā)明的診斷試劑盒與臨床上其它檢測癌胚蛋白標(biāo)志物，以及影像 醫(yī)學(xué)檢查有顯著不同。本發(fā)明可以在基因水平上檢測SPOP異常表達(dá)，在影像醫(yī)學(xué)檢查及其 它檢查未發(fā)現(xiàn)占位性腎癌病灶之前，癌癥生化指標(biāo)未產(chǎn)生異常之前，亦未形成腫塊之前，能 及早做到以上基因表達(dá)異常的信息采集，給臨床腎癌病患一個真正的預(yù)后早期診斷。這樣 才有可能實施腎癌的早期診斷、早期預(yù)防、早期治療，有可能從源頭上徹底根治腎癌惡疾。

圖1是本發(fā)明實施例中癌癥病人SPOP過量表達(dá)圖片。圖2是本發(fā)明實施例中正常人SPOP表達(dá)圖片。
具體實施方式下面結(jié)合附圖對本發(fā)明具體實施方式
作詳細(xì)說明。實施例1一種SPOP基因的原位雜交檢測試劑盒，包括雜交探針、標(biāo)記物、增效劑，其中，所 述的雜交探針序列如SEQ ID NO. 1所示。雜交探針用地高辛標(biāo)記。試劑盒中的其它液體和 標(biāo)本組成如下消化液100 μ 1/管1管/盒 無色透明液體保護(hù)液100 μ 1/管1管/盒 無色透明液體預(yù)雜交液1300 μ 1/管2管/盒 無色透明液體正義雜交液 10μ1/管 1管/盒 無色透明液體反義雜交液 10μ1/管 1管/盒 無色透明液體封閉液100(^1/管1管/盒 無色透明液體堿性磷酸酶抗體Ιμ /管 1管/盒 無色透明液體顯色劑A175 μ 1/管 1管/盒 黃色液體顯色劑B320 μ 1/管 1管/盒 無色透明液體緩沖液I IOx 90ml/瓶 1瓶/盒 淺黃色或無色透明液體緩沖液II IOx 80ml/瓶 1瓶/盒 淺黃色或無色透明液體緩沖液III IOx 20m/瓶 3瓶/盒 淺黃色或無色透明液體緩沖液IV IOx 90ml/瓶 1瓶/盒 淺黃色或無色透明液體
固定液90ml/瓶 1瓶/盒 無色透明液體陽性對照標(biāo)本 6片/盒 上述試劑成分說明(所有試劑購自SIGMA)1、消化液20mg/ml 蛋白酶 K，IOOmg 蛋白酶 K，加 DEPC-H2O 5ml ；2、保護(hù)液0. 2g的glycine加入Iml的1 X緩沖液I ；3、預(yù)雜交液:1 X緩沖液II 7. 5ml50 X D 3ml10mg/ml yest t-RNA 750ulllmg/ml SALMON TESTES DNA 682ul0. 04M EDTA 3ml50% formamide 15ml4、封閉液0.03g的bloking(購買自羅氏公司)加入Iml IX緩沖液III;5、IOx 緩沖液 I (PH7. 1-7. 4)NaCl 80gNa2HPO4. 12H20 360gKCl 2gKH2P042g加三蒸水至11，并高壓滅菌；6、IOx 緩沖液 II (PH7. 0)NaCl 175. 3g檸檬酸鈉88. 2gHCl 幾滴加三蒸水至11，并高壓滅菌；7、緩沖液 III :(ΡΗ7·9)Tris 121. IgNaCl 87. 66gHCl 60ml 左右加三蒸水至11，并高壓滅菌；8、緩沖液 IV:IM Tris-HCl (PH9. 5) =Tirs 121. Ig 加 HCl 3ml 左右，加水 900ml，調(diào) PH 至 9. 5，加 水至11，并高壓滅菌；IM NaCl =NaCl 58. 44 加水至 11，并高壓滅菌；0. 5M MgCl2 101. 65g MgCl2. 6H20 加水至 11，并高壓滅菌；9、固定液多聚甲醛40g加IX緩沖液I至11，稍加熱(約50-60度)攪拌至溶 解；10、顯色劑 A =NBT Ig 加 70% DMFl 1. 44ml ；11、顯色劑 B =BCIP Ig 加 100% DMF30ml。本發(fā)明的試劑盒可以多人份使用或一人份使用。實施例2
一種SPOP基因原位雜交檢測方法及其試劑盒應(yīng)用一、標(biāo)本處理1、用IOml的離心管，裝4. 5ml淋巴細(xì)胞分離液，再將3ml抗凝血緩慢加入含有淋 巴細(xì)胞分離液(血淋巴細(xì)胞分離液=1 1.5)的離心管中，2000r/min離心10min ；2、吸取中間層白細(xì)胞至另一離心管中，再在此管中加入約兩倍的IX緩沖液I，混 勻，1500g/min 離心 10min ；3、棄上清.沉淀加入約兩倍的1 X緩沖液I，混勻，1500g/min離心10min ；4、棄上清，并把試管口多余的液體用擦手紙吸去。再將沉淀制成懸液，滴在玻片上 推片，自然干燥。(有條件的醫(yī)院可以用制片機(jī)制片。)3ml血，可以做4張片子；5、用40ml 4%固定液，在玻璃缸中，固定30min，再用IX緩沖液I洗5min。每缸 可以放16片；6、標(biāo)本可保存在_20°C，或繼續(xù)做實驗。二、將試劑盒中試劑配制成使用濃度1、將IOX緩沖液I用三蒸水按1 10稀釋成IX緩沖液I ；2、將20X緩沖液II用三蒸水按1 10稀釋成2X緩沖液II ；按1 100稀釋成0. 2X緩沖液II ；按1 200稀釋成0. 1 X緩沖液II ；3、將IOX緩沖液III用三蒸水按1 10稀釋成1 X緩沖液III ；4、10 X緩沖液IV用三蒸水按1 10稀釋成X緩沖液IV (取1#，2#，3#各10ml， 加水至IOOml既可)。三、實驗步驟1、取每位待檢者標(biāo)本兩張，(另外兩張留作復(fù)查用)及陽性對照標(biāo)本兩張(每次 實驗做一對陽性對照)；2、在玻璃缸里加消化液(消化液IOOul加IX緩沖液199.9ml，即為使用濃 度)20ml。37°C水浴預(yù)熱10分鐘。放進(jìn)16張玻片，37°C處理12min，再用1 X緩沖液I洗 5min ；3、用0. 2%的保護(hù)液(保護(hù)液Iml加IX緩沖液I99ml即為使用濃度)洗IOmin, 三蒸水洗5min，以上過程都在玻璃缸進(jìn)行。玻片自然干燥；4、將玻片放入保濕盒內(nèi)，加預(yù)雜交液20ul/片.蓋上蓋玻片，蓋緊保濕盒，放在 42°C恒溫水浴箱中3h以上；5、取出玻片，棄去蓋玻片，將玻片放入玻璃缸內(nèi)，用70%，90%，95%的乙醇各洗 2min,自然干燥；6、將玻片放入保濕盒內(nèi)，每位病人標(biāo)本兩張，一張加正義雜交液20ul/片，另一張 加反義雜交液20ul/片，蓋上蓋玻片，蓋緊保濕盒，放在42°C恒溫水浴箱中16-24h ；7、取出玻片，棄去蓋玻片，將玻片放入玻璃缸內(nèi)在42°C恒溫水浴箱中用2X緩沖液II洗兩次，每次15min在42°C恒溫水浴箱中用0. 2X緩沖液II洗一次，每次15min在42°C恒溫水浴箱中用0. 1 X緩沖液II洗兩次，每次15min ；8、用IX緩沖液III洗30s，取出玻片，自然干燥；9、將玻片放入保濕盒內(nèi)，加0.5% 1封閉液(Iml封閉液加5ml IX緩沖液Ill) 1OOul/片，蓋緊保濕盒，在室溫下作用30min ；10、取出玻片，用IX緩沖液III洗30s，自然干燥；11、將玻片放入保濕盒內(nèi)，加堿性磷酸酶抗體(加入1.8ml 1 X緩沖液III) IOOul/ 片，蓋緊保濕盒在室溫下作用30min ；12、取出玻片，用IX緩沖液III洗3次，每次15min;13、IX緩沖液IV洗2min，加顯色劑(顯色劑A73. 3ul，顯色劑B157. 5ul加到30ml 1 X緩沖液IV中，混勻)，室溫避光12h以上；14、用三蒸水洗5min，自然干燥，(用甘油加10%的IX緩沖液I混勻)封片鏡檢。四、結(jié)果判斷在光鏡下計數(shù)100-300個細(xì)胞，計算染上紫色細(xì)胞的百分比。陽性對照標(biāo)本加反義雜交液的應(yīng)該80%以上染上紫色。所有加正義雜交液的陰性內(nèi)對照應(yīng)無色。地高辛標(biāo)記的cDNA、RNA和寡核苷酸探針，不但探針的具有生物素標(biāo)記優(yōu)點，還克 服了生物素標(biāo)記的探針在原位雜交過程中受組織內(nèi)源性生物素干憂等缺點)，將該雜交探 針與人體血液白細(xì)胞的待測RNA核酸進(jìn)行雜交，再用免疫組化的方法顯色，在光鏡下觀察 mRNA的存在和定位，根據(jù)染色的細(xì)胞數(shù)，判斷目的基因的表達(dá)量。本發(fā)明方法是目前常用的核酸原位雜交技術(shù)，該方法通過檢測底物細(xì)胞中的SPOP 基因表達(dá)量，用來確定腎癌是否發(fā)生。臨床研究表明，SPOP基因是腎癌的特異基因，因為 SPOP基因在正常人中不表達(dá)，唯獨在腎癌或其它癌癥中表達(dá)，說明腎癌已經(jīng)發(fā)生，用SPOP 基因的診斷試劑來篩選腎癌或臨床鑒別腎癌或正常具有重要的臨床意義。從而獲得腎癌的 診斷信息，為臨床的治療提供依據(jù)。本發(fā)明實施例采樣為腎癌病人5名，正常對照組5名。抽所有待檢人的外周血 3-5毫升(分離白細(xì)胞)做原位雜交。結(jié)果表示，所有癌癥轉(zhuǎn)移病人SPOP基因有過度表達(dá)， 細(xì)胞染色；正常對照組SPOP基因不表達(dá)，細(xì)胞無染色。具體結(jié)果請見圖1，圖2。以上所述僅是本發(fā)明的優(yōu)選實施方式，應(yīng)當(dāng)指出，對于本技術(shù)領(lǐng)域的普通技術(shù)人 員，在不脫離本發(fā)明方法的前提下，還可以做出若干改進(jìn)和補充，這些改進(jìn)和補充也應(yīng)視為 本發(fā)明的保護(hù)范圍。SEQUENCE LISTING<110>芮屈生物技術(shù)(上海)有限公司<120> 一種SPOP基因的原位雜交檢測試劑盒及其檢測方法和應(yīng)用<130>/<160>1<170>PatentIn version 3. 3<210>1<211>3105<212>DNA<213> 智人(Homo sapiens)<400>1 ggggaggagg ccgcgcgggg tggggtctgg cggtacgcgc tggctgcgtc gacgtgctga60cgccatgacg ccccggctgg tgtgtgtcgg tgtgtatgtg tgtgtgtgag tgtgcgcgct 120ccgagtgtgt gtgtatttgt gtatcggcgg tcccgcaggt cccggatgtt gcggacagta 180tgaggcaagc gcagggggac ggggaccagc agctgtcgcc gccgctctca gatcgagtct 240tgctctgtca cccaggctgg agtgcagtgg cgcgatctca gctcactgcc acctttgcct 300cctgggttca agcgattctt ctgcctcagc ctcccgagta gctgggatta caggctctgg 360gaaccaccct tctactttct gtctctagga atttcactac tctagggtga agagggaaca 420gaaatctttg ccccctgact ttggaaatct cgtttaacct tcaaactggc gatgtcaagg 480gttccaagtc ctccacctcc ggcagaaatg tcgagtggcc ccgtagctga gagttggtgc 540tacacacaga tcaaggtagt gaaattctcc tacatgtgga ccatcaataa ctttagcttt 600tgccgggagg aaatgggtga agtcattaaa agttctacat tttcatcagg agcaaatgat 660aaactgaaat ggtgtttgcg agtaaacccc aaagggttag atgaagaaag caaagattac 720ctgtcacttt acctgttact ggtcagctgt ccaaagagtg aagttcgggc aaaattcaaa 780ttctccatcc tgaatgccaa gggagaagaa accaaagcta tggagagtca acgggcatat 840aggtttgtgc aaggcaaaga ctggggattc aagaaattca tccgtagaga ttttcttttg 900gatgaggcca acgggcttct ccctgatgac aagcttaccc tcttctgcga ggtgagtgtt 960gtgcaagatt ctgtcaacat ttctggccag aataccatga acatggtaaa ggttcctgag 1020tgccggctgg cagatgagtt aggaggactg tgggagaatt cccggttcac agactgctgc 1080ttgtgtgttg ccggccagga attccaggct cacaaggcta tcttagcagc tcgttctccg 1140gtttttagtg ccatgtttga acatgaaatg gaggagagca aaaagaatcg agttgaaatc 1200
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一種SPOP基因的原位雜交檢測試劑盒在制備檢測腎癌疾病藥物中的應(yīng)用，所述的試劑盒包括雜交探針、標(biāo)記物，所述的雜交探針序列如SEQ ID NO.1所示。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的應(yīng)用，其特征在于所述的雜交探針序列如SEQID NO. 1所 示的RNA序列。
3.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的應(yīng)用，其特征在于所述的標(biāo)記物選自放射性核素或非 放射性標(biāo)記物。
4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的應(yīng)用，其特征在于所述的放射性核素選自3H、35S、125I或32P 中的一種。
5.根據(jù)權(quán)利要求3所述的應(yīng)用，其特征在于所述的非放射性標(biāo)記物選自生物素、地高 辛、堿性磷酸酶、辣根過氧化酶或熒光素中的一種。
6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的應(yīng)用，其特征在于所述的非放射性標(biāo)記物優(yōu)選自地高辛。
7.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的應(yīng)用，其特征在于所述的試劑盒還包括增效劑，所述的 增效劑是堿性磷酸酶抗體。
8.—種SPOP基因的原位雜交檢測試劑盒，包括雜交探針、標(biāo)記物，其特征在于，所述的 雜交探針序列如SEQ ID NO. 1所示，所述的標(biāo)記物選自放射性核素或非放射性標(biāo)記物。
9.一種SPOP基因的原位雜交檢測方法，其特征在于，該方法包括以下步驟a、將權(quán)利要求8所述試劑盒中的雜交探針與底物中待測RNA接觸，形成雜交復(fù)合體；b、檢測a步驟得到的雜交復(fù)合體。
10.根據(jù)權(quán)利要求9所述的檢測方法，其特征在于a步驟中形成雜交復(fù)合體的條件為 核酸雜交的溫度為42°C ；核酸雜交的時間為16-24小時，所述的底物選用血液細(xì)胞標(biāo)本或 組織細(xì)胞標(biāo)本。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種SPOP基因的原位雜交檢測試劑盒，包括雜交探針、標(biāo)記物，所述的雜交探針序列如SEQ ID NO.1所示。本發(fā)明還提供了一種SPOP基因原位雜交檢測方法。另外，本發(fā)明還提供了試劑盒在制備檢測腎癌疾病藥物中的應(yīng)用。本發(fā)明優(yōu)點在于本發(fā)明提供的試劑盒具有靈敏度高、特異性強(qiáng)的特點。本發(fā)明的檢測方法操作方便、簡單，能在區(qū)級以上醫(yī)院普遍使用和推廣。
文檔編號C12Q1/68GK101988084SQ20091005605
公開日2011年3月23日 申請日期2009年8月7日 優(yōu)先權(quán)日2009年8月7日 公開號200910056056.8
發(fā)明者張云福, 裘建英 申請人:芮屈生物技術(shù)(上海)有限公司