專利名稱：細菌易位抑制劑以及細菌易位抑制方法
技術領域：
本發(fā)明涉及抑制細菌越過腸道屏障進行侵襲的細菌易位(translocation)抑制劑以及細菌易位的抑制方法。
背景技術：
幾乎所有接觸包括人在內(nèi)的動物的微生物都是存在于動物腸道內(nèi)的微生物。以人為例，每1g腸道內(nèi)容物，在小腸的下端細菌數(shù)達到105～107，在大腸達到109～1011，細菌的種類據(jù)稱大致有100種。這些細菌中的有害細菌侵入生物體內(nèi)進行繁殖時，會引起所謂的條件性感染和多臟器功能不全、敗血癥等嚴重的疾病。
作為抑制這些疾病的方法之一，認為是抑制這些有害細菌透過腸粘膜侵襲腹腔、內(nèi)臟器官等。
抑制這種侵襲的結(jié)構(gòu)是腸道屏障。腸道屏障包括腸道免疫組織和解剖學結(jié)構(gòu)。
腸道免疫組織是與消化道附屬淋巴器官、分泌型IgA、吞噬細胞等有關的腸道周圍特有的免疫組織。腸道屏障的解剖學結(jié)構(gòu)是指粘膜的粘液層和上皮細胞等對細菌透過腸粘膜的物理性抑制。
具體地說，例如在細胞表層存在有構(gòu)成細胞膜的一部分的蛋白、糖脂類、粘多糖類等糖類復合物。它們被稱為糖衣或糖萼。這些結(jié)構(gòu)發(fā)達則可以物理性地防御細菌的接觸和攻擊，使粘膜細胞的腸道屏障能力得到提高，降低上皮細胞的壞死、脫落的頻率，降低對宿主生物體的負擔。
我們將細菌越過腸道屏障侵入宿主生物體內(nèi)稱為細菌易位(BTL)。BTL的途徑被認為有淋巴系統(tǒng)和血管兩條途徑。但是從多數(shù)動物實驗、臨床研究可以看出，淋巴系統(tǒng)是主要的途徑。對于粘膜損害為輕度、由于細菌的異常繁殖而發(fā)生的BTL，細菌走淋巴途徑；而伴有出血性休克等大的侵襲的BTL，則認為也另外有細菌直接進入血液中的途徑。在淋巴性BTL中，細菌只侵襲至腸系膜淋巴結(jié)(以下簡稱為MLN)時，并不會顯示嚴重的病態(tài)。但是，MLN中的細菌量超過可處理量時，細菌進一步侵襲血管系統(tǒng)和內(nèi)臟器官，引發(fā)嚴重的疾病。因此，抑制侵入MLN的BTL與以BTL為起因的疾病的預防緊密相連。
禽畜肉用動物發(fā)生BTL時，涉及到食用部分的污染，不僅可能成為食物中毒的原因，也使正常的生長受阻，導致生產(chǎn)率降低。
現(xiàn)有的對發(fā)生BTL的人或動物的治療方法例如有給予抗生素、疫苗、干擾素等。但是給予抗生素會導致出現(xiàn)耐藥菌、副作用等問題。疫苗由于其效果是基于對每種感染菌的特異性作用機制而產(chǎn)生，因此對于通過給予疫苗來抑制BTL，需要給予對應于所有的感染菌的疫苗。干擾素價格高，可以對人使用，但從經(jīng)濟的觀點來看，對于禽畜肉用動物則難以使用。
發(fā)明的公開本發(fā)明的目的在于提供簡便而且有效地抑制BTL的藥劑、以及簡便且有效的BTL抑制方法。
根據(jù)本發(fā)明，提供含有枯草芽孢桿菌(Bacillus subtilis)的活菌體作為有效成分的BTL抑制劑。
還根據(jù)本發(fā)明提供上述BTL抑制劑，所述BTL抑制劑的特征在于上述枯草芽孢桿菌是枯草芽孢桿菌C-3102(通商產(chǎn)業(yè)省工業(yè)技術院微生物工業(yè)技術研究所保藏號FERM BP-1096)。
進一步根據(jù)本發(fā)明提供上述BTL抑制劑，所述BTL抑制劑的特征在于上述枯草芽孢桿菌C-3102具有在經(jīng)過提取、純化、用序列1和序列2的引物進行PCR處理時生成約700bps片段的染色體DNA。
此外，根據(jù)本發(fā)明提供BTL的抑制方法，該方法包括將上述BTL抑制劑經(jīng)口給予的步驟。
附圖的簡要說明

圖1是顯示實施例3中健康對照組回腸觀察結(jié)果的顯微鏡照片。
圖2是圖1中觀察的粘膜上皮細胞的壞死和剝離脫落以及嗜中性粒細胞和淋巴細胞對固有層浸潤的說明圖。
圖3是顯示實施例3中健康攝取組回腸觀察結(jié)果的顯微鏡照片。
圖4是圖3中觀察的粘膜上皮細胞的壞死和剝離脫落以及嗜中性粒細胞和淋巴細胞對固有層浸潤的說明圖。
圖5是顯示實施例3中健康對照組盲腸觀察結(jié)果的顯微鏡照片。
圖6是圖5中觀察的粘膜上皮細胞的壞死和剝離脫落以及嗜中性粒細胞和淋巴細胞對固有層浸潤的說明圖。
圖7是顯示實施例3中健康攝取組盲腸觀察結(jié)果的顯微鏡照片。
圖8是圖7中觀察的粘膜上皮細胞的壞死和剝離脫落以及嗜中性粒細胞和淋巴細胞對固有層浸潤的說明圖。
圖9是顯示試驗例1中PCR擴增產(chǎn)物的電泳結(jié)果的照片。
實施發(fā)明的方式本發(fā)明的BTL抑制劑含有枯草芽孢桿菌(Bacillus subtilis)的活菌體作為有效成分。本說明書中的“枯草芽孢桿菌活菌體”是指枯草芽孢桿菌的活芽孢和/或營養(yǎng)細胞。
枯草芽孢桿菌的細菌學性質(zhì)記載于Bergey’s Manual of BacteriologyVol.11(1986)等中。上述活菌體可以具體地使用例如具有以下特征的菌體。
(1)革蘭氏陽性(2)形成卵圓形芽孢(3)桿菌(4)游動性有
(5)好氣性(6)過氧化氫酶陽性(7)50℃下生長+(8)pH 5.7下生長+(9)對枸櫞酸鹽的利用+(10)是否可由糖類生成酸阿拉伯糖、葡萄糖、木糖、甘露糖醇+(11)VP反應+(12)對淀粉的水解+(13)對硝酸鹽的還原性+(14)吲哚的生成-(15)對明膠的水解+(16)對酪蛋白的水解+(17)在液體培養(yǎng)基上形成菌膜+(18)對牛乳的凝固-(19)對牛乳的胨化+枯草芽孢桿菌的BTL抑制作用根據(jù)菌株不同而多少有差異。作為本發(fā)明BTL抑制劑有效成分給予的枯草桿菌的菌株可以優(yōu)選例如枯草芽孢桿菌C-3102?？莶菅挎邨U菌C-3102于1985年12月25日保藏于通商產(chǎn)業(yè)省工業(yè)技術院微生物工業(yè)技術研究所，保藏號FERM BP-1096。通商產(chǎn)業(yè)省工業(yè)技術院微生物工業(yè)技術研究所更名為現(xiàn)在的獨立行政法人產(chǎn)業(yè)技術綜合研究所特許生物保藏中心(日本國茨城縣筑波市東1-1-1中央第6)。公眾可以通過現(xiàn)在的特許生物寄托中心利用枯草芽孢桿菌C-3102。
枯草芽孢桿菌C-3102具有下述特征使用下述序列1和序列2的PCR引物進行染色體DNA的PCR反應，則可擴增約700bps的片段。序列1和序列2的引物本來是擴增編碼解淀粉芽孢桿菌(B.amyloliquefaciens)淀粉酶的DNA而開發(fā)的引物，因此對于其他的枯草芽孢桿菌，采用該PCR引物不會發(fā)生擴增。由枯草芽孢桿菌C-3102擴增的約700bps的片段具有與淀粉酶的序列不相同的特征，可以明確地與其他的枯草芽孢桿菌區(qū)別開。
序列15’-GCCCCGCACATACGAAAAGACTGGCTGAAA-3’序列25’-GGATCCCACGTTGTGATTAAAAGCAGCGAT-3’作為培養(yǎng)基，上述枯草芽孢桿菌可以使用微生物培養(yǎng)中常用的含有碳源、氮源和無機物等的液體培養(yǎng)基或固體培養(yǎng)基進行培養(yǎng)。碳源只要是枯草芽孢桿菌可利用的碳源即可，可以例舉葡萄糖、果糖、蔗糖、淀粉、糖蜜等；另外氮源可以例舉蛋白胨、酪蛋白水解產(chǎn)物、肉膏、硫酸銨等。并且，根據(jù)需要可以添加磷酸、鉀、鎂、鈣、鈉、鐵和錳等的鹽類，維生素類，氨基酸類，表面活性劑等。培養(yǎng)條件優(yōu)選有氧條件，培養(yǎng)裝置優(yōu)選例如小型發(fā)酵罐等的通氣攪拌液體培養(yǎng)裝置、架式固體培養(yǎng)、自動制曲培養(yǎng)裝置等，培養(yǎng)溫度為20～50℃，特別優(yōu)選30～45℃，培養(yǎng)時間可以為12小時～7天，培養(yǎng)的初始pH可以為pH 5～9，特別優(yōu)選pH 6～8。
通過以上方法得到的培養(yǎng)物本身即可作為本發(fā)明的BTL抑制劑。另外，上述培養(yǎng)物的濃縮物、由上述培養(yǎng)物中分離的菌體或向其中添加賦形劑等添加劑制成干燥粉末、顆粒、片劑等制劑，均可作為本發(fā)明的BTL抑制劑使用。上述賦形劑并無特別限定，可以使用碳酸鈣、玉米渣、玉米粉、脫脂米糠、麥麩、脫脂奶粉等。
本發(fā)明的BTL抑制劑優(yōu)選含有106～1011個/g枯草芽孢桿菌活菌體，即芽孢和/或營養(yǎng)細胞。
本發(fā)明的BTL抑制劑的給藥對象并無特別限定，可以例舉牛、豬、雞等禽畜肉用動物等動物和人等。在這些給藥對象中，特別可以例舉腸道內(nèi)細菌的異常繁殖、宿主免疫機能低下、絨毛萎縮等解剖學上的腸道粘膜損害等有發(fā)生BTL的危險的對象。
給予本發(fā)明的BTL抑制劑的形式并無特別限定，可以是液體、粉末、顆粒、片劑等形式。特別是給藥對象為人時，片劑或顆?？梢苑奖愕亟o予，因而優(yōu)選。另外給藥途徑并無特別限定，可以是經(jīng)口給藥等。特別是對于家畜動物，通過以粉末的形式混入飼料經(jīng)口給藥，很容易服用，因而優(yōu)選。
本發(fā)明的BTL抑制劑的給藥量以枯草芽孢桿菌活菌體計為106～1011個/天，特別優(yōu)選108～1010個/天。特別是對于禽畜肉用動物，優(yōu)選將制成粉末的BTL抑制劑添加到飼料中，使活菌數(shù)為103～109個/g，特別是104～107個/g。給藥量為106個/天以上，則可獲得充分的效果，1011個/天以下，則可以有效地地達到BTL的抑制效果。
本發(fā)明的BTL抑制劑可以增強給藥對象的腸道屏障功能，抑制腸道內(nèi)有害細菌對腸道膜淋巴結(jié)的侵襲，結(jié)果可以預防所謂條件性感染和多臟器功能不全、敗血癥等。通過對人給藥，可以對人的健康做出貢獻，另外，通過對禽畜肉用動物等動物給藥，可以提供防止上述污染、安全的食用肉。
實施例以下通過實施例和比較例進行更詳細的說明，但本發(fā)明并不受這些限定。
實施例1將18只從5周齡開始進行1周的預先飼養(yǎng)、使腸內(nèi)菌群一致的6周齡小鼠(系統(tǒng)名ICR，雄性)分為對照組(10只)和攝取組(8只)2組，對對照組給予Clea Japan制造的飼料“CE-2”，對攝取組給予在飼料“CE-2”中添加了3×107CFU/g枯草芽孢桿菌C-3102(通商產(chǎn)業(yè)省工業(yè)技術院微生物工業(yè)技術研究所保藏號FERM BP-1096)的飼料。自給藥第14日起，通過對兩組小鼠給予含有0.8mg/ml青霉素、2mg/ml鏈霉素的水作為飲用水給予抗生素。開始給予抗生素的第3天，鏡檢糞便，確認腸內(nèi)細菌已排除，然后按照108CFU/只的量給予鏈霉素抗性大腸桿菌(E.coli C25；由美國典型培養(yǎng)物保藏中心(American Type CultureCollection)購入；保藏號PTA-1896；保藏日2000年5月19日，現(xiàn)在公眾可得到)，之后給予只含有鏈霉素的水作為飲用水。自給予鏈霉素抗性大腸桿菌4天后，按照下述的操作處死并解剖小鼠，測定MLN和盲腸中的菌數(shù)。
盲腸中的菌數(shù)并沒有很大的差別，但攝取組的MLN菌數(shù)顯著減少，為對照組的49％。
表1

(菌數(shù)的測定方法)將小鼠通過頸椎脫臼處死，用70％酒精噴霧，然后切開腹部表皮，再次用70％酒精消毒腹膜，切開腹膜，取出MLN和盲腸。在該過程中，在每次改變切開部位時都要將使用的手術器具浸泡于100％酒精中，經(jīng)火焰滅菌后使用。
在1ml的BHI液養(yǎng)基中，將取出的MLN勻漿，分別取0.2ml涂布于3個含鏈霉素的DHL培養(yǎng)基平板上，在37℃培養(yǎng)20小時。由出現(xiàn)的菌落數(shù)計算出每1個MLN的菌數(shù)。
另外，用剪刀剪取盲腸，將其放入裝有玻璃球和10ml BHI液體培養(yǎng)基的50ml試管中，測定包括盲腸內(nèi)容物的盲腸重量，然后劇烈攪拌，使內(nèi)容物懸浮。用PBS(-)(商品名，株式會社ROMAN工業(yè)社制造，9.57mM)將懸浮物稀釋100倍，將該操作重復3次，稀釋為100萬倍，將最終的稀釋液分別取0.1ml，涂布于3個含鏈霉素的DHL培養(yǎng)基平板上，在37℃培養(yǎng)20小時。由出現(xiàn)的菌落數(shù)計算出盲腸內(nèi)容物中的菌數(shù)。
實施例2將30只從5周齡開始進行1周的預先飼養(yǎng)、使腸內(nèi)菌群一致的6周齡小鼠(系統(tǒng)名ICR，雄性)分為對照組(15只)和攝取組(15只)2組，對對照組給予Clea Jpan制造的飼料“CE-2”，對攝取組給予飼料“CE-2”中添加了3×107CFU/g枯草芽孢桿菌C-3102(通商產(chǎn)業(yè)省工業(yè)技術院微生物工業(yè)技術研究所保藏號FERM BP-1096)的飼料。自給藥第14日起，通過對兩組小鼠給予含有0.8mg/ml青霉素、2mg/ml鏈霉素的水作為飲用水給予抗生素。開始給予抗生素的第3天，鏡檢糞便，確認腸內(nèi)細菌已被排除，然后按照108CFU/只的量給予與實施例1所用的相同的鏈霉素抗性大腸桿菌，之后給予只含有鏈霉素的水作為飲用水。自給予鏈霉素抗性大腸桿菌4天后，按照與實施例1相同的操作處死并解剖小鼠，測定MLN和盲腸中的菌數(shù)。
盲腸中的菌數(shù)并沒有很大的差別，但攝取組的MLN菌數(shù)顯著減少，為對照組的62％，在5％顯著性水準下有統(tǒng)計學顯著性差異。
表2

*P＜0.05實施例3將39只從5周齡開始進行1周的預先飼養(yǎng)、使腸內(nèi)菌群一致的6周齡小鼠(系統(tǒng)名ICR，雄性)分為BTL對照組(18只)、BTL攝取組(17只)、健康對照組(2只)和健康攝取組(2只)4組，對BTL對照組和健康對照組給予Clea Japan制造的飼料“CE-2”，對BTL攝取組和健康攝取組給予飼料“CE-2”中添加了3×107CFU/g枯草芽孢桿菌C-3102(通商產(chǎn)業(yè)省工業(yè)技術院微生物工業(yè)技術研究所保藏號FERMBP-1096)的飼料。自給藥第14日起，通過對BTL對照組和BTL攝取組小鼠給予含有0.8mg/ml青霉素、2.0mg/ml鏈霉素的水作為飲用水給予抗生素。開始給予抗生素的第3天，鏡檢糞便，確認腸內(nèi)菌已排除，然后按照0.63×108CFU/只的量給予與實施例1中使用的菌相同的鏈霉素抗性大腸桿菌，之后給予只含有鏈霉素的水作為飲用水。自給予鏈霉素抗性大腸桿菌4天后，處死并解剖小鼠。對于健康對照組和健康組的小鼠不給予抗生素和鏈霉素抗性大腸桿菌，與BTL對照組和BTL攝取組同一天處死并解剖。取出回腸和盲腸，在10％體積的福爾馬林緩沖液(pH 7.2)中固定。之后按照常規(guī)方法進行石蠟包埋，制成厚度為5μm的切片，進行蘇木精-曙紅染色和PAS染色，在光學顯微鏡下觀察。
對于各組的回腸和盲腸的粘膜上皮細胞的壞死和剝離脫落以及對固有層的細胞浸潤，以沒有為0、少數(shù)為1、中等程度為2、多數(shù)為3進行打分，求出平均分數(shù)，并對BTL攝取組和BTL對照組求偏差。結(jié)果如表3所示。
表3回腸

盲腸

*5％顯著性水準的顯著性差異在BTL攝取組和BTL對照組兩組中，強烈引發(fā)了BTL。對BTL攝取組給予了本發(fā)明的BTL抑制劑，對BTL對照組并未給予。將此作對比，則與BTL對照組相比，BTL攝取組的粘膜上皮細胞壞死、剝離脫落以及對固有層的浸潤都少。對于回腸的壞死和盲腸的剝離脫落，可見5％顯著性水準的顯著性差異。與健康對照組相比，健康攝取組的粘膜上皮細胞的壞死、剝離脫落和對固有層的浸潤也少。
另外，與BTL攝取組和對照組相比，在健康攝取組和健康對照組中多見粘膜上皮細胞的壞死和剝離脫落以及嗜中性粒細胞和淋巴細胞對固有層的浸潤。認為這可能是由于在BTL對照組和BTL攝取組中，觀察是在因抗生素的作用使腸道發(fā)生的損害處于恢復時期進行的緣故。
健康對照組和健康攝取組的回腸顯微鏡照片分別在圖1和圖3中顯示，健康對照組和健康攝取組的盲腸顯微鏡照片分別在圖5和圖7中顯示。圖1、3、5和7中觀察的粘膜上皮細胞的壞死和剝離脫落以及嗜中性粒細胞和淋巴細胞對固有層的浸潤的位置分別在圖2、4、6和8中顯示。
圖1～8的數(shù)字分別表示下述內(nèi)容。
11嗜曙紅染色的核濃縮、壞死、脫落部位12核消失、壞死、脫落部位13嗜中性粒細胞、淋巴細胞浸潤部位31細菌32脫落的部位51細菌52壞死部位71細菌在健康對照組的回場和盲腸中，粘膜上皮細胞的壞死和剝離脫落明顯，多見嗜中性粒細胞和淋巴細胞對固有層的浸潤(參照圖1和圖2以及圖5和圖6)。而健康攝取組的回腸和盲腸與健康對照組相比，也顯示出粘膜上皮細胞的壞死和剝離脫落以及嗜中性粒細胞和淋巴細胞對固有層的浸潤少的傾向，觀察到粘膜上皮細胞表面有輪廓分明的厚糖衣(參照圖3和圖4以及圖7和圖8)。由這些結(jié)果可知，通過給予本發(fā)明的BTL抑制劑，使得腸道粘膜上皮細胞的壞死和剝離脫落減少，使細菌等對腸道組織的侵入減少，并使嗜中性粒細胞和淋巴細胞對固有層的浸潤減少。
試驗例1將枯草芽孢桿菌C-3102菌株、解淀粉芽孢桿菌ATCC23350菌株(模式菌株)、解淀粉芽孢桿菌IFO14141菌株、解淀粉芽孢桿菌IFO3022菌株、枯草芽孢桿菌IFO3009菌株、枯草芽孢桿菌IFO12112菌株、枯草芽孢桿菌ATCC9372菌株和枯草芽孢桿菌ATCC6051菌株(模式菌株)共8種菌株分別在10ml的TS培養(yǎng)基上培養(yǎng)過夜，收集菌體并洗凈。
公眾可由美國典型培養(yǎng)物保藏中心購入解淀粉芽孢桿菌ATCC23350菌株、枯草芽孢桿菌ATCC9372菌株和枯草芽孢桿菌ATCC6051菌株，可由財團法人發(fā)酵研究所購入解淀粉芽孢桿菌IFO14141菌株、解淀粉芽孢桿菌IFO3022菌株、枯草芽孢桿菌IFO3009菌株和枯草芽孢桿菌IFO12112菌株。
用酵母-革蘭氏陽性菌用DNA制備試劑盒“GenTLE”(寶酒造制)提取并純化培養(yǎng)的各個菌株的染色體DNA，得到染色體DNA溶液。提取和純化過程除了將真空干燥后的染色體DNA沉淀用20μl的TE緩沖液溶解之外，均按照DNA制備試劑盒的使用說明書進行。
如表4所示，將得到的染色體DNA溶液與其他的試劑混合，配制PCR處理用試樣。
表4染色體DNA溶液 1μl10×PCR緩沖液 5μldNTP混合液 8μl(各2.5mM)引物1 0.2μM(總量中濃度)引物2 0.2μM(總量中濃度)Taq聚合酶 0.5μl(5單位/μl)無菌水 34.5μl總量 50μl
表4中，“10×PCR緩沖液”使用寶酒造公司制造的“TaKaRaLA-PCR kit Ver2”所附帶的該試劑。另外，引物1和引物2分別使用上述序列1和序列2所示的引物。這些是作為在解淀粉芽孢桿菌中擴增編碼α-淀粉酶的約2KB的DNA片段而開發(fā)的、具有下述序列的DNA。
序列15’-GCCCCGCACATACGAAAAGACTGGCTGAAA-3’序列25’-GGATCCCACGTTGTGATTAAAAGCAGCGAT-3’使用寶酒造公司制造的“TaKaRa LA-PCR kit Ver2”和“TaKaRa PCRThermal Cycler PERSONAL”熱循環(huán)儀，對該PCR處理用試樣進行PCR處理，得到PCR擴增產(chǎn)物。PCR處理的溫度條件如表5所示。
表594℃ 1分鐘 72℃ 10分鐘4℃ 反應停止取5μl得到的PCR擴增產(chǎn)物，用1.2％瓊脂糖凝膠、水平型電泳儀Mupid2(ADVANCE Co.，Ltd.)進行電泳。使用λ-DNA的HindII消化產(chǎn)物作為分子量標記。電泳結(jié)果如圖9所示。
在圖9中，上排數(shù)字(1～9)表示泳道編號。各泳道中分別電泳了下述試樣。
泳道1 分子量標記(λ-DNA HindII消化產(chǎn)物)可見泳道1中有6條條帶，遷移距離短的3條明顯的條帶分別是標記為23,130bp(遷移距離最短的)、9,416bp(遷移距離第二短的)和6,557bp(遷移距離第三短的)的。接下來的一條暗條帶是標記為4,361bp的。從該暗帶到遷移距離長、稍微明顯的兩條帶分別標記為2,322bp(遷移距離第二長的)和2,027bp(遷移距離最長的)標記的。
泳道2來源于枯草芽孢桿菌C-3102菌株的DNA擴增產(chǎn)物泳道3來源于解淀粉芽孢桿菌ATCC23350菌株(模式菌株)的DNA擴增產(chǎn)物泳道4來源于解淀粉芽孢桿菌IFO14141菌株的DNA擴增產(chǎn)物泳道5來源于解淀粉芽孢桿菌IFO3022菌株的DNA擴增產(chǎn)物泳道6來源于枯草芽孢桿菌IFO3009菌株的DNA擴增產(chǎn)物泳道7來源于枯草芽孢桿菌IFO12112菌株的DNA擴增產(chǎn)物泳道8來源于枯草芽孢桿菌ATCC9372菌株的DNA擴增產(chǎn)物泳道9來源于枯草芽孢桿菌ATCC6051菌株(模式菌株)的DNA擴增產(chǎn)物在解淀粉芽孢桿菌的各菌株試樣的電泳結(jié)果(泳道3、4、5)中，可以確認約2kb片段的擴增產(chǎn)物。在枯草芽孢桿菌IFO3009菌株、枯草芽孢桿菌IFO12112菌株、枯草芽孢桿菌ATCC9372菌株和枯草芽孢桿菌ATCC6051菌株試樣的電泳結(jié)果(泳道6、7、8、9)中未檢出擴增片段。但在枯草芽孢桿菌C-3102菌株試樣的電泳結(jié)果(泳道2)中，可以確認具有其他菌株所沒有的約700bp的明確的條帶。
序列表<110>卡爾皮斯株式會社(Calpis Co.，Ltd.)<120>細菌易位抑制劑以及細菌易位抑制方法<160>2<210>1<211>30<212>DNA<213>Bacillus amyloliquefaciens<400>
gcccc gcaca tacga aaaga ctggc tgaaa 30<210>2<211>30<212>DNA<213>Bacillus amyloliquefaciens<400>
ggatc ccacg ttgtg attaa aagca gcgat 30
權(quán)利要求
1.一種細菌易位抑制劑，所述抑制劑含有枯草芽孢桿菌的活菌體作為有效成分。
2.權(quán)利要求1所述的細菌易位抑制劑，其特征在于所述枯草芽孢桿菌是枯草芽孢桿菌C-3102(生命工學工業(yè)技術研究所保藏號FERM BP-1096)。
3.權(quán)利要求2所述的細菌易位抑制劑，其特征在于所述枯草芽孢桿菌C-3102具有通過提取并純化染色體DNA、用序列1和序列2的引物進行PCR處理而生成約700bp片段的染色體DNA。
4.一種細菌易位的抑制方法，所述抑制方法是將有效量的權(quán)利要求1～3中任一項的細菌易位抑制劑經(jīng)口給予需要抑制的給藥對象。
5.權(quán)利要求4所述的細菌易位抑制方法，其中所述給藥對象是除了人以外的動物。
6.權(quán)利要求4所述的細菌易位抑制方法，其中所述有效量以枯草芽孢桿菌活菌體計為106～1011個/天。
全文摘要
本發(fā)明涉及含有枯草芽孢桿菌的活菌體作為有效成分的細菌易位抑制劑和包括將所述細菌易位抑制劑經(jīng)口給予的細菌易位抑制方法。
文檔編號C12N1/21GK1494426SQ0280597
公開日2004年5月5日 申請日期2002年3月5日 優(yōu)先權(quán)日2001年3月5日
發(fā)明者丸橋敏弘, 今林寬和, 和, 丸田喜義, 義 申請人:卡爾皮斯株式會社