專利名稱：一種采用化學(xué)-酶法制備¹⁵N-L-酪氨酸的方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種"N-L-酪氨酸的制備方法，具體地說是涉及一種以廉價(jià)出 發(fā)物有機(jī)合成相應(yīng)的酮酸、采用生物催化方法以"N-L-天冬氨酸或"N-L-谷氨 酸為氨基供體來制備穩(wěn)定同位素標(biāo)記的"N-L-酪氨酸的方法。屬于穩(wěn)定性同位 素標(biāo)記化合物生產(chǎn)領(lǐng)域，涉及到有機(jī)合成、微生物酶和生物下游分離技術(shù)。
背景技術(shù)：
15N穩(wěn)定同位素標(biāo)記的生化物質(zhì)在臨床醫(yī)學(xué)和生物學(xué)研究中具有極其重要 的用途。它可取代對(duì)人體有危害的放射性元素大量用于氣相色譜、質(zhì)譜和核磁 共振的分析測(cè)試中，以及作為示蹤劑幫助確定動(dòng)物體和人體中氨基酸代謝的各 類動(dòng)態(tài)參數(shù)。隨著人類基因圖譜的測(cè)定、蛋白質(zhì)工程的發(fā)展及其他相關(guān)科學(xué)的 快速發(fā)展，"N-L-酪氨酸等標(biāo)記氨基酸將在醫(yī)學(xué)、藥物學(xué)、生物學(xué)、生命科學(xué)、 農(nóng)業(yè)科學(xué)、有機(jī)化學(xué)等領(lǐng)域得到更為廣泛的應(yīng)用。
L-酪氨酸國(guó)內(nèi)外都采用化學(xué)合成法、發(fā)酵法、酶法以及化學(xué)-酶法來生產(chǎn)。 其中有代表性的如采用化學(xué)合成法從對(duì)羥基苯甲醛出發(fā)經(jīng)縮合、加氫、水解來 制得；利用基因工程技術(shù)構(gòu)建攜帶有莽草酸激酶基因的酪氨酸工程菌株發(fā)酵生 產(chǎn)("代謝控制發(fā)酵"，中國(guó)輕工出版社，P338， 1998年)；還有利用細(xì)菌中 酪氨酸苯酚裂解酶催化苯酚、丙酮酸和氨來合成等(Biochemical and Biophysical Research Communications, 46 (2) , 370-374(1972))。但是，這些方法不是 涉及繁瑣的合成、拆分步驟，或者大量的菌種篩選工作且發(fā)酵產(chǎn)量難提高，就 是由于底物的限制不能連續(xù)化生產(chǎn)。近年來興起的化學(xué)-酶法以廉價(jià)出發(fā)物有機(jī) 合成相應(yīng)的酮酸，再采用生物催化方法在天冬氨酸轉(zhuǎn)氨酶的作用下以L-天冬氨 酸或L-谷氨酸為氨基供體轉(zhuǎn)氨制得L-酪氨酸。此法以成本低廉，氮源利用率高，
通用性廣(以此法可類似合成1^苯丙氨酸和1^色氨酸)的優(yōu)點(diǎn)特別適合于1 丄-酪氨酸的生產(chǎn)。雖然國(guó)內(nèi)的南京化工大學(xué)(南京化工大學(xué)學(xué)報(bào)，21 (3) ， 66
一67 ( 1999))對(duì)此路線有一定研究，但報(bào)道不深入，僅對(duì)酮酸酶法轉(zhuǎn)化L-酪氨酸進(jìn)行了初步的研究，而采用此法制備"N-L-酪氨酸國(guó)內(nèi)外均未見報(bào)道。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的就是為了克服上述現(xiàn)有技術(shù)存在的不足之處而提供一種成 本低廉，15N利用率高，通用性廣，產(chǎn)品豐度下降少的，采用化學(xué)一酶法制備 15N—L —酪氨酸的方法。
本發(fā)明的目的可以通過以下技術(shù)方案來實(shí)現(xiàn)
一種采用化學(xué)—酶法制備"N—L一酪氨酸的方法，其特征在于，該方法包 括以下工藝步驟
(1) 菌體細(xì)胞的制備
a) 發(fā)酵產(chǎn)酶所采用的微生物包括大腸桿菌(&c/^n'c/^ co//)、弗氏擰檬 酸細(xì)菌(C7加^f"er戶evm/〃)、惡臭假單胞菌(尸sewcto/wo"os);
b) 斜面培養(yǎng)
培養(yǎng)基為營(yíng)養(yǎng)肉汁瓊脂培養(yǎng)基(g/L):蛋白胨10.0，牛肉膏3.0，氯化鈉 5.0，瓊脂15.0，蒸餾水l.OL， pH7.0，定容至l.OL，分裝，O.lMPa、 121。C滅 菌20分鐘，菌種接入后28'C 32'C培養(yǎng)16 24小時(shí)；
c) 發(fā)酵培養(yǎng)
以碳源、氮源、無機(jī)物配置成發(fā)酵培養(yǎng)基，調(diào)節(jié)其pH值6 9，滅菌后接 入斜面種子，于150 260rpm，32°C 40°C，培養(yǎng)16 24小時(shí)； 裝液量為50ml/500ml，滅菌條件為0.1MPa， 121°C， 20分鐘;
d) 發(fā)酵液離心得濕菌體，經(jīng)生理鹽水洗滌離心后加入磷酸吡眵醛溶液活化 1 3小時(shí)，備用；
(2) 酶反應(yīng)
底物反應(yīng)液底物4-羥基苯丙酮酸的濃度為0.2% 5%,加入金屬離子及 15N氮源后用氨水或NaOH調(diào)節(jié)pH值為7.5 8.5;
將上述處理所得游離整體細(xì)胞作為酶源加入底物溶液中，菌體加入量 0.5% 2.5%，在30。C 45。C下反應(yīng)20 28小時(shí)，轉(zhuǎn)速110 150rpm'，
(3) 提取精制及"N的回收
反應(yīng)結(jié)束后，將酶反應(yīng)液調(diào)pH至1 3后進(jìn)行離心，上清液用乙酸乙酯等 體積萃取3次，所得水相于旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀上趕酯濃縮，直至蒸干；然后加水溶解 至體積為200 300ml，上732樹脂柱，水洗后用0.05M 0.40M的NH4C1洗脫， 分別收集"N-L-酪氨酸和"N-L-天冬氨酸或"N-L-谷氨酸單斑，濃縮后再上柱 除鹽，洗脫得到各自的洗脫液；經(jīng)趕氨濃縮，活性炭脫色后，用乙醇和水進(jìn)行 結(jié)晶；結(jié)晶液冷至室溫后，放冰箱冷藏過夜，第二天抽濾得白色晶體，洗滌、 抽干，將晶體刮入容器內(nèi)，于5(TC 60'C真空烘干；對(duì)產(chǎn)品進(jìn)行純度、豐度檢 測(cè)，純度<98.5%可再行重結(jié)晶，最終得到"N-L-酪氨酸產(chǎn)品及回收的"N-L-天 冬氨酸或"N-L-谷氨酸。
步驟(1)中所述的微生物為能產(chǎn)天冬氨酸轉(zhuǎn)氨酶的菌類。
步驟(1)中所述的菌包括ATCC8739、 ATCC11303、 ATCC950。
步驟(1)中所述的碳源包括葡萄糖、果糖、蔗糖、含這些糖的糖蜜、淀 粉；所述的氮源包括氯化銨、硫酸銨、醋酸銨、磷酸銨、氨水，無機(jī)物以及酵 母提取物、玉米漿、蛋白胨、牛肉膏的一種或多種；所述的無機(jī)物包括磷酸一 氫鉀、磷酸二氫鉀、磷酸鎂、硫酸鎂、氯化鈉、硫酸錳、硫酸銅的一種或多種。
步驟(1)中所述的發(fā)酵培養(yǎng)條件pH值最好是6.5 8.5，轉(zhuǎn)速最好是以 180 220rpm，溫度優(yōu)選35°C 39°C 。
步驟(1)中所述的磷酸吡哆醛溶液的濃度為lmmol/L 5mmol/L。
步驟(2)中所述的底物為4-羥基苯丙酮酸，底物溶液中所用的"N氮源為 "N-L-天冬氨酸或"N-L-谷氨酸，作為氨基供體。
步驟(2)中所述的金屬離子包括Mi^+、 Fe2+、 Zn2+、 C的一種或多種， 濃度為l 5mmol/L。
步驟(2)中所述的底物4-羥基苯丙酮酸的濃度以1% 3%為較佳。
步驟(2)中所述的酶反應(yīng)溫度為35t: 4(TC較佳。
與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明以合成的4-羥基苯丙酮酸為底物，以"N-L-天冬 氨酸或"N-L-谷氨酸為氨基供體，在天冬氨酸轉(zhuǎn)氨酶的作用下得到含"N-L-酪 氨酸的反應(yīng)液，經(jīng)萃取及上柱分離，提取到"N-L-酪氨酸產(chǎn)品，本發(fā)明的技術(shù) 方法制備"N-L-氨基酸，具有成本低廉，15N利用率高，通用性廣，產(chǎn)品豐度 下降少的特點(diǎn)，體現(xiàn)出了化學(xué)一酶法制備"N-L-氨基酸的優(yōu)越性，提高了產(chǎn)品
的市場(chǎng)競(jìng)爭(zhēng)力。
具體實(shí)施例方式
下面結(jié)合具體實(shí)施例，對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步說明。
實(shí)施例1
將斜面培養(yǎng)18小時(shí)的菌接入發(fā)酵培養(yǎng)基，500ml三角瓶中裝50ml培養(yǎng)基， 于37。C恒溫?fù)u床培養(yǎng)24小時(shí)，轉(zhuǎn)速220rpm。培養(yǎng)所得發(fā)酵液于4800 rpm離心 30分鐘，傾去上清液，菌體經(jīng)生理鹽水洗滌離心后加入磷酸吡哆醛溶液(濃度 為lmmol/L)活化2小時(shí)，取得到的菌體懸浮液加入到底物濃度為1%、含豐 度為10.12%的"N-L-天冬氨酸0.50X、硫酸亞鐵0.02X的底物溶液200ml中， 用NaOH調(diào)節(jié)pH值為7.8，于35。C恒溫反應(yīng)23小時(shí)。得到的反應(yīng)液經(jīng)離心， 上清液用乙酸乙酯等體積萃取，水相趕酯濃縮后上柱，水洗后用0.05M的NH4C1 洗脫，分別收集"N-L-天冬氨酸和"N-L-酪氨酸單斑，濃縮后再上柱除鹽，洗 脫得到各自的洗脫液。經(jīng)趕氨濃縮，活性炭脫色后，用乙醇和水進(jìn)行結(jié)晶。結(jié) 晶液冷至室溫后，放冰箱冷藏過夜，第二天抽濾得白色晶體，洗滌、抽干，將 晶體刮入容器內(nèi)，于5(TC真空烘干。得到"N-L-酪氨酸產(chǎn)品0.87克，豐度為 10.03%，僅比原料絕對(duì)下降0.09%，相對(duì)下降0.9%，純度大于98.5°/。?；厥?得到"N-L-天冬氨酸0.22克，收率為81.9%。
實(shí)施例2
取與實(shí)施例1 一樣培養(yǎng)的濕菌體懸浮液，加入到底物濃度為0.8%，含豐 度為99.06%的"N-L-天冬氨酸0.50%、硫酸錳0.02%的底物溶液400ml中， 用NaOH調(diào)節(jié)pH值為8.5，于37t:恒溫反應(yīng)24小時(shí)。得到的反應(yīng)液經(jīng)離心， 上清液用乙酸乙酯等體積萃取，水相趕酯濃縮后上柱，水洗后用0.25M的NH4C1 洗脫，分別收集"N-L-天冬氨酸和"N-L-酪氨酸單斑，濃縮后再上柱除鹽，洗 脫得到各自的洗脫液。經(jīng)趕氨濃縮，活性炭脫色后，用乙醇和水進(jìn)行結(jié)晶。結(jié) 晶液冷至室溫后，放冰箱冷藏過夜，第二天抽濾得白色晶體，洗滌、抽干，將 晶體刮入容器內(nèi)，于6(TC真空烘干。得到"N-L-酪氨酸產(chǎn)品1.42克，豐度為98.43%,比原料絕對(duì)下降0.63%，純度大于98.5%，收率為80.7%，回收得到 "N-L-天冬氨酸0.71克。
實(shí)施例3
一種采用化學(xué)一酶法制備"N — L一酪氨酸的方法，該方法步驟如下
(1) 菌體細(xì)胞的制備稱取葡萄糖18g，蛋白胨12.0g，牛肉膏3.0g，磷酸 二氫鉀0.8g，調(diào)節(jié)pH至7.0,用蒸餾水定容至l.OL，分裝，0.1MPa(12rC)滅菌 20分鐘，菌種接入后于轉(zhuǎn)速150rpm， 32"C培養(yǎng)16小時(shí)，所得發(fā)酵液離心得濕 菌體，經(jīng)生理鹽水洗滌離心后加入濃度為lmmol/L的磷酸吡哆醛溶液活化1小 時(shí)，得菌體懸浮液備用；
(2) 酶反應(yīng)在濃度為0.2%的4-羥基苯丙酮酸中，加入0.01%的金屬離 子Mn+及0.1X的"N — L一天冬氨酸后，調(diào)節(jié)pH值為7.5，配成底物反應(yīng)液， 將步驟(1)中所得菌體懸浮液加入該底物反應(yīng)液中，使菌體加入量0.5%，在 3(TC下，反應(yīng)20小時(shí)，轉(zhuǎn)速110rpm;
(3) 提取精制及"N的回收將步驟(2)中反應(yīng)結(jié)束后的酶反應(yīng)液調(diào)pH 至1 3后進(jìn)行離心，上清液用乙酸乙脂等體積萃取3次，所得水相于旋轉(zhuǎn)蒸 發(fā)儀上趕酯濃縮，直至蒸干，然后加水溶解至體積為200ml，上732樹脂柱， 水洗后用0.05M的NH4C1洗脫，分別收集"N-L-天冬氨酸和"N-L-酪氨酸單斑， 濃縮后再上柱除鹽，洗脫得到各自的洗脫液，經(jīng)趕氨濃縮，活性炭脫色后，用 乙醇和水進(jìn)行結(jié)晶，結(jié)晶液冷至室溫后，放冰箱冷藏過夜，第二天抽濾得白色 晶體，洗滌、抽干，將晶體刮入容器內(nèi)，于5(TC真空烘干，對(duì)產(chǎn)品進(jìn)行純度、 豐度檢測(cè)，最終得到純度大于98.5%的"N-L-酪氨酸產(chǎn)品及回收到0.25g的 "N-L-天冬氨酸。
實(shí)施例4
一種采用化學(xué)一酶法制備"N—L一酪氨酸的方法，該方法步驟如下
(1) 菌體細(xì)胞的制備稱取葡萄糖21g、玉米漿10g、硫酸鎂0.6g，磷酸 二氫鉀1.2g，加蒸餾水配置成發(fā)酵培養(yǎng)基，定容至1L，分裝，在0.1Mpa下滅 菌20分鐘，接入菌種后于轉(zhuǎn)速180rpm， 35°C，培養(yǎng)20小時(shí)，所得發(fā)酵液離 心得濕菌體，經(jīng)生理鹽水洗滌離心后加入濃度為lmmol/L的磷酸吡哆醛溶液活 化2小時(shí)，得菌體懸浮液備用；
(2) 酶反應(yīng)在濃度為1%的4-羥基苯丙酮酸中，加入0.01%的金屬離子 及0.6X的"N氮源"N—L—天冬氨酸后，調(diào)節(jié)pH值為7.8，配成底物反應(yīng)液，
將步驟(1)中所得菌體懸浮液加入該底物反應(yīng)液中，使菌體加入量1%。在35 t:下，反應(yīng)28小時(shí)，轉(zhuǎn)速150rpm;
(3)提取精制及15N的回收將步驟(2)中反應(yīng)結(jié)束后的酶反應(yīng)液調(diào)pH 至3后進(jìn)行離心，上清液用乙酸乙脂等體積萃取3次，所得水相于旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀 上趕酯濃縮，直至蒸干，然后加水溶解至體積為300ml，上732樹脂柱，水洗 后用0.40M的NH4C1洗脫，分別收集"N-L-天冬氨酸和"N-L-酪氨酸單斑，濃 縮后再上柱除鹽，洗脫得到各自的洗脫液，經(jīng)趕氨濃縮，活性炭脫色后，用乙 醇和水進(jìn)行結(jié)晶，結(jié)晶液冷至室溫后，放冰箱冷藏過夜，第二天抽濾得白色晶 體，洗滌、抽干，將晶體刮入容器內(nèi)，于6(TC真空烘干，對(duì)產(chǎn)品進(jìn)行純度、豐 度檢測(cè)，最終得到純度〉98.5n/。"N-L-酪氨酸產(chǎn)品及回收0.20g的"N-L-天冬氨 酸。
實(shí)施例5
一種采用化學(xué)一酶法制備"N—L一酪氨酸的方法，該方法步驟如下
(1) 菌體細(xì)胞的制備稱取果糖25g、玉米漿3g，醋酸銨15g、硫酸鎂 0.5g，磷酸一氫鉀0.8g，加蒸餾水配置成發(fā)酵培養(yǎng)基，定容至1L，分裝，在O.lMpa 下滅菌20分鐘，接入菌種后于轉(zhuǎn)速260rpm， 40°C ，培養(yǎng)24小時(shí)，所得發(fā)酵液 離心得濕菌體，經(jīng)生理鹽水洗滌離心后加入濃度為5mmol/L的磷酸吡哆醛溶液 活化3小時(shí)，得菌體懸浮液備用；
(2) 酶反應(yīng)在濃度為5%的底物4-羥基苯丙酮酸中，加入0.05%的金屬 離子Fe"及2^的"N氮源"N-L-谷氨酸后，調(diào)節(jié)pH值為8.2，配成底物反應(yīng) 液，將步驟(1)中所得菌體懸浮液加入該底物反應(yīng)液中，使菌體加入量2.5%， 在5(TC下，反應(yīng)28小時(shí)，轉(zhuǎn)速150rpm;
(3) 提取精制及"N的回收將步驟(2)中反應(yīng)結(jié)束后的酶反應(yīng)液調(diào)pH 至3后進(jìn)行離心，上清液用乙酸乙脂等體積萃取3次，所得水相于旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀 上趕酯濃縮，直至蒸干，然后加水溶解至體積為200ml，上732樹脂柱，水洗 后用0.40M的NH4C1洗脫，分別收集"N-L-谷氨酸和"N-L-酪氨酸單斑，濃縮 后再上柱除鹽，洗脫得到各自的洗脫液，經(jīng)趕氨濃縮，活性炭脫色后，用乙醇
和水進(jìn)行結(jié)晶，結(jié)晶液冷至室溫后，放冰箱冷藏過夜，第二天抽濾得白色晶體， 洗滌、抽干，將晶體刮入容器內(nèi)，于5(TC真空烘干，對(duì)產(chǎn)品進(jìn)行純度、豐度檢
領(lǐng)IJ，純度<98.5%可再行重結(jié)晶，最終得到"N-L-酪氨酸產(chǎn)品及回收的"N-L-谷氨酸。
權(quán)利要求
1. 一種采用化學(xué)一酶法制備15N-L-酪氨酸的方法，其特征在于，該方法包括以下工藝步驟(1)菌體細(xì)胞的制備a)發(fā)酵產(chǎn)酶所采用的微生物包括大腸桿菌(Escherichia coli)、弗氏檸檬酸細(xì)菌(Citrobacter frevndii)、惡臭假單胞菌(Pseudomonas putida)；b)斜面培養(yǎng)培養(yǎng)基為營(yíng)養(yǎng)肉汁瓊脂培養(yǎng)基(g/L)蛋白胨10.0，牛肉膏3.0，氯化鈉5.0，瓊脂15.0，蒸餾水1.0L，pH7.0，定容至1.0L，分裝，0.1MPa、121℃滅菌20分鐘，菌種接入后28℃～32℃培養(yǎng)16～24小時(shí)；c)發(fā)酵培養(yǎng)以碳源、氮源、無機(jī)物配置成發(fā)酵培養(yǎng)基，調(diào)節(jié)其pH值6～9，滅菌后接入斜面種子，于150～260rpm，32℃～40℃，培養(yǎng)16～24小時(shí)；裝液量為50ml/500ml，滅菌條件為0.1MPa，121℃，20分鐘；d)發(fā)酵液離心得濕菌體，經(jīng)生理鹽水洗滌離心后加入磷酸吡哆醛溶液活化1～3小時(shí)，備用；(2)酶反應(yīng)底物反應(yīng)液底物4-羥基苯丙酮酸的濃度為0.2％～5％，加入金屬離子及15N氮源后用氨水或NaOH調(diào)節(jié)pH值為7.5～8.5；將上述處理所得游離整體細(xì)胞作為酶源加入底物溶液中，菌體加入量0.5％～2.5％，在30℃～45℃下反應(yīng)20～28小時(shí)，轉(zhuǎn)速110～150rpm；(3)提取精制及15N的回收反應(yīng)結(jié)束后，將酶反應(yīng)液調(diào)pH至1～3后進(jìn)行離心，上清液用乙酸乙酯等體積萃取3次，所得水相于旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀上趕酯濃縮，直至蒸干；然后加水溶解至體積為200～300ml，上732樹脂柱，水洗后用0.05M～0.40M的NH4Cl洗脫，分別收集15N-L-酪氨酸和15N-L-天冬氨酸或15N-L-谷氨酸單斑，濃縮后再上柱除鹽，洗脫得到各自的洗脫液；經(jīng)趕氨濃縮，活性炭脫色后，用乙醇和水進(jìn)行結(jié)晶；結(jié)晶液冷至室溫后，放冰箱冷藏過夜，第二天抽濾得白色晶體，洗滌、抽干，將晶體刮入容器內(nèi)，于50℃～60℃真空烘干；對(duì)產(chǎn)品進(jìn)行純度、豐度檢測(cè)，純度＜98.5％可再行重結(jié)晶，最終得到15N-L-酪氨酸產(chǎn)品及回收的15N-L-天冬氨酸或15N-L-谷氨酸。
2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種采用化學(xué)一酶法制備"N—L一酪氨酸的方 法，其特征在于，步驟(1)中所述的微生物為能產(chǎn)天冬氨酸轉(zhuǎn)氨酶的菌類。
3. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種采用化學(xué)一酶法制備"N—L一酪氨酸的方 法，其特征在于，步驟(l)中所述的菌包括ATCC8739、 ATCC11303、 ATCC950。
4. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種采用化學(xué)一酶法制備"N—L一酪氨酸的方 法，其特征在于，步驟(1)中所述的碳源包括葡萄糖、果糖、蔗糖、含這些 糖的糖蜜、淀粉；所述的氮源包括氯化銨、硫酸銨、醋酸銨、磷酸銨、氨水， 無機(jī)物以及酵母提取物、玉米漿、蛋白胨、牛肉膏的一種或多種；所述的無機(jī) 物包括磷酸一氫鉀、磷酸二氫鉀、磷酸鎂、硫酸鎂、氯化鈉、硫酸錳、硫酸銅 的一種或多種。
5. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種采用化學(xué)一酶法制備"N—L一酪氨酸的方 法，其特征在于，步驟(1)中所述的發(fā)酵培養(yǎng)條件pH值最好是6.5 8.5， 轉(zhuǎn)速最好是以180 220rpm，溫度優(yōu)選35°C 39°C 。
6. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種采用化學(xué)一酶法制備"N—L一酪氨酸的方 法，其特征在于，步驟(1)中所述的磷酸吡眵醛溶液的濃度為lmmol/L 5mmol/L。
7. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種采用化學(xué)一酶法制備"N — L一酪氨酸的方 法，其特征在于，步驟(2)中所述的底物為4-羥基苯丙酮酸，底物溶液中所 用的"N氮源為"N-L-天冬氨酸或"N-L-谷氨酸，作為氨基供體。
8. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種采用化學(xué)一酶法制備"N—L一酪氨酸的方 法，其特征在于，步驟(2)中所述的金屬離子包括Mn2+、 Fe2+、 Zn2+、 Co2+ 的一種或多種，濃度為l 5mmol/L。
9. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種采用化學(xué)一酶法制備"N—L一酪氨酸的方 法，其特征在于，步驟(2)中所述的底物4-羥基苯丙酮酸的濃度以1% 3%為較佳。
10. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種采用化學(xué)一酶法制備"N—L一酪氨酸的方 法，其特征在于，步驟(2)中所述的酶反應(yīng)溫度為35。C 40。C較佳。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種采用化學(xué)-酶法制備¹⁵N-L-酪氨酸的方法，該方法包括以下工藝步驟(1)菌體細(xì)胞的制備；(2)酶反應(yīng)；(3)提取精制及¹⁵N的回收。與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明具有成本低廉，¹⁵N利用率高，通用性廣，產(chǎn)品豐度下降少等特點(diǎn)。
文檔編號(hào)C12P13/00GK101205549SQ200610147819
公開日2008年6月25日 申請(qǐng)日期2006年12月22日 優(yōu)先權(quán)日2006年12月22日
發(fā)明者侯靜華, 徐建飛, 李良君, 杜曉寧 申請(qǐng)人:上海化工研究院