專利名稱：鹿角多肽或龜板多肽的制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及鹿角或龜板的深加工技術(shù)，具體的指是一種利用酶解技術(shù)將鹿角膠或龜板膠制備成鹿角多肽或龜板多肽的方法。
背景技術(shù)：
目前，人們對于鹿角或龜板這類具有藥用價值的動物角、骨、殼的利用，不外乎局限于以下三種方式一是將其浸泡在酒中以制成滋補性質(zhì)的藥酒；二是將其與其他中藥組份配伍在一起煎煮以治療某些疾病；三是將其熬成鹿角膠或龜板膠入以藥用或作為補品。前二種方式中鹿角或龜板所溶出的有效成份太低，浪費極大。后一種方式中鹿角膠或龜板膠的有效成份以膠原蛋白的形式存在，而這種膠原蛋白普遍存在著消化、吸收率低的缺陷，人體無法對其充分利用；同時，這種膠原蛋白的加工性能也較差，如市面上所銷售的鹿龜酒常常會產(chǎn)生一些沉淀物，這就是鹿角膠或龜板膠在酒中的溶解度受溫度影響所致，這些不利因素大大限制了鹿角膠或龜板膠這種優(yōu)良資源的充分利用。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的就是要解決鹿角膠或龜板膠這類膠原蛋白存在的消化、吸收難和加工性能差的問題，提供一種利用酶解技術(shù)將鹿角膠或龜板膠制備成消化、吸收率高的鹿角多肽或龜板多肽的方法，更好地發(fā)揮其藥用價值。
為實現(xiàn)上述目的，本發(fā)明所設(shè)計的鹿角多肽或龜板多肽的制備方法，依次包括如下步驟1)用水將鹿角膠或龜板膠溶解成質(zhì)量百分比濃度為8～10％的鹿角膠或龜板膠水溶液；2)將鹿角膠或龜板膠水溶液煮沸3～5分鐘，使其充分溶解、變性，待其溫度冷卻至45～58℃時，調(diào)節(jié)其pH值至7.5～8；3)按鹿角膠或龜板膠質(zhì)量的5～6％加入胰酶進(jìn)行酶解，酶解時間為6～8小時，得到第一次酶解液；4)將第一次酶解液煮沸3～5分鐘滅胰酶的活性，然后將其溫度降低至45℃～58℃；
5)再按鹿角膠或龜板膠質(zhì)量的5～6％加入中性蛋白酶進(jìn)行酶解，酶解時間為3～4小時，得到第二次酶解液；6)將第二次酶解液煮沸3～5分鐘滅中性蛋白酶的活性；7)將經(jīng)過酶滅活處理的第二次酶解液過濾、濃縮、真空干燥，最后研磨成為鹿角多肽粉末或龜板多肽粉末。
上述步驟2)中優(yōu)選質(zhì)量百分比濃度為10～35％的氫氧化鈣溶液來調(diào)節(jié)鹿角膠或龜板膠水溶液的pH值。一方面氫氧化鈣溶液中的鈣離子是胰酶的激活劑，有利于酶活性的充分發(fā)揮，可進(jìn)一步促進(jìn)鹿角膠或龜板膠的酶解；另一方面氫氧化鈣溶液沒有其他堿性溶液所具有的咸味，無須以后脫鹽處理；同時氫氧化鈣溶液呈弱堿性，對pH值的調(diào)節(jié)可操作性好，且成本十分低廉。
上述步驟3)和步驟5)中酶解的最適宜溫度應(yīng)該始終維持在45℃～58℃。一方面胰酶或中性蛋白酶在此溫度下酶解活力較強，另一方面鹿角膠或龜板膠在此溫度下溶解性能較好，易于將其酶解成小分子量的鹿角多肽或龜板多肽。
本發(fā)明的酶解機(jī)理為鹿角膠或龜板膠水溶液經(jīng)過煮沸后，鹿角膠或龜板膠中的膠原蛋白原來穩(wěn)定的三級分子結(jié)構(gòu)被破壞掉，變成性狀不穩(wěn)定的二級或一級分子結(jié)構(gòu)，這樣有利于胰酶或中性蛋白酶與之發(fā)生反應(yīng)。胰酶是內(nèi)肽酶，可以定點酶切精氨酸、賴氨酸等堿性氨基酸，而中性蛋白酶可以定點酶切一些疏水性氨基酸，這樣在不同的時間段雙重酶切，可以把鹿角膠或龜板膠等大分子量的膠原蛋白酶切成小分子量的多肽片段。
本發(fā)明的優(yōu)點在于選用兩種不同性質(zhì)的酶分階段對鹿角膠或龜板膠中不同性質(zhì)的大分子膠原蛋白進(jìn)行定向酶切，可增加酶切位點和酶的利用效率，將鹿角膠或龜板膠充分酶切成為小分子量的鹿角多肽或龜板多肽。通過Sephadex G-25凝膠層析圖的峰形和SDS-PAGE聚丙烯酰胺凝膠電泳圖也可以清晰地印證，大分子量的鹿角膠或龜板膠膠原蛋白經(jīng)過酶解作用后，得到了小分子量較集中的鹿角多肽或龜板多肽產(chǎn)物。這種多肽產(chǎn)物不僅保留了原有的生物活性物質(zhì)，而且較蛋白質(zhì)、氨基酸更易被人體消化吸收，更能發(fā)揮其藥用價值。另外，鹿角多肽或龜板多肽產(chǎn)物具有很好溶解性，其加工性能與鹿角膠或龜板膠相比有了很大的改善，將其添加到功能酒中，不僅可以增強其滋補、營養(yǎng)、抗疲勞的功效，而且可以提高功能酒的理化指標(biāo)，如使酒色美觀、澄清等。并且，本發(fā)明的制備方法工藝及其生產(chǎn)設(shè)備簡單，適合規(guī)?；a(chǎn)，產(chǎn)品得率高。


圖1為鹿角膠的Sephadex G-25凝膠層析圖；圖2為鹿角肽的Sephadex G-25凝膠層析圖；圖3為龜板膠的Sephadex G-25凝膠層析圖；圖4為龜板肽的Sephadex G-25凝膠層析圖；圖5為鹿角肽、龜板肽、鹿角膠、龜板膠的SDS-PAGE聚丙烯酰胺凝膠電泳圖。圖中1.鹿角肽5μl 2.鹿角肽10μl 3.鹿角肽15μl 4.龜板肽10μl 5.龜板肽15μl 6.分子量標(biāo)準(zhǔn) 7.鹿角膠5μl 8.鹿角膠10μl 9.鹿角膠15μl 10.龜板膠5μl 11.龜板膠10μl 12.龜板膠15μl。
具體實施例方式
以下結(jié)合附圖和具體實施例對本發(fā)明所提供的鹿角多肽或龜板多肽的制備方法作進(jìn)一步的詳細(xì)描述從圖1～4中鹿角膠、鹿角肽、龜板膠、龜板肽實驗的Sephadex G-25凝膠層析圖對比可以看出經(jīng)酶解所得的鹿角肽、龜板肽與原料鹿角膠、龜板膠相比，其峰的數(shù)量有所增加，并且從其出峰時間上可斷定比原料的分子量小。故此可以說明經(jīng)過酶解后，大分子量的鹿角膠或龜板膠變成了小分子量的鹿角多肽或龜板多肽。
從圖5中鹿角肽、龜板肽、鹿角膠、龜板膠實驗的SDS-PAGE聚丙烯酰胺凝膠電泳圖中的條帶可見鹿角肽分子量主要分布在1000以下，在6560～14200之間也有一定的分布；龜板肽分子量在20000、17000、10000、5000、3000、1000左右都有條帶顯示。而鹿角膠分子量主要在14200～30000之間，龜板膠分子量主要分布在20000以上。故此可以說明，經(jīng)過酶解后大分子量的鹿角膠或龜板膠變成了小分子量的鹿角多肽或龜板多肽。
實施例1用蒸餾水將鹿角膠溶解成質(zhì)量百分比濃度為10％的鹿角膠水溶液，煮沸5分鐘，待其溫度冷卻至45～58℃時，置于55℃的恒溫水浴鍋中；溫度平衡后，先用質(zhì)量百分比濃度為25％的氫氧化鈣溶液調(diào)節(jié)其pH值至7.8；然后按鹿角膠質(zhì)量的6％加入胰酶進(jìn)行酶解，酶解溫度維持在55℃，酶解時間為8小時，得到第一次酶解液，并將第一次酶解液煮沸5分鐘滅胰酶的活性，待其溫度降低至45℃～58℃時，重新置于55℃的恒溫水浴鍋中；再按鹿角膠質(zhì)量的6％加入標(biāo)號為A.S1398的中性蛋白酶進(jìn)行酶解，酶解溫度維持在55℃，酶解時間為3小時，得到第二次酶解液，并將第二次酶解液煮沸5分鐘滅中性蛋白酶的活性；接著將經(jīng)過酶滅活處理的第二次酶解液過濾、濃縮、75～80℃條件下真空干燥，最后將其研磨成為褐色的鹿角多肽粉末。該鹿角多肽粉末配以其它輔料，即可灌制成保健膠囊。也可以將該鹿角多肽粉末直接添加到牛奶、果汁等飲料中，或面包、火腿等食品中，制成鹿角多肽功能性食品。
實施例2用蒸餾水將龜板膠溶解成質(zhì)量百分比濃度為8％的龜板膠水溶液，煮沸3分鐘，待其溫度冷卻至45～58℃時，置于55℃的恒溫水浴鍋中；溫度平衡后，先用質(zhì)量百分比濃度為30％的氫氧化鈣溶液調(diào)節(jié)其pH值至8；然后按龜板膠質(zhì)量的5％加入胰酶進(jìn)行酶解，酶解溫度維持在55℃，酶解時間為6小時，得到第一次酶解液，并將第一次酶解液煮沸3分鐘滅胰酶的活性，待其溫度降低至45℃～58℃時，重新置于55℃的恒溫水浴鍋中；再按龜板膠質(zhì)量的5％加入標(biāo)號為A.S1398的中性蛋白酶進(jìn)行酶解，酶解溫度維持在55℃，酶解時間為4小時，得到第二次酶解液，并將第二次酶解液煮沸4分鐘滅中性蛋白酶的活性；接著將經(jīng)過酶滅活處理的第二次酶解液過濾、濃縮、75～80℃條件下真空干燥，最后將其研磨成為淺黃色的龜板多肽粉末。該龜板多肽粉同樣也可以制成保健膠囊或作為其他食品的功能性添加劑。
當(dāng)然，也可以將經(jīng)過上述酶滅活處理的第二次酶解液過濾后直接勾對到酒中，配制成含鹿角多肽或龜板多肽的功能酒。
權(quán)利要求
1.一種鹿角多肽或龜板多肽的制備方法，其特征在于該方法依次包括如下步驟1)用水將鹿角膠或龜板膠溶解成質(zhì)量百分比濃度為8～10％的鹿角膠或龜板膠水溶液；2)將鹿角膠或龜板膠水溶液煮沸3～5分鐘，使其充分溶解、變性，待其溫度冷卻至45～58℃時，調(diào)節(jié)其pH值至7.5～8；3)按鹿角膠或龜板膠質(zhì)量的5～6％加入胰酶進(jìn)行酶解，酶解時間為6～8小時，得到第一次酶解液；4)將第一次酶解液煮沸3～5分鐘滅胰酶的活性，然后將其溫度降低至45℃～58℃；5)再按鹿角膠或龜板膠質(zhì)量的5～6％加入中性蛋白酶進(jìn)行酶解，酶解時間為3～4小時，得到第二次酶解液；6)將第二次酶解液煮沸3～5分鐘滅中性蛋白酶的活性；7)將經(jīng)過酶滅活處理的第二次酶解液過濾、濃縮、真空干燥，最后研磨成為鹿角多肽粉末或龜板多肽粉末。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的鹿角多肽或龜板多肽的制備方法，其特征在于所說的步驟2)中采用質(zhì)量百分比濃度為10～35％的氫氧化鈣溶液來調(diào)節(jié)鹿角膠或龜板膠水溶液的pH值。
3.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的鹿角多肽或龜板多肽的制備方法，其特征在于所說的步驟3)和步驟5)中酶解的溫度始終維持45～58℃。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種鹿角多肽或龜板多肽的制備方法，主要解決鹿角膠或龜板膠這類膠原蛋白存在消化吸收難和加工性能差的缺陷。該方法是先用水將鹿角膠或龜板膠溶解，煮沸，冷卻后置于45～58℃的恒溫中調(diào)節(jié)其pH值至7.5～8；然后加入胰酶進(jìn)行第一次酶解，所得酶解液滅胰酶活性，重新置于45～58℃的恒溫中；再加入中性蛋白酶進(jìn)行第二次酶解，所得第二次酶解液滅中性蛋白酶活性；接著將其過濾、濃縮、真空干燥，最后研磨成為鹿角多肽粉末或龜板多肽粉末。該方法利用定向酶切技術(shù)，成功地將鹿角膠或龜板膠加工成了容易消化吸收的小分子量鹿角多肽或龜板多肽，大幅提高了其藥用價值。酶解所得產(chǎn)物可廣泛應(yīng)用于食品、飲料或酒水中。
文檔編號C12P21/00GK1584044SQ0312530
公開日2005年2月23日 申請日期2003年8月21日 優(yōu)先權(quán)日2003年8月21日
發(fā)明者陳棟梁 申請人:武漢天天好生物制品有限公司