專利名稱：：用于檢測人乳頭瘤病毒的引物組和探針的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明涉及用于特異性檢測人乳頭瘤病毒的引物組和探針。本發(fā)明還涉及使用所述引物組和探針特異性檢測人乳頭瘤病毒的方法。
背景技術(shù)：
：人乳頭瘤病毒(Humanpapillomavirus,HPV)是在基因組中具有約8000堿基對的環(huán)狀雙鏈DNA的小型病毒，可引起人類特異性感染。據(jù)報(bào)道，存在多達(dá)100多種HPV亞型，主要分為在皮膚病變例如疣等中檢出的亞型(嗜皮膚性HPV(skintropicHPV))，以及在黏膜病變中檢出的亞型(嗜黏膜性HPV)。此外，嗜黏膜性HPV被分成涉及例如宮頸癌、肛周癌、陰莖癌等癌癥的高危型(HPV16、HPV18等)以及涉及良性尖銳濕疣等的低危型(HPV6、HPVll等)。WHO估計(jì)，全球女性惡性腫瘤的11%涉及HPV感染，即大約有45萬人受累于HPV感染，全球有3億HPV感染攜帶者，說明HPV是一種常見的病毒。特別是宮頸癌患者中幾乎總是檢出HPV。宮頸癌位居全球人數(shù)最多的女性癌癥的第二位，全球每年大約有25萬人，日本每年大約有2500人死于宮頸癌。因此，宮頸癌的預(yù)防、診斷和治療一直被視作是對女性健康十分重大的問題。幸運(yùn)的是，預(yù)防宮頸癌是可能的。其原因是通過細(xì)胞學(xué)診斷等，可以發(fā)現(xiàn)作為宮頸癌癌前期病變的發(fā)育異常，而且通過簡單治療就可以治愈這種發(fā)育異常。由于發(fā)育異常是由HPV感染引起的，因此越來越多地認(rèn)識(shí)到對HPV遺傳篩查的重要性，這樣就能夠更早更準(zhǔn)確地發(fā)現(xiàn)宮頸癌或癌前期病變。HPV遺傳篩查方法主要被分成包括直接檢測HPVDNA的方法和包括在檢測DNA前通過聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(PCR)使HPVDNA擴(kuò)增的方法。一種無需采用PCR的代表性方法是雜交俘獲方法(hybridcapturemethod)。在這種方法中，使RNA探針與樣品中的HPVDNA雜交，采用抗體通過免疫測定法來檢測所得到的DNA/RNA雜合體。由于方便，因此該方法目前是HPV遺傳篩查的主要方法。另一方面，該方法由于使用RNA探針而導(dǎo)致的靈敏度低，穩(wěn)定性低，而且污染的可能性無法排除，因此其可靠性低。此外，即使可以采用該方法鑒定出感染的HPV是高危型還是低危型，卻都無法鑒定其亞型。在采用PCR的方法中，通過包括用限制性內(nèi)切酶切割和用電泳檢測條帶的方法，或者包括與DNA微陣列上的探針雜交的檢測方法，來檢測擴(kuò)增的DNA。前一種利用電泳的檢測方法可在普通實(shí)驗(yàn)室設(shè)備上進(jìn)行，在經(jīng)濟(jì)實(shí)用方面具有優(yōu)勢。然而缺點(diǎn)是需要復(fù)雜的步驟，而且鑒定的亞型不完全。另一方面，后一種利用與探針雜交的檢測方法具有亞型鑒定的檢測靈敏度高和特異性高。然而，在快速和經(jīng)濟(jì)實(shí)用方面存在問題。至于通過PCR的DNA擴(kuò)增，使用型特異性引物(type-specificprimer)使HPV基因進(jìn)行型特異性擴(kuò)增的方法和使用隨機(jī)引物或非型特異性引物(non-type-specificprimer)使HPV基因進(jìn)行非型特異性擴(kuò)增的方法是已知的。在專利文獻(xiàn)1和2所公開的方法中，使用型特異性引物通過PCR使DNA擴(kuò)增。使15用擴(kuò)增的雙鏈DNA本身作為探針，將擴(kuò)增的DNA與專利文獻(xiàn)1中的DNA微陣列進(jìn)行雜交，并進(jìn)行專利文獻(xiàn)2中的電泳以檢測HPVDNA的存在與否。這些方法通過使用型特異性引物實(shí)現(xiàn)了高特異性和高靈敏度的擴(kuò)增。甚至當(dāng)使用引物的混合物時(shí)，也能夠特異性地檢出特定的HPV類型。另一方面，在專利文獻(xiàn)3所公開的方法中，使用非型特異性引物使HPVDNA擴(kuò)增，并使用短的單鏈寡聚DNA作為探針與DNA微陣列雜交以檢測HPVDNA。由于該方法使用了普通引物，因此這在合成成本和設(shè)計(jì)簡易性上是有利的。然而，即使通過使用短探針提高雜交的特異性，在某種程度上可以克服PCR中的低特異性和低靈敏度，但是總體靈敏度仍很低。即使按照專利文獻(xiàn)4所公開的方法制備各種HPV類型的引物，由于相應(yīng)的引物序列幾乎相同，因此引物的制備方法仍被視為與專利文獻(xiàn)3的方法幾乎相同。在此情況下，需要開發(fā)在快速、方便和經(jīng)濟(jì)實(shí)用方面具有優(yōu)勢、能夠以高特異性和高靈敏度檢測多種HPV類型的方法。[專利文獻(xiàn)1]JP-A-2004-121240[專利文獻(xiàn)2]JP-A-2006-345800[專利文獻(xiàn)3]專利申請公布號(hào)2005-503177[專利文獻(xiàn)4]專利申請公布號(hào)2005-51961
發(fā)明內(nèi)容發(fā)明要解決的技術(shù)問題本發(fā)明旨在提供用于以高特異性和高靈敏度檢測多種HPV類型的引物組和探針。本發(fā)明還旨在提供使用上述引物組和探針以高特異性和高靈敏度檢測多種HPV類型的方法。解決技術(shù)問題采用的技術(shù)方案在嘗試解決上述技術(shù)問題時(shí)，本發(fā)明的發(fā)明人注意到一種檢測HPV基因的方法，并進(jìn)行了廣泛深入的研究，該方法包括使用型特異性引物通過PCR使HPV基因擴(kuò)增，使PCR擴(kuò)增產(chǎn)物與用于檢測的DNA微陣列雜交。因此，本發(fā)明的發(fā)明人發(fā)現(xiàn)通過使用本發(fā)明的引物組和探針，可以方便快速地以高特異性和高靈敏度檢測多種HPV類型，這導(dǎo)致了本發(fā)明的完成。因此，本發(fā)明提供下列方面。[1]一種用于擴(kuò)增人乳頭瘤病毒(HPV)基因的PCR引物組，所述引物組是至少一種選自以下的引物組(1)引物組1，由包含SEQIDNO:1所示堿基序列的引物或其同樣具有作為引物的功能且包含在嚴(yán)格條件下與同SEQIDNO:1所示堿基序列互補(bǔ)的堿基序列雜交的堿基序列的變異體，以及包含SEQIDNO2所示堿基序列的引物或其同樣具有作為引物的功能且包含在嚴(yán)格條件下與同SEQIDNO:2所示堿基序列互補(bǔ)的堿基序列雜交的堿基序列的變異體組成，(2)引物組2，由包含SEQIDNO:3所示堿基序列的引物或其同樣具有作為引物的功能且包含在嚴(yán)格條件下與同SEQIDNO:3所示堿基序列互補(bǔ)的堿基序列雜交的堿基序列的變異體，以及包含SEQIDNO:4所示堿基序列的引物或其同樣具有作為引物的功能且包含在嚴(yán)格條件下與同SEQIDNO:4所示堿基序列互補(bǔ)的堿基序列雜交的堿基序列的變異體組成，(3)引物組3，由包含SEQIDNO:5所示堿基序列的引物或其同樣具有作為引物的功能且包含在嚴(yán)格條件下與同SEQIDNO:5所示堿基序列互補(bǔ)的堿基序列雜交的堿基序列的變異體，以及包含SEQIDNO6所示堿基序列的引物或其同樣具有作為引物的功能且包含在嚴(yán)格條件下與同SEQIDNO:6所示堿基序列互補(bǔ)的堿基序列雜交的堿基序列的變異體組成，(4)引物組4，由包含SEQIDNO:7所示堿基序列的引物或其同樣具有作為引物的功能且包含在嚴(yán)格條件下與同SEQIDNO:7所示堿基序列互補(bǔ)的堿基序列雜交的堿基序列的變異體，以及包含SEQIDNO8所示堿基序列的引物或其同樣具有作為引物的功能且包含在嚴(yán)格條件下與同SEQIDNO:8所示堿基序列互補(bǔ)的堿基序列雜交的堿基序列的變異體組成，(5)引物組5，由包含SEQIDNO:9所示堿基序列的引物或其同樣具有作為引物的功能且包含在嚴(yán)格條件下與同SEQIDNO:9所示堿基序列互補(bǔ)的堿基序列雜交的堿基序列的變異體，以及包含SEQIDNO10所示堿基序列的引物或其同樣具有作為引物的功能且包含在嚴(yán)格條件下與同SEQIDNO:10所示堿基序列互補(bǔ)的堿基序列雜交的堿基序列的變異體組成，(6)引物組6，由包含SEQIDNO:11所示堿基序列的引物或其同樣具有作為引物的功能且包含在嚴(yán)格條件下與同SEQIDNO:11所示堿基序列互補(bǔ)的堿基序列雜交的堿基序列的變異體，以及包含SEQIDNO12所示堿基序列的引物或其同樣具有作為引物的功能且包含在嚴(yán)格條件下與同SEQIDNO:12所示堿基序列互補(bǔ)的堿基序列雜交的堿基序列的變異體組成，(7)引物組7，由包含SEQIDNO:13所示堿基序列的引物或其同樣具有作為引物的功能且包含在嚴(yán)格條件下與同SEQIDNO:13所示堿基序列互補(bǔ)的堿基序列雜交的堿基序列的變異體，以及包含SEQIDNO:14所示堿基序列的引物或其同樣具有作為引物的功能且包含在嚴(yán)格條件下與同SEQIDNO:14所示堿基序列互補(bǔ)的堿基序列雜交的堿基序列的變異體組成，(8)弓丨物組8，由包含SEQIDNO15所示堿基序列的引物或其同樣具有作為引物的功能且包含在嚴(yán)格條件下與同SEQIDNO:15所示堿基序列互補(bǔ)的堿基序列雜交的堿基序列的變異體，以及包含SEQIDNO16所示堿基序列的引物或其同樣具有作為引物的功能且包含在嚴(yán)格條件下與同SEQIDNO:16所示堿基序列互補(bǔ)的堿基序列雜交的堿基序列的變異體組成，(9)弓丨物組9，由包含SEQIDNO17所示堿基序列的引物或其同樣具有作為引物的功能且包含在嚴(yán)格條件下與同SEQIDNO:17所示堿基序列互補(bǔ)的堿基序列雜交的堿基序列的變異體，以及包含SEQIDNO18所示堿基序列的引物或其同樣具有作為引物的功能且包含在嚴(yán)格條件下與同SEQIDNO:18所示堿基序列互補(bǔ)的堿基序列雜交的堿基序列的變異體組成，(10)引物組10，由包含SEQIDNO:19所示堿基序列的引物或其同樣具有作為引物的功能且包含在嚴(yán)格條件下與同SEQIDNO:19所示堿基序列互補(bǔ)的堿基序列雜交的堿基序列的變異體，以及包含SEQIDNO:20所示堿基序列的引物或其同樣具有作為引物的功能且包含在嚴(yán)格條件下與同SEQIDNO:20所示堿基序列互補(bǔ)的堿基序列雜交的堿基序列的變異體組成，(11)弓丨物組11，由包含SEQIDNO21所示堿基序列的引物或其同樣具有作為引物的功能且包含在嚴(yán)格條件下與同SEQIDNO:21所示堿基序列互補(bǔ)的堿基序列雜交的堿基序列的變異體，以及包含SEQIDNO:22所示堿基序列的引物或其同樣具有作為引物的功能且包含在嚴(yán)格條件下與同SEQIDNO:22所示堿基序列互補(bǔ)的堿基序列雜交的堿基序列的變異體組成，(12)弓丨物組12，由包含SEQIDNO23所示堿基序列的引物或其同樣具有作為引物的功能且包含在嚴(yán)格條件下與同SEQIDNO:23所示堿基序列互補(bǔ)的堿基序列雜交的堿基序列的變異體，以及包含SEQIDNO:24所示堿基序列的引物或其同樣具有作為引物的功能且包含在嚴(yán)格條件下與同SEQIDNO:24所示堿基序列互補(bǔ)的堿基序列雜交的堿基序列的變異體組成，(13)弓丨物組13，由包含SEQIDNO25所示堿基序列的引物或其同樣具有作為引物的功能且包含在嚴(yán)格條件下與同SEQIDNO:25所示堿基序列互補(bǔ)的堿基序列雜交的堿基序列的變異體，以及包含SEQIDNO:26所示堿基序列的引物或其同樣具有作為引物的功能且包含在嚴(yán)格條件下與同SEQIDNO:26所示堿基序列互補(bǔ)的堿基序列雜交的堿基序列的變異體組成，(14)弓丨物組14，由包含SEQIDNO27所示堿基序列的引物或其同樣具有作為引物的功能且包含在嚴(yán)格條件下與同SEQIDNO:27所示堿基序列互補(bǔ)的堿基序列雜交的堿基序列的變異體，以及包含SEQIDNO:28所示堿基序列的引物或其同樣具有作為引物的功能且包含在嚴(yán)格條件下與同SEQIDNO:28所示堿基序列互補(bǔ)的堿基序列雜交的堿基序列的變異體組成，(15)弓丨物組15，由包含SEQIDNO29所示堿基序列的引物或其同樣具有作為引物的功能且包含在嚴(yán)格條件下與同SEQIDNO:29所示堿基序列互補(bǔ)的堿基序列雜交的堿基序列的變異體，以及包含SEQIDNO:30所示堿基序列的引物或其同樣具有作為引物的功能且包含在嚴(yán)格條件下與同SEQIDNO:30所示堿基序列互補(bǔ)的堿基序列雜交的堿基序列的變異體組成，(16)弓丨物組16，由包含SEQIDNO31所示堿基序列的引物或其同樣具有作為引物的功能且包含在嚴(yán)格條件下與同SEQIDNO:31所示堿基序列互補(bǔ)的堿基序列雜交的堿基序列的變異體，以及包含SEQIDNO:32所示堿基序列的引物或其同樣具有作為引物的功能且包含在嚴(yán)格條件下與同SEQIDNO:32所示堿基序列互補(bǔ)的堿基序列雜交的堿基序列的變異體組成，(17)弓丨物組17，由包含SEQIDNO33所示堿基序列的引物或其同樣具有作為引物的功能且包含在嚴(yán)格條件下與同SEQIDNO:33所示堿基序列互補(bǔ)的堿基序列雜交的堿基序列的變異體，以及包含SEQIDNO:34所示堿基序列的引物或其同樣具有作為引物的功能且包含在嚴(yán)格條件下與同SEQIDNO:34所示堿基序列互補(bǔ)的堿基序列雜交的堿基序列的變異體組成，(18)弓丨物組18，由包含SEQIDNO35所示堿基序列的引物或其同樣具有作為引物的功能且包含在嚴(yán)格條件下與同SEQIDNO:35所示堿基序列互補(bǔ)的堿基序列雜交的堿基序列的變異體，以及包含SEQIDNO:36所示堿基序列的引物或其同樣具有作為引物的功能且包含在嚴(yán)格條件下與同SEQIDNO:36所示堿基序列互補(bǔ)的堿基序列雜交的堿基序列的變異體組成，(19)弓丨物組19，由包含SEQIDNO37所示堿基序列的引物或其同樣具有作為引物的功能且包含在嚴(yán)格條件下與同SEQIDNO:37所示堿基序列互補(bǔ)的堿基序列雜交的堿基序列的變異體，以及包含SEQIDNO:38所示堿基序列的引物或其同樣具有作為引物的功能且包含在嚴(yán)格條件下與同SEQIDNO:38所示堿基序列互補(bǔ)的堿基序列雜交的堿基序列的變異體組成，(20)弓丨物組20，由包含SEQIDNO39所示堿基序列的引物或其同樣具有作為引物的功能且包含在嚴(yán)格條件下與同SEQIDNO:39所示堿基序列互補(bǔ)的堿基序列雜交的堿基序列的變異體，以及包含SEQIDNO:40所示堿基序列的引物或其同樣具有作為引物的功能且包含在嚴(yán)格條件下與同SEQIDNO:40所示堿基序列互補(bǔ)的堿基序列雜交的堿基序列的變異體組成，(21)弓丨物組21，由包含SEQIDNO41所示堿基序列的引物或其同樣具有作為引物的功能且包含在嚴(yán)格條件下與同SEQIDNO:41所示堿基序列互補(bǔ)的堿基序列雜交的堿基序列的變異體，以及包含SEQIDNO:42所示堿基序列的引物或其同樣具有作為引物的功能且包含在嚴(yán)格條件下與同SEQIDNO:42所示堿基序列互補(bǔ)的堿基序列雜交的堿基序列的變異體組成，(22)弓丨物組22，由包含SEQIDNO43所示堿基序列的引物或其同樣具有作為引物的功能且包含在嚴(yán)格條件下與同SEQIDNO:43所示堿基序列互補(bǔ)的堿基序列雜交的堿基序列的變異體，以及包含SEQIDNO:44所示堿基序列的引物或其同樣具有作為引物的功能且包含在嚴(yán)格條件下與同SEQIDNO:44所示堿基序列互補(bǔ)的堿基序列雜交的堿基序列的變異體組成，和(23)弓丨物組23，由包含SEQIDNO45所示堿基序列的引物或其同樣具有作為引物的功能且包含在嚴(yán)格條件下與同SEQIDNO:45所示堿基序列互補(bǔ)的堿基序列雜交的堿基序列的變異體，以及包含SEQIDNO:46所示堿基序列的引物或其同樣具有作為引物的功能且包含在嚴(yán)格條件下與同SEQIDNO:46所示堿基序列互補(bǔ)的堿基序列雜交的堿基序列的變異體組成。[2]一種用于檢測人乳頭瘤病毒(HPV)的探針，所述探針是至少一種選自以下的探針(1)包含SEQIDNO:49所示堿基序列的探針或其同樣具有作為探針的功能且包含在嚴(yán)格條件下與同SEQIDNO:49所示堿基序列互補(bǔ)的堿基序列雜交的堿基序列的變異體，或者包含與SEQIDNO:49所示堿基序列互補(bǔ)的堿基序列的探針或其同樣具有作為探針的功能且包含在嚴(yán)格條件下與SEQIDNO:49所示堿基序列雜交的堿基序列的變異體(探針1)，(2)包含SEQIDNO:50所示堿基序列的探針或其同樣具有作為探針的功能且包含在嚴(yán)格條件下與同SEQIDNO:50所示堿基序列互補(bǔ)的堿基序列雜交的堿基序列的變異體，或者包含與SEQIDNO:50所示堿基序列互補(bǔ)的堿基序列的探針或其同樣具有作為探針的功能且包含在嚴(yán)格條件下與SEQIDNO:50所示堿基序列雜交的堿基序列的變異體(探針2)，(3)包含SEQIDNO:51所示堿基序列的探針或其同樣具有作為探針的功能且包含在嚴(yán)格條件下與同SEQIDNO:51所示堿基序列互補(bǔ)的堿基序列雜交的堿基序列的變異體，或者包含與SEQIDNO:51所示堿基序列互補(bǔ)的堿基序列的探針或其同樣具有作為探針的功能且包含在嚴(yán)格條件下與SEQIDNO:51所示堿基序列雜交的堿基序列的變異體(探針3)，(4)包含SEQIDNO:52所示堿基序列的探針或其同樣具有作為探針的功能且包含在嚴(yán)格條件下與同SEQIDNO:52所示堿基序列互補(bǔ)的堿基序列雜交的堿基序列的變異體，或者包含與SEQIDNO:52所示堿基序列互補(bǔ)的堿基序列的探針或其同樣具有作為探針的功能且包含在嚴(yán)格條件下與SEQIDNO:52所示堿基序列雜交的堿基序列的變異體(探針4)，(5)包含SEQIDNO:53所示堿基序列的探針或其同樣具有作為探針的功能且包含在嚴(yán)格條件下與同SEQIDNO:53所示堿基序列互補(bǔ)的堿基序列雜交的堿基序列的變異體，或者包含與SEQIDNO:53所示堿基序列互補(bǔ)的堿基序列的探針或其同樣具有作為探針的功能且包含在嚴(yán)格條件下與SEQIDNO:53所示堿基序列雜交的堿基序列的變異體(探針5)，(6)包含SEQIDNO:54所示堿基序列的探針或其同樣具有作為探針的功能且包含在嚴(yán)格條件下與同SEQIDNO:54所示堿基序列互補(bǔ)的堿基序列雜交的堿基序列的變異體，或者包含與SEQIDNO:54所示堿基序列互補(bǔ)的堿基序列的探針或其同樣具有作為探針的功能且包含在嚴(yán)格條件下與SEQIDNO:54所示堿基序列雜交的堿基序列的變異體(探針6)，(7)包含SEQIDNO:55所示堿基序列的探針或其同樣具有作為探針的功能且包含在嚴(yán)格條件下與同SEQIDNO:55所示堿基序列互補(bǔ)的堿基序列雜交的堿基序列的變異體，或者包含與SEQIDNO:55所示堿基序列互補(bǔ)的堿基序列的探針或其同樣具有作為探針的功能且包含在嚴(yán)格條件下與SEQIDNO:55所示堿基序列雜交的堿基序列的變異體(探針7)，(8)包含SEQIDNO:56所示堿基序列的探針或其同樣具有作為探針的功能且包含在嚴(yán)格條件下與同SEQIDNO:56所示堿基序列互補(bǔ)的堿基序列雜交的堿基序列的變異體，或者包含與SEQIDNO:56所示堿基序列互補(bǔ)的堿基序列的探針或其同樣具有作為探針的功能且包含在嚴(yán)格條件下與SEQIDNO:56所示堿基序列雜交的堿基序列的變異體(探針8)，(9)包含SEQIDNO:57所示堿基序列的探針或其同樣具有作為探針的功能且包含在嚴(yán)格條件下與同SEQIDNO:57所示堿基序列互補(bǔ)的堿基序列雜交的堿基序列的變異體，或者包含與SEQIDNO:57所示堿基序列互補(bǔ)的堿基序列的探針或其同樣具有作為探針的功能且包含在嚴(yán)格條件下與SEQIDNO:57所示堿基序列雜交的堿基序列的變異體(探針9)，(10)包含SEQIDNO58所示堿基序列的探針或其同樣具有作為探針的功能且包含在嚴(yán)格條件下與同SEQIDNO:58所示堿基序列互補(bǔ)的堿基序列雜交的堿基序列的變異20體，或者包含與SEQIDNO:58所示堿基序列互補(bǔ)的堿基序列的探針或其同樣具有作為探針的功能且包含在嚴(yán)格條件下與SEQIDNO:58所示堿基序列雜交的堿基序列的變異體(探針10)，(11)包含SEQIDNO59所示堿基序列的探針或其同樣具有作為探針的功能且包含在嚴(yán)格條件下與同SEQIDNO:59所示堿基序列互補(bǔ)的堿基序列雜交的堿基序列的變異體，或者包含與SEQIDNO:59所示堿基序列互補(bǔ)的堿基序列的探針或其同樣具有作為探針的功能且包含在嚴(yán)格條件下與SEQIDNO:59所示堿基序列雜交的堿基序列的變異體(探針11)，(12)包含SEQIDNO60所示堿基序列的探針或其同樣具有作為探針的功能且包含在嚴(yán)格條件下與同SEQIDNO:60所示堿基序列互補(bǔ)的堿基序列雜交的堿基序列的變異體，或者包含與SEQIDNO:60所示堿基序列互補(bǔ)的堿基序列的探針或其同樣具有作為探針的功能且包含在嚴(yán)格條件下與SEQIDNO:60所示堿基序列雜交的堿基序列的變異體(探針12)，(13)包含SEQIDNO61所示堿基序列的探針或其同樣具有作為探針的功能且包含在嚴(yán)格條件下與同SEQIDNO:61所示堿基序列互補(bǔ)的堿基序列雜交的堿基序列的變異體，或者包含與SEQIDNO:61所示堿基序列互補(bǔ)的堿基序列的探針或其同樣具有作為探針的功能且包含在嚴(yán)格條件下與SEQIDNO:61所示堿基序列雜交的堿基序列的變異體(探針13)，(14)包含SEQIDNO62所示堿基序列的探針或其同樣具有作為探針的功能且包含在嚴(yán)格條件下與同SEQIDNO:62所示堿基序列互補(bǔ)的堿基序列雜交的堿基序列的變異體，或者包含與SEQIDNO:62所示堿基序列互補(bǔ)的堿基序列的探針或其同樣具有作為探針的功能且包含在嚴(yán)格條件下與SEQIDNO:62所示堿基序列雜交的堿基序列的變異體(探針14)，(15)包含SEQIDNO63所示堿基序列的探針或其同樣具有作為探針的功能且包含在嚴(yán)格條件下與同SEQIDNO:63所示堿基序列互補(bǔ)的堿基序列雜交的堿基序列的變異體，或者包含與SEQIDNO:63所示堿基序列互補(bǔ)的堿基序列的探針或其同樣具有作為探針的功能且包含在嚴(yán)格條件下與SEQIDNO:63所示堿基序列雜交的堿基序列的變異體(探針15)，(16)包含SEQIDNO:64所示堿基序列的探針或其同樣具有作為探針的功能且包含在嚴(yán)格條件下與同SEQIDNO:64所示堿基序列互補(bǔ)的堿基序列雜交的堿基序列的變異體，或者包含與SEQIDNO:64所示堿基序列互補(bǔ)的堿基序列的探針或其同樣具有作為探針的功能且包含在嚴(yán)格條件下與SEQIDNO:64所示堿基序列雜交的堿基序列的變異體(探針16)，(17)包含SEQIDNO:65所示堿基序列的探針或其同樣具有作為探針的功能且包含在嚴(yán)格條件下與同SEQIDNO:65所示堿基序列互補(bǔ)的堿基序列雜交的堿基序列的變異體，或者包含與SEQIDNO:65所示堿基序列互補(bǔ)的堿基序列的探針或其同樣具有作為探針的功能且包含在嚴(yán)格條件下與SEQIDNO:65所示堿基序列雜交的堿基序列的變異體(探針17)，(18)包含SEQIDNO66所示堿基序列的探針或其同樣具有作為探針的功能且包21含在嚴(yán)格條件下與同SEQIDNO:66所示堿基序列互補(bǔ)的堿基序列雜交的堿基序列的變異體，或者包含與SEQIDNO:66所示堿基序列互補(bǔ)的堿基序列的探針或其同樣具有作為探針的功能且包含在嚴(yán)格條件下與SEQIDNO:66所示堿基序列雜交的堿基序列的變異體(探針18)，(19)包含SEQIDNO67所示堿基序列的探針或其同樣具有作為探針的功能且包含在嚴(yán)格條件下與同SEQIDNO:67所示堿基序列互補(bǔ)的堿基序列雜交的堿基序列的變異體，或者包含與SEQIDNO:67所示堿基序列互補(bǔ)的堿基序列的探針或其同樣具有作為探針的功能且包含在嚴(yán)格條件下與SEQIDNO:67所示堿基序列雜交的堿基序列的變異體(探針19)，(20)包含SEQIDNO68所示堿基序列的探針或其同樣具有作為探針的功能且包含在嚴(yán)格條件下與同SEQIDNO:68所示堿基序列互補(bǔ)的堿基序列雜交的堿基序列的變異體，或者包含與SEQIDNO:68所示堿基序列互補(bǔ)的堿基序列的探針或其同樣具有作為探針的功能且包含在嚴(yán)格條件下與SEQIDNO:68所示堿基序列雜交的堿基序列的變異體(探針20)，(21)包含SEQIDNO69所示堿基序列的探針或其同樣具有作為探針的功能且包含在嚴(yán)格條件下與同SEQIDNO:69所示堿基序列互補(bǔ)的堿基序列雜交的堿基序列的變異體，或者包含與SEQIDNO:69所示堿基序列互補(bǔ)的堿基序列的探針或其同樣具有作為探針的功能且包含在嚴(yán)格條件下與SEQIDNO:69所示堿基序列雜交的堿基序列的變異體(探針21)，(22)包含SEQIDNO70所示堿基序列的探針或其同樣具有作為探針的功能且包含在嚴(yán)格條件下與同SEQIDNO:70所示堿基序列互補(bǔ)的堿基序列雜交的堿基序列的變異體，或者包含與SEQIDNO:70所示堿基序列互補(bǔ)的堿基序列的探針或其同樣具有作為探針的功能且包含在嚴(yán)格條件下與SEQIDNO:70所示堿基序列雜交的堿基序列的變異體(探針22)，和(23)包含SEQIDNO71所示堿基序列的探針或其同樣具有作為探針的功能且包含在嚴(yán)格條件下與同SEQIDNO:71所示堿基序列互補(bǔ)的堿基序列雜交的堿基序列的變異體，或者包含與SEQIDNO:71所示堿基序列互補(bǔ)的堿基序列的探針或其同樣具有作為探針的功能且包含在嚴(yán)格條件下與SEQIDNO:71所示堿基序列雜交的堿基序列的變異體(探針23)。[3]一種用于檢測人乳頭瘤病毒(HPV)的試劑盒，所述試劑盒包含(1)引物組1和探針1的組合，(2)引物組2和探針2的組合，(3)引物組3和探針3的組合，(4)引物組4和探針4的組合，(5)引物組5和探針5的組合，(6)引物組6和探針6的組合，(7)引物組7和探針7的組合，(8)引物組8和探針8的組合，(9)引物組9和探針9的組合，(10)弓丨物組10和探針10的組合，(11)弓丨物組11和探針11的組合，(12)引物組12和探針12的組合，(13)弓丨物組13和探針13的組合，(14)弓丨物組14和探針14的組合，(15)弓丨物組15和探針15的組合，(16)弓丨物組16和探針16的組合，(17)弓丨物組17和探針17的組合，(18)弓丨物組18和探針18的組合，(19)弓丨物組19和探針19的組合，(20)引物組20和探針20的組合，(21)引物組21和探針21的組合，(22)引物組22和探針22的組合及(23)引物組23和探針23的組合，以及任選(24)引物組24和探針24的組22合。[4]上述[3]的試劑盒，所述試劑盒包含兩種或更多種選自上述組合(1)(23)的組合。[5]上述[3]或[4]的試劑盒，所述試劑盒包含引物組3和探針3的組合及引物組4和探針4的組合，以及任選引物組24和探針24的組合。[6]上述[3]或[4]的試劑盒，所述試劑盒包含引物組3和探針3的組合、引物組4和探針4的組合、引物組5和探針5的組合、引物組6和探針6的組合、引物組7和探針7的組合、引物組9和探針9的組合、引物組10和探針10的組合、引物組13和探針13的組合、引物組14和探針14的組合、引物組15和探針15的組合、引物組18和探針18的組合、引物組19和探針19的組合、引物組20和探針20的組合及引物組23和探針23的組合，以及任選引物組24和探針24的組合。[7]上述[3]或[4]的試劑盒，所述試劑盒包含引物組1和探針1的組合、引物組2和探針2的組合、引物組3和探針3的組合、引物組4和探針4的組合、引物組5和探針5的組合、引物組6和探針6的組合、引物組7和探針7的組合、引物組8和探針8的組合、引物組9和探針9的組合、引物組10和探針10的組合、引物組11和探針11的組合、引物組12和探針12的組合、引物組13和探針13的組合、引物組14和探針14的組合、引物組15和探針15的組合、引物組16和探針16的組合、引物組17和探針17的組合、引物組18和探針18的組合、引物組19和探針19的組合、引物組20和探針20的組合、引物組21和探針21的組合、引物組22和探針22的組合及引物組23和探針23的組合，以及任選引物組24和探針24的組合。[8]一種通過使用上述[3][7]中任一項(xiàng)的試劑盒以型特異性方式檢測樣品中HPV存在與否的方法，所述方法包括使用前述引物組和從樣品中提取的DNA作為模板進(jìn)行PCR的步驟，以及檢測擴(kuò)增DNA產(chǎn)物的步驟。[9]一種通過使用上述[3][7]中任一項(xiàng)的試劑盒以型特異性方式檢測樣品中HPV存在與否的方法，所述方法包括使用前述引物組和從樣品中提取的DNA作為模板進(jìn)行PCR的步驟，處理擴(kuò)增DNA產(chǎn)物以具有單鏈的步驟，以及使單鏈DNA與前述探針雜交后進(jìn)行檢測的步驟。[10]一種用于檢測HPV的DNA微陣列，其中將至少一種選自上述[2]中所述的探針123的探針固定化。[11]上述[10]的DNA微陣列，其中將兩種或更多種選自上述[2]中所述的探針123的探針固定化。[12]上述[10]或[11]的DNA微陣列，其中將探針24固定化。發(fā)明的有益效果本發(fā)明提供能夠方便快速地以高特異性和高靈敏度檢測多種HPV類型的引物組和探針。本發(fā)明還提供通過使用前述引物組和探針能夠方便快速地以高特異性和高靈敏度檢測多種HPV類型的方法。附圖簡述圖1表示使用磁珠分離單鏈DNA的步驟(反義鏈DNA的分離)的概念圖。圖2表示擴(kuò)增DNA產(chǎn)物的瓊脂糖凝膠電泳的結(jié)果。圖3表示制備的DNA微陣列上的點(diǎn)配置。圖4掃描影像表示檢測經(jīng)分離的標(biāo)記單鏈DNA與DNA微陣列雜交的結(jié)果。圖5表示使用磁珠進(jìn)行與不進(jìn)行單鏈DNA分離步驟之間HPV檢測靈敏度的差異。實(shí)施發(fā)明的最佳方式本發(fā)明提供用于擴(kuò)增HPV基因的PCR引物組，特別是型特異性引物組。引物組的實(shí)例包括下列(1)(23)所示的引物組。(1)引物組1，由包含SEQIDNO:1所示堿基序列的引物或其同樣具有作為引物的功能且包含在嚴(yán)格條件下與同SEQIDNO:1所示堿基序列互補(bǔ)的堿基序列雜交的堿基序列的變異體，以及包含SEQIDNO2所示堿基序列的引物或其同樣具有作為引物的功能且包含在嚴(yán)格條件下與同SEQIDNO:2所示堿基序列互補(bǔ)的堿基序列雜交的堿基序列的變異體組成，(2)引物組2，由包含SEQIDNO:3所示堿基序列的引物或其同樣具有作為引物的功能且包含在嚴(yán)格條件下與同SEQIDNO:3所示堿基序列互補(bǔ)的堿基序列雜交的堿基序列的變異體，以及包含SEQIDNO:4所示堿基序列的引物或其同樣具有作為引物的功能且包含在嚴(yán)格條件下與同SEQIDNO:4所示堿基序列互補(bǔ)的堿基序列雜交的堿基序列的變異體組成，(3)引物組3，由包含SEQIDNO:5所示堿基序列的引物或其同樣具有作為引物的功能且包含在嚴(yán)格條件下與同SEQIDNO:5所示堿基序列互補(bǔ)的堿基序列雜交的堿基序列的變異體，以及包含SEQIDNO6所示堿基序列的引物或其同樣具有作為引物的功能且包含在嚴(yán)格條件下與同SEQIDNO:6所示堿基序列互補(bǔ)的堿基序列雜交的堿基序列的變異體組成，(4)引物組4，由包含SEQIDNO:7所示堿基序列的引物或其同樣具有作為引物的功能且包含在嚴(yán)格條件下與同SEQIDNO:7所示堿基序列互補(bǔ)的堿基序列雜交的堿基序列的變異體，以及包含SEQIDNO8所示堿基序列的引物或其同樣具有作為引物的功能且包含在嚴(yán)格條件下與同SEQIDNO:8所示堿基序列互補(bǔ)的堿基序列雜交的堿基序列的變異體組成，(5)引物組5，由包含SEQIDNO:9所示堿基序列的引物或其同樣具有作為引物的功能且包含在嚴(yán)格條件下與同SEQIDNO:9所示堿基序列互補(bǔ)的堿基序列雜交的堿基序列的變異體，以及包含SEQIDNO10所示堿基序列的引物或其同樣具有作為引物的功能且包含在嚴(yán)格條件下與同SEQIDNO:10所示堿基序列互補(bǔ)的堿基序列雜交的堿基序列的變異體組成，(6)引物組6，由包含SEQIDNO:11所示堿基序列的引物或其同樣具有作為引物的功能且包含在嚴(yán)格條件下與同SEQIDNO:11所示堿基序列互補(bǔ)的堿基序列雜交的堿基序列的變異體，以及包含SEQIDNO12所示堿基序列的引物或其同樣具有作為引物的功能且包含在嚴(yán)格條件下與同SEQIDNO:12所示堿基序列互補(bǔ)的堿基序列雜交的堿基序列的變異體組成，(7)引物組7，由包含SEQIDNO:13所示堿基序列的引物或其同樣具有作為引物的功能且包含在嚴(yán)格條件下與同SEQIDNO:13所示堿基序列互補(bǔ)的堿基序列雜交的堿基序列的變異體，以及包含SEQIDNO:14所示堿基序列的引物或其同樣具有作為引物的功能且包含在嚴(yán)格條件下與同SEQIDNO:14所示堿基序列互補(bǔ)的堿基序列雜交的堿基序列的變異體組成，(8)引物組8，由包含SEQIDNO:15所示堿基序列的引物或其同樣具有作為引物的功能且包含在嚴(yán)格條件下與同SEQIDNO:15所示堿基序列互補(bǔ)的堿基序列雜交的堿基序列的變異體，以及包含SEQIDNO16所示堿基序列的引物或其同樣具有作為引物的功能且包含在嚴(yán)格條件下與同SEQIDNO:16所示堿基序列互補(bǔ)的堿基序列雜交的堿基序列的變異體組成，(9)引物組9，由包含SEQIDNO:17所示堿基序列的引物或其同樣具有作為引物的功能且包含在嚴(yán)格條件下與同SEQIDNO:17所示堿基序列互補(bǔ)的堿基序列雜交的堿基序列的變異體，以及包含SEQIDNO18所示堿基序列的引物或其同樣具有作為引物的功能且包含在嚴(yán)格條件下與同SEQIDNO:18所示堿基序列互補(bǔ)的堿基序列雜交的堿基序列的變異體組成，(10)引物組10，由包含SEQIDNO:19所示堿基序列的引物或其同樣具有作為引物的功能且包含在嚴(yán)格條件下與同SEQIDNO:19所示堿基序列互補(bǔ)的堿基序列雜交的堿基序列的變異體，以及包含SEQIDNO:20所示堿基序列的引物或其同樣具有作為引物的功能且包含在嚴(yán)格條件下與同SEQIDNO:20所示堿基序列互補(bǔ)的堿基序列雜交的堿基序列的變異體組成，(11)弓丨物組11，由包含SEQIDNO21所示堿基序列的引物或其同樣具有作為引物的功能且包含在嚴(yán)格條件下與同SEQIDNO:21所示堿基序列互補(bǔ)的堿基序列雜交的堿基序列的變異體，以及包含SEQIDNO:22所示堿基序列的引物或其同樣具有作為引物的功能且包含在嚴(yán)格條件下與同SEQIDNO:22所示堿基序列互補(bǔ)的堿基序列雜交的堿基序列的變異體組成，(12)弓丨物組12，由包含SEQIDNO23所示堿基序列的引物或其同樣具有作為引物的功能且包含在嚴(yán)格條件下與同SEQIDNO:23所示堿基序列互補(bǔ)的堿基序列雜交的堿基序列的變異體，以及包含SEQIDNO:24所示堿基序列的引物或其同樣具有作為引物的功能且包含在嚴(yán)格條件下與同SEQIDNO:24所示堿基序列互補(bǔ)的堿基序列雜交的堿基序列的變異體組成，(13)弓丨物組13，由包含SEQIDNO25所示堿基序列的引物或其同樣具有作為引物的功能且包含在嚴(yán)格條件下與同SEQIDNO:25所示堿基序列互補(bǔ)的堿基序列雜交的堿基序列的變異體，以及包含SEQIDNO:26所示堿基序列的引物或其同樣具有作為引物的功能且包含在嚴(yán)格條件下與同SEQIDNO:26所示堿基序列互補(bǔ)的堿基序列雜交的堿基序列的變異體組成，(14)弓丨物組14，由包含SEQIDNO27所示堿基序列的引物或其同樣具有作為引物的功能且包含在嚴(yán)格條件下與同SEQIDNO:27所示堿基序列互補(bǔ)的堿基序列雜交的堿基序列的變異體，以及包含SEQIDNO:28所示堿基序列的引物或其同樣具有作為引物的功能且包含在嚴(yán)格條件下與同SEQIDNO:28所示堿基序列互補(bǔ)的堿基序列雜交的堿基序列的變異體組成，(15)引物組15，由包含SEQIDNO29所示堿基序列的引物或其同樣具有作為引物的功能且包含在嚴(yán)格條件下與同SEQIDNO:29所示堿基序列互補(bǔ)的堿基序列雜交的堿25基序列的變異體，以及包含SEQIDNO:30所示堿基序列的引物或其同樣具有作為引物的功能且包含在嚴(yán)格條件下與同SEQIDNO:30所示堿基序列互補(bǔ)的堿基序列雜交的堿基序列的變異體組成，(16)弓丨物組16，由包含SEQIDNO31所示堿基序列的引物或其同樣具有作為引物的功能且包含在嚴(yán)格條件下與同SEQIDNO:31所示堿基序列互補(bǔ)的堿基序列雜交的堿基序列的變異體，以及包含SEQIDNO:32所示堿基序列的引物或其同樣具有作為引物的功能且包含在嚴(yán)格條件下與同SEQIDNO:32所示堿基序列互補(bǔ)的堿基序列雜交的堿基序列的變異體組成，(17)弓丨物組17，由包含SEQIDNO33所示堿基序列的引物或其同樣具有作為引物的功能且包含在嚴(yán)格條件下與同SEQIDNO:33所示堿基序列互補(bǔ)的堿基序列雜交的堿基序列的變異體，以及包含SEQIDNO:34所示堿基序列的引物或其同樣具有作為引物的功能且包含在嚴(yán)格條件下與同SEQIDNO:34所示堿基序列互補(bǔ)的堿基序列雜交的堿基序列的變異體組成，(18)弓丨物組18，由包含SEQIDNO35所示堿基序列的引物或其同樣具有作為引物的功能且包含在嚴(yán)格條件下與同SEQIDNO:35所示堿基序列互補(bǔ)的堿基序列雜交的堿基序列的變異體，以及包含SEQIDNO:36所示堿基序列的引物或其同樣具有作為引物的功能且包含在嚴(yán)格條件下與同SEQIDNO:36所示堿基序列互補(bǔ)的堿基序列雜交的堿基序列的變異體組成，(19)弓丨物組19，由包含SEQIDNO37所示堿基序列的引物或其同樣具有作為引物的功能且包含在嚴(yán)格條件下與同SEQIDNO:37所示堿基序列互補(bǔ)的堿基序列雜交的堿基序列的變異體，以及包含SEQIDNO:38所示堿基序列的引物或其同樣具有作為引物的功能且包含在嚴(yán)格條件下與同SEQIDNO:38所示堿基序列互補(bǔ)的堿基序列雜交的堿基序列的變異體組成，(20)引物組20，由包含SEQIDNO39所示堿基序列的引物或其同樣具有作為引物的功能且包含在嚴(yán)格條件下與同SEQIDNO:39所示堿基序列互補(bǔ)的堿基序列雜交的堿基序列的變異體，以及包含SEQIDNO:40所示堿基序列的引物或其同樣具有作為引物的功能且包含在嚴(yán)格條件下與同SEQIDNO:40所示堿基序列互補(bǔ)的堿基序列雜交的堿基序列的變異體組成，(21)弓丨物組21，由包含SEQIDNO41所示堿基序列的引物或其同樣具有作為引物的功能且包含在嚴(yán)格條件下與同SEQIDNO:41所示堿基序列互補(bǔ)的堿基序列雜交的堿基序列的變異體，以及包含SEQIDNO:42所示堿基序列的引物或其同樣具有作為引物的功能且包含在嚴(yán)格條件下與同SEQIDNO:42所示堿基序列互補(bǔ)的堿基序列雜交的堿基序列的變異體組成，(22)引物組22，由包含SEQIDNO:43所示堿基序列的引物或其同樣具有作為引物的功能且包含在嚴(yán)格條件下與同SEQIDNO:43所示堿基序列互補(bǔ)的堿基序列雜交的堿基序列的變異體，以及包含SEQIDNO:44所示堿基序列的引物或其同樣具有作為引物的功能且包含在嚴(yán)格條件下與同SEQIDNO:44所示堿基序列互補(bǔ)的堿基序列雜交的堿基序列的變異體組成，和(23)引物組23，由包含SEQIDNO:45所示堿基序列的引物或其同樣具有作為引26物的功能且包含在嚴(yán)格條件下與同SEQIDNO:45所示堿基序列互補(bǔ)的堿基序列雜交的堿基序列的變異體，以及包含SEQIDNO:46所示堿基序列的引物或其同樣具有作為引物的功能且包含在嚴(yán)格條件下與同SEQIDNO:46所示堿基序列互補(bǔ)的堿基序列雜交的堿基序列的變異體組成。引物組1中的“包含SEQIDNO:1所示堿基序列的引物”和“包含SEQIDNO2所示堿基序列的引物”表示的含義分別與“包含SEQIDNO1所示堿基序列的寡核苷酸”和“包含SEQIDNO:2所示堿基序列的寡核苷酸”相同，下文亦分別簡稱為“SEQIDN0:1的引物”和“SEQIDNO:2的引物’’?！捌渫瑯泳哂凶鳛橐锏墓δ芮野趪?yán)格條件下與同SEQIDNO:1所示堿基序列互補(bǔ)的堿基序列雜交的堿基序列的變異體”是在嚴(yán)格條件下與包含同SEQIDN0:1所示堿基序列互補(bǔ)的堿基序列的上述寡核苷酸雜交、且具有作為類似于包含SEQIDN0:1所示堿基序列的寡核苷酸的引物的功能的寡核苷酸，所述功能即能夠通過與包含SEQIDN0:2所示堿基序列的引物混合，使HPV6基因的特定區(qū)域進(jìn)行PCR擴(kuò)增的功能。在下文中，該變異體亦簡稱為“SEQIDNO:1的引物變異體”。同樣，“其同樣具有作為引物的功能且包含在嚴(yán)格條件下與同SEQIDNO:2所示堿基序列互補(bǔ)的堿基序列雜交的堿基序列的變異體”是在嚴(yán)格條件下與包含同SEQIDNO:2所示堿基序列互補(bǔ)的堿基序列的上述寡核苷酸雜交、且具有作為類似于包含SEQIDNO2所示堿基序列的寡核苷酸的引物的功能的寡核苷酸，所述功能即能夠通過與包含SEQIDNO:1所示堿基序列的引物混合，使HPV6基因的特定區(qū)域進(jìn)行PCR擴(kuò)增的功能。在下文中，亦簡稱為“SEQIDNO:2的引物變異體”?！白儺愺w”是在保持其作為引物的功能不變的范圍內(nèi)，原寡核苷酸中取代、缺失、插入或添加一個(gè)或多個(gè)核苷酸。已知雜交中的嚴(yán)格性是溫度、鹽濃度、引物鏈長、引物核苷酸序列的GC含量和雜交緩沖液中離液劑濃度的函數(shù)。至于嚴(yán)格條件，可采用例如以下文獻(xiàn)描述的條件Sambrook,J.等(1998)MolecularCloning-ΛLaboratoryManual(第二片反)，ColdSpringHarborLaboratoryPress，NewYork等。嚴(yán)格溫度條件約為30°C以上，更優(yōu)選約37°C以上，最優(yōu)選約42°C以上。其它條件為雜交時(shí)間、去污劑(例如SDS)濃度、載體DNA存在與否等，通過綜合這些條件可設(shè)置各種嚴(yán)格性。本領(lǐng)域普通技術(shù)人員可適當(dāng)?shù)卮_定各條件以獲得具有作為PCR引物的功能以擴(kuò)增所需HPV基因的變異體。引物組1由“SEQIDNO1的引物”或“SEQIDNO1的引物變異體”和“SEQIDNO2的引物”或“SEQIDNO2的引物變異體”組成，優(yōu)選由“SEQIDNO1的引物”和“SEQIDNO2的引物”組成?？砂凑张c引物組1相同的方式定義引物組2引物組23的每個(gè)引物。具體來講，引物組2由“SEQIDNO3的引物”或“SEQIDNO3的引物變異體”和“SEQIDNO4的引物”或“SEQIDNO:4的引物變異體”組成，優(yōu)選由“SEQIDNO:3的引物，，和“SEQIDN0:4的引物”組成，并且可以擴(kuò)增HPVll基因的特定區(qū)域，引物組3由“SEQIDNO:5的引物”或“SEQIDNO:5的引物變異體”和“SEQIDNO6的引物”或“SEQIDNO6的引物變異體”組成，優(yōu)選由“SEQIDNO5的引物”和“SEQIDNO6的引物”組成，并且可以擴(kuò)增HPV16基因的特定區(qū)域，引物組4由“SEQIDNO:7的引物，，或“SEQIDNO:7的引物變異體”和“SEQIDNO8的引物”或“SEQIDNO8的引物變異體”組成，優(yōu)選由“SEQIDNO7的引物”和“SEQIDNO8的引物”組成，并且可以擴(kuò)增HPV18基因的特定區(qū)域，引物組5由“SEQIDNO:9的引物，，或“SEQIDNO:9的引物變異體”和“SEQIDN0:10的引物”或“SEQIDN0:10的引物變異體”組成，優(yōu)選由“SEQIDNO:9的引物”和"SEQIDN0:10的引物”組成，并且可以擴(kuò)增HPV30基因的特定區(qū)域，引物組6由“SEQIDNO11的引物”或“SEQIDNO11的引物變異體”和“SEQIDN0:12的引物”或“SEQIDNO12的引物變異體”組成，優(yōu)選由“SEQIDN0:11的引物’’和"SEQIDN0:12的引物”組成，并且可以擴(kuò)增HPV31基因的特定區(qū)域，引物組7由“SEQIDNO13的引物”或“SEQIDNO13的引物變異體”和“SEQIDN0:14的引物”或“SEQIDNO14的引物變異體”組成，優(yōu)選由“SEQIDN0:13的引物’’和"SEQIDN0:14的引物”組成，并且可以擴(kuò)增HPV33基因的特定區(qū)域，引物組8由“SEQIDNO15的引物”或“SEQIDNO15的引物變異體”和“SEQIDN0:16的引物”或“SEQIDNO16的引物變異體”組成，優(yōu)選由“SEQIDN0:15的引物’’和"SEQIDN0:16的引物”組成，并且可以擴(kuò)增HPV34基因的特定區(qū)域，引物組9由“SEQIDNO17的引物”或“SEQIDNO17的引物變異體”和“SEQIDN0:18的引物”或“SEQIDNO18的引物變異體”組成，優(yōu)選由“SEQIDN0:17的引物’’和"SEQIDN0:18的引物”組成，并且可以擴(kuò)增HPV35基因的特定區(qū)域，引物組10由“SEQIDNO19的引物”或“SEQIDNO19的引物變異體”和“SEQIDNO20的引物，，或“SEQIDNO:20的引物變異體”組成，優(yōu)選由“SEQIDN0:19的引物”和“SEQIDN0:20的引物”組成，并且可以擴(kuò)增HPV39基因的特定區(qū)域，引物組11由“SEQIDNO21的引物”或“SEQIDNO21的引物變異體”和“SEQIDNO22的引物，，或“SEQIDNO:22的引物變異體”組成，優(yōu)選由“SEQIDNO21的引物”和“SEQIDN0:22的引物”組成，并且可以擴(kuò)增HPV40基因的特定區(qū)域，引物組12由“SEQIDNO:23的引物”或“SEQIDNO:23的引物變異體”和“SEQIDNO:24的引物”或“SEQIDNO:24的引物變異體”組成，優(yōu)選由“SEQIDNO:23的引物”和“SEQIDNO24的引物”組成，并且可以擴(kuò)增HPV42基因的特定區(qū)域，引物組13由“SEQIDNO:25的引物”或“SEQIDNO:25的引物變異體”和“SEQIDNO26的引物，，或“SEQIDNO:26的引物變異體”組成，優(yōu)選由“SEQIDNO:25的引物”和“SEQIDN0:26的引物”組成，并且可以擴(kuò)增HPV45基因的特定區(qū)域，引物組14由“SEQIDNO27的引物”或“SEQIDNO27的引物變異體”和“SEQIDNO28的引物，，或“SEQIDNO:28的引物變異體”組成，優(yōu)選由“SEQIDNO:27的引物”和“SEQIDN0:28的引物”組成，并且可以擴(kuò)增HPV51基因的特定區(qū)域，引物組15由“SEQIDNO:29的引物”或“SEQIDNO:29的引物變異體”和“SEQIDNO30的引物，，或“SEQIDNO:30的引物變異體”組成，優(yōu)選由“SEQIDNO:29的引物”和“SEQIDN0:30的引物”組成，并且可以擴(kuò)增HPV52基因的特定區(qū)域，引物組16由“SEQIDNO31的引物”或“SEQIDNO31的引物變異體”和“SEQIDNO32的引物，，或“SEQIDNO:32的引物變異體”組成，優(yōu)選由“SEQIDNO31的引物”和“SEQIDN0:32的引物”組成，并且可以擴(kuò)增HPV53基因的特定區(qū)域，引物組17由“SEQIDNO:33的引物”或“SEQIDNO:33的引物變異體”和“SEQIDNO:34的引物”或“SEQIDNO:34的引物變異體”組成，優(yōu)選由“SEQIDNO:33的引物”和“SEQIDNO34的引物”組成，并且可以擴(kuò)增HPV54基因的特定區(qū)域，引物組18由“SEQIDNO:35的引物”或“SEQIDNO:35的引物變異體”和“SEQIDNO36的引物，，或“SEQIDNO:36的引物變異體”組成，優(yōu)選由“SEQIDNO:35的引物”和“SEQIDN0:36的引物”組成，并且可以擴(kuò)增HPV56基因的特定區(qū)域，引物組19由“SEQIDNO:37的引物”或“SEQIDNO:37的引物變異體”和“SEQIDNO38的引物，，或“SEQIDNO:38的引物變異體”組成，優(yōu)選由“SEQIDNO:37的引物”和“SEQIDN0:38的引物”組成，并且可以擴(kuò)增HPV58基因的特定區(qū)域，弓I物組20由“SEQIDNO39的引物，，或“SEQIDNO39的引物變異體，，和“SEQIDNO:40的引物”或“SEQIDNO:40的引物變異體”組成，優(yōu)選由“SEQIDNO:39的引物”和“SEQIDN0:40的引物”組成，并且可以擴(kuò)增HPV59基因的特定區(qū)域，引物組21由“SEQIDNO41的引物”或“SEQIDNO41的引物變異體”和“SEQIDNO42的引物”或“SEQIDNO42的引物變異體”組成，優(yōu)選由“SEQIDNO41的引物”和“SEQIDN0:42的引物”組成，并且可以擴(kuò)增HPV61基因的特定區(qū)域，引物組22由“SEQIDNO:43的引物”或“SEQIDNO:43的引物變異體”和“SEQIDNO:44的引物，，或“SEQIDNO:44的引物變異體”組成，優(yōu)選由“SEQIDNO:43的引物”和“SEQIDNO44的引物”組成，并且可以擴(kuò)增HPV66基因的特定區(qū)域，引物組23由“SEQIDNO:45的引物”或“SEQIDNO:45的引物變異體”和“SEQIDNO:46的引物”或“SEQIDNO:46的引物變異體”組成，優(yōu)選由“SEQIDNO:45的引物”和“SEQIDN0:46的引物”組成，并且可以擴(kuò)增HPV68基因的特定區(qū)域。各引物組的一個(gè)實(shí)例見表1。如稍后所述，在本發(fā)明中，可以任選使用用作內(nèi)標(biāo)以擴(kuò)增G3PDH(甘油醛三磷酸脫氫酶)基因的引物組。用于擴(kuò)增G3PDH基因的引物組(引物組24)由包含SEQIDNO:47所示堿基序列的引物或其同樣具有作為引物的功能且包含在嚴(yán)格條件下與同SEQIDNO:47所示堿基序列互補(bǔ)的堿基序列雜交的堿基序列的變異體，以及包含SEQIDNO:48所示堿基序列的引物或其同樣具有作為引物的功能且包含在嚴(yán)格條件下與同SEQIDNO:48所示堿基序列互補(bǔ)的堿基序列雜交的堿基序列的變異體組成。[表1-1]29[表1-2](續(xù))卞表示正向引物，R表示反向引物。#位置(nt)表示基因組上引物5’端與之結(jié)合的位置。在上述表1中，各個(gè)病毒類型基因組和G3PHD上各引物與之結(jié)合的位置(nt)，是表2所示的各基因在GenBank(美國國立生物技術(shù)信息中心(NationalCenterforBiotechnologyInformation,NCBI))登錄號(hào)下的基因序列上的位置。[表2]本發(fā)明的引物被設(shè)計(jì)成提高對各個(gè)HPV基因的特異性(100%互補(bǔ)性)且與其它HPV類型不具有高度同源性的序列，并且引物組之間的Tm值較接近。因此，當(dāng)在一個(gè)試管中進(jìn)行這些引物的混合物的多重PCR時(shí)，可以特異性地?cái)U(kuò)增存在于樣品中HPV基因的特定類型?？梢愿鶕?jù)表1所述的每個(gè)引物的信息來設(shè)計(jì)每個(gè)引物的變異體序列。準(zhǔn)確地講，設(shè)計(jì)SEQIDNO:1的引物變異體以提供同源性與通過以下PCR反應(yīng)得到的PCR產(chǎn)物的同源性相同或較之為高的PCR產(chǎn)物使SEQIDNO1的引物和SEQIDNO2的引物與SEQIDNO2的引物(或SEQIDNO2的引物變異體)進(jìn)行PCR反應(yīng)。同源性水平至少為80%，優(yōu)選至少90%，特別優(yōu)選至少95%。SEQIDNO:1引物的5，端與HPV6(GenBank登錄號(hào)AF092932)基因組上的第7251位結(jié)合。與士50位、優(yōu)選士20位、特別優(yōu)選士10位結(jié)合的引物，也屬于本發(fā)明SEQIDNO1的引物變異體的范圍。作為初始設(shè)置，可應(yīng)用常規(guī)用于本領(lǐng)域的同源性檢索程序(例如BLAST、FASTA等)來確定同源性(％)。另一方面，可運(yùn)用本領(lǐng)域已知的任何算法確定同源性(％)，例如Needleman等(1970)(J.Mol.Biol.48:444_453)、Myers和Miller(CABI0S，1988，4:11_17)的算法等。Needleman等人的算法已被合編到GCG軟件包的GAP程序(可獲自gcg.com)中，可應(yīng)用例如BLOSUM62矩陣或PAM250矩陣；空位權(quán)重(gapweight):16、14、12、10、8、6或4；以及長度權(quán)重1、2、3、4、5或6中的任一個(gè)，來確定同源性(%)0另外，Myers和Miller的算法被合編到GCG序列比對軟件包的組成部分ALIGN程序中。例如，當(dāng)運(yùn)用ALIGN程序比較氨基酸序列時(shí)，可以使用PAM120權(quán)重殘基表(weightresiduetable)、空位長度罰分(gaplengthpenalty)12、和空位罰分4?？梢允褂美缤ㄓ肈NA合成儀(例如由AppliedBiosystems制造的394型)，經(jīng)化學(xué)方法合成本發(fā)明引物組中的各個(gè)核苷酸。還可采用本領(lǐng)域眾所周知的任何其它方法來合成寡核苷酸。本發(fā)明還提供與前述PCR擴(kuò)增產(chǎn)物特異性雜交的探針。該探針是每個(gè)PCR擴(kuò)增產(chǎn)物的堿基序列中包含的單鏈DNA，可以是有義鏈DNA或反義鏈DNA。其具體實(shí)例包括下列探針⑴(23)。(1)包含SEQIDNO:49所示堿基序列的探針或其同樣具有作為探針的功能且包含在嚴(yán)格條件下與同SEQIDNO:49所示堿基序列互補(bǔ)的堿基序列雜交的堿基序列的變異體，或者包含與SEQIDNO:49所示堿基序列互補(bǔ)的堿基序列的探針或其同樣具有作為探針的功能且包含在嚴(yán)格條件下與SEQIDNO:49所示堿基序列雜交的堿基序列的變異體(探針1)，(2)包含SEQIDNO:50所示堿基序列的探針或其同樣具有作為探針的功能且包含在嚴(yán)格條件下與同SEQIDNO:50所示堿基序列互補(bǔ)的堿基序列雜交的堿基序列的變異體，或者包含與SEQIDNO:50所示堿基序列互補(bǔ)的堿基序列的探針或其同樣具有作為探針的功能且包含在嚴(yán)格條件下與SEQIDNO:50所示堿基序列雜交的堿基序列的變異體(探針2)，(3)包含SEQIDNO:51所示堿基序列的探針或其同樣具有作為探針的功能且包含在嚴(yán)格條件下與同SEQIDNO:51所示堿基序列互補(bǔ)的堿基序列雜交的堿基序列的變異體，或者包含與SEQIDNO:51所示堿基序列互補(bǔ)的堿基序列的探針或其同樣具有作為探針的功能且包含在嚴(yán)格條件下與SEQIDNO:51所示堿基序列雜交的堿基序列的變異體(探針3)，(4)包含SEQIDNO:52所示堿基序列的探針或其同樣具有作為探針的功能且包含在嚴(yán)格條件下與同SEQIDNO:52所示堿基序列互補(bǔ)的堿基序列雜交的堿基序列的變異體，或者包含與SEQIDNO:52所示堿基序列互補(bǔ)的堿基序列的探針或其同樣具有作為探針的功能且包含在嚴(yán)格條件下與SEQIDNO:52所示堿基序列雜交的堿基序列的變異體(探針4)，(5)包含SEQIDNO:53所示堿基序列的探針或其同樣具有作為探針的功能且包含在嚴(yán)格條件下與同SEQIDNO:53所示堿基序列互補(bǔ)的堿基序列雜交的堿基序列的變異體，或者包含與SEQIDNO:53所示堿基序列互補(bǔ)的堿基序列的探針或其同樣具有作為探針的功能且包含在嚴(yán)格條件下與SEQIDNO:53所示堿基序列雜交的堿基序列的變異體(探針5)，(6)包含SEQIDNO:54所示堿基序列的探針或其同樣具有作為探針的功能且包含在嚴(yán)格條件下與同SEQIDNO:54所示堿基序列互補(bǔ)的堿基序列雜交的堿基序列的變異體，或者包含與SEQIDNO:54所示堿基序列互補(bǔ)的堿基序列的探針或其同樣具有作為探針的功能且包含在嚴(yán)格條件下與SEQIDNO:54所示堿基序列雜交的堿基序列的變異體(探針6)，(7)包含SEQIDNO:55所示堿基序列的探針或其同樣具有作為探針的功能且包含在嚴(yán)格條件下與同SEQIDNO:55所示堿基序列互補(bǔ)的堿基序列雜交的堿基序列的變異體，或者包含與SEQIDNO:55所示堿基序列互補(bǔ)的堿基序列的探針或其同樣具有作為探針的功能且包含在嚴(yán)格條件下與SEQIDNO:55所示堿基序列雜交的堿基序列的變異體(探針7)，(8)包含SEQIDNO:56所示堿基序列的探針或其同樣具有作為探針的功能且包含在嚴(yán)格條件下與同SEQIDNO:56所示堿基序列互補(bǔ)的堿基序列雜交的堿基序列的變異體，或者包含與SEQIDNO:56所示堿基序列互補(bǔ)的堿基序列的探針或其同樣具有作為探針的功能且包含在嚴(yán)格條件下與SEQIDNO:56所示堿基序列雜交的堿基序列的變異體(探針8)，(9)包含SEQIDNO:57所示堿基序列的探針或其同樣具有作為探針的功能且包含在嚴(yán)格條件下與同SEQIDNO:57所示堿基序列互補(bǔ)的堿基序列雜交的堿基序列的變異體，或者包含與SEQIDNO:57所示堿基序列互補(bǔ)的堿基序列的探針或其同樣具有作為探針的功能且包含在嚴(yán)格條件下與SEQIDNO:57所示堿基序列雜交的堿基序列的變異體(探針9)，(10)包含SEQIDNO:58所示堿基序列的探針或其同樣具有作為探針的功能且包含在嚴(yán)格條件下與同SEQIDNO:58所示堿基序列互補(bǔ)的堿基序列雜交的堿基序列的變異體，或者包含與SEQIDNO:58所示堿基序列互補(bǔ)的堿基序列的探針或其同樣具有作為探針的功能且包含在嚴(yán)格條件下與SEQIDNO:58所示堿基序列雜交的堿基序列的變異體(探針10)，(11)包含SEQIDNO:59所示堿基序列的探針或其同樣具有作為探針的功能且包含在嚴(yán)格條件下與同SEQIDNO:59所示堿基序列互補(bǔ)的堿基序列雜交的堿基序列的變異體，或者包含與SEQIDNO:59所示堿基序列互補(bǔ)的堿基序列的探針或其同樣具有作為探針的功能且包含在嚴(yán)格條件下與SEQIDNO:59所示堿基序列雜交的堿基序列的變異體(探34(12)包含SEQIDNO:60所示堿基序列的探針或其同樣具有作為探針的功能且包含在嚴(yán)格條件下與同SEQIDNO:60所示堿基序列互補(bǔ)的堿基序列雜交的堿基序列的變異體，或者包含與SEQIDNO:60所示堿基序列互補(bǔ)的堿基序列的探針或其同樣具有作為探針的功能且包含在嚴(yán)格條件下與SEQIDNO:60所示堿基序列雜交的堿基序列的變異體(探針12)，(13)包含SEQIDNO61所示堿基序列的探針或其同樣具有作為探針的功能且包含在嚴(yán)格條件下與同SEQIDNO:61所示堿基序列互補(bǔ)的堿基序列雜交的堿基序列的變異體，或者包含與SEQIDNO:61所示堿基序列互補(bǔ)的堿基序列的探針或其同樣具有作為探針的功能且包含在嚴(yán)格條件下與SEQIDNO:61所示堿基序列雜交的堿基序列的變異體(探針13)，(14)包含SEQIDNO:62所示堿基序列的探針或其同樣具有作為探針的功能且包含在嚴(yán)格條件下與同SEQIDNO:62所示堿基序列互補(bǔ)的堿基序列雜交的堿基序列的變異體，或者包含與SEQIDNO:62所示堿基序列互補(bǔ)的堿基序列的探針或其同樣具有作為探針的功能且包含在嚴(yán)格條件下與SEQIDNO:62所示堿基序列雜交的堿基序列的變異體(探針14)，(15)包含SEQIDNO:63所示堿基序列的探針或其同樣具有作為探針的功能且包含在嚴(yán)格條件下與同SEQIDNO:63所示堿基序列互補(bǔ)的堿基序列雜交的堿基序列的變異體，或者包含與SEQIDNO:63所示堿基序列互補(bǔ)的堿基序列的探針或其同樣具有作為探針的功能且包含在嚴(yán)格條件下與SEQIDNO:63所示堿基序列雜交的堿基序列的變異體(探針15)，(16)包含SEQIDNO:64所示堿基序列的探針或其同樣具有作為探針的功能且包含在嚴(yán)格條件下與同SEQIDNO:64所示堿基序列互補(bǔ)的堿基序列雜交的堿基序列的變異體，或者包含與SEQIDNO:64所示堿基序列互補(bǔ)的堿基序列的探針或其同樣具有作為探針的功能且包含在嚴(yán)格條件下與SEQIDNO:64所示堿基序列雜交的堿基序列的變異體(探針16)，(17)包含SEQIDNO:65所示堿基序列的探針或其同樣具有作為探針的功能且包含在嚴(yán)格條件下與同SEQIDNO:65所示堿基序列互補(bǔ)的堿基序列雜交的堿基序列的變異體，或者包含與SEQIDNO:65所示堿基序列互補(bǔ)的堿基序列的探針或其同樣具有作為探針的功能且包含在嚴(yán)格條件下與SEQIDNO:65所示堿基序列雜交的堿基序列的變異體(探針17)，(18)包含SEQIDNO:66所示堿基序列的探針或其同樣具有作為探針的功能且包含在嚴(yán)格條件下與同SEQIDNO:66所示堿基序列互補(bǔ)的堿基序列雜交的堿基序列的變異體，或者包含與SEQIDNO:66所示堿基序列互補(bǔ)的堿基序列的探針或其同樣具有作為探針的功能且包含在嚴(yán)格條件下與SEQIDNO:66所示堿基序列雜交的堿基序列的變異體(探針18)，(19)包含SEQIDNO:67所示堿基序列的探針或其同樣具有作為探針的功能且包含在嚴(yán)格條件下與同SEQIDNO:67所示堿基序列互補(bǔ)的堿基序列雜交的堿基序列的變異體，或者包含與SEQIDNO:67所示堿基序列互補(bǔ)的堿基序列的探針或其同樣具有作為探針的功能且包含在嚴(yán)格條件下與SEQIDNO:67所示堿基序列雜交的堿基序列的變異體(探針19)，(20)包含SEQIDNO68所示堿基序列的探針或其同樣具有作為探針的功能且包含在嚴(yán)格條件下與同SEQIDNO:68所示堿基序列互補(bǔ)的堿基序列雜交的堿基序列的變異體，或者包含與SEQIDNO:68所示堿基序列互補(bǔ)的堿基序列的探針或其同樣具有作為探針的功能且包含在嚴(yán)格條件下與SEQIDNO:68所示堿基序列雜交的堿基序列的變異體(探針20)，(21)包含SEQIDNO:69所示堿基序列的探針或其同樣具有作為探針的功能且包含在嚴(yán)格條件下與同SEQIDNO:69所示堿基序列互補(bǔ)的堿基序列雜交的堿基序列的變異體，或者包含與SEQIDNO:69所示堿基序列互補(bǔ)的堿基序列的探針或其同樣具有作為探針的功能且包含在嚴(yán)格條件下與SEQIDNO:69所示堿基序列雜交的堿基序列的變異體(探針21)，(22)包含SEQIDNO70所示堿基序列的探針或其同樣具有作為探針的功能且包含在嚴(yán)格條件下與同SEQIDNO:70所示堿基序列互補(bǔ)的堿基序列雜交的堿基序列的變異體，或者包含與SEQIDNO:70所示堿基序列互補(bǔ)的堿基序列的探針或其同樣具有作為探針的功能且包含在嚴(yán)格條件下與SEQIDNO:70所示堿基序列雜交的堿基序列的變異體(探針22)，和(23)包含SEQIDNO71所示堿基序列的探針或其同樣具有作為探針的功能且包含在嚴(yán)格條件下與同SEQIDNO:71所示堿基序列互補(bǔ)的堿基序列雜交的堿基序列的變異體，或者包含與SEQIDNO:71所示堿基序列互補(bǔ)的堿基序列的探針或其同樣具有作為探針的功能且包含在嚴(yán)格條件下與SEQIDNO:71所示堿基序列雜交的堿基序列的變異體(探針23)。在探針1中的“包含SEQIDNO49所示堿基序列的探針”表示的含義與“包含SEQIDNO:49所示堿基序列的寡核苷酸”相同，下文亦簡稱為“SEQIDNO:49的探針”。“其同樣具有作為探針的功能且包含在嚴(yán)格條件下與同SEQIDNO49所示堿基序列互補(bǔ)的堿基序列雜交的堿基序列的變異體”是在嚴(yán)格條件下與包含同SEQIDN0:49所示堿基序列互補(bǔ)的堿基序列的上述寡核苷酸雜交、且具有作為類似于包含SEQIDN0:49所示堿基序列的寡核苷酸的探針的功能的寡核苷酸，所述功能即能夠檢測HPV6基因的特定區(qū)域。在下文中，該變異體亦簡稱為“SEQIDNO:49的探針變異體”?！白儺愺w”是在保持其作為探針的功能的范圍內(nèi)，原寡核苷酸中取代、缺失、插入或添加一個(gè)或多個(gè)核苷酸。“包含與SEQIDNO:49所示堿基序列互補(bǔ)的堿基序列的探針”表示的含義與“包含與SEQIDNO:49所示堿基序列互補(bǔ)的堿基序列的寡核苷酸”相同，下文亦簡稱為“與SEQIDNO49互補(bǔ)的探針”?！捌渫瑯泳哂凶鳛樘结樀墓δ芮野趪?yán)格條件下與SEQIDN0:49所示堿基序列雜交的堿基序列的變異體”是在嚴(yán)格條件下與包含SEQIDNO:49所示堿基序列的上述寡核苷酸雜交、且具有作為類似于包含與SEQIDNO:49所示堿基序列互補(bǔ)的堿基序列的寡核苷酸的探針的功能的寡核苷酸，所述功能即能夠檢測HPV6基因的特定區(qū)域。在下文中，該變異體亦簡稱為“與SEQIDNO:49互補(bǔ)的探針變異體”。“變異體”是在保持其作為探針的功能的范圍內(nèi)，原寡核苷酸中取代、缺失、插入或添加一個(gè)或多個(gè)核苷酸。已知雜交中的嚴(yán)格性是溫度、鹽濃度、探針鏈長、探針核苷酸序列的GC含量和雜交緩沖液中離液劑濃度的函數(shù)。至于嚴(yán)格條件，可采用例如下列文獻(xiàn)所描述的條件Sambrook,J.等(1998)MolecularCloning-ΛLaboratoryManual(第二片反)，ColdSpringHarborLaboratoryPress，NewYork等。嚴(yán)格溫度條件約為30°C以上，更優(yōu)選約37°C以上，最優(yōu)選約42°C以上。其它條件為雜交時(shí)間、去污劑(例如SDS)濃度、載體DNA存在與否等，綜合這些條件可設(shè)置各種嚴(yán)格性。本領(lǐng)域普通技術(shù)人員可適當(dāng)?shù)卮_定各條件以獲得具有作為探針的功能以檢測所需HPV基因的變異體。探針1是“SEQIDNO:49的探針，，、“SEQIDNO:49的探針變異體”、“與SEQIDNO:49互補(bǔ)的探針”和“與SEQIDNO:49互補(bǔ)的探針變異體”中的任一個(gè)，優(yōu)選“SEQIDNO49的探針”或“與SEQIDNO:49互補(bǔ)的探針”。可按照與探針1相同的方式定義探針2探針23。具體來講，探針2是“SEQIDNO50的探針，，、“SEQIDNO:50的探針變異體”、“與SEQIDN0:50互補(bǔ)的探針”和“與SEQIDNO:50互補(bǔ)的探針變異體”中的任一個(gè)，優(yōu)選“SEQIDNO50的探針”或“與SEQIDNO:50互補(bǔ)的探針”，并且可以檢測HPVll基因的特定區(qū)域，探針3是“SEQIDNO:51的探針”、“SEQIDNO:51的探針變異體”、“與SEQIDN0:51互補(bǔ)的探針”和“與SEQIDNO:51互補(bǔ)的探針變異體”中的任一個(gè)，優(yōu)選“SEQIDNO51的探針”或“與SEQIDN0:51互補(bǔ)的探針”，并且可以檢測HPV16基因的特定區(qū)域，探針4是“SEQIDNO52的探針，，、“SEQIDNO:52的探針變異體”、“與SEQIDN0:52互補(bǔ)的探針”和“與SEQIDNO:52互補(bǔ)的探針變異體”中的任一個(gè)，優(yōu)選“SEQIDNO52的探針”或“與SEQIDN0:52互補(bǔ)的探針”，并且可以檢測HPV18基因的特定區(qū)域，探針5是“SEQIDNO53的探針，，、“SEQIDNO:53的探針變異體”、“與SEQIDN0:53互補(bǔ)的探針”和“與SEQIDNO:53互補(bǔ)的探針變異體”中的任一個(gè)，優(yōu)選“SEQIDNO53的探針”或“與SEQIDN0:53互補(bǔ)的探針”，并且可以檢測HPV30基因的特定區(qū)域，探針6是“SEQIDNO54的探針，，、“SEQIDNO:54的探針變異體”、“與SEQIDN0:54互補(bǔ)的探針”和“與SEQIDNO:54互補(bǔ)的探針變異體”中的任一個(gè)，優(yōu)選“SEQIDNO54的探針”或“與SEQIDN0:54互補(bǔ)的探針”，并且可以檢測HPV31基因的特定區(qū)域，探針7是“SEQIDNO55的探針，，、“SEQIDNO:55的探針變異體”、“與SEQIDN0:55互補(bǔ)的探針”和“與SEQIDNO:55互補(bǔ)的探針變異體”中的任一個(gè)，優(yōu)選“SEQIDNO55的探針”或“與SEQIDN0:55互補(bǔ)的探針”，并且可以檢測HPV33基因的特定區(qū)域，探針8是“SEQIDNO56的探針，，、“SEQIDNO:56的探針變異體”、“與SEQIDN0:56互補(bǔ)的探針”和“與SEQIDNO:56互補(bǔ)的探針變異體”中的任一個(gè)，優(yōu)選“SEQIDNO56的探針”或“與SEQIDN0:56互補(bǔ)的探針”，并且可以檢測HPV34基因的特定區(qū)域，探針9是“SEQIDNO57的探針，，、“SEQIDNO:57的探針變異體”、“與SEQIDN0:57互補(bǔ)的探針”和“與SEQIDNO:57互補(bǔ)的探針變異體”中的任一個(gè)，優(yōu)選“SEQIDNO57的探針”或“與SEQIDN0:57互補(bǔ)的探針”，并且可以檢測HPV35基因的特定區(qū)域，探針10是“SEQIDNO58的探針”、“SEQIDNO58的探針變異體”、“與SEQIDNO:58互補(bǔ)的探針”和“與SEQIDNO:58互補(bǔ)的探針變異體”中的任一個(gè)，優(yōu)選“SEQIDNO58的探針”或“與SEQIDNO58互補(bǔ)的探針”，并且可以檢測HPV39基因的特定區(qū)域，探針11是“SEQIDNO59的探針”、“SEQIDNO59的探針變異體”、“與SEQIDNO:59互補(bǔ)的探針”和“與SEQIDNO:59互補(bǔ)的探針變異體”中的任一個(gè)，優(yōu)選“SEQIDNO59的探針”或“與SEQIDNO59互補(bǔ)的探針”，并且可以檢測HPV40基因的特定區(qū)域，探針12是“SEQIDNO60的探針”、“SEQIDNO60的探針變異體”、“與SEQIDNO:60互補(bǔ)的探針”和“與SEQIDNO:60互補(bǔ)的探針變異體”中的任一個(gè)，優(yōu)選“SEQIDNO60的探針”或“與SEQIDNO60互補(bǔ)的探針”，并且可以檢測HPV42基因的特定區(qū)域，探針13是“SEQIDNO61的探針”、“SEQIDNO61的探針變異體”、“與SEQIDNO:61互補(bǔ)的探針”和“與SEQIDNO:61互補(bǔ)的探針變異體”中的任一個(gè)，優(yōu)選“SEQIDNO61的探針”或“與SEQIDNO61互補(bǔ)的探針”，并且可以檢測HPV45基因的特定區(qū)域，探針14是“SEQIDNO62的探針”、“SEQIDNO62的探針變異體”、“與SEQIDNO:62互補(bǔ)的探針”和“與SEQIDNO:62互補(bǔ)的探針變異體”中的任一個(gè)，優(yōu)選“SEQIDNO62的探針”或“與SEQIDNO62互補(bǔ)的探針”，并且可以檢測HPV51基因的特定區(qū)域，探針15是“SEQIDNO:63的探針”、“SEQIDNO:63的探針變異體”、“與SEQIDNO:63互補(bǔ)的探針”和“與SEQIDNO:63互補(bǔ)的探針變異體”中的任一個(gè)，優(yōu)選“SEQIDNO63的探針”或“與SEQIDNO63互補(bǔ)的探針”，并且可以檢測HPV52基因的特定區(qū)域，探針16是“SEQIDNO64的探針”、“SEQIDNO64的探針變異體”、“與SEQIDNO:64互補(bǔ)的探針”和“與SEQIDNO:64互補(bǔ)的探針變異體”中的任一個(gè)，優(yōu)選“SEQIDNO:64的探針”或“與SEQIDNO:64互補(bǔ)的探針”，并且可以檢測HPV53基因的特定區(qū)域，探針17是“SEQIDNO65的探針”、“SEQIDNO65的探針變異體”、“與SEQIDNO:65互補(bǔ)的探針”和“與SEQIDNO:65互補(bǔ)的探針變異體”中的任一個(gè)，優(yōu)選“SEQIDNO:65的探針”或“與SEQIDNO:65互補(bǔ)的探針”，并且可以檢測HPV54基因的特定區(qū)域，探針18是“SEQIDNO66的探針”、“SEQIDNO66的探針變異體”、“與SEQIDNO:66互補(bǔ)的探針”和“與SEQIDNO:66互補(bǔ)的探針變異體”中的任一個(gè)，優(yōu)選“SEQIDNO66的探針”或“與SEQIDNO66互補(bǔ)的探針”，并且可以檢測HPV56基因的特定區(qū)域，探針19是“SEQIDNO67的探針”、“SEQIDNO67的探針變異體”、“與SEQIDNO:67互補(bǔ)的探針”和“與SEQIDNO:67互補(bǔ)的探針變異體”中的任一個(gè)，優(yōu)選“SEQIDNO67的探針”或“與SEQIDNO67互補(bǔ)的探針”，并且可以檢測HPV58基因的特定區(qū)域，探針20是“SEQIDNO68的探針”、“SEQIDNO68的探針變異體”、“與SEQIDNO:68互補(bǔ)的探針”和“與SEQIDNO:68互補(bǔ)的探針變異體”中的任一個(gè)，優(yōu)選“SEQIDNO68的探針”或“與SEQIDNO68互補(bǔ)的探針”，并且可以檢測HPV59基因的特定區(qū)域，探針21是“SEQIDNO69的探針”、“SEQIDNO69的探針變異體”、“與SEQIDNO:69互補(bǔ)的探針”和“與SEQIDNO:69互補(bǔ)的探針變異體”中的任一個(gè)，優(yōu)選“SEQIDNO69的探針”或“與SEQIDNO69互補(bǔ)的探針”，并且可以檢測HPV61基因的特定區(qū)域，探針22是“SEQIDNO70的探針”、“SEQIDNO70的探針變異體”、“與SEQIDNO:70互補(bǔ)的探針”和“與SEQIDNO:70互補(bǔ)的探針變異體”中的任一個(gè)，優(yōu)選“SEQIDNO70的探針”或“與SEQIDNO70互補(bǔ)的探針”，并且可以檢測HPV66基因的特定區(qū)域，探針23是“SEQIDNO71的探針”、“SEQIDNO71的探針變異體”、“與SEQIDNO:71互補(bǔ)的探針”和“與SEQIDNO:71互補(bǔ)的探針變異體”中的任一個(gè)，優(yōu)選“SEQIDNO71的探針”或“與SEQIDNO71互補(bǔ)的探針”，并且可以檢測HPV68基因的特定區(qū)域。各探針當(dāng)為有義鏈DNA時(shí)的一個(gè)實(shí)例見表3。如稍后所述，在本發(fā)明中，可以任選38使用用作內(nèi)標(biāo)以檢測G3PDH基因的探針。用于檢測G3PDH基因的探針(探針24)為包含SEQIDNO:72所示堿基序列的探針或其同樣具有作為探針的功能且包含在嚴(yán)格條件下與同SEQIDNO:72所示堿基序列互補(bǔ)的堿基序列雜交的堿基序列的變異體，或者包含與SEQIDNO72所示堿基序列互補(bǔ)的堿基序列的探針或其同樣具有作為探針的功能的變異體且包含在嚴(yán)格條件下與SEQIDNO72所示堿基序列雜交的堿基序列的變異體。各探針的堿基序列、Tm值、大小和在基因組上位置見表3。[表3-1][表3-2](續(xù)表)探針(有義鏈DNA)的位置(nt)用在各病毒類型基因組和G3PDH上的位置(5’一3’)表示。位置對應(yīng)于表2中所示各基因在GenBank登錄號(hào)下基因序列中的位置。探針的長度相對較短，為6971bp，且設(shè)計(jì)成與其它類型的HPV不具有高同源性的序列。因此，它與各PCR擴(kuò)增產(chǎn)物雜交的特異性極高。例如，通過使PCR擴(kuò)增產(chǎn)物與用于檢測的DNA微陣列雜交，可以檢測樣品中各HPV的存在與否，其中將各HPV的特異性探針固定在支持體上。可根據(jù)表3中所示的各探針的信息，來設(shè)計(jì)各探針變異體的序列。具體來講，將SEQIDNO:49的探針變異體設(shè)計(jì)成具有高同源性的寡核苷酸，以允許在嚴(yán)格條件下與包含同HPV6基因組上7519位7588位堿基序列互補(bǔ)的堿基序列的寡核苷酸雜交。同源性水平至少為80%，優(yōu)選至少90%，特別優(yōu)選至少95%。SEQIDNO:49的探針對應(yīng)于HPV6(GenBank登錄號(hào)AF092932)基因組上的7519位7588位區(qū)域。只要可以特異性地檢測HPV6基因，5，末端側(cè)和3，末端側(cè)則可變動(dòng)士50位，優(yōu)選士20位，特別優(yōu)選士10位。當(dāng)探針是反義鏈DNA時(shí)，可根據(jù)與表3所示各HPV基因特異性序列互補(bǔ)的序列，來設(shè)計(jì)所需要的HPV型特異性探針。作為初始設(shè)置，可應(yīng)用常規(guī)用于本領(lǐng)域的同源性檢索程序(例如BLAST、FASTA等)來確定同源性(％)。另一方面，可運(yùn)用本領(lǐng)域已知的任何算法確定同源性(％)，例如Needleman等(1970)(J.Mol.Biol.48:444_453)、Myers和Miller(CABI0S，1988，4:11_17)的算法等。Needleman等人的算法已被合編到GCG軟件包的GAP程序(可獲自gcg.com)中，可應(yīng)用例如BLOSUM62矩陣或PAM250矩陣；空位權(quán)重16、14、12、10、8、6或4；以及長度權(quán)重1、2、3、4、5或6中的任一個(gè)，來確定同源性(％)。另外，Myers和Miller的算法被合編到GCG序列比對軟件包的組成部分ALIGN程序中。例如，當(dāng)運(yùn)用ALIGN程序比較氨基酸序列時(shí)，可以使用PAM120權(quán)重殘基表、空位長度罰分12和空位罰分4?？梢允褂美缤ㄓ肈NA合成儀(例如由AppliedBiosystems制造的394型)，經(jīng)化學(xué)方法合成探針的各個(gè)核苷酸?？刹捎帽绢I(lǐng)域眾所周知的任何其它方法合成寡核苷酸。在本發(fā)明的一個(gè)方面，提供用于HPV檢測的試劑盒，其含有一種或多種、優(yōu)選兩種或更多種組合的HPV型特異性引物組和探針。使用試劑盒檢測HPV包括使用型特異性引物組擴(kuò)增相應(yīng)型的HPV基因的PCR，以及用與各擴(kuò)增產(chǎn)物特異性雜交的探針檢測HPV的存在。本發(fā)明的引物組被設(shè)計(jì)成具有近似的Tm值，因此，特別優(yōu)選用于使用多個(gè)引物組混合物的多重PCR反應(yīng)。由引物組123獲得的PCR擴(kuò)增產(chǎn)物各自用探針123進(jìn)行型特異性檢測。例如，當(dāng)使用引物組1時(shí)，則使用探針1對其PCR擴(kuò)增產(chǎn)物進(jìn)行檢測。對于使用本發(fā)明試劑盒檢測HPV，可提取樣品中的DNA，使用前述引物組對DNA進(jìn)行PCR。至于樣品，可以使用獲自疑似感染HPV的受試者的組織樣品、活檢樣品、涂片等。此外，可將從通過密度梯度離心操作所采集的細(xì)胞中濃縮出普遍感染了HPV的宮頸鱗狀細(xì)胞并使用。或者，可以使用培養(yǎng)的細(xì)胞，例如HeLa細(xì)胞等。對于根據(jù)本發(fā)明檢出HPV基因的存在是有益的目標(biāo)疾病包括疣、上皮內(nèi)贅生物、皮膚癌、口腔/口咽癌、生殖器贅生物、宮頸癌、濕疣、乳頭瘤等。從樣品中提取DNA的方法是本領(lǐng)域眾所周知的，可用例如苯酚和氯仿進(jìn)行抽提，或者使用市售DNA提取試劑進(jìn)行提取。或者，可使用柱試劑盒(columnkit)(GENERATION(注冊商標(biāo))CaptureColumnKitGentra)進(jìn)行抽提。使用如此從樣品中提取的DNA作為模板，并使用前述引物組，通過PCR擴(kuò)增各種類型的HPV基因。PCR法本身是本領(lǐng)域眾所周知的(Saiki等，Science，239=487-491,1988),在這些引物、模板DNA(即HPV基因)和耐熱DNA聚合酶存在下，使用與有義鏈雜交的引物(反向引物)和與反義鏈雜交的引物(正向引物)，通過使退火、延伸和變性步驟的循環(huán)重復(fù)大約20次40次來進(jìn)行RCR。在使用本發(fā)明試劑盒的HPV檢測中，例如FastStartTaqDNA聚合酶(Roche)、ExTaq(注冊商標(biāo)，Takara)、Z_Taq、AccuPrimeTaqDNA聚合酶、裝于M-PCR試劑盒(QIAGEN)中的聚合酶等可用作如上所述的DNA聚合酶?；谝颰m值選擇合適PCR反應(yīng)條件的方法是本領(lǐng)域眾所周知的，本領(lǐng)域普通技術(shù)人員可以根據(jù)引物長度、GC含量、目標(biāo)特異性和靈敏度、所使用的聚合酶性質(zhì)等，選出最佳條件。例如，下列實(shí)施例中，通過95°C4分鐘，然后95°C30秒鐘，60°C30秒鐘和72°C1分鐘，循環(huán)30次，然后72°C7分鐘，來進(jìn)行PCR。另外，可適當(dāng)調(diào)整PCR溶液中所含引物的量，以達(dá)到所需檢測靈敏度，并減少檢測靈敏度依賴于病毒類型的變化。以相應(yīng)的型特異性方式，使用能夠檢測HPV的本發(fā)明探針，使由PCR擴(kuò)增的DNA產(chǎn)物進(jìn)行雜交反應(yīng)。通過例如使用標(biāo)記探針和微陣列，可方便且高準(zhǔn)確性地進(jìn)行雜交。準(zhǔn)確地講，作為使用標(biāo)記DNA探針的雜交方法，可采用例如等位基因特異性寡核苷酸探針法(Allele-specificOligonucleotideProbemethod)、寡核苷酸連接測定法(OligonucleotideLigationAssaymethod)、侵入物法(Invadermethod)等已知方法。另外，可通過微陣列進(jìn)行診斷，例如如下文中所述。具體來講，使用各種型特異性引物組，使從受試者的生物樣品(例如血等)分離的DNA通過PCR擴(kuò)增(DNA擴(kuò)增產(chǎn)物)。在此情況下，41摻入標(biāo)記的dNTP，得到標(biāo)記的DNA。使標(biāo)記DNA與微陣列接觸，檢測與預(yù)先固定在微陣列上的探針雜交的DNA。可將標(biāo)記DNA的水溶液分配到0.2ml或1.5ml塑料管中，將該溶液點(diǎn)滴到微陣列上，來進(jìn)行雜交。點(diǎn)滴量可大致為5-100μ1。雜交優(yōu)選在室溫70°C的溫度范圍內(nèi)進(jìn)行0.5-20小時(shí)。雜交完成后，通過用表面活性劑和緩沖液的混合溶液洗滌，除去未反應(yīng)的標(biāo)記DNA。優(yōu)選使用十二烷基硫酸鈉(SDS)或聚乙烯(20)失水山梨醇醚單月桂酸酯(吐溫20)作為表面活性劑。可以使用檸檬酸鹽緩沖液、磷酸鹽緩沖液、硼酸鹽緩沖液、三羥甲基氨基甲烷(Tris)緩沖液、Good緩沖液等作為緩沖液，優(yōu)選檸檬酸鹽緩沖液。可以使用例如JP-B-3860174中披露的方法，作為使多種DNA擴(kuò)增產(chǎn)物與探針生物聚合物同時(shí)雜交的方法。本發(fā)明提供一種用于檢測HPV的DNA微陣列，其中使至少一種、優(yōu)選兩種或更多種選自探針123的探針固定化。DNA微陣列可含有作為內(nèi)標(biāo)固定化的探針24。至于微陣列的制備方法，包括在支持體表面上直接合成寡核苷酸的方法(單芯片法(on-chipmethod))以及包括將預(yù)先制備的寡核苷酸固定在支持體表面的方法是已知的。雖然本發(fā)明的微陣列可按照這些方法中的任一種制備，但方便的方法是后者。至于單芯片方法，可進(jìn)行以下方法，即包括結(jié)合使用可通過光照射選擇性脫去的保護(hù)基與用于半導(dǎo)體制造的光刻技術(shù)及固相合成技術(shù)，在小矩陣的指定區(qū)域上選擇性地進(jìn)行合成(掩蔽技術(shù)(maskingtechnique)例如Fodor，S.P.A.Science251:767，1991)等。另一方面，當(dāng)預(yù)先制備的寡核苷酸被固定在固相載體表面時(shí)，將寡核苷酸點(diǎn)滴到表面經(jīng)處理的離子鍵結(jié)合或共價(jià)鍵結(jié)合的支持體表面上(例如Lamture，J.B.等，Nucl.AcidsRes.22=2121-2125,1994；Guo,Ζ.等，Nucl.AcidsRes.22:5456_5465，1994)。寡核苷酸一般通過間隔基(spacer)或交聯(lián)劑共價(jià)結(jié)合在表面經(jīng)處理的支持體上。一種包括將小塊聚丙烯酰胺凝膠排列在玻璃表面上以及使合成寡核苷酸與之共價(jià)結(jié)合的方法也是已知的(Yershov，G.等，Proc.Natl.Acad.Sci.USA94:4913，1996)。另外，涂覆有聚-L-賴氨酸或氨基丙基硅烷的玻璃表面也可用作支持體。支持體的實(shí)例包括尼龍膜、硝化纖維素膜、玻璃、硅片等。此外，探針可通過本領(lǐng)域所用的任何方法固定化，一般可用點(diǎn)樣器(spotter)等將DNA固定在支持體上。當(dāng)使用本發(fā)明的試劑盒將DNA微陣列用于檢測HPV時(shí)，優(yōu)選在進(jìn)行雜交之前對擴(kuò)增DNA產(chǎn)物預(yù)先進(jìn)行標(biāo)記，特別優(yōu)選在擴(kuò)增期間進(jìn)行標(biāo)記。標(biāo)記方法的實(shí)例包括以下兩種方法一種方法包括制備作為DNA聚合酶底物用于產(chǎn)生PCR擴(kuò)增產(chǎn)物的4種脫氧核苷酸ATCG(dATP、dCTP、dGTP、dTTP統(tǒng)稱為dNTP)和標(biāo)記的脫氧核苷酸(例如Cy3_dUTP)，調(diào)節(jié)各dNTP的最終濃度至同一水平，將標(biāo)記的脫氧核苷酸摻到要制備的擴(kuò)增產(chǎn)物中，另一種方法包括使用預(yù)先標(biāo)記的引物以標(biāo)記DNA的PCR反應(yīng)。出于檢測靈敏度和標(biāo)記方便性方面的考慮，標(biāo)記物質(zhì)優(yōu)選含有熒光物質(zhì)和生物素中的任一種。熒光物質(zhì)的優(yōu)選實(shí)例包括FITC、FAM、Cy3、Cy5、Cy5.5、Cy7、TAMRA,Dabcyl、R0X、ΤΕΤ、羅丹明、德克薩斯紅、HEX、CyberGreen等，特別優(yōu)選的熒光物質(zhì)是Cy3。在生物素和洋地黃毒苷的情況下，各種生物素結(jié)合的標(biāo)記酶蛋白起反應(yīng)，可利用這類標(biāo)記酶蛋白的酶活性為指標(biāo)來進(jìn)行檢測。通過采用光學(xué)檢測手段，觀察源于這類熒光物質(zhì)的熒光強(qiáng)度，能夠以高靈敏度檢測被用于熒光標(biāo)記的各種熒光物質(zhì)。另外，當(dāng)酶活性是利用各種顯色反應(yīng)檢測時(shí)，前述使用標(biāo)記酶蛋白的酶活性作為指標(biāo)的檢測方法也可采用光學(xué)檢測手段，并能夠以高靈敏度進(jìn)行檢測。使用聚焦、非共焦激光掃描儀或CCD掃描儀為光學(xué)檢測手段，可讀取熒光強(qiáng)度值。當(dāng)擴(kuò)增產(chǎn)物與DNA微陣列雜交時(shí)，雙鏈DNA產(chǎn)物可與DNA微陣列進(jìn)行雜交反應(yīng)，或者可以增加在雜交反應(yīng)之前由擴(kuò)增的雙鏈DNA產(chǎn)物中分離出單鏈DNA的步驟。出于檢測靈敏度方面的考慮，優(yōu)選增加分離單鏈DNA的步驟。由雙鏈DNA分離出單鏈DNA的方法并無特別的限制，可能提及的有例如公開于JP-A-2006-230342的方法。具體來講，可通過下列步驟分離單鏈DNA。將在非檢測一側(cè)上合成標(biāo)簽鏈的引物5’端用生物素標(biāo)記。擴(kuò)增之后，使生物素與鏈霉抗生物素固定化磁珠結(jié)合，形成擴(kuò)增DNA產(chǎn)物-磁珠復(fù)合物。使該復(fù)合物與堿溶液(例如NaOH水溶液等)反應(yīng)，由此使擴(kuò)增DNA產(chǎn)物的雙鏈解離成為單鏈。之后，使磁珠吸附到磁體上，由此可選擇性地只分離出通過未用生物素標(biāo)記的引物延伸的單鏈DNA。使用磁珠分離反義鏈DNA的步驟的概要圖見圖1。圖1所示步驟中，當(dāng)使用具有生物素修飾的5’端的反向引物而不是具有生物素修飾的5’端的正向引物時(shí)，也可按同樣方式，使用磁珠分離出有義鏈DNA。因?yàn)镠PV遺傳篩查是使用臨床樣品的試驗(yàn)，所以實(shí)驗(yàn)準(zhǔn)確性控制極其重要。因此，需要設(shè)置作為內(nèi)標(biāo)的基因(內(nèi)標(biāo)基因)。本說明書的內(nèi)標(biāo)基因是與得自樣品的DNA—起進(jìn)行多重PCR、與識(shí)別擴(kuò)增產(chǎn)物的探針雜交并檢測假陰性反應(yīng)的基因。為此目的，通常采用持家基因，該基因在細(xì)胞中以相對較高的量表達(dá)，且其變異較少。具體實(shí)例包括G3PDH、β-肌動(dòng)蛋白等。本發(fā)明的試劑盒采用了G3PDH作為內(nèi)標(biāo)，任選含有用于G3PDH的引物組(引物組24)和探針(探針24)的組合(參見上表1和表3)。設(shè)計(jì)引物組和探針的組合，以按與各種類型的HPV基因的擴(kuò)增反應(yīng)或雜交反應(yīng)相同的效率同時(shí)進(jìn)行擴(kuò)增或雜交。在一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明的試劑盒含有從前述24種引物組和探針的組合之中選出的引物組3和探針3的組合及引物組4和探針4的組合，以及任選引物組24和探針24的組合。這樣，該試劑盒便可檢出HPV16和HPV18。這些HPV亞型對宮頸癌發(fā)生具有特別高的風(fēng)險(xiǎn)。在另一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明的試劑盒含有從前述24種引物組和探針的組合之中選出的引物組3和探針3的組合、引物組4和探針4的組合、引物組5和探針5的組合、引物組6和探針6的組合、引物組7和探針7的組合、引物組9和探針9的組合、引物組10和探針10的組合、引物組13和探針13的組合、引物組14和探針14的組合、引物組15和探針15的組合、引物組18和探針18的組合、引物組19和探針19的組合、引物組20和探針20的組合、引物組23和探針23的組合，以及任選引物組24和探針24的組合。這樣，該試劑盒便可檢出HPV16、HPV18、HPV30、HPV31、HPV33、HPV35、HPV39、HPV45、HPV51、HPV52、HPV56、HPV58、HPV59和HPV68。這些HPV亞型被歸類為對宮頸癌發(fā)生具有高風(fēng)險(xiǎn)。在進(jìn)一步的實(shí)施方案中，本發(fā)明的試劑盒含有所有前述23種用于檢測HPV的引物組和探針的組合，以及任選引物組24和探針24的組合。除各前述引物組和探針的組合外，本發(fā)明的試劑盒可含有所有下列試劑或其任選組合和其它試劑的組合緩沖液、耐熱DNA聚合酶、陽性對照HPVDNA、非HPVDNA、內(nèi)標(biāo)G3PDHDNA、dNTP、熒光染料標(biāo)記的堿基(例如Cy3_dUTP)和鏈霉抗生物素固定化磁珠。作為本發(fā)明的另一方面，提供使用前述本發(fā)明的試劑盒以型特異性方式檢測樣品中HPV存在與否的方法。該方法包括使用從樣品中提取的DNA(作為模板)和前述引物組進(jìn)行PCR的步驟，以及檢測擴(kuò)增DNA產(chǎn)物的步驟。在另一個(gè)實(shí)施方案中，該方法包括使用從樣品中提取的DNA(作為模板)和前述引物組進(jìn)行PCR的步驟，分離擴(kuò)增DNA產(chǎn)物作為單鏈的步驟，通過單鏈DNA與前述探針進(jìn)行雜交的檢測步驟。雖然不特別限制各個(gè)步驟的實(shí)際方法，但適當(dāng)時(shí)，優(yōu)選采用試劑盒說明書所描述的方法。雖然下文中參照實(shí)施例對本發(fā)明進(jìn)行更詳細(xì)的說明，但是本發(fā)明絕不局限于下面的實(shí)施例等。實(shí)施例除非另有說明，否則用于實(shí)施例的各種試劑(緩沖液、酶、溶液、化合物等)是本領(lǐng)域通常使用的試劑，且是市售的或可通過以前報(bào)道的方法制備。實(shí)施例1引物的設(shè)計(jì)和特異性的確認(rèn)由公共數(shù)據(jù)庫獲取HPV和用作內(nèi)標(biāo)的G3PDH(甘油醛三磷酸脫氫酶)的基因序列。用于本發(fā)明的24種基因序列的GenBank登錄號(hào)見表2。根據(jù)各個(gè)基因的序列，設(shè)計(jì)出滿足下列標(biāo)準(zhǔn)的引物組解鏈溫度(Tm)的范圍為6070°C(當(dāng)采用最近鄰法時(shí)。Na+濃度50mM)；擴(kuò)增產(chǎn)物長度的范圍為100500bp；GC含量的范圍為5060%;它不含與其它HPV種類具有高度同源性的序列；而且它在分子內(nèi)不形成二級結(jié)構(gòu)；引物彼此間不雜交。這樣，設(shè)計(jì)出對HPV和G3PDH中的每一個(gè)都具有特異性的引物組。根據(jù)表1所示引物組的序列，用DNA合成儀合成寡核苷酸DNA。將HPV6、HPVll、HPV16、HPV18、HPV30、HPV31、HPV33、HPV34、HPV35、HPV39、HPV40、HPV42、HPV45、HPV51、HPV52、HPV53、HPV54、HPV56、HPV58、HPV59、HPV61、HPV66或HPV68的編碼DNA分別導(dǎo)入質(zhì)粒pUC18中，得到用于23種模板的質(zhì)粒。然后，使用按照上述方法制備的每個(gè)引物組，將23種用于HPV模板的質(zhì)粒的各DNA和得自Jurkat細(xì)胞(人白血病T淋巴瘤)的基因組分別進(jìn)行PCR反應(yīng)。反應(yīng)溶液的組成如下[表4]10XPCR緩沖液2μL2.5mMdNTP0.4μL弓I物F(4μΜ)0.5μL引物R(4μΜ)0.5μLDNATaq聚合酶0.16μLDDff(雙蒸水)15.44μL模板(1XIO6個(gè)拷貝)IyL_合計(jì)20μL所采用的PCR反應(yīng)條件如下95°C4分鐘，然后95°C30秒鐘，60°C30秒鐘和72°C1分鐘，30次循環(huán)，然后72°C7分鐘，接著在4°C下保存。所得到的擴(kuò)增DNA產(chǎn)物用瓊脂糖凝44膠電泳進(jìn)行分離。得到每種引物組的具有預(yù)期長度的擴(kuò)增產(chǎn)物，證實(shí)不存在由非特異性雜交引起的污染擴(kuò)增產(chǎn)物。然后，使用24種引物組的混合物，分別使23種用于HPV模板的質(zhì)粒和由Jurkat細(xì)胞提取的基因組進(jìn)行PCR反應(yīng)。引物組以兩種濃度形式混合，使得每個(gè)引物組的擴(kuò)增效率幾乎為同一水平。反應(yīng)溶液的組成如下。[表5]10XPCR緩沖液2μL2.5mMdNTP0.4μL引物混合物IyL(最終濃度0·05μΜ或0·ΙμΜ)DNATaq聚合酶0.16μLDDff15.44μL模板(1XIO6個(gè)拷貝)IyL_合計(jì)20μL所采用的PCR反應(yīng)條件如下95°C4分鐘，然后95°C30秒鐘，60°C30秒鐘和72°C1分鐘，30次循環(huán)，然后72°C7分鐘，接著在4°C下保存。所得到的擴(kuò)增DNA產(chǎn)物用瓊脂糖凝膠電泳進(jìn)行分離。結(jié)果見圖2。得到每個(gè)模板的具有預(yù)期長度的擴(kuò)增產(chǎn)物，因此證實(shí)，即使當(dāng)引物混合時(shí)，也不存在由非特異性雜交引起的污染擴(kuò)增產(chǎn)物。實(shí)施例2探針的設(shè)計(jì)設(shè)計(jì)在23種HPV和G3PDH的各個(gè)PCR擴(kuò)增區(qū)內(nèi)滿足下列標(biāo)準(zhǔn)的探針(有義鏈DNA)解鏈溫度(Tm)在7278°C范圍內(nèi)(當(dāng)采用6(%方法時(shí)。Na+濃度50mM)；探針長度的范圍為6971bp；GC含量在4555%的范圍內(nèi)；它不含與其它HPV種類具有高度同源性的序列，而且它在分子內(nèi)不形成二級結(jié)構(gòu)。這樣，設(shè)計(jì)出對HPV和G3PDH中的每一個(gè)都具有特異性的引物組(表3)。根據(jù)表3所示探針的序列，用DNA合成儀合成寡核苷酸DNA。實(shí)施例3DNA微陣列的制備將實(shí)施例2中合成的24種探針的每一種按表6所示的組成進(jìn)行混合，用市售接觸型或非接觸型點(diǎn)樣器(SpotArray或Piezorray=PerkinElmer)按圖3的排列方式，點(diǎn)在涂覆有聚-L-賴氨酸的玻璃基底上(每種探針2個(gè)點(diǎn))，得到用于檢測的DNA微陣列。[表6]探針(100μm)5μL20XSSC3.75μLDDff16.25μL_合計(jì)25μL實(shí)施例4HPV的擴(kuò)增和檢測(1)HPV和G3PDH的擴(kuò)增與標(biāo)記按表7所示反應(yīng)混合物的組成，采用24種引物組的混合物(引物混合物)，分別使23種用于HPV模板的質(zhì)粒和由Jurkat細(xì)胞提取的基因組進(jìn)行PCR反應(yīng)。24種引物組以兩種濃度形式混合，使得每個(gè)引物組的擴(kuò)增效率幾乎為同一水平。為了檢測表現(xiàn)為DNA微陣列上熒光強(qiáng)度的HPV感染存在與否，將熒光染料標(biāo)記的堿基(Cy3_dUTP=GEHealthcareBio-SciencesCorp.)同時(shí)加到PCR反應(yīng)溶液中。[表7]10XPCR緩沖液2μLdCTP、dGTP、dATP(各2.5mM)0.4μLdTTP(ImM)0.8μLCy3-dUTP(ImM)0.2μL引物混合物1μL(最終濃度:0.05μM或0.1μΜ)DNATaq聚合酶0.16μLDDff14.44μL模板(IXIO4個(gè)拷貝)1μL合計(jì)20μL所采用的PCR反應(yīng)條件如下:95V4分鐘，然后950C30秒鐘，60°C30秒鐘和72°C1分鐘，30次循環(huán)，然后72°C7分鐘，接著在4°C下保存。如上獲得Cy3標(biāo)記的擴(kuò)增DNA產(chǎn)物。PCR反應(yīng)后，使用純化Cy3標(biāo)記的擴(kuò)增DNA產(chǎn)物的市售PCR純化柱，除去反應(yīng)中未使用的過量酶、熒光染料標(biāo)記的堿基和引物。(2)使用DNA微陣列檢測HPV將純化的Cy3標(biāo)記的擴(kuò)增DNA產(chǎn)物與表8中所述的雜交溶液混合，在95°C加熱2分鐘使之變性，將混合物在冰上靜置3分鐘，使用8μL與DNA微陣列雜交。[表8]Cy3標(biāo)記的擴(kuò)增DNA產(chǎn)物3.1μL20XSSC2.5μL50XDenhardt溶液0.8μL4%吐溫溶液0.5yLDDff3.1μL_合計(jì)10μL按照J(rèn)P-B-3860174中所述方法，在65°C恒溫槽中進(jìn)行雜交反應(yīng)1小時(shí)。雜交反應(yīng)后，DNA微陣列分別用2XSSC-0.1%SDS溶液和0.2XSSC-0.SDS溶液洗滌5分鐘，用0.2XSSC和0.05XSSC漂洗后，用氮?dú)饪諝鈽尰蜉d玻片離心機(jī)干燥。用市售微陣列掃描儀(GenePix4000B=AxonInstruments)進(jìn)行掃描。由532nm波長下樣點(diǎn)的熒光強(qiáng)度值和樣點(diǎn)周圍的背景值，對檢測進(jìn)行了評價(jià)。任何模板都未檢出由非特異性雜交引起的熒光點(diǎn)，結(jié)果證實(shí)可以HPV類型特異性的方式檢測熒光點(diǎn)。實(shí)施例5HPV的檢測額外包括使用磁珠分離單鏈DNA的步驟(參見圖1)在實(shí)施例1中設(shè)計(jì)的引物組中，僅引物F是將生物素加到5’端而新產(chǎn)生的。將實(shí)際合成的定單發(fā)給DNA合成承包制造商，引物使用通用DNA合成儀經(jīng)化學(xué)方法合成。按同樣的方式，使用引物進(jìn)行如實(shí)施例4(1)中所述HPV和G3PDH的擴(kuò)增和標(biāo)記步驟，得到Cy3標(biāo)記的擴(kuò)增DNA產(chǎn)物。然后，在1.5mL管中，使純化的Cy3標(biāo)記的擴(kuò)增DNA產(chǎn)物溶液與鏈霉抗生物素固定化磁珠(DynabeadsMyOneStreptavidinCl,Invitrogen)反應(yīng)15分鐘，形成擴(kuò)增DNA產(chǎn)物-磁珠復(fù)合物。反應(yīng)溶液的組成如下[表9]純化的Cy3標(biāo)記的擴(kuò)增DNA產(chǎn)物IOyL*2XB&W緩沖液IOyL磁珠3.5-6XIO7個(gè)磁珠_合計(jì)20μL*2XB&ff緩沖液的組成為:10mMTris-HCl(pH7.5)UmMEDTA、2.OMNaCl0之后，充分除去反應(yīng)溶液，同時(shí)使復(fù)合物吸附到磁體上。然后，除去磁體，將0.INNaOH(堿)溶液(10μL)加到復(fù)合物中，使混合物反應(yīng)10分鐘，使擴(kuò)增DNA產(chǎn)物的雙鏈解離成為單鏈。之后，僅將表1的PCR反應(yīng)中由引物F延伸的有義鏈(單鏈)DNA再次吸附到磁體上，收獲堿溶液，從而僅PCR反應(yīng)中由引物R延伸的反義鏈DNA被選擇性地分離出來。分離的反義鏈(單鏈)DNA用3M乙酸鈉(1μL)中和后，在冰上靜置5分鐘。然后，將分離的反義鏈(單鏈)DNA用于與實(shí)施例4(2)中所述的DNA微陣列進(jìn)行雜交反應(yīng)。按照與實(shí)施例4(2)同樣的方法進(jìn)行反應(yīng)，只是用反義鏈(單鏈)DNA替換表8中所列的反應(yīng)組成中的Cy3標(biāo)記的擴(kuò)增DNA產(chǎn)物。掃描影像見圖4。對于任何模板都未檢出由非特異性雜交引起的熒光點(diǎn)，這就證實(shí)了可HPV類型特異性的方式檢測熒光點(diǎn)。此外，這可以證實(shí)，與實(shí)施例4相比，以較高靈敏度檢測任何模板是可行的，這是由附加使用磁珠分離單鏈DNA的步驟導(dǎo)致的(圖5)。上述結(jié)果表明，使用本發(fā)明的引物組和探針以及本發(fā)明的HPV檢測方法，可以高特異性和高靈敏度檢測HPV。工業(yè)實(shí)用性本發(fā)明提供可方便快速地以高特異性和高靈敏度檢測多種HPV類型的引物組和探針。本發(fā)明還提供使用前述引物組和探針，能夠方便快速地以高特異性和高靈敏度檢測多種HPV類型的方法。本申請以在日本申請的專利申請?zhí)?007-203677(申請日為2007年8月3日)為基礎(chǔ)，該申請的內(nèi)容通過引用全文結(jié)合到本文中。[序列表自由文本]SEQIDNO1用于HPV6基因擴(kuò)增的正向PCR引物SEQIDNO2用于HPV6基因擴(kuò)增的反向PCR引物SEQIDNO3用于HPVll基因擴(kuò)增的正向PCR引物SEQIDNO4用于HPVll基因擴(kuò)增的反向PCR引物47SEQIDNO5用于HPV16基因擴(kuò)增的正向PCR引物SEQIDNO6用于HPV16基因擴(kuò)增的反向PCR引物SEQIDNO7用于HPV18基因擴(kuò)增的正向PCR引物SEQIDNO8用于HPV18基因擴(kuò)增的反向PCR引物SEQIDNO9用于HPV30基因擴(kuò)增的正向PCR引物SEQIDNO10用于HPV30基因擴(kuò)增的反向PCR引物SEQIDNO11用于HPV31基因擴(kuò)增的正向PCR引物SEQIDNO12用于HPV31基因擴(kuò)增的反向PCR引物SEQIDNO13用于HPV33基因擴(kuò)增的正向PCR引物SEQIDNO14用于HPV33基因擴(kuò)增的反向PCR引物SEQIDNO15用于HPV34基因擴(kuò)增的正向PCR引物SEQIDNO16用于HPV34基因擴(kuò)增的反向PCR引物SEQIDNO17用于HPV35基因擴(kuò)增的正向PCR引物SEQIDNO18用于HPV35基因擴(kuò)增的反向PCR引物SEQIDNO19用于HPV39基因擴(kuò)增的正向PCR引物SEQIDNO20用于HPV39基因擴(kuò)增的反向PCR引物SEQIDNO21用于HPV40基因擴(kuò)增的正向PCR引物SEQIDNO22用于HPV40基因擴(kuò)增的反向PCR引物SEQIDNO23用于HPV42基因擴(kuò)增的正向PCR引物SEQIDNO24用于HPV42基因擴(kuò)增的反向PCR引物SEQIDNO25用于HPV45基因擴(kuò)增的正向PCR引物SEQIDNO26用于HPV45基因擴(kuò)增的反向PCR引物SEQIDNO27用于HPV51基因擴(kuò)增的正向PCR引物SEQIDNO28用于HPV51基因擴(kuò)增的反向PCR引物SEQIDNO29用于HPV52基因擴(kuò)增的正向PCR引物SEQIDNO30用于HPV52基因擴(kuò)增的反向PCR引物SEQIDNO31用于HPV53基因擴(kuò)增的正向PCR引物SEQIDNO32用于HPV53基因擴(kuò)增的反向PCR引物SEQIDNO33用于HPV54基因擴(kuò)增的正向PCR引物SEQIDNO34用于HPV54基因擴(kuò)增的反向PCR引物SEQIDNO35用于HPV56基因擴(kuò)增的正向PCR引物SEQIDNO36用于HPV56基因擴(kuò)增的反向PCR引物SEQIDNO37用于HPV58基因擴(kuò)增的正向PCR引物SEQIDNO38用于HPV58基因擴(kuò)增的反向PCR引物SEQIDNO39用于HPV59基因擴(kuò)增的正向PCR引物SEQIDNO40用于HPV59基因擴(kuò)增的反向PCR引物SEQIDNO41用于HPV61基因擴(kuò)增的正向PCR引物SEQIDNO42用于HPV61基因擴(kuò)增的反向PCR引物SEQIDNO43用于HPV66基因擴(kuò)增的正向PCR引物48SEQIDNO44用于HPV66基因擴(kuò)增的反向PCR引物SEQIDNO45用于HPV68基因擴(kuò)增的正向PCR引物SEQIDNO46用于HPV68基因擴(kuò)增的反向PCR引物SEQIDNO47用于G3PDH基因擴(kuò)增的正向PCR引物SEQIDNO48用于G3PDH基因擴(kuò)增的反向PCR引物SEQIDNO49用于HPV6基因檢測的探針SEQIDNO50用于HPVll基因檢測的探針SEQIDNO51用于HPV16基因檢測的探針SEQIDNO52用于HPV18基因檢測的探針SEQIDNO53用于HPV30基因檢測的探針SEQIDNO54用于HPV31基因檢測的探針SEQIDNO55用于HPV33基因檢測的探針SEQIDNO56用于HPV34基因檢測的探針SEQIDNO57用于HPV35基因檢測的探針SEQIDNO58用于HPV39基因檢測的探針SEQIDNO59用于HPV40基因檢測的探針SEQIDNO60用于HPV42基因檢測的探針SEQIDNO61用于HPV45基因檢測的探針SEQIDNO62用于HPV51基因檢測的探針SEQIDNO63用于HPV52基因檢測的探針SEQIDNO64用于HPV53基因檢測的探針SEQIDNO65用于HPV54基因檢測的探針SEQIDNO66用于HPV56基因檢測的探針SEQIDNO67用于HPV58基因檢測的探針SEQIDNO68用于HPV59基因檢測的探針SEQIDNO69用于HPV61基因檢測的探針SEQIDNO70用于HPV66基因檢測的探針SEQIDNO71用于HPV68基因檢測的探針SEQIDNO72用于G3PDH基因檢測的探針權(quán)利要求一種用于擴(kuò)增人乳頭瘤病毒(HPV)基因的PCR引物組，所述引物組是至少一種選自以下的引物組(1)引物組1，由包含SEQIDNO1所示堿基序列的引物或其同樣具有作為引物的功能且包含在嚴(yán)格條件下與同SEQIDNO1所示堿基序列互補(bǔ)的堿基序列雜交的堿基序列的變異體，以及包含SEQIDNO2所示堿基序列的引物或其同樣具有作為引物的功能且包含在嚴(yán)格條件下與同SEQIDNO2所示堿基序列互補(bǔ)的堿基序列雜交的堿基序列的變異體組成，(2)引物組2，由包含SEQIDNO3所示堿基序列的引物或其同樣具有作為引物的功能且包含在嚴(yán)格條件下與同SEQIDNO3所示堿基序列互補(bǔ)的堿基序列雜交的堿基序列的變異體，以及包含SEQIDNO4所示堿基序列的引物或其同樣具有作為引物的功能且包含在嚴(yán)格條件下與同SEQIDNO4所示堿基序列互補(bǔ)的堿基序列雜交的堿基序列的變異體組成，(3)引物組3，由包含SEQIDNO5所示堿基序列的引物或其同樣具有作為引物的功能且包含在嚴(yán)格條件下與同SEQIDNO5所示堿基序列互補(bǔ)的堿基序列雜交的堿基序列的變異體，以及包含SEQIDNO6所示堿基序列的引物或其同樣具有作為引物的功能且包含在嚴(yán)格條件下與同SEQIDNO6所示堿基序列互補(bǔ)的堿基序列雜交的堿基序列的變異體組成，(4)引物組4，由包含SEQIDNO7所示堿基序列的引物或其同樣具有作為引物的功能且包含在嚴(yán)格條件下與同SEQIDNO7所示堿基序列互補(bǔ)的堿基序列雜交的堿基序列的變異體，以及包含SEQIDNO8所示堿基序列的引物或其同樣具有作為引物的功能且包含在嚴(yán)格條件下與同SEQIDNO8所示堿基序列互補(bǔ)的堿基序列雜交的堿基序列的變異體組成，(5)引物組5，由包含SEQIDNO9所示堿基序列的引物或其同樣具有作為引物的功能且包含在嚴(yán)格條件下與同SEQIDNO9所示堿基序列互補(bǔ)的堿基序列雜交的堿基序列的變異體，以及包含SEQIDNO10所示堿基序列的引物或其同樣具有作為引物的功能且包含在嚴(yán)格條件下與同SEQIDNO10所示堿基序列互補(bǔ)的堿基序列雜交的堿基序列的變異體組成，(6)引物組6，由包含SEQIDNO11所示堿基序列的引物或其同樣具有作為引物的功能且包含在嚴(yán)格條件下與同SEQIDNO11所示堿基序列互補(bǔ)的堿基序列雜交的堿基序列的變異體，以及包含SEQIDNO12所示堿基序列的引物或其同樣具有作為引物的功能且包含在嚴(yán)格條件下與同SEQIDNO12所示堿基序列互補(bǔ)的堿基序列雜交的堿基序列的變異體組成，(7)引物組7，由包含SEQIDNO13所示堿基序列的引物或其同樣具有作為引物的功能且包含在嚴(yán)格條件下與同SEQIDNO13所示堿基序列互補(bǔ)的堿基序列雜交的堿基序列的變異體，以及包含SEQIDNO14所示堿基序列的引物或其同樣具有作為引物的功能且包含在嚴(yán)格條件下與同SEQIDNO14所示堿基序列互補(bǔ)的堿基序列雜交的堿基序列的變異體組成，(8)引物組8，由包含SEQIDNO15所示堿基序列的引物或其同樣具有作為引物的功能且包含在嚴(yán)格條件下與同SEQIDNO15所示堿基序列互補(bǔ)的堿基序列雜交的堿基序列的變異體，以及包含SEQIDNO16所示堿基序列的引物或其同樣具有作為引物的功能且包含在嚴(yán)格條件下與同SEQIDNO16所示堿基序列互補(bǔ)的堿基序列雜交的堿基序列的變異體組成，(9)引物組9，由包含SEQIDNO17所示堿基序列的引物或其同樣具有作為引物的功能且包含在嚴(yán)格條件下與同SEQIDNO17所示堿基序列互補(bǔ)的堿基序列雜交的堿基序列的變異體，以及包含SEQIDNO18所示堿基序列的引物或其同樣具有作為引物的功能且包含在嚴(yán)格條件下與同SEQIDNO18所示堿基序列互補(bǔ)的堿基序列雜交的堿基序列的變異體組成，(10)引物組10，由包含SEQIDNO19所示堿基序列的引物或其同樣具有作為引物的功能且包含在嚴(yán)格條件下與同SEQIDNO19所示堿基序列互補(bǔ)的堿基序列雜交的堿基序列的變異體，以及包含SEQIDNO20所示堿基序列的引物或其同樣具有作為引物的功能且包含在嚴(yán)格條件下與同SEQIDNO20所示堿基序列互補(bǔ)的堿基序列雜交的堿基序列的變異體組成，(11)引物組11，由包含SEQIDNO21所示堿基序列的引物或其同樣具有作為引物的功能且包含在嚴(yán)格條件下與同SEQIDNO21所示堿基序列互補(bǔ)的堿基序列雜交的堿基序列的變異體，以及包含SEQIDNO22所示堿基序列的引物或其同樣具有作為引物的功能且包含在嚴(yán)格條件下與同SEQIDNO22所示堿基序列互補(bǔ)的堿基序列雜交的堿基序列的變異體組成，(12)引物組12，由包含SEQIDNO23所示堿基序列的引物或其同樣具有作為引物的功能且包含在嚴(yán)格條件下與同SEQIDNO23所示堿基序列互補(bǔ)的堿基序列雜交的堿基序列的變異體，以及包含SEQIDNO24所示堿基序列的引物或其同樣具有作為引物的功能且包含在嚴(yán)格條件下與同SEQIDNO24所示堿基序列互補(bǔ)的堿基序列雜交的堿基序列的變異體組成，(13)引物組13，由包含SEQIDNO25所示堿基序列的引物或其同樣具有作為引物的功能且包含在嚴(yán)格條件下與同SEQIDNO25所示堿基序列互補(bǔ)的堿基序列雜交的堿基序列的變異體，以及包含SEQIDNO26所示堿基序列的引物或其同樣具有作為引物的功能且包含在嚴(yán)格條件下與同SEQIDNO26所示堿基序列互補(bǔ)的堿基序列雜交的堿基序列的變異體組成，(14)引物組14，由包含SEQIDNO27所示堿基序列的引物或其同樣具有作為引物的功能且包含在嚴(yán)格條件下與同SEQIDNO27所示堿基序列互補(bǔ)的堿基序列雜交的堿基序列的變異體，以及包含SEQIDNO28所示堿基序列的引物或其同樣具有作為引物的功能且包含在嚴(yán)格條件下與同SEQIDNO28所示堿基序列互補(bǔ)的堿基序列雜交的堿基序列的變異體組成，(15)引物組15，由包含SEQIDNO29所示堿基序列的引物或其同樣具有作為引物的功能且包含在嚴(yán)格條件下與同SEQIDNO29所示堿基序列互補(bǔ)的堿基序列雜交的堿基序列的變異體，以及包含SEQIDNO30所示堿基序列的引物或其同樣具有作為引物的功能且包含在嚴(yán)格條件下與同SEQIDNO30所示堿基序列互補(bǔ)的堿基序列雜交的堿基序列的變異體組成，(16)引物組16，由包含SEQIDNO31所示堿基序列的引物或其同樣具有作為引物的功能且包含在嚴(yán)格條件下與同SEQIDNO31所示堿基序列互補(bǔ)的堿基序列雜交的堿基序列的變異體，以及包含SEQIDNO32所示堿基序列的引物或其同樣具有作為引物的功能且包含在嚴(yán)格條件下與同SEQIDNO32所示堿基序列互補(bǔ)的堿基序列雜交的堿基序列的變異體組成，(17)引物組17，由包含SEQIDNO33所示堿基序列的引物或其同樣具有作為引物的功能且包含在嚴(yán)格條件下與同SEQIDNO33所示堿基序列互補(bǔ)的堿基序列雜交的堿基序列的變異體，以及包含SEQIDNO34所示堿基序列的引物或其同樣具有作為引物的功能且包含在嚴(yán)格條件下與同SEQIDNO34所示堿基序列互補(bǔ)的堿基序列雜交的堿基序列的變異體組成，(18)引物組18，由包含SEQIDNO35所示堿基序列的引物或其同樣具有作為引物的功能且包含在嚴(yán)格條件下與同SEQIDNO35所示堿基序列互補(bǔ)的堿基序列雜交的堿基序列的變異體，以及包含SEQIDNO36所示堿基序列的引物或其同樣具有作為引物的功能且包含在嚴(yán)格條件下與同SEQIDNO36所示堿基序列互補(bǔ)的堿基序列雜交的堿基序列的變異體組成，(19)引物組19，由包含SEQIDNO37所示堿基序列的引物或其同樣具有作為引物的功能且包含在嚴(yán)格條件下與同SEQIDNO37所示堿基序列互補(bǔ)的堿基序列雜交的堿基序列的變異體，以及包含SEQIDNO38所示堿基序列的引物或其同樣具有作為引物的功能且包含在嚴(yán)格條件下與同SEQIDNO38所示堿基序列互補(bǔ)的堿基序列雜交的堿基序列的變異體組成，(20)引物組20，由包含SEQIDNO39所示堿基序列的引物或其同樣具有作為引物的功能且包含在嚴(yán)格條件下與同SEQIDNO39所示堿基序列互補(bǔ)的堿基序列雜交的堿基序列的變異體，以及包含SEQIDNO40所示堿基序列的引物或其同樣具有作為引物的功能且包含在嚴(yán)格條件下與同SEQIDNO40所示堿基序列互補(bǔ)的堿基序列雜交的堿基序列的變異體組成，(21)引物組21，由包含SEQIDNO41所示堿基序列的引物或其同樣具有作為引物的功能且包含在嚴(yán)格條件下與同SEQIDNO41所示堿基序列互補(bǔ)的堿基序列雜交的堿基序列的變異體，以及包含SEQIDNO42所示堿基序列的引物或其同樣具有作為引物的功能且包含在嚴(yán)格條件下與同SEQIDNO42所示堿基序列互補(bǔ)的堿基序列雜交的堿基序列的變異體組成，(22)引物組22，由包含SEQIDNO43所示堿基序列的引物或其同樣具有作為引物的功能且包含在嚴(yán)格條件下與同SEQIDNO43所示堿基序列互補(bǔ)的堿基序列雜交的堿基序列的變異體，以及包含SEQIDNO44所示堿基序列的引物或其同樣具有作為引物的功能且包含在嚴(yán)格條件下與同SEQIDNO44所示堿基序列互補(bǔ)的堿基序列雜交的堿基序列的變異體組成，和(23)引物組23，由包含SEQIDNO45所示堿基序列的引物或其同樣具有作為引物的功能且包含在嚴(yán)格條件下與同SEQIDNO45所示堿基序列互補(bǔ)的堿基序列雜交的堿基序列的變異體，以及包含SEQIDNO46所示堿基序列的引物或其同樣具有作為引物的功能且包含在嚴(yán)格條件下與同SEQIDNO46所示堿基序列互補(bǔ)的堿基序列雜交的堿基序列的變異體組成。2.一種用于檢測人乳頭瘤病毒(HPV)的探針，所述探針是至少一種選自以下的探針(1)包含SEQIDNO:49所示堿基序列的探針或其同樣具有作為探針的功能且包含在嚴(yán)格條件下與同SEQIDNO:49所示堿基序列互補(bǔ)的堿基序列雜交的堿基序列的變異體，或者包含與SEQIDNO:49所示堿基序列互補(bǔ)的堿基序列的探針或其同樣具有作為探針的功能且包含在嚴(yán)格條件下與SEQIDNO:49所示堿基序列雜交的堿基序列的變異體(探針1)，(2)包含SEQIDNO:50所示堿基序列的探針或其同樣具有作為探針的功能且包含在嚴(yán)格條件下與同SEQIDNO:50所示堿基序列互補(bǔ)的堿基序列雜交的堿基序列的變異體，或者包含與SEQIDNO:50所示堿基序列互補(bǔ)的堿基序列的探針或其同樣具有作為探針的功能且包含在嚴(yán)格條件下與SEQIDNO:50所示堿基序列雜交的堿基序列的變異體(探針2)，(3)包含SEQIDNO:51所示堿基序列的探針或其同樣具有作為探針的功能且包含在嚴(yán)格條件下與同SEQIDNO:51所示堿基序列互補(bǔ)的堿基序列雜交的堿基序列的變異體，或者包含與SEQIDNO:51所示堿基序列互補(bǔ)的堿基序列的探針或其同樣具有作為探針的功能且包含在嚴(yán)格條件下與SEQIDNO:51所示堿基序列雜交的堿基序列的變異體(探針3)，(4)包含SEQIDNO:52所示堿基序列的探針或其同樣具有作為探針的功能且包含在嚴(yán)格條件下與同SEQIDNO:52所示堿基序列互補(bǔ)的堿基序列雜交的堿基序列的變異體，或者包含與SEQIDNO:52所示堿基序列互補(bǔ)的堿基序列的探針或其同樣具有作為探針的功能且包含在嚴(yán)格條件下與SEQIDNO:52所示堿基序列雜交的堿基序列的變異體(探針4)，(5)包含SEQIDNO:53所示堿基序列的探針或其同樣具有作為探針的功能且包含在嚴(yán)格條件下與同SEQIDNO:53所示堿基序列互補(bǔ)的堿基序列雜交的堿基序列的變異體，或者包含與SEQIDNO:53所示堿基序列互補(bǔ)的堿基序列的探針或其同樣具有作為探針的功能且包含在嚴(yán)格條件下與SEQIDNO:53所示堿基序列雜交的堿基序列的變異體(探針5)，(6)包含SEQIDNO:54所示堿基序列的探針或其同樣具有作為探針的功能且包含在嚴(yán)格條件下與同SEQIDNO:54所示堿基序列互補(bǔ)的堿基序列雜交的堿基序列的變異體，或者包含與SEQIDNO:54所示堿基序列互補(bǔ)的堿基序列的探針或其同樣具有作為探針的功能且包含在嚴(yán)格條件下與SEQIDNO:54所示堿基序列雜交的堿基序列的變異體(探針6)，(7)包含SEQIDNO:55所示堿基序列的探針或其同樣具有作為探針的功能且包含在嚴(yán)格條件下與同SEQIDNO:55所示堿基序列互補(bǔ)的堿基序列雜交的堿基序列的變異體，或者包含與SEQIDNO:55所示堿基序列互補(bǔ)的堿基序列的探針或其同樣具有作為探針的功能且包含在嚴(yán)格條件下與SEQIDNO:55所示堿基序列雜交的堿基序列的變異體(探針7)，(8)包含SEQIDNO:56所示堿基序列的探針或其同樣具有作為探針的功能且包含在嚴(yán)格條件下與同SEQIDNO:56所示堿基序列互補(bǔ)的堿基序列雜交的堿基序列的變異體，或者包含與SEQIDNO:56所示堿基序列互補(bǔ)的堿基序列的探針或其同樣具有作為探針的功能且包含在嚴(yán)格條件下與SEQIDNO:56所示堿基序列雜交的堿基序列的變異體(探針8)，(9)包含SEQIDNO:57所示堿基序列的探針或其同樣具有作為探針的功能且包含在嚴(yán)格條件下與同SEQIDNO:57所示堿基序列互補(bǔ)的堿基序列雜交的堿基序列的變異體，或者包含與SEQIDNO:57所示堿基序列互補(bǔ)的堿基序列的探針或其同樣具有作為探針的功能且包含在嚴(yán)格條件下與SEQIDNO:57所示堿基序列雜交的堿基序列的變異體(探針9)，(10)包含SEQIDNO:58所示堿基序列的探針或其同樣具有作為探針的功能且包含在嚴(yán)格條件下與同SEQIDNO:58所示堿基序列互補(bǔ)的堿基序列雜交的堿基序列的變異體，或者包含與SEQIDNO:58所示堿基序列互補(bǔ)的堿基序列的探針或其同樣具有作為探針的功能且包含在嚴(yán)格條件下與SEQIDNO:58所示堿基序列雜交的堿基序列的變異體(探針10)，(11)包含SEQIDNO:59所示堿基序列的探針或其同樣具有作為探針的功能且包含在嚴(yán)格條件下同與SEQIDNO:59所示堿基序列互補(bǔ)的堿基序列雜交的堿基序列的變異體，或者包含與SEQIDNO:59所示堿基序列互補(bǔ)的堿基序列的探針或其同樣具有作為探針的功能且包含在嚴(yán)格條件下與SEQIDNO:59所示堿基序列雜交的堿基序列的變異體(探針11)，(12)包含SEQIDNO:60所示堿基序列的探針或其同樣具有作為探針的功能且包含在嚴(yán)格條件下與同SEQIDNO:60所示堿基序列互補(bǔ)的堿基序列雜交的堿基序列的變異體，或者包含與SEQIDNO:60所示堿基序列互補(bǔ)的堿基序列的探針或其同樣具有作為探針的功能且包含在嚴(yán)格條件下與SEQIDNO:60所示堿基序列雜交的堿基序列的變異體(探針12)，(13)包含SEQIDNO:61所示堿基序列的探針或其同樣具有作為探針的功能且包含在嚴(yán)格條件下與同SEQIDNO:61所示堿基序列互補(bǔ)的堿基序列雜交的堿基序列的變異體，或者包含與SEQIDNO:61所示堿基序列互補(bǔ)的堿基序列的探針或其同樣具有作為探針的功能且包含在嚴(yán)格條件下與SEQIDNO:61所示堿基序列雜交的堿基序列的變異體(探針13)，(14)包含SEQIDNO:62所示堿基序列的探針或其同樣具有作為探針的功能且包含在嚴(yán)格條件下與同SEQIDNO:62所示堿基序列互補(bǔ)的堿基序列雜交的堿基序列的變異體，或者包含與SEQIDNO:62所示堿基序列互補(bǔ)的堿基序列的探針或其同樣具有作為探針的功能且包含在嚴(yán)格條件下與SEQIDNO:62所示堿基序列雜交的堿基序列的變異體(探針14)，(15)包含SEQIDNO:63所示堿基序列的探針或其同樣具有作為探針的功能且包含在嚴(yán)格條件下與同SEQIDNO:63所示堿基序列互補(bǔ)的堿基序列雜交的堿基序列的變異體，或者包含與SEQIDNO:63所示堿基序列互補(bǔ)的堿基序列的探針或其同樣具有作為探針的功能且包含在嚴(yán)格條件下與SEQIDNO:63所示堿基序列雜交的堿基序列的變異體(探針15)，(16)包含SEQIDNO:64所示堿基序列的探針或其同樣具有作為探針的功能且包含在嚴(yán)格條件下與同SEQIDNO:64所示堿基序列互補(bǔ)的堿基序列雜交的堿基序列的變異體，或者包含與SEQIDNO:64所示堿基序列互補(bǔ)的堿基序列的探針或其同樣具有作為探針的功能且包含在嚴(yán)格條件下與SEQIDNO:64所示堿基序列雜交的堿基序列的變異體(探針16)，(17)包含SEQIDNO:65所示堿基序列的探針或其同樣具有作為探針的功能且包含在嚴(yán)格條件下與同SEQIDNO:65所示堿基序列互補(bǔ)的堿基序列雜交的堿基序列的變異體，或者包含與SEQIDNO:65所示堿基序列互補(bǔ)的堿基序列的探針或其同樣具有作為探針的功能且包含在嚴(yán)格條件下與SEQIDNO:65所示堿基序列雜交的堿基序列的變異體(探針17),(18)包含SEQIDNO:66所示堿基序列的探針或其同樣具有作為探針的功能且包含在嚴(yán)格條件下與同SEQIDNO:66所示堿基序列互補(bǔ)的堿基序列雜交的堿基序列的變異體，或者包含與SEQIDNO:66所示堿基序列互補(bǔ)的堿基序列的探針或其同樣具有作為探針的功能且包含在嚴(yán)格條件下與SEQIDNO:66所示堿基序列雜交的堿基序列的變異體(探針18)，(19)包含SEQIDNO:67所示堿基序列的探針或其同樣具有作為探針的功能且包含在嚴(yán)格條件下與同SEQIDNO:67所示堿基序列互補(bǔ)的堿基序列雜交的堿基序列的變異體，或者包含與SEQIDNO:67所示堿基序列互補(bǔ)的堿基序列的探針或其同樣具有作為探針的功能且包含在嚴(yán)格條件下與SEQIDNO:67所示堿基序列雜交的堿基序列的變異體(探針19)，(20)包含SEQIDNO:68所示堿基序列的探針或其同樣具有作為探針的功能且包含在嚴(yán)格條件下與同SEQIDNO:68所示堿基序列互補(bǔ)的堿基序列雜交的堿基序列的變異體，或者包含與SEQIDNO:68所示堿基序列互補(bǔ)的堿基序列的探針或其同樣具有作為探針的功能且包含在嚴(yán)格條件下與SEQIDNO:68所示堿基序列雜交的堿基序列的變異體(探針20)，(21)包含SEQIDNO:69所示堿基序列的探針或其同樣具有作為探針的功能且包含在嚴(yán)格條件下與同SEQIDNO:69所示堿基序列互補(bǔ)的堿基序列雜交的堿基序列的變異體，或者包含與SEQIDNO:69所示堿基序列互補(bǔ)的堿基序列的探針或其同樣具有作為探針的功能且包含在嚴(yán)格條件下與SEQIDNO:69所示堿基序列雜交的堿基序列的變異體(探針21)，(22)包含SEQIDNO:70所示堿基序列的探針或其同樣具有作為探針的功能且包含在嚴(yán)格條件下與同SEQIDNO:70所示堿基序列互補(bǔ)的堿基序列雜交的堿基序列的變異體，或者包含與SEQIDNO:70所示堿基序列互補(bǔ)的堿基序列的探針或其同樣具有作為探針的功能且包含在嚴(yán)格條件下與SEQIDNO:70所示堿基序列雜交的堿基序列的變異體(探針22)，和(23)包含SEQIDNO:71所示堿基序列的探針或其同樣具有作為探針的功能且包含在嚴(yán)格條件下與同SEQIDNO:71所示堿基序列互補(bǔ)的堿基序列雜交的堿基序列的變異體，或者包含與SEQIDNO:71所示堿基序列互補(bǔ)的堿基序列的探針或其同樣具有作為探針的功能且包含在嚴(yán)格條件下與SEQIDNO:71所示堿基序列雜交的堿基序列的變異體(探針23)。3.一種用于檢測人乳頭瘤病毒(HPV)的試劑盒，所述試劑盒包含一種或多種選自以下的組合(1)引物組1和探針1的組合，所述引物組1由包含SEQIDNO1所示堿基序列的引物或其同樣具有作為引物的功能且包含在嚴(yán)格條件下與同SEQIDNO:1所示堿基序列互補(bǔ)的堿基序列雜交的堿基序列的變異體，以及包含SEQIDNO:2所示堿基序列的引物或其同樣具有作為引物的功能且包含在嚴(yán)格條件下與同SEQIDNO:2所示堿基序列互補(bǔ)的堿基序列雜交的堿基序列的變異體組成，所述探針1為包含SEQIDNO:49所示堿基序列的探針或其同樣具有作為探針的功能且包含在嚴(yán)格條件下與同SEQIDNO:49所示堿基序列互補(bǔ)的堿基序列雜交的堿基序列的變異體，或者包含與SEQIDNO:49所示堿基序列互補(bǔ)的堿基序列的探針或其同樣具有作為探針的功能且包含在嚴(yán)格條件下與SEQIDN0:49所示堿基序列雜交的堿基序列的變異體，(2)弓丨物組2和探針2的組合，所述引物組2由包含SEQIDNO3所示堿基序列的引物或其同樣具有作為引物的功能且包含在嚴(yán)格條件下與同SEQIDNO:3所示堿基序列互補(bǔ)的堿基序列雜交的堿基序列的變異體，以及包含SEQIDNO:4所示堿基序列的引物或其同樣具有作為引物的功能且包含在嚴(yán)格條件下與同SEQIDNO:4所示堿基序列互補(bǔ)的堿基序列雜交的堿基序列的變異體組成，所述探針2為包含SEQIDNO:50所示堿基序列的探針或其同樣具有作為探針的功能且包含在嚴(yán)格條件下與同SEQIDNO:50所示堿基序列互補(bǔ)的堿基序列雜交的堿基序列的變異體，或者包含與SEQIDNO:50所示堿基序列互補(bǔ)的堿基序列的探針或其同樣具有作為探針的功能且包含在嚴(yán)格條件下與SEQIDN0:50所示堿基序列雜交的堿基序列的變異體，(3)弓丨物組3和探針3的組合，所述引物組3由包含SEQIDNO5所示堿基序列的引物或其同樣具有作為引物的功能且包含在嚴(yán)格條件下與同SEQIDNO:5所示堿基序列互補(bǔ)的堿基序列雜交的堿基序列的變異體，以及包含SEQIDNO:6所示堿基序列的引物或其同樣具有作為引物的功能且包含在嚴(yán)格條件下與同SEQIDNO:6所示堿基序列互補(bǔ)的堿基序列雜交的堿基序列的變異體組成，所述探針3為包含SEQIDNO:51所示堿基序列的探針或其同樣具有作為探針的功能且包含在嚴(yán)格條件下與同SEQIDNO:51所示堿基序列互補(bǔ)的堿基序列雜交的堿基序列的變異體，或者包含與SEQIDNO:51所示堿基序列互補(bǔ)的堿基序列的探針或其同樣具有作為探針的功能且包含在嚴(yán)格條件下與SEQIDN0:51所示堿基序列雜交的堿基序列的變異體，(4)引物組4和探針4的組合，所述引物組4由包含SEQIDN0:7所示堿基序列的引物或其同樣具有作為引物的功能且包含在嚴(yán)格條件下與同SEQIDNO:7所示堿基序列互補(bǔ)的堿基序列雜交的堿基序列的變異體，以及包含SEQIDNO:8所示堿基序列的引物或其同樣具有作為引物的功能且包含在嚴(yán)格條件下與同SEQIDNO:8所示堿基序列互補(bǔ)的堿基序列雜交的堿基序列的變異體組成，所述探針4為包含SEQIDNO:52所示堿基序列的探針或其同樣具有作為探針的功能且包含在嚴(yán)格條件下與同SEQIDNO:52所示堿基序列互補(bǔ)的堿基序列雜交的堿基序列的變異體，或者包含與SEQIDNO:52所示堿基序列互補(bǔ)的堿基序列的探針或其同樣具有作為探針的功能且包含在嚴(yán)格條件下與SEQIDN0:52所示堿基序列雜交的堿基序列的變異體，(5)引物組5和探針5的組合，所述引物組5由包含SEQIDNO9所示堿基序列的引物或其同樣具有作為引物的功能且包含在嚴(yán)格條件下與同SEQIDNO:9所示堿基序列互補(bǔ)的堿基序列雜交的堿基序列的變異體，以及包含SEQIDNO:10所示堿基序列的引物或其同樣具有作為引物的功能且包含在嚴(yán)格條件下與同SEQIDNO:10所示堿基序列互補(bǔ)的堿基序列雜交的堿基序列的變異體組成，所述探針5為包含SEQIDNO:53所示堿基序列的探針或其同樣具有作為探針的功能且包含在嚴(yán)格條件下與同SEQIDNO:53所示堿基序列互補(bǔ)的堿基序列雜交的堿基序列的變異體，或者包含與SEQIDNO:53所示堿基序列互補(bǔ)的堿基序列的探針或其同樣具有作為探針的功能且包含在嚴(yán)格條件下與SEQIDN0:53所示堿基序列雜交的堿基序列的變異體，(6)引物組6和探針6的組合，所述引物組6由包含SEQIDNO:11所示堿基序列的引物或其同樣具有作為引物的功能且包含在嚴(yán)格條件下與同SEQIDNO:11所示堿基序列互補(bǔ)的堿基序列雜交的堿基序列的變異體，以及包含SEQIDNO:12所示堿基序列的引物或其同樣具有作為引物的功能且包含在嚴(yán)格條件下與同SEQIDNO:12所示堿基序列互補(bǔ)的堿基序列雜交的堿基序列的變異體組成，所述探針6為包含SEQIDNO:54所示堿基序列的探針或其同樣具有作為探針的功能且包含在嚴(yán)格條件下與同SEQIDNO:54所示堿基序列互補(bǔ)的堿基序列雜交的堿基序列的變異體，或者包含與SEQIDNO:54所示堿基序列互補(bǔ)的堿基序列的探針或其同樣具有作為探針的功能且包含在嚴(yán)格條件下與SEQIDN0:54所示堿基序列雜交的堿基序列的變異體，(7)引物組7和探針7的組合，所述引物組7由包含SEQIDNO13所示堿基序列的引物或其同樣具有作為引物的功能且包含在嚴(yán)格條件下與同SEQIDNO:13所示堿基序列互補(bǔ)的堿基序列雜交的堿基序列的變異體，以及包含SEQIDNO:14所示堿基序列的引物或其同樣具有作為引物的功能且包含在嚴(yán)格條件下與同SEQIDNO:14所示堿基序列互補(bǔ)的堿基序列雜交的堿基序列的變異體組成，所述探針7為包含SEQIDNO:55所示堿基序列的探針或其同樣具有作為探針的功能且包含在嚴(yán)格條件下與同SEQIDNO:55所示堿基序列互補(bǔ)的堿基序列雜交的堿基序列的變異體，或者包含與SEQIDNO:55所示堿基序列互補(bǔ)的堿基序列的探針或其同樣具有作為探針的功能且包含在嚴(yán)格條件下與SEQIDN0:55所示堿基序列雜交的堿基序列的變異體，(8)引物組8和探針8的組合，所述引物組8由包含SEQIDNO:15所示堿基序列的引物或其同樣具有作為引物的功能且包含在嚴(yán)格條件下與同SEQIDNO:15所示堿基序列互補(bǔ)的堿基序列雜交的堿基序列的變異體，以及包含SEQIDNO:16所示堿基序列的引物或其同樣具有作為引物的功能且包含在嚴(yán)格條件下與同SEQIDNO:16所示堿基序列互補(bǔ)的堿基序列雜交的堿基序列的變異體組成，所述探針8為包含SEQIDNO:56所示堿基序列的探針或其同樣具有作為探針的功能且包含在嚴(yán)格條件下與同SEQIDNO:56所示堿基序列互補(bǔ)的堿基序列雜交的堿基序列的變異體，或者包含與SEQIDNO:56所示堿基序列互補(bǔ)的堿基序列的探針或其同樣具有作為探針的功能且包含在嚴(yán)格條件下與SEQIDN0:56所示堿基序列雜交的堿基序列的變異體，(9)引物組9和探針9的組合，所述引物組9由包含SEQIDNO:17所示堿基序列的引物或其同樣具有作為引物的功能且包含在嚴(yán)格條件下與同SEQIDNO:17所示堿基序列互補(bǔ)的堿基序列雜交的堿基序列的變異體，以及包含SEQIDNO:18所示堿基序列的引物或其同樣具有作為引物的功能且包含在嚴(yán)格條件下與同SEQIDNO:18所示堿基序列互補(bǔ)的堿基序列雜交的堿基序列的變異體組成，所述探針9為包含SEQIDNO:57所示堿基序列的探針或其同樣具有作為探針的功能且包含在嚴(yán)格條件下與同SEQIDNO:57所示堿基序列互補(bǔ)的堿基序列雜交的堿基序列的變異體，或者包含與SEQIDNO:57所示堿基序列互補(bǔ)的堿基序列的探針或其同樣具有作為探針的功能且包含在嚴(yán)格條件下與SEQIDN0:57所示堿基序列雜交的堿基序列的變異體，(10)弓丨物組10和探針10的組合，所述引物組10由包含SEQIDNO19所示堿基序列的引物或其同樣具有作為引物的功能且包含在嚴(yán)格條件下與同SEQIDN0:19所示堿基序列互補(bǔ)的堿基序列雜交的堿基序列的變異體，以及包含SEQIDNO:20所示堿基序列的引物或其同樣具有作為引物的功能且包含在嚴(yán)格條件下與同SEQIDNO:20所示堿基序列互補(bǔ)的堿基序列雜交的堿基序列的變異體組成，所述探針10為包含SEQIDN0:58所示堿基序列的探針或其同樣具有作為探針的功能且包含在嚴(yán)格條件下與同SEQIDN0:58所示堿基序列互補(bǔ)的堿基序列雜交的堿基序列的變異體，或者包含與SEQIDNO:58所示堿基序列互補(bǔ)的堿基序列的探針或其同樣具有作為探針的功能且包含在嚴(yán)格條件下與SEQIDN0:58所示堿基序列雜交的堿基序列的變異體，(11)弓丨物組11和探針11的組合，所述引物組11由包含SEQIDNO21所示堿基序列的引物或其同樣具有作為引物的功能且包含在嚴(yán)格條件下與同SEQIDN0:21所示堿基序列互補(bǔ)的堿基序列雜交的堿基序列的變異體，以及包含SEQIDNO:22所示堿基序列的引物或其同樣具有作為引物的功能且包含在嚴(yán)格條件下與同SEQIDNO:22所示堿基序列互補(bǔ)的堿基序列雜交的堿基序列的變異體組成，所述探針11為包含SEQIDN0:59所示堿基序列的探針或其同樣具有作為探針的功能且包含在嚴(yán)格條件下與同SEQIDN0:59所示堿基序列互補(bǔ)的堿基序列雜交的堿基序列的變異體，或者包含與SEQIDNO:59所示堿基序列互補(bǔ)的堿基序列的探針或其同樣具有作為探針的功能且包含在嚴(yán)格條件下與SEQIDN0:59所示堿基序列雜交的堿基序列的變異體，(12)弓丨物組12和探針12的組合，所述引物組12由包含SEQIDNO23所示堿基序列的引物或其同樣具有作為引物的功能且包含在嚴(yán)格條件下與同SEQIDN0:23所示堿基序列互補(bǔ)的堿基序列雜交的堿基序列的變異體，以及包含SEQIDNO:24所示堿基序列的引物或其同樣具有作為引物的功能且包含在嚴(yán)格條件下與同SEQIDNO:24所示堿基序列互補(bǔ)的堿基序列雜交的堿基序列的變異體組成，所述探針12為包含SEQIDNO60所示堿基序列的探針或其同樣具有作為探針的功能且包含在嚴(yán)格條件下與同SEQIDN0:60所示堿基序列互補(bǔ)的堿基序列雜交的堿基序列的變異體，或者包含與SEQIDNO:60所示堿基序列互補(bǔ)的堿基序列的探針或其同樣具有作為探針的功能且包含在嚴(yán)格條件下與SEQIDN0:60所示堿基序列雜交的堿基序列的變異體，(13)弓丨物組13和探針13的組合，所述引物組13由包含SEQIDNO25所示堿基序列的引物或其同樣具有作為引物的功能且包含在嚴(yán)格條件下與同SEQIDN0:25所示堿基序列互補(bǔ)的堿基序列雜交的堿基序列的變異體，以及包含SEQIDNO:26所示堿基序列的引物或其同樣具有作為引物的功能且包含在嚴(yán)格條件下與同SEQIDNO:26所示堿基序列互補(bǔ)的堿基序列雜交的堿基序列的變異體組成，所述探針13為包含SEQIDNO61所示堿基序列的探針或其同樣具有作為探針的功能且包含在嚴(yán)格條件下與同SEQIDN0:61所示堿基序列互補(bǔ)的堿基序列雜交的堿基序列的變異體，或者包含與SEQIDNO:61所示堿基序列互補(bǔ)的堿基序列的探針或其同樣具有作為探針的功能且包含在嚴(yán)格條件下與SEQIDN0:61所示堿基序列雜交的堿基序列的變異體，(14)弓丨物組14和探針14的組合，所述引物組14由包含SEQIDNO27所示堿基序列的引物或其同樣具有作為引物的功能且包含在嚴(yán)格條件下與同SEQIDN0:27所示堿基序列互補(bǔ)的堿基序列雜交的堿基序列的變異體，以及包含SEQIDNO:28所示堿基序列的引物或其同樣具有作為引物的功能且包含在嚴(yán)格條件下與同SEQIDNO:28所示堿基序列互補(bǔ)的堿基序列雜交的堿基序列的變異體組成，所述探針14為包含SEQIDN0:62所示堿基序列的探針或其同樣具有作為探針的功能且包含在嚴(yán)格條件下與同SEQIDN0:62所示堿基序列互補(bǔ)的堿基序列雜交的堿基序列的變異體，或者包含與SEQIDNO:62所示堿基序列互補(bǔ)的堿基序列的探針或其同樣具有作為探針的功能且包含在嚴(yán)格條件下與SEQIDN0:62所示堿基序列雜交的堿基序列的變異體，(15)弓丨物組15和探針15的組合，所述引物組15由包含SEQIDNO29所示堿基序列的引物或其同樣具有作為引物的功能且包含在嚴(yán)格條件下與同SEQIDN0:29所示堿基序列互補(bǔ)的堿基序列雜交的堿基序列的變異體，以及包含SEQIDNO:30所示堿基序列的引物或其同樣具有作為引物的功能且包含在嚴(yán)格條件下與同SEQIDNO:30所示堿基序列互補(bǔ)的堿基序列雜交的堿基序列的變異體組成，所述探針15為包含SEQIDNO63所示堿基序列的探針或其同樣具有作為探針的功能且包含在嚴(yán)格條件下與同SEQIDN0:63所示堿基序列互補(bǔ)的堿基序列雜交的堿基序列的變異體，或者包含與SEQIDNO:63所示堿基序列互補(bǔ)的堿基序列的探針或其同樣具有作為探針的功能且包含在嚴(yán)格條件下與SEQIDNO63所示堿基序列雜交的堿基序列的變異體，(16)弓丨物組16和探針16的組合，所述引物組16由包含SEQIDNO31所示堿基序列的引物或其同樣具有作為引物的功能且包含在嚴(yán)格條件下與同SEQIDN0:31所示堿基序列互補(bǔ)的堿基序列雜交的堿基序列的變異體，以及包含SEQIDNO:32所示堿基序列的引物或其同樣具有作為引物的功能且包含在嚴(yán)格條件下與同SEQIDNO:32所示堿基序列互補(bǔ)的堿基序列雜交的堿基序列的變異體組成，所述探針16為包含SEQIDNO64所示堿基序列的探針或其同樣具有作為探針的功能且包含在嚴(yán)格條件下與同SEQIDN0:64所示堿基序列互補(bǔ)的堿基序列雜交的堿基序列的變異體，或者包含與SEQIDNO:64所示堿基序列互補(bǔ)的堿基序列的探針或其同樣具有作為探針的功能且包含在嚴(yán)格條件下與SEQIDNO64所示堿基序列雜交的堿基序列的變異體，(17)弓丨物組17和探針17的組合，所述引物組17由包含SEQIDNO33所示堿基序列的引物或其同樣具有作為引物的功能且包含在嚴(yán)格條件下與同SEQIDN0:33所示堿基序列互補(bǔ)的堿基序列雜交的堿基序列的變異體，以及包含SEQIDNO:34所示堿基序列的引物或其同樣具有作為引物的功能且包含在嚴(yán)格條件下與同SEQIDNO:34所示堿基序列互補(bǔ)的堿基序列雜交的堿基序列的變異體組成，所述探針17為包含SEQIDNO65所示堿基序列的探針或其同樣具有作為探針的功能且包含在嚴(yán)格條件下與同SEQIDN0:65所示堿基序列互補(bǔ)的堿基序列雜交的堿基序列的變異體，或者包含與SEQIDNO:65所示堿基序列互補(bǔ)的堿基序列的探針或其同樣具有作為探針的功能且包含在嚴(yán)格條件下與SEQIDNO65所示堿基序列雜交的堿基序列的變異體，(18)弓丨物組18和探針18的組合，所述引物組18由包含SEQIDNO35所示堿基序列的引物或其同樣具有作為引物的功能且包含在嚴(yán)格條件下與同SEQIDN0:35所示堿基序列互補(bǔ)的堿基序列雜交的堿基序列的變異體，以及包含SEQIDNO:36所示堿基序列的引物或其同樣具有作為引物的功能且包含在嚴(yán)格條件下與同SEQIDNO:36所示堿基序列互補(bǔ)的堿基序列雜交的堿基序列的變異體組成，所述探針18為包含SEQIDNO66所示堿基序列的探針或其同樣具有作為探針的功能且包含在嚴(yán)格條件下與同SEQIDN0:66所示堿基序列互補(bǔ)的堿基序列雜交的堿基序列的變異體，或者包含與SEQIDNO:66所示堿基序列互補(bǔ)的堿基序列的探針或其同樣具有作為探針的功能且包含在嚴(yán)格條件下與SEQIDN0:66所示堿基序列雜交的堿基序列的變異體，(19)弓丨物組19和探針19的組合，所述引物組19由包含SEQIDNO37所示堿基序列的引物或其同樣具有作為引物的功能且包含在嚴(yán)格條件下與同SEQIDN0:37所示堿基序列互補(bǔ)的堿基序列雜交的堿基序列的變異體，以及包含SEQIDNO:38所示堿基序列的引物或其同樣具有作為引物的功能且包含在嚴(yán)格條件下與同SEQIDNO:38所示堿基序列互補(bǔ)的堿基序列雜交的堿基序列的變異體組成，所述探針19為包含SEQIDNO67所示堿基序列的探針或其同樣具有作為探針的功能且包含在嚴(yán)格條件下與同SEQIDN0:67所示堿基序列互補(bǔ)的堿基序列雜交的堿基序列的變異體，或者包含與SEQIDNO:67所示堿基序列互補(bǔ)的堿基序列的探針或其同樣具有作為探針的功能且包含在嚴(yán)格條件下與SEQIDNO67所示堿基序列雜交的堿基序列的變異體，(20)引物組20和探針20的組合，所述引物組20由包含SEQIDNO39所示堿基序列的引物或其同樣具有作為引物的功能且包含在嚴(yán)格條件下與同SEQIDN0:39所示堿基序列互補(bǔ)的堿基序列雜交的堿基序列的變異體，以及包含SEQIDNO:40所示堿基序列的引物或其同樣具有作為引物的功能且包含在嚴(yán)格條件下與同SEQIDNO:40所示堿基序列互補(bǔ)的堿基序列雜交的堿基序列的變異體組成，所述探針20為包含SEQIDN0:68所示堿基序列的探針或其同樣具有作為探針的功能且包含在嚴(yán)格條件下與同SEQIDN0:68所示堿基序列互補(bǔ)的堿基序列雜交的堿基序列的變異體，或者包含與SEQIDNO:68所示堿基序列互補(bǔ)的堿基序列的探針或其同樣具有作為探針的功能且包含在嚴(yán)格條件下與SEQIDNO68所示堿基序列雜交的堿基序列的變異體，(21)弓丨物組21和探針21的組合，所述引物組21由包含SEQIDNO41所示堿基序列的引物或其同樣具有作為引物的功能且包含在嚴(yán)格條件下與同SEQIDN0:41所示堿基序列互補(bǔ)的堿基序列雜交的堿基序列的變異體，以及包含SEQIDNO:42所示堿基序列的引物或其同樣具有作為引物的功能且包含在嚴(yán)格條件下與同SEQIDNO:42所示堿基序列互補(bǔ)的堿基序列雜交的堿基序列的變異體組成，所述探針21為包含SEQIDN0:69所示堿基序列的探針或其同樣具有作為探針的功能且包含在嚴(yán)格條件下與同SEQIDN0:69所示堿基序列互補(bǔ)的堿基序列雜交的堿基序列的變異體，或者包含與SEQIDNO:69所示堿基序列互補(bǔ)的堿基序列的探針或其同樣具有作為探針的功能且包含在嚴(yán)格條件下與SEQIDNO69所示堿基序列雜交的堿基序列的變異體，(22)引物組22和探針22的組合，所述引物組22由包含SEQIDNO43所示堿基序列的引物或其同樣具有作為引物的功能且包含在嚴(yán)格條件下與同SEQIDN0:43所示堿基序列互補(bǔ)的堿基序列雜交的堿基序列的變異體，以及包含SEQIDNO:44所示堿基序列的引物或其同樣具有作為引物的功能且包含在嚴(yán)格條件下與同SEQIDNO:44所示堿基序列互補(bǔ)的堿基序列雜交的堿基序列的變異體組成，所述探針22為包含SEQIDN0:70所示堿基序列的探針或其同樣具有作為探針的功能且包含在嚴(yán)格條件下與同SEQIDN0:70所示堿基序列互補(bǔ)的堿基序列雜交的堿基序列的變異體，或者包含與SEQIDNO:70所示堿基序列互補(bǔ)的堿基序列的探針或其同樣具有作為探針的功能且包含在嚴(yán)格條件下與SEQIDN0:70所示堿基序列雜交的堿基序列的變異體，和(23)引物組23和探針23的組合，所述引物組23由包含SEQIDNO45所示堿基序列的引物或其同樣具有作為引物的功能且包含在嚴(yán)格條件下與同SEQIDN0:45所示堿基序列互補(bǔ)的堿基序列雜交的堿基序列的變異體，以及包含SEQIDNO:46所示堿基序列的引物或其同樣具有作為引物的功能且包含在嚴(yán)格條件下與同SEQIDNO:46所示堿基序列互補(bǔ)的堿基序列雜交的堿基序列的變異體組成，所述探針23為包含SEQIDN0:71所示堿基序12列的探針或其同樣具有作為探針的功能且包含在嚴(yán)格條件下與同SEQIDN0:71所示堿基序列互補(bǔ)的堿基序列雜交的堿基序列的變異體，或者包含與SEQIDNO:71所示堿基序列互補(bǔ)的堿基序列的探針或其同樣具有作為探針的功能且包含在嚴(yán)格條件下與SEQIDN0:71所示堿基序列雜交的堿基序列的變異體，以及任選，(24)引物組24和探針24的組合，所述引物組24由包含SEQIDNO47所示堿基序列的引物或其同樣具有作為引物的功能且包含在嚴(yán)格條件下與同SEQIDN0:47所示堿基序列互補(bǔ)的堿基序列雜交的堿基序列的變異體，以及包含SEQIDNO:48所示堿基序列的引物或其同樣具有作為引物的功能且包含在嚴(yán)格條件下與同SEQIDNO:48所示堿基序列互補(bǔ)的堿基序列雜交的堿基序列的變異體組成，所述探針24為包含SEQIDN0:72所示堿基序列的探針或其同樣具有作為探針的功能且包含在嚴(yán)格條件下與同SEQIDN0:72所示堿基序列互補(bǔ)的堿基序列雜交的堿基序列的變異體，或者包含與SEQIDNO:72所示堿基序列互補(bǔ)的堿基序列的探針或其同樣具有作為探針的功能且包含在嚴(yán)格條件下與SEQIDN0:72所示堿基序列雜交的堿基序列的變異體。4.權(quán)利要求3的試劑盒，所述試劑盒包含兩種或更多種選自上述組合(1)(23)的組合。5.權(quán)利要求3或4的試劑盒，所述試劑盒包含引物組3和探針3的組合及引物組4和探針4的組合，以及任選引物組24和探針24的組合。6.權(quán)利要求3或4的試劑盒，所述試劑盒包含引物組3和探針3的組合、引物組4和探針4的組合、引物組5和探針5的組合、引物組6和探針6的組合、引物組7和探針7的組合、引物組9和探針9的組合、引物組10和探針10的組合、引物組13和探針13的組合、引物組14和探針14的組合、引物組15和探針15的組合、引物組18和探針18的組合、引物組19和探針19的組合、引物組20和探針20的組合及引物組23和探針23的組合，以及任選引物組24和探針24的組合。7.權(quán)利要求3或4的試劑盒，所述試劑盒包含引物組1和探針1的組合、引物組2和探針2的組合、引物組3和探針3的組合、引物組4和探針4的組合、引物組5和探針5的組合、引物組6和探針6的組合、引物組7和探針7的組合、引物組8和探針8的組合、引物組9和探針9的組合、引物組10和探針10的組合、引物組11和探針11的組合、引物組12和探針12的組合、引物組13和探針13的組合、引物組14和探針14的組合、引物組15和探針15的組合、引物組16和探針16的組合、引物組17和探針17的組合、引物組18和探針18的組合、引物組19和探針19的組合、引物組20和探針20的組合、引物組21和探針21的組合、引物組22和探針22的組合及引物組23和探針23的組合，以及任選引物組24和探針24的組合。8.—種通過使用權(quán)利要求3-7中任一項(xiàng)的試劑盒以型特異性方式檢測樣品中HPV存在與否的方法，所述方法包括使用前述引物組和從樣品中提取的DNA作為模板進(jìn)行PCR的步驟，以及檢測擴(kuò)增DNA產(chǎn)物的步驟。9.一種通過使用權(quán)利要求3-7中任一項(xiàng)的試劑盒以型特異性方式檢測樣品中HPV存在與否的方法，所述方法包括使用前述引物組和從樣品中提取的DNA作為模板進(jìn)行PCR的步驟，處理擴(kuò)增DNA產(chǎn)物以具有單鏈的步驟，以及使單鏈DNA與前述探針雜交后進(jìn)行檢測的步馬聚ο10.一種用于檢測HPV的DNA微陣列，其中將至少一種選自權(quán)利要求2中所記載的探針123的探針固定化。11.權(quán)利要求10的DNA微陣列，其中將兩種或更多種選自權(quán)利要求2中所記載的探針123的探針固定化。12.權(quán)利要求10或11的DNA微陣列，其中將探針24固定化。全文摘要本發(fā)明的目的是以高特異性和高靈敏度檢測兩種或更多種HPV類型。本發(fā)明提供引物組1～23(各引物組如說明書中所記載)，探針1～23(各探針如說明書中所記載)，以及包含所述引物組和所述探針的試劑盒，它們所有都用于HPV的型特異性檢測。文檔編號(hào)C12Q1/68GK101918550SQ20088010965公開日2010年12月15日申請日期2008年8月1日優(yōu)先權(quán)日2007年8月3日發(fā)明者宮川功,小鄉(xiāng)和彥,尾川直樹,川上明子,森下篤申請人:倉敷紡績株式會(huì)社