專利名稱：一種快速提取小鼠組織dna的方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于分子生物學(xué)技術(shù)領(lǐng)域，涉及一種模板DNA的制備方法，更 具體的說是一種新型的用于快速簡易地提取小鼠組織DNA的方法。
背景技術(shù)：
分子生物學(xué)技術(shù)已經(jīng)滲透到生物學(xué)、醫(yī)學(xué)、植物學(xué)、遺傳學(xué)和動物學(xué) 等各個方面。由于生命科學(xué)的研究領(lǐng)域越來越認(rèn)可和依賴動物體內(nèi)實驗結(jié) 果，因而到目前為止，研究人員構(gòu)建了各種轉(zhuǎn)基因和敲基因小鼠，并在此 基礎(chǔ)上開展了系列人類疾病的動物模型的研究，這是生命科學(xué)研究領(lǐng)域不 可或缺的重要部分。對轉(zhuǎn)基因和敲基因小鼠基因型的鑒定是這一領(lǐng)域的關(guān) 鍵技術(shù)之一，而其中小鼠組織DNA的提取是該關(guān)鍵技術(shù)的關(guān)鍵步驟。DNA提取的質(zhì)量和產(chǎn)量是直接影響PCR擴(kuò)增的關(guān)鍵步驟，自1985年 PCR技術(shù)問世以來，這一技術(shù)己被應(yīng)用到生命科學(xué)的各信息領(lǐng)域，因其敏 感性高、特異性強(qiáng)、操作簡便、所需時間短等優(yōu)點(diǎn)己被廣泛用于多種檢測 領(lǐng)域。PCR檢測技術(shù)的第一步就是模板DNA的制備，即樣品中DNA的提 取，這直接影響著PCR反應(yīng)的結(jié)果。長期以來，樣品中DNA的提取和純 化一直是耗時、繁瑣的過程，嚴(yán)重減慢了檢測速度。因此，許多學(xué)者一直 在探索各種樣品DNA的快速提取方法。目前，提取DNA的方法主要有傳統(tǒng)法、贅合樹脂法、玻璃粉法、磁 珠法、免疫親和法等。市場所售試劑盒及各實驗室所用小鼠組織DNA提 取的方法通常使用蛋白酶K (PK)消化小鼠組織，利用氯仿等有機(jī)溶劑萃 取，而后用酒精沉淀和洗滌DNA。這些方法存在缺點(diǎn)是由于使用蛋白酶 K而費(fèi)用高，使用氯仿而毒性大，并且整個實驗流程耗時長，需要數(shù)小時或過夜；另外流程繁瑣，同時樣品需要用4 5個Eppendorf管，容易造成 混淆和污染；操作復(fù)雜，方法不易掌握及推廣，而且操作過程中使用了大 量有機(jī)溶劑，有損實驗人員健康。發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明的目的在于提供一種可大規(guī)模、快速提取小鼠組織DNA的方 法，用于PCR技術(shù)來鑒定小鼠基因型。本實用新型的目的通過以下技術(shù)方案來實現(xiàn) 一種快速提取小鼠組織DNA的方法，包括以下步驟(1) 剪取小鼠尾巴末端或小鼠足趾置入Eppendorf管內(nèi)；(2) 向Eppendorf管管內(nèi)加入50微升~200微升、20mM-200 mM的 氫氧化鈉溶液，并將Eppendorf管置入PCR儀器內(nèi)，加熱至90。C 10(TC并 持續(xù)加熱0.5 1.5小時；(3) 取出Eppendorf管，加入10微升、酸性的1M三羥甲基氨基甲 烷溶液；(4) 劇烈震蕩Eppendorf管，至小鼠尾巴末端或足趾組織完全溶解；(5) 再將Eppendorf管置入PCR儀器內(nèi)，離心分離5分鐘，轉(zhuǎn)速范 圍為5000rpm 15000rpm;(6) 收集上清液，取1微升的上清液加入基因型的鑒定PCR反應(yīng)體系。進(jìn)一步地，所述三羥甲基氨基甲垸溶液的PH值為4.5。 本發(fā)明的有益效果主要體現(xiàn)在該方法簡易、快速、經(jīng)濟(jì)和高效，規(guī) ?；瘡男∈笪舶椭刑崛』蚪MDNA。1) 該方法制備的小鼠組織DNA用于PCR鑒定基因型與市售試劑盒 制備DNA后的鑒定結(jié)果比較，同樣穩(wěn)定和質(zhì)量佳，但是本發(fā)明價格極為 便宜，性價比極高；該方法使用試劑極為簡易和經(jīng)濟(jì)；2) 操作步驟簡單，實驗耗時極短，約1.5小時，且制備的每一個樣品作為PCR模板可用于50-100個PCR反應(yīng)；3)可同時制備大量小鼠組織DNA，適用于大規(guī)模的小鼠基因型篩查。
具體實施方式
下面結(jié)合實施例，對本發(fā)明作進(jìn)一步詳細(xì)說明在優(yōu)選實施例中， 一種快速提取小鼠組織DNA的方法，包括以下步驟(1) 剪取小鼠尾巴末端或小鼠足趾置入Eppendorf管內(nèi)；(2) 向Eppendorf管管內(nèi)加入100微升、100 mM的NaOH溶液，并 將Eppendorf管置入PCR儀器內(nèi)，加熱至95。C并持續(xù)加熱1小時；(3) 取出Eppendorf管，加入10微升、PH值為4.5的lMTrometamol (三羥甲基氨基甲烷)；(4) 劇烈震蕩Eppendorf管，至小鼠尾巴末端或小鼠足趾組織完全溶解；(5) 再將Eppendorf管置入PCR儀器內(nèi)，離心分離5分鐘，速度為 畫00rpm;(6) 收集上清液，取1微升左右的上清液加入基因型的鑒定PCR反 應(yīng)體系即可。由于本法所用試劑最佳為100 mM的NaOH和1M的Trometamol (調(diào) 節(jié)pH至4.5),而PH值的調(diào)節(jié)只需加入酸性溶液即可，極為簡易和經(jīng)濟(jì)， 因此易于推廣。采用本法和常規(guī)蛋白酶K (PK)法，分別從7個小鼠尾巴提取組織 DNA，而后采用相同的PCR方法，均可獲得理想的目的DNA產(chǎn)物條 帶。
權(quán)利要求
1.一種快速提取小鼠組織DNA的方法，其特征在于包括以下步驟(1)剪取小鼠尾巴末端或小鼠足趾置入試管內(nèi)；(2)向試管管內(nèi)加入50微升～200微升、20mM-200mM的氫氧化鈉溶液，并將試管置入PCR儀器內(nèi)，加熱至90℃～100℃并持續(xù)加熱0.5～1.5小時；(3)取出試管，加入10微升、酸性的1M三羥甲基氨基甲烷溶液；(4)劇烈震蕩試管，至小鼠尾巴末端或小鼠足趾組織完全溶解；(5)再將試管置入PCR儀器內(nèi)，離心分離5分鐘，轉(zhuǎn)速范圍為5000rpm～15000rpm；(6)收集上清液，取1微升的上清液加入基因型的鑒定PCR反應(yīng)體系。
2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的快速提取小鼠組織DNA的方法，其特征在 于所述試管為Eppendorf管。
3. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的快速提取小鼠組織DNA的方法，其特征在 于所述三羥甲基氨基甲烷溶液的PH值為4.5。
4. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的快速提取小鼠組織DNA的方法，其特征在 于所述步驟(2)中向試管管內(nèi)加入100微升、lOOmM的氫氧化鈉溶液， 并將試管置入PCR儀器內(nèi)，加熱至95'C并持續(xù)加熱1小時。
5. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的快速提取小鼠組織DNA的方法，其特征在 于所述步驟(5)中將試管置入PCR儀器內(nèi)，離心分離5分鐘，轉(zhuǎn)速為 10000rpm。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種小鼠組織DNA的快速提取方法，僅采用氫氧化鈉溶液和三羥甲基氨基甲烷溶液作為試劑，極為簡易和經(jīng)濟(jì)。本發(fā)明采用的DNA提取方法，1.5小時就可以完成樣品DNA提取的全過程，所提取的DNA質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)滿足了后續(xù)PCR擴(kuò)增的要求，更適合于生產(chǎn)、科研過程中快速提取樣品DNA的目的。
文檔編號C12N15/10GK101407808SQ20081023430
公開日2009年4月15日 申請日期2008年11月11日 優(yōu)先權(quán)日2008年11月11日
發(fā)明者居頌光, 錢鳴宇, 勤 顧 申請人:蘇州工業(yè)園區(qū)普天生物科技有限公司