專利名稱：：在斷奶時的過敏反應(yīng)的預(yù)防的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明涉及營養(yǎng)組合物及該組合物在降低斷奶過程中發(fā)生過敏反應(yīng)和特應(yīng)性疾病的風(fēng)險中的應(yīng)用。
背景技術(shù)：
：食物過敏反應(yīng)(其中生命中首先發(fā)生的是牛奶過敏反應(yīng))在大多數(shù)情況下由對食物中蛋白的反應(yīng)而引起。在生命早期，免疫系統(tǒng)仍在發(fā)育中，可能不能對食物性抗原產(chǎn)生耐受(這也可被描述為口服耐受的誘導(dǎo)不足)。其結(jié)果是嬰兒或兒童或幼小動物對食物蛋白產(chǎn)生過度的免疫應(yīng)答并對其產(chǎn)生過敏反應(yīng)。食物過敏反應(yīng)不僅會影響人類還會影響其他哺乳動物如狗和貓。通常，食物超敏反應(yīng)僅在易感的嬰兒、兒童或幼小動物初次遇到含有潛在變應(yīng)原的新食物后產(chǎn)生。除其母乳之外，至少人類嬰兒一般最早遇到的食物蛋白是牛奶蛋白，并且如上所述，牛奶過敏反應(yīng)是人類嬰兒中最常見的食物過敏反應(yīng)。一般認(rèn)為，有確立的牛奶過敏反應(yīng)的嬰兒對其它食物蛋白如雞蛋和谷物蛋白產(chǎn)生過敏反應(yīng)的風(fēng)險增加。這些過敏反應(yīng)臨床上會表現(xiàn)為特應(yīng)性疾病如特應(yīng)性皮炎、濕疹和哮喘。即使是那些對牛奶蛋白成功產(chǎn)生口服耐受的嬰兒，當(dāng)斷奶時飲食中引入其它食物蛋白如雞蛋和谷物蛋白時，也可能隨后對其發(fā)生過敏反應(yīng)。從飲食的觀點(diǎn)來看，治療確立的過敏反應(yīng)只有兩種方法——必須全部避免含變應(yīng)原的食物，或者必須處理食物例如通過廣泛水解以降低其變應(yīng)原潛能。為后者目的生產(chǎn)了含有廣泛水解的牛奶蛋白(所含的肽由不多于5個氨基酸構(gòu)成)的嬰兒配方。相似地，例如在美國專利US6403142中，已計劃為懷疑產(chǎn)生食物過敏反應(yīng)的伴侶動物制備具有減低的變應(yīng)原性的寵物食品。然而，由于在避免式飲食(avoidancediets)的情況下可用的食材非常有限，而在使用廣泛水解產(chǎn)物的情況下口味差，排除式飲食(exclusiondiets)具有順應(yīng)性低的缺點(diǎn)。另外，總是存在仍然遇到完整變應(yīng)原的危險。因此，特別是對被認(rèn)為有過敏反應(yīng)風(fēng)險的兒童(即，具有至少一個患有過敏反應(yīng)的近親的兒童)而言，設(shè)計了有助于降低產(chǎn)生最初過敏反應(yīng)風(fēng)險的產(chǎn)品。這種產(chǎn)品的實例之一是基于部分水解的乳清蛋白的嬰兒配方，所述乳清蛋白的商標(biāo)是NANHAl和NANHA2。這些產(chǎn)品被證明能積極誘導(dǎo)對牛奶蛋白的口服耐受。Fritsch6等(J.AllergyClin.Immunol，第100卷，第2期，第266-273頁，1997)用動物模型顯示具有18%水解度的牛奶蛋白的酶水解物能夠誘導(dǎo)對完整牛奶蛋白的口服耐受，而具有28%水解度的水解物則不能。這些實驗的結(jié)果顯示，用這種適度水解的牛奶配方對大鼠進(jìn)行的預(yù)防性給食抑制了特異性IgE和腸肥大細(xì)胞的介質(zhì)釋放(均為直接型過敏反應(yīng)的參數(shù))，與標(biāo)準(zhǔn)配方相比上述配方的變應(yīng)原性被降低超過100倍。這項工作證明，對牛奶蛋白而言，限定酶水解度由此保持肽類誘導(dǎo)口服耐受的能力同時顯著降低其變應(yīng)原性是可能的。在人奶中發(fā)現(xiàn)的生物活性肽一轉(zhuǎn)化生長因子β，已被證實為特應(yīng)性疾病的潛在調(diào)節(jié)劑。整合分析(metaanalysis)為人奶中TGF-β的總體過敏反應(yīng)預(yù)防效果提供了證據(jù)(Gdalevich，2001)。根據(jù)Kalliomaki等(JAllergyClin.Immunol.1999年12月；104(6)1251-7)，初乳中的TGF-β能夠在僅母乳喂養(yǎng)期預(yù)防特應(yīng)性疾病的發(fā)生并促進(jìn)人類個體中特異性IgA產(chǎn)生。相似地，Oddy等報道了在相當(dāng)長時期內(nèi)母乳喂養(yǎng)并因此與較短時期母乳喂養(yǎng)的兒童相比接收到的TGF-β的總量高的兒童中，喘鳴(指示發(fā)生呼吸器官過敏反應(yīng))的發(fā)病率降低(Oddy等，JAllergyClinImmunol)。近來，在大鼠模型中顯示向牛奶配方WATGF-P降低了對牛奶的變應(yīng)性致敏(Pentilla等，PediatrResearch2006)。幼小哺乳動物僅靠奶喂養(yǎng)的時期是相對短的范圍，例如，從對大鼠和小鼠而言幾周，到對人類嬰兒而言四至六個月。在這段時期后，其它含有不同食物蛋白的食材逐漸地被引入飲食中，在通常被稱為斷奶的階段，對用來提供所有生長發(fā)育必需營養(yǎng)素的奶的依賴被相應(yīng)地降低。一般而言，幼小哺乳動物遇到的第二食物蛋白是谷物蛋白，其在斷奶開始即被引入，對人類嬰兒而言通常以嬰兒谷物的形式引入。即使奶蛋白已被成功地引入，谷物蛋白當(dāng)最初被引入幼小哺乳動物飲食中時也可能引起過敏反應(yīng)。此后，幼小哺乳動物將快速連續(xù)地遇到其它食物蛋白包括雞蛋、花生、魚和肉，每次都有導(dǎo)致過敏反應(yīng)的風(fēng)險。然而，與奶蛋白相比，對其它食物蛋白如谷物和雞蛋蛋白的過敏反應(yīng)的初級預(yù)防或通過飲食干預(yù)預(yù)防對其它抗原如花粉的過敏反應(yīng)發(fā)生的可能性相對幾乎沒有引起關(guān)注。事實上，考慮到對牛奶蛋白的過敏反應(yīng)通常在二至五歲間自發(fā)消失而對例如谷物和雞蛋蛋白的過敏反應(yīng)一般較慢消失甚至可能持續(xù)終生，其可能是更值得關(guān)切的事。因此，特別是在有過敏反應(yīng)發(fā)生風(fēng)險的嬰兒中，有需要通過降低對除了奶蛋白的食物蛋白發(fā)生過敏反應(yīng)的風(fēng)險以促進(jìn)所述蛋白在斷奶幼小哺乳動物飲食中的引入，以及有需要降低隨后的特應(yīng)性疾病的發(fā)生，無論其是否由食物性抗原引起。發(fā)明概述本發(fā)明人驚奇地發(fā)現(xiàn)，當(dāng)被引入在斷奶的幼小哺乳動物飲食中時，使用部分水解的奶蛋白和TGF-β的組合有助于誘導(dǎo)對其它食物蛋白如谷物和雞蛋蛋白的耐受，同時保持先前確立的對牛奶蛋白的耐受。因此，在第一方面，本發(fā)明提供了營養(yǎng)組合物，其包含水解度在15至25%的部分水解的奶蛋白和就每IOOml即用組合物而言的50至1000毫微克的TGF-β。本發(fā)明還涉及對在斷奶的幼小哺乳動物對新引入的食物蛋白的過敏反應(yīng)的初級預(yù)防的方法，其包括對斷奶期幼小哺乳動物給食治療量的包含水解度15至25%的部分水解的奶蛋白和TGF-β的組合物。本發(fā)明進(jìn)一步涉及在斷奶的幼小哺乳動物中特應(yīng)性疾病的初級預(yù)防的方法，其包括對斷奶期幼小哺乳動物給食治療量的包含水解度15至25%的部分水解的奶蛋白和TGF-β的組合物。特應(yīng)性疾病如特應(yīng)性濕疹、過敏性鼻炎和哮喘可能是對食物蛋白的過敏反應(yīng)或?qū)ζ渌愋涂乖缈諝鈧鞑バ涂乖倪^敏反應(yīng)的臨床表現(xiàn)。例如，哮喘的流行在近幾十年里顯著增加，極可能是環(huán)境因素(如病原體、變應(yīng)原、空氣污染及飲食)改變的結(jié)果。已證明，空氣傳播型抗原能有效地通過奶由母親轉(zhuǎn)移給嬰兒，以及耐受誘導(dǎo)不需要免疫球蛋白的轉(zhuǎn)移。母乳喂養(yǎng)誘導(dǎo)的耐受依賴于哺乳期間TGF-β的存在，由CD4+T淋巴細(xì)胞介導(dǎo)并依賴于T細(xì)胞中的TGF-β信號傳導(dǎo)?？傊?，母乳介導(dǎo)的空氣傳播型抗原向嬰兒的轉(zhuǎn)移使口服耐受被誘導(dǎo)，導(dǎo)致抗原-特異性保護(hù)以免發(fā)生過敏性氣道疾病。不希望受理論的約束，發(fā)明人相信，對空氣傳播型抗原的耐受誘導(dǎo)不需要免疫球蛋白的轉(zhuǎn)移但是卻依賴于母乳中TGF-β的作用，這一令人驚奇的發(fā)現(xiàn)導(dǎo)致實現(xiàn)了通過基于部分水解的奶蛋白與TGF-β聯(lián)合的營養(yǎng)干預(yù)以降低對食物蛋白的過敏反應(yīng)和特應(yīng)性疾病發(fā)生的風(fēng)險的可能性。換句話說，在斷奶期間施用部分水解的奶蛋白和TGF-β的組合在當(dāng)嬰兒初次遇到其它食物蛋白如雞蛋蛋白和谷物蛋白時有助于降低對新蛋白的致敏風(fēng)險及隨之對這些蛋白發(fā)生的過敏反應(yīng)，以及降低特應(yīng)性疾病發(fā)生的風(fēng)險。發(fā)明詳述在本說明書中，下列術(shù)語具有下列含義“特應(yīng)性疾病”表示變應(yīng)性致敏的臨床表現(xiàn)，并包括特應(yīng)性皮炎、特應(yīng)性濕疹、變應(yīng)性鼻炎和哮喘；蛋白的“水解度”或“DH”表示完整蛋白在水解時被裂解的肽鍵數(shù)除以完整蛋白中的肽鍵數(shù)，以百分比表達(dá)；“嬰兒”表示年齡小于12個月的兒童；“成長配方(follow-onformula)”表示預(yù)期用于年齡在4個月以上的嬰兒、并在所述嬰兒逐漸變化的飲食中構(gòu)成主要液體成分的組合物；“口服耐受”表示對經(jīng)口服途徑遞送的抗原有免疫低反應(yīng)性的活性狀態(tài)；“對食物蛋白過敏反應(yīng)的初級預(yù)防”表示防止建立該過敏反應(yīng)，并包括降低該過敏反應(yīng)的風(fēng)險；"TGF-β”或“轉(zhuǎn)化生長因子β”是指一組至少5種不同但密切相關(guān)的生物活性肽，其稱為TGF-β1、TGF-β2等，尤其在人奶中被發(fā)現(xiàn)(TGF-β1和TGF-β2)(Li等，免疫iSg^^mH因ill(TransformingGrowthFactor-βRegulationofImmuneResponses),Annu.Rev.Immunol.200624:99_146)；“斷奶”表示在幼小哺乳動物的飲食中引入食物而非其母乳或基于奶的替代品如嬰兒配方；“斷奶期”表示在幼小哺乳動物生命中的一個時期，以食物而非其母乳或基于奶的替代品的引入為開始，以停止母乳喂養(yǎng)或嬰兒配方或成長配方的施用為終止。除非另有說明，所有提及的百分比都是重量百分比。本發(fā)明提供了營養(yǎng)組合物，其包含水解度15至25%的部分水解的奶蛋白和就每IOOrnl即用組合物而言的50至1000毫微克的TGF-β。奶蛋白可以是乳清蛋白、酪蛋白或其混合物，但優(yōu)選乳清蛋白。如果使用乳清蛋白，優(yōu)選水解度在15至19%。優(yōu)選地，部分水解的奶蛋白具有至少低于完整乳清蛋白100倍的殘留抗原性。部分水解的奶蛋白的殘留變應(yīng)原性可通過由Fritsch6等(Int.Arch.AllerandApplImm,93，289-293，1990)描述的技術(shù)來測量。按照EU導(dǎo)則96/4/EC的規(guī)定，所述部分水解的奶蛋白及含有其的產(chǎn)品可以被描述為低變應(yīng)原的。本發(fā)明的組合物可以被用于斷奶的幼小哺乳動物包括人類嬰兒、幼兒以及幼小的伴侶動物如狗和貓。優(yōu)選地，本發(fā)明的營養(yǎng)組合物是嬰兒配方、更優(yōu)選用于年齡在4個月以上嬰兒的成長配方。奶蛋白可以以本領(lǐng)域已知的任何適合方式水解。在乳清蛋白的情況下，合適的方法被描述于歐洲專利EP322，589，其內(nèi)容在此引入作為參考。經(jīng)發(fā)現(xiàn)，如果用作起始材料的乳清片段基本上無乳糖，則蛋白在水解和其后的加熱過程中受到較少的賴氨酸的阻礙。這使得賴氨酸阻礙的范圍從約15%重量的總賴氨酸降低到小于約10%重量的賴氨酸；例如約7%重量的賴氨酸阻礙，這極大地改善了蛋白源的營養(yǎng)質(zhì)量。乳清蛋白的源可以是酸乳清、甜乳清、乳清蛋白分離物或其混合物。然而，優(yōu)選地，蛋白源是基于乳清蛋白分離物或改良的甜乳清。甜乳清是乳酪生產(chǎn)中容易獲得的副產(chǎn)品并常用于生產(chǎn)基于牛奶的嬰兒配方。然而，甜乳清包含稱為酪蛋白糖巨肽(CGMP)的成分，其不期望地富含蘇氨酸而少含色氨酸。從甜乳清中去除CGMP以產(chǎn)生具有更接近于人奶蘇氨酸含量的蛋白片段。從甜乳清中去除CGMP的過程被描述于EP880902。如果用改良的甜乳清或乳清蛋白分離物作為蛋白源，優(yōu)選用游離組氨酸以0.1至3%重量的蛋白的量加以補(bǔ)充。本發(fā)明的嬰兒配方可包含就每IOOml即用配方而言的1.0至2.0克部分水解的乳清蛋白，更優(yōu)選1.5至1.9g/100ml。本發(fā)明的成長配方含有就每IOOml即用配方而言的50至1000毫微克的TGF-β，更優(yōu)選50至500毫微克/100ml，最優(yōu)選200至300毫微克/100ml。優(yōu)選地，本發(fā)明的成長配方含有TGF-β1和TGF-i32，更優(yōu)選以15至150的比例存在。TGF-β可以以富含生物活性肽如來自于ArmorProt6ines(法國)的TM0301或XP-828L的乳清蛋白片段的形式，或以例如如EP313515或W092/00994中所述的從奶中分離的多肽生長因子的形式加入配方中?；蛘撸绻麅?yōu)選可以用重組TGF-β。本發(fā)明的成長配方可含有碳水化合物源。盡管優(yōu)選的碳水化合物源是乳糖，可以使用任何常規(guī)存在于嬰兒配方中的碳水化合物源如乳糖、蔗糖、麥芽糖糊精、淀粉及其混合物。優(yōu)選地，碳水化合物源貢獻(xiàn)配方總能量的35至65%。本發(fā)明的成長配方可含有脂類源。脂類源可以是任何適合用于嬰兒配方的脂質(zhì)或脂肪。優(yōu)選的脂肪源包括棕櫚三油酸甘油酯、高油酸葵花籽油和高油酸紅花油。也可加入必需脂肪酸亞油酸和α-亞麻酸，也可加入少量含有大量的預(yù)先形成的花生四烯酸和二十二碳六烯酸的油，如魚油或微生物油。總之，脂肪含量優(yōu)選地例如貢獻(xiàn)配方總能量的30至55%。優(yōu)選地，脂肪源中η-6至η-3脂肪酸的比例是約51至約151；例如約81至約101。所述成長配方還可以以營養(yǎng)學(xué)上有意義的量含有所有被認(rèn)為在日常飲食中必要的維生素和礦物質(zhì)。對一些維生素和礦物質(zhì)而言已建立最小需求量。礦物質(zhì)、維生素和其它任選地存在于嬰兒配方中的營養(yǎng)素的實例包括維生素Α、維生素Bi、維生素Β2、維生素Β6、維生素Β12、維生素Ε、維生素K、維生素C、維生素D、葉酸、肌醇、煙酸、生物素、泛酸、膽堿、鈣、磷、碘、鐵、鎂、銅、鋅、錳、氯化物、鉀、鈉、硒、鉻、鉬、?；撬岷蚅-肉堿。礦物質(zhì)通常以鹽的形式加入。特定礦物質(zhì)和其它維生素的存在及用量的變化取決于目標(biāo)嬰兒群。如果有必要，配方可含有乳化劑和穩(wěn)定劑如大豆卵磷脂、單和雙甘油酯的檸檬酸酯等。配方任選地含有可具有有益影響的其它物質(zhì)如乳鐵蛋白、核苷酸、核苷等。最后，配方可含有不能消化的寡糖如半乳寡糖(galacto-oligosaccharides)，例如含量是0.3至7%。配方可以以任何合適的方式制備。例如，可通過以適當(dāng)?shù)谋壤旌喜糠炙獾哪痰鞍?、碳水化合物源以及脂肪源而制備。如果使用乳化劑，則可在此時加入。TGF-β也可在此時加入。維生素和礦物質(zhì)可在此時加入但通常稍后加入以避免熱降解。任何親脂性維生素、乳化劑等可在攪拌前溶解于脂肪源中。然后可將水、優(yōu)選已進(jìn)行反滲透的水加入混合以形成液體混合物。水的適宜溫度為約50°C至約80°C以利于成分的分散?？墒褂蒙藤徔傻玫囊夯饕孕纬梢后w混合物。然后將液體混合物(例如分兩個階段)均化。然后可將液體混合物熱處理以降低細(xì)菌載量，例如通過快速加熱液體混合物至約80°C至約150°C的溫度范圍約5秒至約5分鐘來進(jìn)行。這可通過注蒸汽、高壓釜或通過熱交換器進(jìn)行；例如板式熱交換器。然后，可將液體混合物冷卻至約60°C至約85°C；例如通過瞬時冷卻法進(jìn)行。然后可將液體混合物再次均化，例如分兩個階段，第一階段約IOMPa至約30MPa，第二階段約2MPa至約lOMPa。然后可將均化的混合物進(jìn)一步冷卻以加入任何熱敏感成分，如維生素和礦物質(zhì)。此時適宜地調(diào)節(jié)均化混合物的pH和固體成分。將均化的混合物轉(zhuǎn)移至合適的干燥裝置如噴霧干燥器或冷凍干燥器并轉(zhuǎn)化成粉末。該粉末的含水量應(yīng)小于約5%重量。TGF-β如果未在之前加入則可在此時通過干燥混合加入。如果優(yōu)選是液體產(chǎn)品，則可將均化的混合物滅菌并無菌填裝于合適的容器中。實施例1下列給出本發(fā)明的成長配方組合物的實施例。該組合物僅為說明意圖而給出。<table>tableseeoriginaldocumentpage7</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage8</column></row><table>權(quán)利要求營養(yǎng)組合物，其包含水解度15至25％的部分水解的奶蛋白和就每100ml即用組合物而言的50至1000毫微克的TGF-β。2.根據(jù)權(quán)利要求1的組合物，其為成長配方。3.根據(jù)權(quán)利要求1或2的組合物，其中所述部分水解的奶蛋白具有至少低于完整蛋白100倍的殘留抗原性。4.根據(jù)前述權(quán)利要求中任意一項的組合物，其中所述部分水解的奶蛋白是乳清蛋白。5.根據(jù)權(quán)利要求5的組合物，其中所述部分水解乳清蛋白的水解度是15至19%。6.根據(jù)權(quán)利要求4或5的組合物，其包含就每IOOml即用組合物而言的1.0至2.0克部分水解的乳清蛋白。7.根據(jù)權(quán)利要求4至6中任意一項的組合物，其包含就每IOOml即用組合物而言的1.2至1.9克部分水解的乳清蛋白。8.根據(jù)前述權(quán)利要求中任意一項的組合物，其包含就每IOOml即用組合物而言的200至300毫微克的TGF-β。9.根據(jù)前述權(quán)利要求中任意一項的組合物，其中所述TGF-β是TGF-β1和TGF-β2的混合物。10.根據(jù)權(quán)利要求9的組合物，其中TGF-β1與TGF-β2的比例是15至150。11.對在斷奶的幼小哺乳動物對新引入的食物蛋白的過敏反應(yīng)的初級預(yù)防方法，包括在斷奶期以治療量的根據(jù)權(quán)利要求1至10中任意一項的組合物喂養(yǎng)幼小哺乳動物。12.對在斷奶的幼小哺乳動物中特應(yīng)性疾病的初級預(yù)防方法，包括在斷奶期以治療量的根據(jù)權(quán)利要求1至10中任意一項的組合物喂養(yǎng)幼小哺乳動物。13.根據(jù)權(quán)利要求11或12的方法，其中幼小哺乳動物是人類嬰兒。14.根據(jù)權(quán)利要求13的方法，其中人類嬰兒的年齡在4個月以上。全文摘要本發(fā)明涉及營養(yǎng)組合物，其包含水解度15至25％的部分水解的奶蛋白和就每100ml即用組合物而言的50至1000毫微克的TGF-β，以及用于初級預(yù)防在斷奶的幼小哺乳動物對新引入的食物蛋白的過敏反應(yīng)的方法和預(yù)防在斷奶的幼小哺乳動物發(fā)生特應(yīng)性疾病的方法，其包括以治療量的所公開組合物喂養(yǎng)幼小哺乳動物。文檔編號A23L1/305GK101808532SQ200880108700公開日2010年8月18日申請日期2008年9月19日優(yōu)先權(quán)日2007年9月26日發(fā)明者A·梅賽尼爾,A·齊歇爾,M·C·菲紹申請人:雀巢產(chǎn)品技術(shù)援助有限公司