專利名稱：用活性炭進(jìn)行微過濾的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及在過濾發(fā)酵產(chǎn)物時(shí)提高加工能力的方法。
背景技術(shù)：
最近幾年，微過濾已經(jīng)成為眾多研究與發(fā)展的目標(biāo)。在硬件及濾膜方面的發(fā)展被瞄定了，但是，在回收發(fā)酵生物分子方面仍有兩個(gè)問題限制著微過濾的應(yīng)用。低透過量及通常也低的透過率是影響成功的因素。一般說(shuō)來(lái)，可以基于微過濾為生產(chǎn)這類產(chǎn)物開發(fā)出一種方法，但是在很多情況下，這種方法不能與傳統(tǒng)的固液分離法如離心法或轉(zhuǎn)鼓真空過濾進(jìn)行競(jìng)爭(zhēng)。在為了保持高透過率和高透過量而需要將臟東西頻繁進(jìn)行現(xiàn)場(chǎng)清洗的大規(guī)模連續(xù)方法的場(chǎng)合，這種情況尤其如此。
特別在生物技術(shù)工業(yè)中，在發(fā)酵培養(yǎng)物的微過濾中產(chǎn)生堵塞，已變成幾乎不可解決的問題。這是由于這樣一種事實(shí)發(fā)酵培養(yǎng)物除了含有令人感興趣的產(chǎn)物外，還含有眾多雜質(zhì)例如別的分子內(nèi)和分子外新陳代謝產(chǎn)物、溶解的細(xì)胞、基質(zhì)組份、核酸、去泡劑等等。
因此，很多目標(biāo)已經(jīng)瞄準(zhǔn)在開發(fā)親水膜方面，瞄準(zhǔn)在采用如反洗/反沖工藝和降低機(jī)械剪切力技術(shù)的改進(jìn)微過濾硬件方面，作為更成功的開發(fā)。
在操作方面，瞄準(zhǔn)對(duì)橫跨膜壓力的精確控制以及對(duì)最大透過流量的控制，因?yàn)檫@些參數(shù)對(duì)減少膜的堵塞也是重要的。此外，操作溫度和pH的最優(yōu)化也被證明對(duì)改進(jìn)微過濾操作是重要參數(shù)。
然而，在濾膜，硬件及操作參數(shù)方面，盡管多年來(lái)已取得很多進(jìn)展，但是為了開發(fā)成功的微過濾法堵塞問題在今天仍被認(rèn)為是需予以解決的一個(gè)最大問題。對(duì)于源自發(fā)酵培養(yǎng)物的產(chǎn)物的微過濾來(lái)說(shuō)，尤其如此。
因此，本發(fā)明的目的是在發(fā)酵產(chǎn)物的微過濾中使堵塞減至最少。
本發(fā)明的概述意想不到地發(fā)現(xiàn)，當(dāng)微過濾發(fā)酵產(chǎn)物時(shí)，活性炭及高的溫度能提高加工能力。
因此，本發(fā)明提供一種發(fā)酵產(chǎn)物的微過濾方法，此方法包括在微過濾操作之前或之中在微過濾溫度25℃至65℃下往發(fā)酵產(chǎn)物溶液中加入活性炭。
本發(fā)明的詳細(xì)說(shuō)明本發(fā)明探討在發(fā)酵產(chǎn)物微過濾方法中的一種新的和意想不到效果的減少堵塞的方法。
業(yè)已驚人地發(fā)現(xiàn)，在微過濾加工中，當(dāng)在微過濾操作之前或之中加入活性炭，能有效地將堵塞減至最少。
也已發(fā)現(xiàn)，在加入活性炭及利用高溫加工方法之間，存在協(xié)同作用。已發(fā)現(xiàn)因?yàn)樘繉?dǎo)致的功能提高很適合于采用反洗/反沖的現(xiàn)代微過濾體系和采用機(jī)械導(dǎo)致剪切的體系。
關(guān)于在微過濾中使用活性炭，從廢水處理及從酪蛋白水解物的生產(chǎn)中已經(jīng)知悉，在這兩種情況下，為了改善產(chǎn)物質(zhì)量，使用活性炭來(lái)除去可溶性雜質(zhì)(WO93/08702)。
但是，在生物技術(shù)領(lǐng)域，尚未發(fā)現(xiàn)在微過濾加工中為減少堵塞的目的而使用活性炭。
為了提高微過濾功能而加入活性炭的另一優(yōu)點(diǎn)是，在許多情況下，所加的炭與會(huì)影響隨后濃縮的不需要的雜質(zhì)相結(jié)合，否則的話，為了獲得可接受的產(chǎn)物質(zhì)量，需增加提純工序，以除去這些雜質(zhì)。
根據(jù)本發(fā)明，任何令人感興趣的發(fā)酵產(chǎn)物可以如這里所述進(jìn)行微過濾。特別是本發(fā)明的方法能用于提純蛋白質(zhì)。
在一種優(yōu)選實(shí)施方案中，此方法用于酶，特別是用于水解酶(根據(jù)酶命名法，屬于EC3類；國(guó)際生化聯(lián)盟命名委員會(huì)建議)。
在特別優(yōu)選的實(shí)施方案中，下列水解酶是優(yōu)選的蛋白酶適用的蛋白酶包括源自細(xì)菌或霉菌的那些蛋白酶。也包括化學(xué)改性的突變種或蛋白質(zhì)工程的突變株。這些蛋白酶可以是絲氨酸蛋白酶或金屬蛋白酶，優(yōu)選堿性微生物蛋白酶或者胰蛋白酶類蛋白酶。堿性蛋白酶的例子是枯草溶菌素，特別是衍生自芽孢桿菌屬(Bacillus)的那些，例如枯草溶菌素Novo，枯草溶菌素Carlsberg，枯草溶菌素309，枯草溶菌素147和枯草溶菌素168(WO89/06279中所述的)。胰蛋白酶類蛋白酶的例子是胰蛋白酶(例如源自豬和牛的那些)以及在WO89/06270及WO94/25583中所述的鐮菌素(Fusarium)蛋白酶。
適用的蛋白酶例子是WO92/19729，WO98/20115，WO98/20116及WO98/34946中描述的變種。特別是在下列位置27，36，57，76，87，97，101，104，120，123，167，170，194，206，218，222，224，235及274中的一個(gè)或多個(gè)進(jìn)行了取代的變種。
優(yōu)選的商業(yè)提供的蛋白酶包括AlcalaseTM，SavinaseTM，PrimaseTM，DuralaseTM，EsperaseTM，和KannaseTM(Novozymes A/S)，MaxataseTM，MaxacalTM，MaxapemTM，ProperaseTM，PurafectTM，Purafect OxPTM，F(xiàn)N2TM及FN3TM(Genencor International Inc.)。
脂肪酶適用的脂肪酶包括源自細(xì)菌或霉菌的那些。包括化學(xué)改性的或蛋白質(zhì)工程的突變株。適用的脂肪酶的例子包括來(lái)自腐質(zhì)霉屬(Humicola)(同義詞Thermomyces)的脂肪酶，例如來(lái)自在EP258068及EP305216中所描述的H.lanuginosa(T.lanuginosus)，或來(lái)自在WO96/13580中描述的H.insolens；假單胞菌屬(Pseudomonas)脂肪酶，例如來(lái)自產(chǎn)堿假單胞菌(P.alcaligenes)或單產(chǎn)堿假單胞菌(P.pseudoalcaligenes)(EP 218 272)，蔥頭假單胞菌(P.cepacia)(EP331 376)，司徒茨氏假單胞菌(P.stutzeri)(GB1,372,034)，熒光假單胞菌(P.fluorescens)，假單胞菌屬菌株SD705(WO95/06720和WO96/27002)，P.wisconsinensis(WO96/12012)的那些；芽孢桿菌屬(Bacillus)脂肪酶，例如來(lái)自枯草芽孢桿菌(B.subtilis)(Dartois等人，(1993)，Biochemica et Biophysica Acta，1131，253-360)，嗜熱脂肪芽孢桿菌(B.stearothermophilus)(JP64/744992)或短小芽孢桿菌(B.pumilus)(WO91/16422)的那些。
其他例子是脂肪酶變種，例如在WO92/05249，WO94/01541，EP407225，EP260105，WO95/35381，WO96/00292，WO95/30744，WO94/25578，WO95/14783，WO95/22615，WO97/04079和WO97/07202中描述的那些。
優(yōu)選的商業(yè)供應(yīng)的脂肪酶包括LipolaseTM和LipolaseUltraTM(Novozymes A/S)。
淀粉酶合適的淀粉酶(α和/或β)包括源自細(xì)菌或霉菌的淀粉酶。包括化學(xué)改性的或蛋白質(zhì)工程的突變株。淀粉酶包括例如得自芽孢桿菌屬(Bacillus)的α-淀粉酶，如在GB1296839中更詳細(xì)描述的地衣形芽孢桿菌(B.licheniformis)的特別菌株。
有用的脂肪酶的例子是在WO94/02597，WO94/18314，WO96/23873及WO97/43424中描述的變種，特別是在下列位置15，23，105，106，124，128，133，154，156，181，188，190，197，202，208，209，243，264，304，305，391，408，444中的一個(gè)或多個(gè)進(jìn)行了取代的變種。
商業(yè)供應(yīng)的淀粉酶是DuramylTM，TermamylTM，F(xiàn)ungamylTM和BANTM(Novozymes A/S)，RapidaseTM和PurastarTM(得自Genencor InternationalInc.)。
纖維素酶適用的纖維素酶包括源自細(xì)菌和霉菌的那些。包括化學(xué)改性的或蛋白質(zhì)工程突變株。適用的纖維素酶包括來(lái)自芽孢桿菌屬(Bacillus)，假單胞菌屬(Pseudomonas)，腐質(zhì)霉屬(Humicola)，鐮孢屬(Fusarium)，草根霉屬(Thielavia)，支頂孢屬屬(Acremonium)的纖維素酶，例如在US4,435,307，US，5,648,263，US5,691,178，US5,776,757及WO89/09259中描述的產(chǎn)自insolens腐質(zhì)霉(Humicola)，嗜熱毀絲霉(Myceliophthora thermophila)及尖孢鐮孢(Fusarium oxysporum)的霉菌纖維素酶。
特別適用的纖維素酶是具有顏色好處的堿性或中性纖維素酶。這類纖維素酶的例子是在EP0 495 257，EP0 531 372，WO96/11262，WO96/29397，WO98/08940中描述的纖維素酶。其他例子是纖維素酶變種，例如在WO94/07998，EP0 531 315，US5,457,046，US5,686,593，US5,763,254，WO95/24471，WO98/12307及PCT/DK98/00299中描述的那些。
商業(yè)供應(yīng)的纖維素酶包括CelluzymeTM，及CarezymeTM(NovozymesA/S)，ClazinaseTM及Puradax HATM(Genencor International Inc.)，以及KAD-500(B)TM(Kao Corporation)。
氧化還原酶根據(jù)本發(fā)明可被處理的氧化還原酶包括過氧化物酶及氧化酶如漆酶。
過氧化物酶顯示氧化還原酶活性的酶可以是任何由酶分類(EC1.11.1.7)所包括的或由其衍生的任何片段并顯示過氧化物酶活性的過氧化物酶。
本發(fā)明方法中優(yōu)選使用的氧化還原酶是可由微生物如霉菌或細(xì)菌生產(chǎn)的。一些優(yōu)選的霉菌包括屬于半知菌亞門(Deuteromycotina)，絲孢綱(Hyphomycetes)的菌株，例如鐮孢屬(Fusarium)，腐質(zhì)霉屬(Humicola)，木霉屬(Tricoderma)，漆斑菌屬(Myrothecium)，輪枝孢屬(Verticillum)，Arthromyces，卡爾黑霉屬(Caldariomyces)，Ulocladium，Embellisia，枝孢屬(Cladosporium)或Dreschlera，特別是尖孢鐮孢(Fusarium oxysporum)(DSM2672)，insolens腐質(zhì)霉(Humicola)，resii木霉(Trichoderma)，疣孢漆斑菌(Myrothecium verrucana)(IFO6113)，棉黃萎輪枝孢(Verticillum alboatrum)，大麗花輪枝孢(Verticillum dahlie)，Arthromyces ramosus(FERM P-7754)，煙色卡爾黑霉(Caldariomyces fumage)，Ulocladium chartarum，Embellisia alli或Dreschlera halodes。
其他優(yōu)選的霉菌包括屬于擔(dān)子菌亞門(Basidiomycotina)，擔(dān)子菌綱(Basidiomycetes)的菌株，例如鬼傘屬(Coprinus)，展齒草菌屬(Phanerochaete)，草蓋菌屬(Coriolus)或栓菌屬(Trametes)。特別是灰蓋鬼傘(Coprinus cinereus)小孢子菌(microsporus)(IFD8371)，長(zhǎng)根鬼傘(coprinusmacrorhizus)，金孢子展齒草菌(Phanerochaete chrysosporium)(例如NA-12)或栓菌屬(Trametes)(先前稱多孔菌屬(Polyporus))，例如T.versicolor(例如PR428-A)。
其他優(yōu)選的霉菌包括屬于接合菌亞門(Zygomycotina)，毛霉綱(Mycoraceae)的菌株，例如根霉屬(Rhizopus)或毛霉菌(Mucor)，特別是凍土毛霉(Mucor hiemalis)。
一些優(yōu)選的細(xì)菌包括放射菌目(Acti-nomycetales)的菌株，例如鏈霉菌屬(Streptomyces spheroides)(ATTC23965)，嗜熱鏈霉菌(Streptomycesthermoviolaceus)(IFO12382)或輪枝孢鏈輪絲菌(StreptoverticillumVerticillium)。
其他優(yōu)選的細(xì)菌包括短小芽孢桿菌(Bacillus pumilus)(ATCC 12905)，嗜熱脂肪芽孢桿菌屬(Bacillus stearothermophilus)，類球紅細(xì)菌(Rhodobactersphaeroides)，Rhodomonas palustri，乳鏈球菌(Streptococcus lactis)，purrocinia假單胞菌屬(Pseudomonas)(ATCC15958)或熒光假單胞菌(Pseudomonasfluorescens)(NRRL B-11)。
其他優(yōu)選的細(xì)菌包括屬于粘球菌屬(Myxococcus)的菌株，例如變錄粘球菌(M.virescens)。
特別是，重組生成的過氧化物酶是優(yōu)選的，例如衍生自鬼傘屬菌株(Coprinus sp.)的過氧化物酶，特別是根據(jù)WO92/16634中的長(zhǎng)根鬼傘(C.macrorhizus)或灰蓋鬼傘(C.cinereus)，或其變種，例如在WO93/24618及WO95/10602中描述的變種。
漆酶及與漆酶有關(guān)的酶在本發(fā)明的文本中，漆酶及與漆酶有關(guān)的酶意指任何由酶分類(EC1.10.3.2)所包括的漆酶，任何由酶分類(EC1.10.3.1)所包括的兒茶酚氧化酶，任何由酶分類(EC1.3.3.5)所包括的膽紅素氧化酶，或任何由酶分類(EC1.14.18.1)所包括的單酚單加氧酶。
此微生物的漆酶可以由細(xì)菌或霉菌(包括絲狀的霉菌及酵母)衍生，其適用例子包括可衍生自曲霉屬(Aspergillus)，鏈孢霉屬(Neurospora)的漆酶，例如粗糙鏈孢霉(N.crasssa)，柄孢殼(Podospora)，葡萄孢屬(Botrytis)，金錢菌屬(Collybia)，層孔菌屬(Fomes)，香菇屬(Lentinus)，灰側(cè)耳菌屬(Pleurotus)，栓菌屬(Trametes)，例如T.villosa和雜色栓菌(T.versicolor)，絲核菌屬(Rhizoctonia)，例如茄屬絲核菌(R.solani)，鬼傘屬(Coprinus)，例如褶紋鬼傘(C.plicatilis)和灰蓋鬼傘(C.cinereus)，小脆柄菇(Psatyrella)，毀絲霉屬(Myceliophthora)，例如嗜熱嗜熱菌(M.thermophila)，Schytalidium，多孔菌屬(Polyporus)，例如P.pinsitus，射脈菌屬(Phlebia)，例如輻射射脈菌(P.radita)(WO92/01046)，或草蓋菌屬(Coriolus)，例如毛草蓋菌(C.hirsutus)(JP2-238885)的菌株的漆酶，特別是可由栓菌屬(Trametes)，毀絲霉屬(Myceliophthora)，Schytalidium或多孔菌屬(Polyporus)獲得的漆酶。
其他優(yōu)選的水解酶是糖酶，轉(zhuǎn)移酶，裂合酶，異構(gòu)酶及連接酶。
本發(fā)明的方法可用于未處理的發(fā)酵培養(yǎng)物或已發(fā)酵的培養(yǎng)物，后者已首先進(jìn)行了例如pH調(diào)整、溫度調(diào)整、水稀釋和/或一次或多次固/液分離處理如絮凝或離心分離。
根據(jù)本發(fā)明，微過濾方法指從固體如生物體或其他微粒狀物中分離出可溶性產(chǎn)物的膜過濾方法。任何現(xiàn)有技術(shù)中公知的膜設(shè)備均可使用，但是，優(yōu)選采用例如空心纖維、管式或板式和框式裝置的膜技術(shù)的膜過濾法。這些膜可以使用多種材料例如聚砜(PS)或聚四氟乙烯(PTFE)來(lái)制造。優(yōu)選的截止值取決于發(fā)酵產(chǎn)物的性能，但對(duì)2μm孔徑來(lái)說(shuō)，它是200KD這一范圍。
根據(jù)本發(fā)明，活性炭指現(xiàn)有技術(shù)公知的任何活性炭；適用的活性炭類別可以是購(gòu)自Elf Atochem North America的Acticarbon 4S#2228；購(gòu)自American Norit Co.的Darco carbon KB-B；購(gòu)自Pittsburgh Activated Carbon的粒狀炭Calgon，或購(gòu)自法國(guó)Pica的PicatifFGV 120。
根據(jù)本發(fā)明，活性炭的加入量?jī)?yōu)選為發(fā)酵培養(yǎng)物起始體積的0.05～2％(w/w)，特別是炭加入量為發(fā)酵培養(yǎng)物起始體積的0.1～1％(w/w)。
根據(jù)本發(fā)明，微過濾方法優(yōu)選在25℃～65℃的溫度下進(jìn)行；優(yōu)選在30℃～60℃的溫度，更優(yōu)選在30℃～55℃的溫度，特別優(yōu)選在35℃～50℃的溫度下進(jìn)行。
如果需要pH調(diào)整，任何的酸和堿均可使用，但甲酸或乙酸優(yōu)選用作酸，而氫氧化鈉優(yōu)選用作堿。最佳的pH通常是令人感興趣的發(fā)酵產(chǎn)物最穩(wěn)定時(shí)的pH與令人感興趣的發(fā)酵產(chǎn)物的溶解度最大時(shí)的pH兩者之間的值。
如果除了炭處理之外還加入鋁產(chǎn)物(實(shí)施例3)，則此微過濾方法還能進(jìn)一步改進(jìn)。可以在微過濾之前或之中往發(fā)酵培養(yǎng)物中加入鋁產(chǎn)物。
根據(jù)本發(fā)明，可以使用任何可溶性鋁化合物或它們的混合物，特別是Al2(SO4)3，NaAlO2，Na2Al2O4，K2Al2O4，Al(NO3)3，AlCl3，乙酸鋁，甲酸鋁，或羥基氯化鋁聚合物(例如購(gòu)自Boliden的EKOFLOCK)。
根據(jù)本發(fā)明，鋁產(chǎn)物的加入量?jī)?yōu)選為發(fā)酵培養(yǎng)物起始體積的1.4×10-3～2.8×10-1(mol Al/w)，特別是鋁產(chǎn)物的加入量為發(fā)酵培養(yǎng)物起始體積的1.4×10-2～1.4×10-1(mol Al/w)。
如果除了炭處理之外還加入鈣產(chǎn)物(見實(shí)施例4)，則此微過濾方法還能進(jìn)一步改進(jìn)?？梢栽谖⑦^濾之前或之中加入鈣產(chǎn)物。
根據(jù)本發(fā)明，可以加入任何可溶性鈣化合物或它們的混合物，特別是CaSO4，Ca(OH)2或CaCl2。
根據(jù)本發(fā)明，鈣產(chǎn)物的加入量?jī)?yōu)選為發(fā)酵培養(yǎng)物起始體積的1.6×10-2～4.9×10-1(mol Ca/w)，特別是鈣產(chǎn)物的加入量為發(fā)酵培養(yǎng)物起始體積的3.2×10-2～3.2×10-1(mol Ca/w)。
如果除了炭處理外還加入鋁產(chǎn)物和鈣產(chǎn)物，則此微過濾方法還能更改進(jìn)。
應(yīng)該指出，根據(jù)本發(fā)明的微過濾方法，可以是間歇法或連續(xù)法。
根據(jù)本發(fā)明所獲得的發(fā)酵產(chǎn)物還可以用多種方法如超濾、蒸發(fā)、色譜、吸收和/或結(jié)晶法進(jìn)行進(jìn)一步提純。
本發(fā)明再用下面的實(shí)施例進(jìn)行解釋，這些實(shí)施例不應(yīng)被理解為對(duì)本發(fā)明保護(hù)范圍的限制。
實(shí)施例1試驗(yàn)將例如按US3723250說(shuō)明的150升發(fā)酵的Savinase培養(yǎng)物批樣，稀釋到225升，把pH調(diào)整到6.0，并將此溶液在3.7m2Pall Sep PS400VMF型濾膜上進(jìn)行微過濾，橫跨膜壓為0.4巴，使用300升通濾水。

從上述實(shí)驗(yàn)可知，活性炭的加入對(duì)加工能力有巨大影響，此外，當(dāng)加入炭并采用高溫加工時(shí)，對(duì)加工能力似乎存在協(xié)同效應(yīng)在20℃時(shí)，當(dāng)加入0.2％活性炭時(shí)，透過量的增大為(19-17)/17×100％＝12％；在40℃時(shí)，當(dāng)加入0.2％活性炭時(shí)，透過量的增大為(32-27)/27×100％＝19％；因?yàn)槊恳籆IP之間的加工時(shí)間對(duì)方法的總經(jīng)濟(jì)性是特別重要的，而且因?yàn)槎氯麊栴}在發(fā)酵產(chǎn)物的微過濾方面是一個(gè)特別問題，所以測(cè)量了炭對(duì)于避免長(zhǎng)期堵塞的能力。
為進(jìn)行這一研究，選擇了一種Savinase的蛋白工程變種(Kannase)，以與前述四種試驗(yàn)相同的方法進(jìn)行發(fā)酵。在這種情況下，將2m3的發(fā)酵培養(yǎng)物稀釋至3m3，將pH調(diào)整到6.0，加入4.0kg炭Picatif FGV 120。在30℃進(jìn)行微過濾，并在實(shí)驗(yàn)過程中測(cè)量透過率(trasmission)和透過量。
結(jié)果透過率(開始)95％透過率(1hr) 95％透過率(4hr) 95％透過率(7hr-結(jié)束)95％透過量(開始)22(l/m2*hr)透過量(1hr) 23(l/m2*hr)透過量(4hr) 24(l/m2*hr)
透過量(7hr-結(jié)束)24(l/m2*hr)從上面所給出的結(jié)果可以看出，在整個(gè)試驗(yàn)期間，透過率或膜透過量均未降低。
實(shí)施例2Termamyl(淀粉酶)的試驗(yàn)將按GB1296839所述發(fā)酵的體積為150kg的Termamyl培養(yǎng)物用水稀釋至310升，一起加入0.300kg炭Picatif FGV 120及購(gòu)自Nordisk Aluminat的6.9kg 45％(w/w)Na2Al2O4的溶液。把pH調(diào)至10.6，在45℃和60℃以連續(xù)方式進(jìn)行微過濾。在1m2PallSep PS 10 VMF型(0.45μm PTFE)濾膜和等于或小于0.4巴的TMP(橫跨膜壓)之下，將此溶液進(jìn)行微過濾。如下面解釋的計(jì)算平均透過性為了通過消除TMP的任何小差別而獲得連續(xù)過濾實(shí)驗(yàn)之間的更好比較，已如下計(jì)算了平均透過性透過性＝透過量/TMP(透過量＝透過性×TMP)。透過性是堵塞量的度量，例如，透過性越高，則堵塞量越小，此預(yù)處理方法或過濾方法越好。

實(shí)施例3往Savinase培養(yǎng)物中加入鋁酸鈉的試驗(yàn)把如上述發(fā)酵的Savinase培養(yǎng)物分成4份。將100％水連同0.2％炭(Picatif FGV 120)加至每一份中，并把pH調(diào)至5.2。往四份制備的溶液中的3份中，將購(gòu)自Nordisk Aluminat的45％鋁酸鈉(Na2Al2O4)溶液，以比例為0.77％(w/w)、1.54％(w/w)及3.1％(w/w)加入。在1m2PallSep PS 10 VMF型濾膜(0.45μm PTFE)上，在40℃及TMP等于或小于0.4巴之下，將此溶液進(jìn)行連續(xù)式的微過濾。如上面解釋的比較其平均透過性。


由試驗(yàn)所得的結(jié)果如下

實(shí)施例4往Savinase培養(yǎng)物中加入CaCl2的試驗(yàn)把如上述發(fā)酵的Savinase培養(yǎng)物分成5份。將100％水連同0.2％炭(Picatif FGV 120)加至每一份中，并把pH調(diào)至5.2。往5份溶液中，將36％CaCl2溶液以比例為2.00％(w/w)、4.00％(w/w)，6.0％(w/w)，8.0％(w/w)及12％(w/w)加入。把這5份經(jīng)氯化鈣處理的溶液在1m2PallSep PS 10 VMF型濾膜(0.45μm PTFE)上，在40℃及TMP等于或小于0.4巴之下，進(jìn)行連續(xù)式的微過濾。如上面解釋的比較其平均透過性。

試驗(yàn)結(jié)果如下


權(quán)利要求
1.一種發(fā)酵產(chǎn)物的微過濾方法，它包括在微過濾操作之前或之中在微過濾溫度25℃～65℃下往發(fā)酵產(chǎn)物的溶液中加入活性炭。
2.根據(jù)權(quán)利要求1的方法，其中發(fā)酵產(chǎn)物是蛋白質(zhì)。
3.根據(jù)權(quán)利要求2的方法，其中蛋白質(zhì)是酶。
4.根據(jù)權(quán)利要求3的方法，其中酶是蛋白酶、淀粉酶或纖維素酶。
5.根據(jù)權(quán)利要求1的方法，其中微過濾的溫度是30℃～60℃。
6.根據(jù)權(quán)利要求1的方法，其中微過濾的溫度是30℃～55℃。
7.根據(jù)權(quán)利要求1的方法，其中微過濾的溫度是35℃～50℃。
8.根據(jù)權(quán)利要求1～7任一項(xiàng)的方法，其中活性炭的加入量為發(fā)酵培養(yǎng)物起始體積的0.05-2％(w/w)。
9.根據(jù)權(quán)利要求7的方法，其中活性炭的加入量為發(fā)酵培養(yǎng)物起始體積的0.1～1％(w/w)。
10.根據(jù)權(quán)利要求1的方法，其中在微過濾操作之前或之中往溶液中還加入鋁產(chǎn)物。
11.根據(jù)權(quán)利要求10的方法，其中鋁產(chǎn)物的加入量為發(fā)酵培養(yǎng)物起始體積的1.4×10-3～2.8×10-1(mol Al/w)。
12.根據(jù)權(quán)利要求1的方法，其中在微過濾操作之前或之中往溶液中還加入鈣產(chǎn)物。
13.根據(jù)權(quán)利要求12的方法，其中鈣產(chǎn)物的加入量為發(fā)酵培養(yǎng)物起始體積的1.6×10-2～4.9×10-1(mol Ca/w)。
14.根據(jù)權(quán)利要求1的方法，其中在微過濾操作之前或之中往溶液中還加入鋁產(chǎn)物和鈣產(chǎn)物。
15.根據(jù)權(quán)利要求1的方法，其中此微過濾方法為間歇法或連續(xù)法。
全文摘要
一種發(fā)酵產(chǎn)物的微過濾法，它包括在微過濾操作之前或之中在微過濾的溫度25℃～65℃下往發(fā)酵產(chǎn)物的溶液中加入活性炭。
文檔編號(hào)A23J1/00GK1429131SQ01809691
公開日2003年7月9日 申請(qǐng)日期2001年5月15日 優(yōu)先權(quán)日2000年5月18日
發(fā)明者馬茨·A·勞斯特森, 索倫·B·尼爾森, 薩恩·雅各布森, 金·U·漢森 申請(qǐng)人:諾維信公司