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銅綠假單胞菌鞭毛運(yùn)動(dòng)能力相關(guān)基因pa5017及應(yīng)用的制作方法

文檔序號(hào):565974閱讀:271來源:國(guó)知局
專利名稱:銅綠假單胞菌鞭毛運(yùn)動(dòng)能力相關(guān)基因pa5017及應(yīng)用的制作方法
銅綠假單胞鋼秘動(dòng)能力相關(guān)基因腳"及應(yīng)用
fe^領(lǐng)域本發(fā)明屬于賞姓物生,術(shù)領(lǐng)域,特別涉及一種銅綠假單胞菌鞭^S動(dòng)能力相關(guān)基
背景fe7lt銅綠假單胞菌CPw油wo膨aen^"ara,PA),屬于假單胞菌屬(Pseudomonas),又
稱為綠膿桿菌。革蘭氏陰性菌,廣泛分布于自然界中(如土壤、水和空氣),正常人體的劍失、腸 道和上呼B腿中,是一種重要的條件鵬菌。在一些慢性疾病、鵬導(dǎo)致宿主免疫功能受損的因 素,易引起支氣管-肺部的原發(fā)性銅綠假單胞菌感染。同時(shí)也是嚴(yán)S^f勞、創(chuàng)傷感鵬人,囊性纖 維魏人及晚綳中瘤患者死亡的重要原因,常引起菌血癥、月市炎、泌尿系統(tǒng)感染、燒傷感染和支
氣管擴(kuò)張、慢性支氣管 #性纖維4 ^感染等 ,嚴(yán)m(xù)害著人類的,和生命。
銅綠假單胞菌的鞭毛是一種重要的毒力因子,同時(shí)其介導(dǎo)的泳動(dòng)及!^^運(yùn)動(dòng)也是菌株毒力的 重要組成部分,鞭毛缺陷的菌株毒力明顯減弱。泳動(dòng)是細(xì)菌在單端鞭毛的推動(dòng)下,單個(gè)菌體細(xì)胞 在水M量高的環(huán)境中的運(yùn)動(dòng)方式,是一種個(gè)體的行為。,運(yùn)動(dòng)則是細(xì)菌在半固體環(huán)境中的群 體之間互相協(xié)調(diào)運(yùn)動(dòng)方式,需要鞭毛和菌毛及鼠李糖脂表面活性劑的參與。
目前已知M^有35個(gè)基因與鞭毛的合成和功能相關(guān),新的鞭毛相關(guān)基因不斷的微現(xiàn)。對(duì)鞭 毛運(yùn)動(dòng)能力相關(guān)基因的研究可以為揭示鞭毛運(yùn)動(dòng)機(jī)理、研究新基因的功能,探索銅綠假單胞菌的 致病機(jī)制,為藥物設(shè)計(jì)皿新的耙位點(diǎn),為預(yù)防和抑制銅綠假單胞菌的感染Jii共理論依據(jù)。
發(fā)明內(nèi)容1本發(fā)明目的是發(fā)現(xiàn)與鞭^S動(dòng)能力相關(guān)的新基因,以此為耙位點(diǎn),設(shè)計(jì)新的抗菌藥
物,預(yù)防和治療銅綠假單胞菌引起的感染。
本發(fā)明^i共的銅綠假單胞繊^S動(dòng)能力相關(guān)基因7M劃7,具有如序列辦列1麻核苷酸序列。
戰(zhàn)的銅綠假單胞繊^S動(dòng)能力相錢因賴50/7可以用于以雜因?yàn)樾滤幇尹c(diǎn)設(shè)計(jì)并制備 抑制菌#||頓動(dòng)的藥物,以斷碟毒力^C病性,增強(qiáng)抗生素的藥效。
本發(fā)明基因賴5W7的獲得方法禾,Mu轉(zhuǎn)座重組獄,構(gòu)建轉(zhuǎn)座子插入突效庫,泳動(dòng)或
,運(yùn)動(dòng)喪失的突變子,提取基因組DNA,用A柳ffl酶切基因組DNA,酶切片段與pUC18載
體驗(yàn),艦電轉(zhuǎn)化將雜F^^^A煩桿菌DH5a感受態(tài)細(xì)胞,涂在賴精霉素和卡那霉
素雙抗的LB平^i:,經(jīng)過PCR和酶切鑒定,篩選陽性轉(zhuǎn)化子,領(lǐng)!l序確定轉(zhuǎn)化子中Mu所插入片
段的核苷,列,經(jīng)NCBI中Blast比對(duì)確定Mu所插入的基因位置。 本發(fā)明的有^^:
說5W7基因Mu插入失活的突變株喪失泳動(dòng)和iiH運(yùn)動(dòng)能力,說明此基因與銅綠假單胞菌鞭 毛的運(yùn)動(dòng)有關(guān),而該基因是—功能完錄知的新基因,本實(shí)驗(yàn)首 :fc^現(xiàn)其于鞭秘動(dòng)能力相關(guān)。 新基因功能的發(fā)現(xiàn)對(duì)揭示鞭^ig動(dòng)機(jī)制、皿藥物設(shè)計(jì)的耙位點(diǎn),預(yù)防和治療銅綠假單胞菌的感
染都有指導(dǎo)意義。

圖1 A泳動(dòng)能力檢測(cè);B.麟運(yùn)動(dòng)能力檢測(cè)。 1、野生型PA68作為陽'[4^照 2、 7M5W7::Mu突變株 圖2 Mu克隆子酶切產(chǎn)物電泳圖 1、 DL15000 2、克隆子質(zhì)粒酶切3、克隆子質(zhì)粒 圖3. Mu轉(zhuǎn)座子PCR產(chǎn)物電泳圖(用PCR方法檢測(cè)轉(zhuǎn)化子的Mu轉(zhuǎn)座子) 1、 DL20002、 Mu克隆子PCR產(chǎn)物具體 ^
鄉(xiāng)例l:艦Mu轉(zhuǎn)^m^S行^t庫的粒
1. 從于37。C培養(yǎng)16 20 h的,平肚挑取一個(gè)PA68單離,轉(zhuǎn)到含有5mL LB液體培養(yǎng)基 的試管中,37°C, 200rpm,過夜振蕩培養(yǎng)14 18h。
2. 次日按1 : 100轉(zhuǎn)接到含有100 mL LB液體培養(yǎng)基的三角瓶中,37°C, 200rpm,振蕩培養(yǎng)約 3誦5h,使用752分光光度計(jì)測(cè)定細(xì)菌i^t/在540nm處的吸光度,在OD54o=0.5 0.6時(shí),停
止培養(yǎng)。
3,在無菌割牛下將菌#^移到一個(gè)無菌的預(yù)冷的50mL離心管中,在冰上方燈10min,使培 ,至(TC。
4. 于4。C, 6000rpm,離心10min,收集菌體。
5. 倒出培養(yǎng)液,用100mL預(yù)冷的300mM賺重懸菌體,4°C, 6000rpm,離心10min。
6. SM5),依7細(xì)50 mL、 20 mL預(yù)冷的300 mM蔗糖溶M1:、洗滌菌體。
7. 蔬將細(xì)胞溶于lmL300mM蔗糖溶液中,100^管,制備好感受態(tài)細(xì)胝懸液,冰浴 保絲用。
8. 取1^ Mu轉(zhuǎn)座復(fù)合物,力口MU100^L感受態(tài)細(xì)胝懸液中,混勻,吸取混^t/加AlU預(yù)冷的 0.2cm電轉(zhuǎn)化杯中,用Bio-Rad電穿孔仗體電壓2.6kv,進(jìn)行電擊,記錄下電擊所用的電壓 和時(shí)間。
9. 在電擊后的轉(zhuǎn)化體系中加入予跣37。C溫浴的900& SOC培養(yǎng)基中,37°C , 200 rpm,復(fù)蘇lh。
10. 鵬量復(fù)蘇后的轉(zhuǎn)化體系涂械含50jig/mL卡那霉素的LB平肚。37。C培養(yǎng)16—18 h,陰 '艦照除轉(zhuǎn)化體系中不加Mu轉(zhuǎn)座復(fù)合物外,其^ii程與樣品完全相同。如果在陰'隨照平 fei:無0^長(zhǎng)出,械性平feh長(zhǎng)出的轉(zhuǎn)化子謝 a—步篩選。
11. 取2m1菌液做禾鎌,以A!Mu轉(zhuǎn)座子上的特異序列Mul (5, - GCAACTGTCCATACTCTGA-3,) 和Mu2 (5'-CGCTGGGTTTATCGTCGA-3')做引物,用PCR方^增Mu轉(zhuǎn)座子片段。同 時(shí)分別以銅綠假單胞難株M粒pHTH2做陰'股陽'斷照。擴(kuò)增斜牛為,先在94"預(yù)變性 15min,然后,94。C變性1 min, 55。C退火lmin, 72。C延伸1 min,共30個(gè)循環(huán),雜72。C 延伸10min。
12. PCR產(chǎn)鵬0.8。/。瓊月l^繊中電泳檢測(cè),EB染色后紫外燈下觀察結(jié)果并留照片,具有700bp 卡那霉素抗性基因的轉(zhuǎn)化子帶有Mu轉(zhuǎn)座子。
鄉(xiāng)例2:鞭毛胸和離劍能力6^ij
1. 在無菌塑料培養(yǎng)皿內(nèi)鋪上一層運(yùn)動(dòng)能力檢測(cè)培養(yǎng)基,室溫下千鵬夜。
(1) 檢測(cè)鞭毛》慟能力的培養(yǎng)基5g!NaCl, 10^胰蛋白胨,0.3% (W/V)瓊月離(Spanish 微,pH值調(diào)至T2左右。
(2) 檢測(cè),運(yùn)動(dòng)能力的培養(yǎng)基8g^營(yíng)養(yǎng)肉湯NB, 0.5%瓊月謝(Bacto"agar), pH值調(diào)至 7.5左右,1.034xl05Pa,滅菌20rain,制針板時(shí)加入5g/L葡萄糖。
2. 從Mu轉(zhuǎn)座子突^t庫中活化突變菌株。
3. 用無菌的牙簽挑取在LB平feiJl夜培養(yǎng)的PA68的Mu轉(zhuǎn)座突變子,點(diǎn)種到泳動(dòng)@#基的表 面。30°C,正置培養(yǎng)16 24h。
4. 泳動(dòng)能力檢測(cè)細(xì)菌會(huì)f^鞭^S動(dòng)在表型檢測(cè)培養(yǎng)基的表面以接種點(diǎn)為圓心向周圍泳動(dòng)生 長(zhǎng),形成一個(gè)圓環(huán),根據(jù)環(huán)的大小篩選出泳動(dòng)能力喪失或繊i的突變子(圖l)。
5. i^^運(yùn)動(dòng)能力檢測(cè)細(xì)菌因受化學(xué)趨向性的影響而《繊鞭毛和IV菌毛的運(yùn)動(dòng)在培養(yǎng)基的表面 蔓延生長(zhǎng),在接種點(diǎn)的周圍形成分支狀的 ,以野生型菌株P(guān)A68為陽性對(duì)照,篩選出,
運(yùn)動(dòng)能力喪失或繊§的突變子(圖l)。
^es例3:銅綠假^iam i^^t^;相^因的克隆
野生型和缺陷,因組DNA的提取
1. 從雜羊劃線培養(yǎng)的LB固體平社扭陬單麟,接種到5mL Lbroth液體培養(yǎng)基中,37°C, 200rpm,過夜培泰
2. 次日按l : lOO的比例轉(zhuǎn)擬ijlOmLU)roth液體培養(yǎng)基中,37°C, 200rpm,培養(yǎng)14-16h;
3. 將菌,移至一 llmL離心管中,4°C, 12000ipm^離心lmin。棄去上清,收集菌體;
4. 在離心管中加入l.lmL離緩沖液(20 mMTris'HClpH8.0, 10mMEDTA, 10mMNaCl, 20% 蔗糖)重,浮菌體,再加入5。MLRNase (10mg/ml), 37。C水浴lh;
5. 加入1.1 mL的2% SDS,充分振蕩至溶液澄清,再加lljxL蛋白酶K (20 mg/ml), 37。C7夂浴 過夜,其間經(jīng)常搖動(dòng)一下離心管,使蛋白酶K倉巨充分水解蛋白;
6. 加入2.2mLTris飽和苯酚/氯仿l: 1混合液,劇烈振蕩,12000 rpm,離心20min;
7. 吸10:層±7尺相轉(zhuǎn)移至另一新離心管中,Mffl酚/氯仿抽提3次,操作步驟同上,至蛋白抽 提干凈為止;
8. 吸取上清,加入約4mL忠乂乙醇,用鵬棒離 出沉淀,置^"^個(gè)新的UmL離心管中, 70%乙,一次,盡量少帶出液體,真空千燥;
9. 在抽干后的DNA中加入1.5 mlTES溶液(500 mMTris'HCl, pH8.0, 5mMEDTA, 50mMNaCl) 離DNA,之后加入15nlRNase (10mg/ml), 37。C7K浴lh;
10. 加入1.5mLTris飽和苯酚/氯仿l: l混合液抽提蛋白,12000rpm,離心15min, ^Lh清;重 復(fù)抽提一次,IU:清;加入1.5ml氯仿翻提一次,祉清;
11. 加入約4mL^7jC乙醇,-20°C]^g0.5h, 4°C, 12000 rpm,離心10min;
12. 棄去上清,沉淀用lmL70。/。乙^fc滌2次,真空千鵬重溶預(yù)量的1E中。0.8% (W/V) 的瓊月1^ 電泳^^測(cè)DNA的質(zhì)皿濃度。
質(zhì)粒的小量提取,參照〈(MolecularCloning》(Sambrook"o/., 1989)的;^法并加以改進(jìn)。
1. 挑取單0^^種于5mLLB液體培養(yǎng)基中,37°C, 180rpm,過夜振蕩培養(yǎng);
2. 取l-1.5mL菌液轉(zhuǎn)移至一1.5mL離心管中,12000rpm, lmin,離心收集菌體;
3. 棄去上清,菌體盡離干,置于冰上,力口入100jiL預(yù)冷的溶液I ,重懸沉淀,冰浴5min;
4. 加入200mL溶液II (1%SDS, 0.2mol/LNaOH),輕輕的混合均勻至溶 的清^&粘稠,冰 浴5min,注意溶液II要先用現(xiàn)配;
5. 力口入150mL溶淑I1,輕輕的混勻,冰浴5min;
6. 4°C, 12000rpm,離心10min,吸取上清轉(zhuǎn)移至另一f W中;
7. 加入8nLRnase (10mg/mL),腿37。C7JC浴中45min;
8. 加入約400mL的Tris飽和苯酚/氯仿/異戊醇混合液(苯酚:氯仿:異戊醇=25 : 24 : 1)抽提,4°C , 12000rpm,離心10min,吸取上離移至另一新管中;
9. 加入約lmL予賞冷的^7夂乙醇,混合均勻,-20°C,體20min:
10. 4°C, 12000rpm,離心10min,棄去上清;
11. 用lmL 70%乙0^滌沉淀一次,真空千燥,沉淀溶預(yù)量的(10-50mL) IE (pH=8.0)頓 菌水中。
12. 0.8%的瓊月^ 電泳檢測(cè)提取的質(zhì)粒的量,以DL15000為DNA分子量標(biāo)準(zhǔn)。 載體pUC18質(zhì)粒的酶切及去磷酸化處理
用限制性內(nèi)切酶及脂H I酶切處理pUC18質(zhì)粒,酶切的方法參見TaKaRa公司產(chǎn)品說明書。 此酶切產(chǎn)物可以直接用電泳檢測(cè)酶切結(jié)果,若酶切完全,則終止反應(yīng),細(xì)加熱處理(6(TC 15min) 使限制性內(nèi)切酶失活。
酶切反應(yīng)體系的處理
(1) 用Tris飽和苯酚/氯仿/異戊醇抽提一次,4'C, 12000rpm,離心10min,轉(zhuǎn)移上清至另一 新離心管中;
(2) 加入l/10體積的3MNaAC(pH4.8), 2倍^特只預(yù)冷的無水乙醇,混和均勻后,于一2(TC中
(3) 4°C, 12000 rpm離心10 min, DNA沉淀用70X乙^fe滌兩次,真空千燥。溶于適量的
TE (10 mM Tris.HCl, 1 mM EDT人pH8.0 )緩沖液^6菌水中。 為防止載體自身連接反應(yīng),斷機(jī)化時(shí)的背景,提高連^^率,用小腸堿性磷酸單酯酶(CIAP) 除去線形化的pUC18分子5'^l磷酸。具體方法按照說明書進(jìn)行。 連接、轉(zhuǎn)艦篩選
1. 連接反應(yīng)體系(總《材只為20Ml):
基因組DNA和質(zhì)粒pUC18的連接(15m1體系)
DNA 1^L ddH20 攀 pUC18 1^L
混勻,45。C7乂浴5賄后,鵬冰浴,再加T4連娜1單,衡buffer 1.5mL, 14隱16。C水浴過夜。
2. 連接產(chǎn)物的處理
(1) TE補(bǔ)超200nL。
(2) 加入2《剖禍只的^7乂乙醇和1/10^!R的3mol/LNaAc(pH4.8), -20°。,201^沉淀0忖八。
(3) 4°C 12000rpm離心10min,棄上清。
(4) 加入lmL70。/。的冷乙II^DNA沉淀兩次,真空千燥。
(5) 沉淀溶于5^LddH20中。14MlddH20, lpl酶切處理后的基因組DNA, lMl酶切處理后的 載體pUC18片段,混和均勻,45。C水^^溫5min。
(6) 取出后立即置于冰上,加入2Mll0xT4DNALigaseBuffer, 2MlT4DNALigase,混勻,16°C 反應(yīng)16-24h;
3. ^桿菌感受態(tài)細(xì)胞的制備
(1) 挑取雜羊劃線培養(yǎng)的單^^接種于5mLLB液體培養(yǎng)基中,37°C, 180ipm,過夜振蕩培 養(yǎng);
(2) 按1 : 100的比例轉(zhuǎn)接至200mL LB液體培養(yǎng)基中,37°C, 180ipm,振蕩培養(yǎng)至 ODaxr0.5"0.6,約3-5h; (3) 將菌鵬移至無菌的250mL離心管中,4'C, 6000rpm,離心10min,收集菌體;
(4) 棄去上清,加入200mL的無菌去離子水(預(yù)冷),重懸沉淀,4'C, 6000rpm,離心10min;
(5) 棄去上清,加入100mL的無菌去離子水(預(yù)冷),重復(fù)步驟(4)的操作;
(6) 加入100mL的無菌10。/。甘油(預(yù)冷),鼓步驟4)鵬作;
(7) 加入2mL無菌10%甘油(預(yù)冷),塞懸沉淀,1.5 ml無菌離心管中,95pL/管,-70°C保存。
4. 大腸桿菌DH5a的電轉(zhuǎn)化方法
(1) 5MLDNA雜產(chǎn)物與95ML大腸桿菌感受態(tài)細(xì)胞混勻,冰浴5-10min。
(2) 混合物轉(zhuǎn)移至預(yù)冷的0.2cm電轉(zhuǎn)化杯中(陰',照不加混合物,只加感受態(tài)細(xì)胞),在 Bio-Rad電轉(zhuǎn)化ftj:i體2.50kv,進(jìn)行電擊。
(3) 從電轉(zhuǎn)化杯中吸出電轉(zhuǎn)化體系,并用lmL37T:預(yù)熱的SOC液體培養(yǎng)基(20 胰蛋白胨, 5g/L酵母粉,0.5g/LNaC120mM葡萄糖,lOmM氯化鎂),后,37°C, 150轉(zhuǎn)/^# 培養(yǎng)lh。
(4) 菌液^l^布憎20mmol/L MgS04 50|xg/mL卡那霉素禾口 IOO昭/mL氨節(jié)青霉素的LB固 鵬養(yǎng)基上,37。C倒置過夜歸。
5. 克隆子的篩選、鑒定
(1) /A31夜培養(yǎng)的雙抗平fei:挑取轉(zhuǎn)化子,小量提頓粒,用限制性內(nèi)切酶femHI酶切,并 以pUCl肪amH I酶切產(chǎn)物為對(duì)照。
(2) 以DL15000為DNA標(biāo)準(zhǔn),在0.8%瓊月^^繊中電泳檢測(cè)縱,^腿同時(shí)具有pUC18 載體帶和夕卜源目的基因帶的克隆子(圖2)。
(3) 同時(shí)以從轉(zhuǎn)化子中提取的質(zhì)粒為^鎌,用Mu轉(zhuǎn)座子DNA片段的Mu轉(zhuǎn)座子檢測(cè)弓嫩 Mul和Mu2進(jìn)行PCR (具體方法同實(shí)施例1中所述)。電泳檢測(cè)PCR產(chǎn)物,以DL2000 為DNA標(biāo)準(zhǔn),以質(zhì)粒pHTH2為正對(duì)照,若能擴(kuò)增出700bp的特異性帶,則說明轉(zhuǎn)化子 質(zhì)粒中含有人工Mu轉(zhuǎn)座子DNA片段,克隆成功(圖3)。
(4) 對(duì)成功克隆的轉(zhuǎn)化子質(zhì)fii4行測(cè)序。
6. 陽性轉(zhuǎn)化子質(zhì)粒的DNA領(lǐng),
以Mu轉(zhuǎn)座子兩端的反向序列為依據(jù)設(shè)計(jì)的AM42P1作為弓嫩進(jìn)行測(cè)序。委肚海英俊公司 進(jìn)行DNA測(cè)序,測(cè)定轉(zhuǎn)座子插入位點(diǎn)側(cè)翼500bp的核苷,列。
7. 基因定位
測(cè)序結(jié)果在銅綠假單胞菌的基因組數(shù)據(jù)庫(htQy/wwwpseudomonas.com)或GenBank (http://wwwncbi.nlm.nih.gov/)中BLAST進(jìn)行序列t樹找到Mu所插AS因在銅綠假單胞菌基因
組中的{45。
序列表
<110>南開大學(xué)
<12贈(zèng)錄假單胞 ||^動(dòng)斷相錢因靡77&!^ffl
<160>1
<210>1
<211>2700
<212>DNA
<213>Hf綠假單胞菌CP犯idbmonas aerwg^ora;, PA) <400>1
atgaaaagtc atcccgatgc cgccagccgt tcggcggccg aggttgtcac gcagctaccc 60 gtgccgtcgc ggctcgggct gctgcgtttc gagcggctga acgagccgag ctgggcactg 120 ctgttcctcg atcctgcctg c辟gcgccag ctcgggctgc cggcgactac cctctgcgca 180 ctgctcgatg cgccttacgc cagcct辟tg gaacccgagg cccgccaccg cctgcacgag 240 cagatccagc agcaactggt gaagcgcccg cactaccagg t辟gctacaa gctgcacaca 300 cccaacggcg tgctgaccat gctggagttc ggcgaagcct tccagcagca tggccgccag 360 ttgctgcacg gctacctgat ggtcgaggag cgagcggaga gcgccgagcg cagcgaacag 420 ttgctcgacc tggaatcgca gaacctgcgc ctgaaggcgt ccctggacct ctaccagcgc 480
tcccaggacgaccacctgcaacacctgctgcgctcgcgcacccagcagaacctgatcgtc540
cgcctggcccgccatcgctacctgtccagcgacccgctgctggaggctgcgcaactgatc600
acccaggccgcctgcgaagccteicggc3ccgcgcgagccggcatctggcggctgctcgac660
gaccagcgcctggaagcggtgaccgtctaccgccgcgacctcgaccagtacgagaagccc720
C3gagcatcgacgccagccgctaccccgcctacctcgaggcggtacac3gcgggcgcgcc780
atcgacgcccacaacgcccagcgcgacccacgcacccaggaactctacaaggactacctg840
aggccgctgggcgtcaacgccctgctcgacgccaccatccgcatcggcggcgaggtggtc900
ggcgtgctgtgcctggaacacgccggcgagaaccgcatgtggcagagcgacgagatcgcc960
ttcgccggggaactcgccgaccagtacgcgcaggtcctgatgaaccacgagcgacgcaat1020
gtctccagcgccctgcacctgttccagcgcgcggtggaacagagcgccagcgccttcctg1080
ctgatcgaccgcgacggcgtggtggaatacgtcaatccgagcttcacctcgatcacccag1140
tacagcgccgacgaagtgcgtaaccgacgcctgtccgagcttccggcgctggagaacctc體
agcgagctgctgttcgacgcgcgttccgcgctgacccagcagaacagctggcagggcgag1260
ttccgcagccgccgcaagaaccacgagccttactggggccagttgtcgctgtcgaaggtc1320
tacgacgatctcggcgagctgacccactacatcggcatctacgaagacatcacgcagaac1380
aagctggccc6LgC3gC3Catcgagaaactcgcctaccgcgacaacctcaccggcctggcc1440
aaccggcactatttcatcggcgccctcgaggaacgcctggaaagcagcggcgaccgcccg1500
ctcagcctgctgctggtggacatcgacaacttcaagcggatcaatgacagcctcggccac1560
cagaccggcgacaagctgctggtcagcctggcccggcgcttgcgcagttgcctcggcgac1620
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權(quán)利要求
1.一種銅綠假單胞菌鞭毛運(yùn)動(dòng)能力相關(guān)基因PA5017,其核苷酸序列如序列表序列1所示。
2、 權(quán)利要求1戶腿的銅綠假單胞繊^S動(dòng)能力相關(guān)基因尸WW7的應(yīng)用,用于以該基因?yàn)?新藥耙點(diǎn)設(shè)計(jì)并制 制菌{糊秘動(dòng)的藥物,以斷氐其毒力^[病性,增強(qiáng)抗生素的藥效。
全文摘要
本發(fā)明公開了銅綠假單胞菌鞭毛運(yùn)動(dòng)能力相關(guān)基因PA5017。屬于微生物生物技術(shù)領(lǐng)域。此基因大小為2700bp,目前國(guó)際上對(duì)該基因的功能尚沒有報(bào)道。銅綠假單菌的鞭毛介導(dǎo)菌體的泳動(dòng)(swimming motility)及蜂群運(yùn)動(dòng)(swarming motility),本實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)該基因的失活導(dǎo)致銅綠假單胞菌同時(shí)喪失泳動(dòng)及蜂群運(yùn)動(dòng)能力。銅綠假單菌的鞭毛及其所介導(dǎo)的運(yùn)動(dòng)能力是該菌的重要的毒力因子及致病因素。對(duì)該基因的發(fā)現(xiàn)及研究有助于研究銅綠假單胞菌鞭毛的運(yùn)動(dòng)機(jī)制,揭示銅綠假單胞菌的致病機(jī)理,為預(yù)防和治療該菌引起的感染提供理論依據(jù)。
文檔編號(hào)C12N15/31GK101368185SQ20081015228
公開日2009年2月18日 申請(qǐng)日期2008年10月10日 優(yōu)先權(quán)日2008年10月10日
發(fā)明者喬明強(qiáng), 劉力偉, 姚宏明, 張秀明, 徐海津, 李迎麗, 銳 牟, 白艷玲, 靳永新 申請(qǐng)人:南開大學(xué)
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