專利名稱：塑料試管蛋白芯片、其制備方法及應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種蛋白芯片，尤其涉及一種塑料試管蛋白芯片、其制備方法 及其在檢測疾病中的應(yīng)用；本發(fā)明還涉及主要以該塑料試管蛋白芯片為主要組 分的診斷試劑盒、該試劑盒的制備方法及在檢測疾病中的應(yīng)用，屬于生物芯片 領(lǐng)域。
背景技術(shù)：
生物芯片技術(shù)是九十年代中期興起的一項新興生物技術(shù)，因其可在一次反 應(yīng)中進(jìn)行多種信息的平行分析，而受到眾多研究者的矚目，迅速在諸多生物學(xué) 領(lǐng)域得到應(yīng)用。生物芯片技術(shù)按檢測對象分類，主要分為基因芯片和蛋白芯片 兩類。基因芯片主要用于基因表達(dá)分析、基因組比較分析、多態(tài)性分析以及疾病 的基因診斷等。由于基因芯片在人類基因組計劃的研究工作中的重要作用，此 技術(shù)在短短幾年內(nèi)得到了長足的發(fā)展。但基因芯片技術(shù)成本高，芯片的制備比 較復(fù)雜，樣品的準(zhǔn)備與標(biāo)記較為繁瑣，且其信號檢測的靈敏度也有待于進(jìn)一步 提高，這些問題使得目前對該技術(shù)的應(yīng)用大多停留在實驗室研究階段，離臨床 檢驗及疾病診斷的普及性應(yīng)用還有一段距離。蛋白芯片是一項更為前沿的技術(shù)。它通過固定于支持介質(zhì)上的多種蛋白質(zhì) 構(gòu)成的微陣列，直接檢測特定功能物質(zhì)(標(biāo)志性蛋白)。目前對蛋白芯片的研究和 應(yīng)用所采用的固相載體是無機(jī)片基或有機(jī)化合物片基，無機(jī)片基包括半導(dǎo)體硅 片、玻璃片、微孔硅片、微孔玻璃片等，優(yōu)選玻璃片；有機(jī)片基包括醋酸纖維 素膜、硝酸纖維素膜、尼龍膜、聚丙烯膜等，優(yōu)選硝酸纖維素膜?，F(xiàn)在，人類基因組計劃即將完成，生物科學(xué)的研究重心即將從基因組研究 轉(zhuǎn)向蛋白質(zhì)組的研究。蛋白芯片以其特有的優(yōu)勢，可為現(xiàn)代醫(yī)學(xué)診斷學(xué)提供高 效、便捷、準(zhǔn)確的臨床檢測手段，對疑難病癥的確診及惡性疾病(如腫瘤)的早期
診斷和及時治療有重大的意義。此技術(shù)的成熟和應(yīng)用必將在新世紀(jì)的疾病診斷 和治療，新型藥物開發(fā)，探索疾病的分子機(jī)理等生命科學(xué)相關(guān)領(lǐng)域有巨大的應(yīng) 用前景。現(xiàn)在的檢測尿液、血清及其它體液的方法很多，檢測方式大致包括ELISA、 放射性同位素標(biāo)記、金標(biāo)、熒光、化學(xué)發(fā)光、時間分辨熒光等形式，檢測的材 料有酶標(biāo)板、試劑條、試管、硅化玻璃等多種，多應(yīng)用在檢測體液中疾病性標(biāo) 志蛋白、激素、流行病毒、細(xì)胞因子等指標(biāo)。這些方法均是在抗原抗體反應(yīng)的 基礎(chǔ)上，采用酶、同位素、膠體金、熒光基團(tuán)、鑭性元素等不同標(biāo)記形式，進(jìn) 行定量或定性檢測。然而，現(xiàn)有的檢測方法大多是單指標(biāo)檢測，信息量小，而 且均有其局限性(如標(biāo)記步驟復(fù)雜、試劑和儀器昂貴、操作煩瑣、靈敏度低、易 污染等)。發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明首先所要解決的技術(shù)問題是克服現(xiàn)有技術(shù)的不足，提供一種含有多 個疾病檢測指標(biāo)可并行檢測疾病的塑料試管蛋白芯片，該塑料試管蛋白芯片用 于檢測疾病具有準(zhǔn)確性和靈敏度高、高重復(fù)性、高穩(wěn)定性等優(yōu)點。本發(fā)明首先所要解決的技術(shù)問題是通過以下技術(shù)方案來實現(xiàn)的 一種含有多個疾病檢測指標(biāo)可并行檢測疾病的塑料試管蛋白芯片，包括塑 料試管片基和固定于該芯片上的蛋白質(zhì)，所述的塑料試管(塑料試管基片表面活 性集團(tuán)為環(huán)氧基或醛基化三維聚合物，可通過共價/擴(kuò)散吸附原理將蛋白質(zhì)固定) 大小為0.5ml-5ml,基片大小為0.2—3cm2;其中，所述的蛋白質(zhì)能與體內(nèi)某一疾 病的至少兩種標(biāo)志蛋白特異結(jié)合。優(yōu)選的，蛋白質(zhì)在基片上分布的密度范圍是25—200點/cm2， 一個點為一種 蛋白質(zhì)，每個點的點樣量為0.1 — 10ng。其中，所述的能夠與體內(nèi)疾病性標(biāo)志蛋白特異結(jié)合的蛋白質(zhì)可以是抗原、 抗體、受體、配體，多肽藥物等，例如可以是乳腺癌抗原(CA15-3)，胃腸癌抗原 (CA19-9)，卵巢癌抗原(CA125)，細(xì)胞角質(zhì)素19(CYFRA21-1)，糖類抗原 72-4(CA72-4)，糖類抗原-50(CA-50)，磷癌相關(guān)抗原(SCC),癌胚抗原(CEA)，前 列腺特異性抗原(PSA)，游離前列腺特異性抗原(E-PSA)，甲胎蛋白(AFP)，游離B人絨毛膜促性激素，鐵蛋白，B2微球蛋白，神經(jīng)元特異性烯醇化酶(NSE)等。例如為了檢測胰腺癌，可以在基片上除固定CA19-9夕卜，再加上CA125、 CA50及DU-PAN,可把檢出率提高到卯％以上；再如為了檢測肺癌，制備塑料 試管蛋白芯片，除了在基片上固定CEA夕卜，還再基片上固定NSE、 CEA、 SCC 等蛋白，診斷的特異性和靈敏度顯著提高。本發(fā)明中所述的"受體"術(shù)語指細(xì)胞膜上或細(xì)胞內(nèi)能識別生物活性分子(藥 物、毒素、神經(jīng)遞質(zhì)和激素、抗原和細(xì)胞粘附分子等)并與之相結(jié)合的生物大分 子。它們能將生物活性分子產(chǎn)生的信息傳遞到效應(yīng)器，從而引起相應(yīng)的生物效 應(yīng)。這些生物大分子多數(shù)是蛋白質(zhì)，個別的是糖脂。所述的"配體"術(shù)語是能與受體特異結(jié)合的生物活性分子(即藥物、毒素、神 經(jīng)遞質(zhì)和激素、抗原和細(xì)胞粘附分子等)?？乖涂贵w由于其免疫上的特殊功能， 可單獨歸為一類。本發(fā)明中所述的受體和配體均是蛋白質(zhì)。本發(fā)明所要解決的另一個技術(shù)問題是提供一種制備上述塑料試管蛋白芯片 的方法。本發(fā)明所要解決的另一個技術(shù)問題是通過以下技術(shù)方案來實現(xiàn)的 一種制備上述塑料試管蛋白芯片的方法，包括使用芯片自動點樣系統(tǒng)，通過物理吸附或共價結(jié)合的方式，將能夠與體內(nèi) 疾病性標(biāo)志蛋白特異結(jié)合的多種蛋白質(zhì)按照下述要求分別固定在塑料試管上 密度分布范圍25 — 200點/cm2;每個點的點樣量為O.l — lOng， 一個點為一種 蛋白質(zhì)。優(yōu)選的， 一種制備上述塑料試管蛋白芯片的方法，包括(1) 將所要固定的能夠與體內(nèi)疾病性標(biāo)志蛋白特異結(jié)合的蛋白質(zhì)分別以一定濃度(最少1 pg4il)溶解于PH值為6-10.0的PBS緩沖液中；(2) 用芯片自動點樣系統(tǒng)將溶解于PBS緩沖液中的蛋白質(zhì)點制在塑料試管片 基上，點樣密度范圍是25—200點/cm2， 一個點為一種蛋白質(zhì)，蛋白質(zhì)點樣量的 范圍為0.1 —10ng/點；其中，塑料試管大小為0.5ml-5ml,基片大小為0.2—3cm2;(3) 放置過夜；用封閉液將蛋白芯片封閉IO分鐘一I小時；(勺密封保存于惰性氣體中，即得。其中，步驟(3)所述的封閉液優(yōu)選為含1%-10%奶粉(milk powder )(Roth GmbH )的PBS溶液，其pH值為6-10.0。本發(fā)明所要解決的又一個技術(shù)問題是提供一種主要以上述塑料試管蛋白 芯片為主要組分的檢測疾病的試劑盒，該試劑盒含有多個指標(biāo)可并行檢測疾病。本發(fā)明所要解決的又一個技術(shù)問題是通過以下技術(shù)方案來實現(xiàn)的一種多指標(biāo)并行檢測疾病的試劑盒，包括上述的塑料試管蛋白芯片；生 物素標(biāo)記液；鏈親和素反應(yīng)液；產(chǎn)生并增強(qiáng)化學(xué)發(fā)光反應(yīng)的組合物；蛋白芯片 的洗滌液；被檢蛋白質(zhì)的標(biāo)準(zhǔn)品(如actin);封閉液。其中，所述蛋白芯片的洗滌液含有PBS和0.05-0.2X的Tween20， pH值在 6.0-9.0之l司；所述的鏈親和素反應(yīng)液優(yōu)選為耦聯(lián)納米；所述的產(chǎn)生并增強(qiáng)化學(xué)發(fā)光反應(yīng)的組合物指起始劑(initiator )和增強(qiáng)劑 (enhancer》被檢測標(biāo)準(zhǔn)品可用actin蛋白，或每種芯片上蛋白質(zhì)對應(yīng)結(jié)合的被檢測蛋 白質(zhì)(應(yīng)在體液中被檢測到)以一定濃度混合配制成，此標(biāo)準(zhǔn)品與蛋白芯片的結(jié) 合，經(jīng)過一系列反應(yīng)，產(chǎn)生的光信號在一個可比的范圍內(nèi)。所述封閉液中含有l(wèi)-20。/。BSA或1-20%牛奶粉。其中洗滌液配方為pH值在6.0至9.0之間PBS洗滌液其中含 0.1-0.5%Tween20，封閉液的作用是使固相載體的其他部位不能結(jié)合蛋白質(zhì)，從 而保證實驗數(shù)據(jù)的準(zhǔn)確性。本發(fā)明的多指標(biāo)并行檢測疾病的試劑盒的使用方法如下 1、用PBS稀釋液將待測的體液上清液稀釋， 一般稀釋5-20倍，使待測蛋 白質(zhì)濃度為0.5陽2mg/ml，取1—2.5 pi of NHS-succinimid畫Biotin (SIGMA) (100 pg/pl in ultra pure DMSO; water free),溶于25 — 100 ul待測蛋白質(zhì)在 200-550rpm和20-37度下振搖20-30分鐘，反應(yīng)形成A-labelled;2、吸取含2—20。/。BSA(SIGMA)標(biāo)記蛋白，照每平方厘米蛋白芯片約50ul 的體積滴加到蛋白芯片塑料試管中在200- 550 rpm下20-30溫度作用20-30分 鐘；使體液中的特定蛋白質(zhì)(A-labelled)與固定于蛋白芯片上的特異性蛋白(B)起
反應(yīng)，形成穩(wěn)定復(fù)合物B-A-labelled;3、 吸干反應(yīng)液，將蛋白芯片放在洗滌液PBS-T中振搖3-6分鐘，重復(fù)二到 三次；4、 吸取0.2 — 5 ul納米金溶液(BRITISH BIOCELL, PLANO公司)加入上述 蛋白芯片塑料試管中，在200-550 rpm下20-30溫度作用20-30分鐘；復(fù)合物B —A進(jìn)一步與多蛋白混合液中的特異性結(jié)合蛋白C反應(yīng)，形成穩(wěn)定復(fù)合物B — A-labelled—C;5、 吸干反應(yīng)液，將蛋白芯片放在洗滌液中振搖3-6分鐘，重復(fù)二到三次；6、 將20-100ul增強(qiáng)劑和20-100ul初始劑(BRITISH BIOCELL， PLANO公 司)加入上述蛋白芯片塑料試管中，通過塑料試管蛋白芯片儀(clondiag公司)于 每30秒—1分鐘的設(shè)置頻率連續(xù)記錄5min-lhr并通過計算機(jī)監(jiān)控和保存；數(shù)據(jù) 處理采用PartisianlconoClust軟件(clondiag公司)定量計算；如采用標(biāo)準(zhǔn)品作對 照，則被檢測樣品對標(biāo)準(zhǔn)品有強(qiáng)烈信號差異，表明該指標(biāo)呈陽性。本發(fā)明所用到的濃度單位除非特指均為W/V。本發(fā)明所述用于多指標(biāo)并行檢測的蛋白芯片其一個顯著的特點是引入多種 疾病指標(biāo)，使得檢測的準(zhǔn)確性大大增加?，F(xiàn)有的疾病指標(biāo)絕大多數(shù)是非特異性 指標(biāo)，不僅多個標(biāo)示物含量在同一疾病同時顯著升高，而且同一標(biāo)志物含量在 多種疾病皆會升高，這種情況導(dǎo)致疾病診斷上會出現(xiàn)誤診。就拿腫瘤的檢測來 說，現(xiàn)有的疾病標(biāo)志性蛋白均是非特異性指標(biāo)。就連公認(rèn)的原發(fā)性肝癌指標(biāo) AFP(甲胎蛋白)對肝癌的檢出率只有70%左右，并且AFP在某些睪丸癌、畸胎癌、 胃癌、胰腺癌等患者血清中也有明顯增高。因此提出了多種標(biāo)志物聯(lián)合檢測的 必要性。如胰腺癌CA19-9檢出率約60。/。，加上CA125、 CA50及DU-PAN則 可把檢出率提高到90%以上。再如肺癌單用CEA對肺癌診斷已有較高的特異 性，但如加上NSE、唾液酸、CEA、 SCC則特異性更高。本發(fā)明所述用于多指標(biāo)并行檢測的蛋白芯片的另一個優(yōu)點是靈敏度高，利 用化學(xué)發(fā)光反應(yīng)和增強(qiáng)發(fā)光反應(yīng)使得本蛋白芯片可檢測每毫升體液中含量僅有 lpg的目標(biāo)蛋白。這使得一些特異性高但在體液中含量很低的蛋白指標(biāo)可以被 用于臨床檢測，從而擴(kuò)大了臨床檢測指標(biāo)的選擇范圍。此外，本發(fā)明的蛋白芯片還具有高重復(fù)性(因試管芯片掌控性好，重復(fù)性
好)、高穩(wěn)定性(4匸可穩(wěn)定放置2年；37"C可穩(wěn)定放置1周)、高信號性、可適 于大量樣本、簡便(大約2小時內(nèi)完成實驗)、安全(比現(xiàn)在使用的熒光芯片無放射性，無污染)、價格便宜(比現(xiàn)在使用的熒光芯片便宜)等優(yōu)點。


圖1塑料蛋白芯片與待測樣品在不同反應(yīng)時間的結(jié)果示意圖。圖2用塑料蛋白芯片檢測待測樣品的數(shù)字化結(jié)果。
具體實施方式
下面結(jié)合具體實施例來進(jìn)一步描述本發(fā)明，本發(fā)明的優(yōu)點和特點將會隨著 描述而更為清楚。但這些實施例僅是范例性的，并不對本發(fā)明的范圍構(gòu)成任何 限制。本領(lǐng)域技術(shù)人員應(yīng)該理解的是，在不偏離本發(fā)明的精神和范圍下可以對 本發(fā)明技術(shù)方案的細(xì)節(jié)和形式進(jìn)行修改或替換，但這些修改和替換均落入本發(fā) 明的保護(hù)范圍內(nèi)。實施例試驗材料與體內(nèi)疾病性標(biāo)志蛋白特異結(jié)合的蛋白質(zhì)通過采集來自臨床腫瘤病人的血清，選用腫瘤系列抗體乳腺癌抗(CA15-3)，胃腸癌抗原(CA19-9)， 卵巢癌抗原(CA125)，細(xì)胞角質(zhì)素19(CYFRA21-1)，糖類抗原72-4(CA72-4)， 糖類抗原-50(CA-50)，磷癌相關(guān)抗原(SCC)，癌胚抗原(CEA)，前列腺特異性抗 原(PSA)，游離前列腺特異性抗原(E-PSA)，甲胎蛋白(AFP)(0-300ng/ml)，甲胎 蛋白(AFP)(0-1000ng/ml)，游離B人絨毛膜促性激素，鐵蛋白，B2微球 蛋白，神經(jīng)元特異性烯醇化酶(NSE)。實施例1試劑盒的制備 1、蛋白芯片的制備(1) 將CA19-9、、 CA50及DU-PAN分別以最少不低于1 ng/[d的濃度溶解于 pH值為6-10.0的PBS緩沖液中；(2) 用芯片自動點樣系統(tǒng)將溶解于PBS緩沖液中的蛋白質(zhì)分別點制在塑料試
管片基上，點樣密度范圍是25—200點/cm2， 一個點為一種蛋白質(zhì)，蛋白質(zhì)點樣 量的范圍為0.1 —10ng/點；其中，塑料試管大小為0.5ml-5ml,基片大小為0.2 — 3cm、(3) 放置過夜；用封閉液(含1%-10%奶粉的PBS溶液，pH值為6-10.0)將 蛋白芯片封閉10分鐘一1小時；(4) 密封保存于惰性氣體中，即得蛋白芯片。 2、試劑盒的組裝試劑盒包括塑料試管蛋白芯片；蛋白芯片的洗滌液(洗滌液含有PBS和 0.05-0.2X的Tween20， pH值在6.0-9.0之間)；生物素標(biāo)記液；鏈親和素反應(yīng)液； 起始劑和增強(qiáng)劑；actin;封閉液。將上述各組分分別包裝后，裝入到試劑盒， 即得。試驗例1試劑盒的臨床檢測試驗 檢測方法1. 按常規(guī)方法提取蛋白用pH7.4PBS稀釋液將待測的蛋白稀釋， 一般 稀釋5-20倍，使待測蛋白質(zhì)濃度為0.5-2mg/ml,取2pl of NHS-succinimid-Biotin (SIGMA) (100 pg/jil in ultra pure DMSO; water free),溶于25ul待測蛋白質(zhì)在 550rpm和30溫度下振搖20分鐘，反應(yīng)形成A-labelled.2. 吸取含10。/。BSA標(biāo)記蛋白，照每平方厘米蛋白芯片約50ul的體積滴 加到蛋白芯片塑料試管中在550 rpm下30溫度作用20分鐘.使體液中的特定蛋 白質(zhì)(A-labdled)與固定于蛋白芯片上的其特異性蛋白(B)起反應(yīng)，形成穩(wěn)定復(fù)合 物B-A-labelled.;3. 吸干反應(yīng)液，將蛋白芯片放在洗滌液pH7.4PBS-T(l。/。)中振搖3-6分鐘，重復(fù)二到三次。4. 吸取1 ul納米金溶液(BRITISH BIOCELL, PLANO公司)入上述蛋白芯片 塑料試管中，在550rpm下30溫度作用20分鐘。復(fù)合物B—A進(jìn)一步與多蛋白 混合液中的特異性結(jié)合蛋白C反應(yīng)，形成穩(wěn)定復(fù)合物B—A-labelled—C;5. 吸干反應(yīng)液，將蛋白芯片放在pH7.4PBS-T(0.05^吐溫一20);洗滌液中振 搖3-6分鐘，重復(fù)二到三次。6. 50ul增強(qiáng)劑和50ul初始劑(BRITISH BIOCELL, PLANO公司)加入上述蛋白 芯片塑料試管中，通過塑料試管蛋白芯片儀(clondiag公司)于每30秒一l分鐘的 設(shè)置頻率連續(xù)記錄5min-lhr并通過計算機(jī)監(jiān)控和保存。數(shù)據(jù)處理采用Econuclust 軟件(clondiag公司)定量計算；檢測結(jié)果表明本發(fā)明試劑盒檢測胰腺癌的準(zhǔn)確率達(dá)到97.5%。
權(quán)利要求
1、一種塑料試管蛋白芯片，包括塑料試管片基和固定于該芯片上的蛋白質(zhì)，塑料試管大小為0.5ml-5ml，基片大小為0.2-3cm2，其特征在于所述的蛋白質(zhì)能與體內(nèi)某一疾病的至少兩種標(biāo)志蛋白特異結(jié)合。
2、 按照權(quán)利要求1的塑料試管蛋白芯片，其特征在于所述的蛋白質(zhì)按 照下述特征固定在塑料試管的基片上分布密度是25—200點/cm2， 一個點為一 種蛋白質(zhì)；蛋白質(zhì)點樣的量是0.1ng/點-10ng/點。
3、 根據(jù)權(quán)利要求1的蛋白芯片，其特征在于，所述蛋白質(zhì)選自抗原、抗 體、受體、配體或多肽藥物中的任一種或多種。
4、 一種制備權(quán)利要求l所述塑料試管蛋白芯片的方法，包括 使用芯片自動點樣系統(tǒng)，通過物理吸附或共價結(jié)合的方式，將能夠與體內(nèi)某一疾病的標(biāo)志性蛋白特異結(jié)合的多種蛋白質(zhì)按照下述要求分別固定在塑料試 管上密度分布范圍25—200點/cm2;每個點的點樣量為O.l — lOng， 一個點 為一種蛋白質(zhì)。
5、 一種制備權(quán)利要求l所述塑料試管蛋白芯片的方法，包括(1) 將所要固定的蛋白質(zhì)溶解于pH值為6-10.0的PBS緩沖液中；(2) 用芯片自動點樣系統(tǒng)將溶解于PBS緩沖液中的蛋白質(zhì)點制在塑料試管片 基上，點樣密度范圍是25—200點/cm2， 一個點為一種蛋白質(zhì)，蛋白質(zhì)點樣量的 范圍為0.1 —10ng/點；其中，塑料試管大小為0.5ml-5ml,基片大小為0.2—3cm2;(3) 放置過夜；用封閉液將蛋白芯片封閉IO分鐘一I小時；(4) 密封保存于惰性氣體中，即得。
6、 一種檢測疾病的試劑盒，包括權(quán)利要求1所述的塑料試管蛋白芯片； 生物素標(biāo)記液；鏈親和素反應(yīng)液；產(chǎn)生并增強(qiáng)化學(xué)發(fā)光反應(yīng)的組合物；蛋白芯 片的洗滌液；被檢蛋白質(zhì)的標(biāo)準(zhǔn)品；封閉液。
7、按照權(quán)利要求6的試劑盒，其特征在于所述蛋白芯片的洗滌液含有 PBS和0.05-0.2%的吐溫20， pH值在6.0-9.0之間；所述的鏈親和素反應(yīng)液為耦 聯(lián)納米；所述的產(chǎn)生并增強(qiáng)化學(xué)發(fā)光反應(yīng)的組合物為起始劑和增強(qiáng)劑；所述封 閉液中含有l(wèi)-20n/。BSA或1-20°/。牛奶粉。
8、 按照權(quán)利要求6的試劑盒，其特征在于被檢測標(biāo)準(zhǔn)品為actin蛋白。
9、 權(quán)利要求6-8任何一項試劑盒的使用方法，包括(1) 、用PBS稀釋液將待測的體液上清液稀釋5-20倍，使待測蛋白質(zhì)濃度為 0.5-2mg/ml，取1—2.5 jnl of NHS-succinimid-Biotin溶于25 —lOOul待測蛋白質(zhì) 在200-550rpm和20-37溫度下振搖20-30分鐘，反應(yīng)形成A-labelled;(2) 、吸取含2—20。/。BSA標(biāo)記蛋白，按照每平方厘米蛋白芯片50ul的體積 滴加到蛋白芯片塑料試管中在200-550 rpm下20-30溫度作用20-30分鐘；使 體液中的特定蛋白質(zhì)A-labdled與固定于蛋白芯片上的特異性蛋白B起反應(yīng)，形 成穩(wěn)定復(fù)合物B-A-labelled;(3) 、吸干反應(yīng)液，將蛋白芯片放在洗滌液PBS-T中振搖3-6分鐘，重復(fù)二 到三次；(4) 、吸取0,2—5ul納米金溶液加入上述蛋白芯片塑料試管中，在200-550 rpm下20-30溫度作用20-30分鐘；復(fù)合物B—A進(jìn)一步與多蛋白混合液中的特 異性結(jié)合蛋白C反應(yīng)，形成穩(wěn)定復(fù)合物B—A-labelled—C;(5) 、吸干反應(yīng)液，將蛋白芯片放在洗滌液中振搖3-6分鐘，重復(fù)二到三次；(6) 、 將20-100ul增強(qiáng)劑和20-100ul初始劑加入上述蛋白芯片塑料試管中， 通過塑料試管蛋白芯片儀于每30秒一l分鐘的設(shè)置頻率連續(xù)記錄5min-lhr并通 過計算機(jī)監(jiān)控和保存；數(shù)據(jù)處理采用Partisian IconoClust軟件定量計算；如釆用 標(biāo)準(zhǔn)品作對照，則被檢測樣品對標(biāo)準(zhǔn)品有強(qiáng)烈信號差異，表明該指標(biāo)呈陽性。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種塑料試管蛋白芯片、其制備方法及應(yīng)用。本發(fā)明還公開了主要以該塑料試管蛋白芯片為主要組分的檢測試劑盒以及該試劑盒在診斷或檢測疾病中的應(yīng)用。本發(fā)明塑料試管蛋白芯片引入多種疾病檢測指標(biāo)，檢測疾病的準(zhǔn)確性大為提高。此外，本發(fā)明蛋白芯片還具有高靈敏度、高重復(fù)性、高穩(wěn)定性、高信號性、可適于大量樣本、簡便、安全、價格便宜等優(yōu)點。
文檔編號C12Q1/68GK101126759SQ20071015183
公開日2008年2月20日 申請日期2007年9月21日 優(yōu)先權(quán)日2007年9月21日
發(fā)明者孫民富, 琳 王 申請人:王 琳;孫民富