專利名稱：一種增強蔬菜作物耐鹽性的方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及土壤微生物技術(shù)領(lǐng)域，特別是涉及由分離、篩選到的具有1-氨
基環(huán)丙烷1-羧酸(ACC)脫氨酶活性的菌株及有較好耐鹽性的蔬菜品種，通過 構(gòu)建"植物-微生物"的聯(lián)合途徑，以實現(xiàn)緩解海涂土壤鹽分對蔬菜作物損害作 用的方法。
背景技術(shù)：
農(nóng)業(yè)是人類賴以生存的第一產(chǎn)業(yè)。隨著人口的增長，對農(nóng)業(yè)的需求也越來 越大，而土壤的鹽漬化限制了農(nóng)業(yè)的發(fā)展，成為一個世界性的資源和生態(tài)問題。 據(jù)統(tǒng)計，全世界20%的耕地和近半數(shù)的灌溉土地都受到不同程度的鹽脅迫。就我 國而言，全國有超過lX109hm2各種鹽漬土地，其中現(xiàn)代鹽漬土約O. 373X 109hm2， 殘余鹽漬土約0.446X109 hm2，其它潛在鹽漬土約O. 173X 109 hm2。在灌溉區(qū)， 土壤鹽漬化面積正以每年105 hm2的速度發(fā)展。浙江沿海一帶的濱海鹽土便是典 型的鹽漬土。鹽土的改良利用是解決面臨的人口、糧食、資源和環(huán)境等問題的 重要措施。
鹽脅迫會影響植物形態(tài)發(fā)育，降低植物光合作用，促使植物細胞脫水，破 壞膜結(jié)構(gòu)，影響植物體內(nèi)代謝，改變植物脂類及蛋白質(zhì)成分，進而影響植物的 生長。為提高植物的耐鹽性，傳統(tǒng)手段主要集中開溝躲鹽、挖溝排水洗鹽、筑 堤種植等，但隨著淡水資源的嚴重不足，迫使人們考慮利用植物改良利用鹽土。 隨著生物技術(shù)的發(fā)展，通過生物途徑使植物充分適應鹽漬環(huán)境，以提高植物在 鹽漬土壤上的生產(chǎn)力，是國內(nèi)外近年來提高鹽漬土生產(chǎn)力的新方向，如通過分 子育種或種子處理以提高植物的耐鹽性。植物根際微生物種類繁多而且活躍，構(gòu)成特有的根際土壤微生物區(qū)系是提 高植物對不良土壤環(huán)境抗性的有效手段之一。其中，植物促生根際菌(PGPR) 是一類可以通過合成某種化合物(如生長激素)供植物利用，或促進植物對營養(yǎng) 物質(zhì)的吸收，或通過對病原微生物的生物防治，減輕或抑制了有害的根圍微生 物，從而間接促進植物生長的有益微生物，其應用十分廣泛。在目前的研究報
道中，Shimon. Mayak等發(fā)現(xiàn)無色桿菌屬Uc力ro邁o/ acz^r /^'ecAgi/力7)在鹽脅迫
下能句多促進番燕的生長(Plant growth-promoting bacteria confer resistance in
tomato plants to salt stress, Plant Physiology and Biochemistry, 2004， 42:565-572);
在固氮螺菌屬C^osp眾i"膽7j》o/er柳)的研究中，Bacilio. M等發(fā)現(xiàn)在鹽脅
迫下該菌屬能夠定植于小麥根部并促進小麥的生長(Mitigation of salt stress in wheat seedling by a gfp-tagged Azospirillum lipoferum， Biological Fertilization and Soils, 2004， 40:188-193)。種種研究表明，通過構(gòu)建合適的根際微生物有利于緩
解植物受到鹽脅迫的損害。但至今尚未見有利用假單胞菌與植物構(gòu)建"植物-微
生物"系統(tǒng)，從而改善蔬菜作物在濱海鹽漬地生長狀況的報導。
本發(fā)明通過利用具有l(wèi)-氨基環(huán)丙烷l-羧酸(ACC)脫氨酶活性的根際微生物
定植于蔬菜作物根際，降低植物體內(nèi)乙烯含量，從而緩解鹽脅迫對植物體的損
害，提高植物的耐鹽性。同時與傳統(tǒng)植物耐鹽品種的篩選相結(jié)合，構(gòu)建"植物-
微生物"系統(tǒng)，緩解蔬菜作物受涂地鹽分的影響，改善植物在海涂地上的生長
狀況，優(yōu)化蔬菜作物在海涂土壤上的生長狀況，以提高植物在海涂上的生產(chǎn)力。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明目的是，針對海涂地鹽分對植物造成的鹽脅迫損害，提供一種能增 強蔬菜作物耐鹽性，改善蔬菜作物在濱海鹽漬地生長狀況的方法。
本發(fā)明的基本原理是通過對微生物活性細菌與蔬菜品種的篩選，分別得
4到具有高1-氨基環(huán)丙烷1-羧酸脫氨酶活性的微生物活性菌株與耐鹽性較強的蔬 菜品種；然后將蔬菜品種種子在微生物活性細菌菌液中浸泡、包衣，構(gòu)成特有
的根際土壤微生物區(qū)系；最后將該種子在高鹽分的海涂上進行種植，通過利用 微生物產(chǎn)生ACC脫氨酶催化乙烯的前體ACC，從而影響植物生長時的乙烯水 平，以獲得較高的產(chǎn)量與品質(zhì)。
本發(fā)明目的通過如下技術(shù)方案來實現(xiàn)
一種具有1-氨基環(huán)丙烷l-羧酸脫氨酶活性細菌的篩選及鑒定
a、 菌種的富集培養(yǎng)將從浙江上虞海涂采集的土樣懸浮亍PAF培養(yǎng)基中， 于28-35。C搖床200r "min—i振蕩培養(yǎng)24h，取其懸浮液轉(zhuǎn)接至DF培養(yǎng)基屮，在 同樣工藝條件下培養(yǎng)24h，即得到富集培養(yǎng)液；
b、 培養(yǎng)基配制及其菌種分離純化取步驟a富集培養(yǎng)液轉(zhuǎn)接于以1-氨基環(huán) 丙垸1-羧酸為唯一氮源的DFa培養(yǎng)基中，在同樣工藝條件下培養(yǎng)24-48h至菌對 數(shù)期；取菌懸液在分離純化培養(yǎng)基上涂平板，在同樣工藝條件下培養(yǎng)72h后，挑 取不同類型的單個菌落，在培養(yǎng)基上連續(xù)純化5次,得到純培養(yǎng)菌；
c、 菌種的篩選向Dfa培養(yǎng)基中接種經(jīng)步驟b純化的細菌，每個菌株3次 重復；將培養(yǎng)皿置于28"C-35r的恒溫箱中培養(yǎng)24-72h，測定各菌株的ACC脫氨 酶活性，從中選擇出ACC脫氨酶活性最高的菌株，命名為DW1;
d、 菌種的鑒定按《常見細菌系統(tǒng)鑒定手冊》以及《伯杰氏細菌鑒定手冊 (第八版)》的生理生化鑒定，菌株DW1的形態(tài)為桿狀，無芽胞，有鞭毛，革蘭
氏染色陰性，能產(chǎn)生熒光色素，在LB平板上呈乳白半透明狀，邊緣整齊；經(jīng)生 理生化鑒定該株微生物具有ACC脫氨酶活性，其酶活高達Q. 023 U / mg;結(jié)合分 子鑒定，確認該菌株為假單胞菌(/^ew/o瓜o/7as^.)。
生物樣品材料保藏該假單胞菌(Ae^/omo"flss; .)菌株DW1已于2008年10月29日保藏在"中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心"，保藏編號 為CGMCCNo.2729。
一種增強蔬菜作物耐鹽性的方法，該方法的具體步驟為
(1) 培養(yǎng)基的配制DF培養(yǎng)基，每L含KH2P04 4.0 g， Na2HP04 6.0 g， MgS04'7H20 0.2 g，葡萄糖2.0g，葡萄糖酸2.0g，檸檬酸2.0 g， (NH4)2S04 2.0 g， pH 7.2-7.4; DFa培養(yǎng)基，將ACC加入到不含有,)2804的DF培養(yǎng)基中， 其終濃度為》2.0mmo卜L—1，滅菌后，備用；
(2) 菌種的活化培養(yǎng)將假單胞菌(/^^fomo"m^.)菌株DWl , CGMCC No.2729，接種于DFa培養(yǎng)基中活化，待菌長至對數(shù)期，備用；
(3) 菌種的發(fā)酵培養(yǎng)將步驟(2)活化菌懸液100W接入步驟(1) DF培 養(yǎng)基中，在25'C - 37'C下培養(yǎng)24-48h，至菌體對數(shù)生長期后，進行離心分離， 得到菌體，備用；
(4) 耐鹽蔬菜品種的篩選a、對各種蔬菜作物種子萌發(fā)率的比較，篩選 出在鹽脅迫條件下有較高萌發(fā)率的蔬菜品種；b、對步驟a中篩選出的種子萌發(fā) 率較高的蔬菜品種，進行幼苗生長耐鹽性實驗，通過植株生長狀況測定，從中 篩選出耐鹽的蔬菜品種；
(5) 蔬菜品種-微生物系統(tǒng)的構(gòu)建將步驟(3)發(fā)酵菌體配制成濃度為Aeoo 》0.1的菌懸液；將步驟(4)篩選出的耐鹽蔬菜品種種子消毒處理、無菌水洗 凈后，在菌懸液中浸泡、包衣，使種子表面含菌量達到3.0X 107-6.0X 107 CFU/ 顆，瀝干后即可播種、種植。
本發(fā)明的有益效果
一是本發(fā)明從海涂土壤中分離篩選出具有較高1-氨基環(huán)丙垸1-羧酸脫氨酶 活性的新菌株DW1，該菌株能以1-氨基環(huán)丙烷1-羧酸為氮源進行生長，其酶活高二是本發(fā)明通過耐鹽性比較，從大量現(xiàn)有蔬菜品種中篩選出引茄一號和浙雜 番茄兩個耐鹽的蔬菜品種，其耐鹽臨界值均達到2 gNaCl/kg 土 (見表l)。
三是通過植物-微生物系統(tǒng)的構(gòu)建，可以顯著增加茄子在0.1%和0.2%鹽濃度 下的鮮重與Cf和k+離子的含量，減少脯氨酸及Na+離子含量，同時可以增加 番茄幼苗的鮮重和抗氧化酶活性，有利于蔬菜作物在鹽脅迫條件下的生長，提 高蔬菜在海涂上的生產(chǎn)力，進而被用于濱海鹽土改良(見表2， 3)。
具體實施例方式
下面通過實施例對本發(fā)明作進一步的詳細說明，但應該理解本發(fā)明并不受這 些內(nèi)容所限制。
ACC:美國sigma公司生產(chǎn)，純度>99.9%。
實施例1:(具有1-氨基環(huán)丙烷l-羧酸脫氨酶活性菌株的篩選) 按以下步驟進行
(1) 菌種的富集培養(yǎng)將浙江上虞海涂土樣懸浮于PAF培養(yǎng)基中(每L含
有10g蛋白胨，10g酪蛋白水解物，1.5gMgS04， 1.5gK2HP04)，于28。C-35 "C搖床200r "min"振蕩培養(yǎng)24h，取懸浮液轉(zhuǎn)接至DF培養(yǎng)基中(每L含4.0g KH2P04， 6.0gNa2HPO4， 0.2 g MgS04.7H20， 2.0g葡萄糖，2.0g葡萄糖酸， 2.0g檸檬酸，2.0 g (NH4)2S04， pH7.2-7.4)，同條件培養(yǎng)24h，即得到富集培養(yǎng) 液；
(2) 培養(yǎng)基配方及菌種分離純化取富集培養(yǎng)液轉(zhuǎn)接于以1-氨基環(huán)丙烷1-羧酸為唯一氮源的DFa培養(yǎng)基(ACC溶于超純水后抽濾滅菌，加到不含有(NH4)2S04且預先滅菌的DF鹽培養(yǎng)基中，ACC終濃度^2.0mmo1 .L")中，同 條件培養(yǎng)24-48h至菌對數(shù)期；取菌懸液在純化培養(yǎng)基(在Dfa培養(yǎng)基中添加瓊 月旨20g/L)上涂平板，將培養(yǎng)皿置于同上溫度的恒溫箱內(nèi)倒置培養(yǎng)72h，挑取 不同類型的單個菌落，在培養(yǎng)基上連續(xù)純化5次，得到純培養(yǎng)；
(3)菌種的篩選及酶活測定在無菌條件下，將滅菌的Dfa純化培養(yǎng)基在 5(TC溫度下倒入培養(yǎng)皿中，待冷卻后向培養(yǎng)基中接種經(jīng)步驟(2)純化的細菌， 每個菌株3次重復將培養(yǎng)皿置于同上溫度的恒溫箱中培養(yǎng)24-72h，測定菌株 的ACC脫氨酶活性(取200 y 1的細胞懸液于1.5ml離心管中，加入20 u 1 0.5M ACC，振蕩混勻；于30。C保溫15min后，加入lml 0.56M HC1，振蕩混勻，室 溫下16000G離心5 min;取lml上清液，加入800y 1 0.56M HC1,混勻后，加 入300ul2， 4-二硝基苯肼，混勻后于3(TC保溫30min;然后用2.0 ml 2M NaOH 顯色，于540nm處測定光吸收值；通過標準曲線計算出a-丁酮酸的濃度，換算 成酶活單位；l個酶活單位定義在上述條件下，ACC脫氨酶催化ACC，每分 鐘生成lpmol(x-丁酮酸的活性)，選擇ACC脫氨酶活性最高的菌株，即得到所需 的微生物活性細菌，命名為菌株DW1。
以下實施例所用菌株均為本實施例所篩選到的菌株DW1， 200ulDWl的細 胞抽提物在酶反應體系中反應30min， A,為0.153。根據(jù)標準曲線，相當于每分 鐘產(chǎn)生8.98X10—4 ii mola-丁酮酸。細胞抽提物濕重0. 195 u g/u 1，其細胞抽 提物的酶活為0.023 U/mg。
實施例2:(具有1-氨基環(huán)丙垸1-羧酸脫氨酶活性菌株DW1的鑒定)
由實施例1篩選到的菌株DW1按《伯杰氏細菌鑒定手冊(第八版)》，以及 《常見細菌系統(tǒng)鑒定手冊》進行生理生化特性鑒定，并按分子克隆三提取總DNA， 禾U用引物BSF8/20， 5' -AGAGTTTGATCCTGGCTCAG-3，(￡sc/ eric/w'a coh'對應位置為8-27);反向引物BSR1541/20，5， -AAGGAGGTGATCCAGCCGCA-3， (￡ cWi對應位置為1541-1522) 擴增菌株的16SrDNA基因，委托Invitrogen公司對該菌16S rDNA擴增及測序，
得到該菌株的16S rDNA序列后，在NCBI網(wǎng)站上用BLAST檢索GenBank中相關(guān)
菌株的16SrRNA基因序列，并進行同源性比對?；谛螒B(tài)、生理生化特征和16S
rDNA序列等方面的鑒定，將菌株DW1鑒定為假單胞菌，擬命名為假單胞菌
(/^ew/o卿朋5^p.) DW1，此菌株已于2008年10月29日保藏在中國普通微生物
保藏中心，保藏編號為CGMCCNo.2729。
實施例3:(在鹽脅迫條件下耐鹽蔬菜品種的篩選)
按以下步驟進行
(1) 種子發(fā)芽實驗在直徑9cm培養(yǎng)皿中進行NaCl濃度分別為0 (CK)、 0. 1 %、 0. 2 %、 0. 3 %的種子發(fā)芽培養(yǎng)試驗，所有濃度均設(shè)3次重復；每個培養(yǎng) 皿播種30粒種子，每個處理中一次性加入某一種濃度的NaCl溶液10ml，培養(yǎng)溫 度28。C，于發(fā)芽第7d記錄發(fā)芽種子數(shù)并計算發(fā)芽率；發(fā)芽率(%) 二第7d發(fā)芽 種子數(shù)/播種種子數(shù)乂100%，同時測量芽長；
(2) 盆栽實驗選擇種子發(fā)芽率高的品種進一步進行盆栽實驗，試驗缽為 高12cm、直徑10cm的塑料缽，每缽裝土 (杭州灣濱海鹽土) 0.5kg，并施尿素 0.216g、磷酸二氫鉀0.096g、硫酸鉀0.124g;缽內(nèi)套塑料袋(防止鹽分隨水流失)； 鹽分(NaCl)處理設(shè)6個水平，即0.57、 1.0、 1.5、 2.0、 2.5和3.0 g'kg人為使 土體鹽分均勻，分析純NaCl用適量水溶解后澆入供試土壤，并充分攪拌均勻， 每缽播10粒種子，出苗后留4株，稱重澆水，保持田間持水量的75%，置于日 本三洋(SANYO) MLR-350H型光照培養(yǎng)箱中進行培養(yǎng)(每天光照14h，白天 溫度26士0.5。C，晚上20士0.5。C)， 60d后取地上部烘干，稱重；試驗采用隨機 排列，重復4次(見表1)。結(jié)果顯示，其中的引茄一號及浙雜番茄耐鹽性好，其耐鹽限度均達到2
gNaCl/kg土。
表1 在鹽脅迫條件下耐鹽蔬菜品種的篩選結(jié)果
早熟五浙白九人青皮曰本大
鹽濃度引茄一號杭茄浙雜番浙粉番號大A號大白蠶豆蠶豆
(g/kg' 土)(g)(g)茄(g)茄(g)菜(g)菜(g)(g)(g)
ck1. 131. 074. 673. 41. 180. 782.441. 38
11. 351. 13, 353. 321. 20. 881. 61. 21
1. 50, 980. 352. 42. 281, 190. 921. 221. 1
20. 740. 2721. 740. 850. 780. 920. 7
實施例4:(引茄一號-微生物系統(tǒng)的構(gòu)建及盆栽實驗) 按以下步驟進行
(1) 培養(yǎng)基的配制DF培養(yǎng)基，每L含KH2P04 4.0 g， Na2HP04 6.0 g， MgS04.7H20 0.2 g，葡萄糖2.0g，葡萄糖酸2.0 g，檸檬酸2.0 g， (NH4)2S04 2.0 g， pH 7.2-7.4; DFa培養(yǎng)基，將ACC加入到不含有(麗4)2804的DF培養(yǎng)基中， 其終濃度為^2.0mmol'L—1，滅菌后，備用；滅菌后，備用；
(2) 菌種的活化培養(yǎng)將假單胞菌(i^Womo"os平)菌株DW1 ， CGMCC No.2729，接種于DFa培養(yǎng)基中活化，待菌長至對數(shù)期，備用；
(3) 菌種的發(fā)酵培養(yǎng)將步驟(2)活化菌懸液接入步驟(1) DF 培養(yǎng)基中，在25°C _ 37。C下培養(yǎng)24-48h，至菌體對數(shù)生長期后，進行離心分 離，得到菌體，備用；
(4) 引茄一號種子包衣取步驟(3)菌懸液0.5ml，用滅菌的0.03MMgS04 重懸浮，并稀釋8—10倍，在600nm處測定至吸收值X). 1;取實施例3篩選出 的引茄一號種子用70。/。乙醇處理lmin，無菌水洗凈；再用P/oNaC10處理10min，無菌水洗凈；將種子在菌懸液中浸泡處理lh-2h，使種子表面菌含量達到3.0X 107-6. 0Xl()7CFU/顆；
(5)蔬菜種植按要求加入鹽分和肥料，混勻裝盆。每盆裝土lkg，加蒸
餾水使土壤含水量達田間持水量的75%，靜置。每盆加入尿素O. 1722g、磷酸二 氫鉀0.0376g、硫酸鉀O. 1164g，準確加入所需鹽分，使土壤含鹽量分別達到 1.0g/kg、 2.0g/kg 、 3.0g/kg NaCl。每個處理3次重復。種子經(jīng)過處理后，播 種。l個月后定苗，2個月后測定植株的生長狀況，測定茄苗的鮮重、離子含量 及脯氨酸含量。
結(jié)果顯示，通過具有1-氨基環(huán)丙垸1-羧酸脫氨酶活性菌株處理，可以顯著增 加茄苗在0.1%和0.2%鹽濃度下的鮮重，增加C^+和k+離子的含量，減少脯氨酸 含量及Na+離子含量(見表2)。
表2 引茄一號接菌處理后的測定結(jié)果
菌處理鹽濃度/%鮮重/gNa/%K/%Ca/%0脯氨酸含量 /%=
016, 160. 7753. 1123. 3180. 332
+017. 810. 743. 2154. 010. 197
0. 120. 990. 9323. 0962. 7670. 359
+0. 123. 630. 4983. 1122, 960. 298
0. 210, 81. 682. 2482. 2721. 415
+0.213.391.2832. 7282.441.018
—0.35. 233. 061. 7241. 9211, 662
+0.37. 32. 4942.0232.4271. 327
注-(空白對照)
實施例5:(浙雜番茄-微生物系統(tǒng)的構(gòu)建及盆栽實驗)
(1) DF培養(yǎng)基的配制；(2)菌種的活化培養(yǎng)；(3)菌種的發(fā)酵培養(yǎng)；(4) 浙雜番茄種子包衣；及(5)蔬菜種植方法同實施例4， 2個月后測定植株的生長狀況，測定幼苗的鮮重及抗氧化酶系統(tǒng)活性。
結(jié)果顯示，通過具有1-氨基環(huán)丙烷1-羧酸脫氨酶活性菌株處理，可以顯著 增加番茄幼苗在0.1%和0.2%鹽濃度下的鮮重，增加植株體內(nèi)抗氧化酶活性。
表3 浙雜番茄接菌處理后的測定結(jié)果
鹽濃度鮮重POD/ (u-CAT/ (u-APX/ (u-
菌處理A/gprotein-1-min-1)protein十mirfproteirT'-mirf1)
035. 373. 5514. 8290. 612
+035. 353. 9528. 8610. 784
—0. 125.211. 5255. 7660,421
+0. 128. 592, 510. 070. 685
0.223. 921. 3616.6620. 352
+0.226. 211. 82911. 7890. 425
一0. 320. 520. 8496. 1420, 113
+0. 322. 811. 0418. 7460. 359
12序列表
<110〉浙江省農(nóng)業(yè)科學院
〈120〉一種增強蔬菜作物耐鹽性的方法
〈160〉2
〈210〉1 <211〉20 〈212〉DNA 〈213〉引物
〈400〉1
AGAGTTTGAT CCTGGCTCAG 20
〈210〉2 〈211〉20 <212〉DNA 〈213〉引物
<400>2
AAGGAGGTGA TCCAGCCGCA 20
權(quán)利要求
1、假單胞菌(Pseudomonas sp.)菌株DW1，其菌株保藏編號為CGMCCNo.2729。
2、 一種增強蔬菜作物耐鹽性的方法，其特征在于該方法按以下步驟進行(1) 培養(yǎng)基的配制DF培養(yǎng)基，每L含KH2P04 4.0 g， Na2HP04 6.0 g， MgS04'7H20 0.2 g，葡萄糖2.0g，葡萄糖酸2.0 g，檸檬酸2.0g， (NH4)2S04 2.0 g， pH 7.2-7.4; DFa培養(yǎng)基，將ACC加入到不含有(NH4)2S04的DF培養(yǎng)基中， 其終濃度為》2.0mmol'U1，滅菌后，備用；(2) 菌種的活化培養(yǎng)將假單胞菌(/^e^/omo"o^p.)菌株DWl ， CGMCC No.2729，接種于DFa培養(yǎng)基中活化，待菌長至對數(shù)期，備用；(3) 菌種的發(fā)酵培養(yǎng)將步驟(2)活化菌懸液10(￥1接入步驟(1) DF培 養(yǎng)基中，在25"C - 37。C下培養(yǎng)24-48h，至菌體對數(shù)生長期后，進行離心分離， 得到菌體,備用；(4) 耐鹽蔬菜品種的篩選a、 對各種蔬菜作物種子萌發(fā)率的比較，篩選出在鹽脅迫條件下有較高 萌發(fā)率的蔬菜品種；b、 對步驟a中篩選出的種子萌發(fā)率較高的蔬菜品種，進行幼苗生長耐鹽 性實驗，通過植株生長狀況測定，從中篩選出耐鹽的蔬菜品種；(5) 蔬菜品種-微生物系統(tǒng)的構(gòu)建將步驟(3)發(fā)酵菌體配制成濃度為A6。o 》0.1的菌懸液；將步驟(4)篩選出的耐鹽蔬菜品種種子消毒處理、無菌水洗 凈后，在菌懸液中浸泡、包衣，使種子表面含菌量達到3.0X 107-6.0X 107 CFU/ 顆，瀝干后即可播種、種植。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種增強蔬菜作物耐鹽性的方法，屬于土壤微生物技術(shù)領(lǐng)域。本發(fā)明首先從海涂土壤中篩選獲得一株具高1-氨基環(huán)丙烷1-羧酸脫氨酶活性的假單胞菌菌株DW1 CGTCC No.2729；進而提出了一種增強蔬菜作物耐鹽性的方法，包括DF培養(yǎng)基的配制；菌種的活化培養(yǎng)；菌種的發(fā)酵培養(yǎng)；耐鹽蔬菜品種的篩選及蔬菜品種-微生物系統(tǒng)的構(gòu)建等步驟。該方法能顯著提高蔬菜作物在0.1％和0.2％鹽濃度下的鮮重與Ca²⁺和k⁺離子的含量，減少脯氨酸及Na⁺離子含量，同時增加幼苗的抗氧化酶活性，有利于在鹽脅迫條件下的植株生長，提高生產(chǎn)力。本發(fā)明可在濱海鹽土改良利用中推廣應用。
文檔編號C12N1/20GK101492647SQ20081016255
公開日2009年7月29日 申請日期2008年12月1日 優(yōu)先權(quán)日2008年12月1日
發(fā)明者丁能飛, 傅慶林, 琛 劉, 林義成, 彬 郭 申請人:浙江省農(nóng)業(yè)科學院