專利名稱：根特異性啟動子的制作方法
發(fā)明說明本發(fā)明涉及轉基因植物，其展現出在轉化之后穩(wěn)定地整合到其基因組內的根據SEQ ID Nos1至3的調節(jié)性核酸序列或其片段或其衍生物，及涉及編碼一種基因產物的核酸序列，該核酸序列以可操縱方式連接到該調節(jié)性核酸序列。再者，本發(fā)明涉及制備本發(fā)明轉基因植物的方法及根據SEQ ID Nos1至3的核酸序列。該調節(jié)性核酸序列涉及天然能在物種擬南芥(Arabidopsis thalinana)中主要以根特異性方式表達一外來基因的多核苷酸。
啟動子，在植物體內是作為天然基因和重組基因轉錄的調節(jié)物。調節(jié)一基因轉錄特異性的所有DNA節(jié)段的整體稱為該基因的啟動子，其中個別調節(jié)元件在該啟動子內是可區(qū)別的。啟動子管制諸基因的空間與時間性轉錄，亦即在植物體的哪一位置及在其發(fā)育期間的哪一時間，被其所調節(jié)的基因會表達。
從公開的先前用途得知可將外來基因導到植物體內以使該等基因表達。經常地，在此種轉基因(transgene)植物體內是采用組成型啟動子，此等啟動子可促成在該植物體內的所有組織內的永久性基因表達?；诙囗椑碛?，例如基因表達的改善及從外來基因表達所得蛋白質的濃度的增加，例如能量平衡的改善(蛋白質只在有需要其的處所表達)與環(huán)境安全性的改善等，可能需要不是以組成性方式而是以組織特異性方式來表達該外來基因。舉例而言，可能需要利用特別的多肽保護根部對抗致病原或寄生物，或者使特定的多肽增濃以便在其根部分離出。
本發(fā)明因而基于提供一多核苷酸的目的，其展現出一可促成轉基因在植物體內的根特異性表達的核酸序列。該目的可經由權利要求所界定的主要內容而解決。
本發(fā)明要利用下列附圖予以解說。


圖1示出位于PyK10基因轉錄起始位點的上游處5’位置區(qū)的核酸序列。于后文中，此區(qū)也稱為pPK10且列示于SEQ ID No1之中，位置1確定出轉錄起始位點。底下畫線的斜字體堿基是確定在該轉錄起始位點前面的位置-1。底下畫兩條線的黑體字母區(qū)是確定出經修飾以使其得以插入一XhoI酶切位點中的引物序列。底下畫線的黑體字母區(qū)是確定出反向引物序列。
圖2確定出pPKY10一片段的核酸序列。于下文中，此片段也稱為pPKY10c且列示于SEQ ID No2之中，沒有導入的限制酶酶切位點。位置1確定出轉錄起始位點。底下畫線的斜字體堿基是確定在該轉錄起始位點前面的位置-1。底下畫兩條線的黑體字母區(qū)是確定出經修飾以使其得以插入一XhoI酶切位點中的引物序列。底下畫線的黑體字母區(qū)是確定出反向引物序列。
圖3確定出pPKY10和pPKY10c一片段的核酸序列。于下文中，此片段也稱為pPKY10b且列示于SEQ ID No3之中，沒有導入的限制酶切酶位點。位置1確定出轉錄起始位點。底下畫線的斜字體堿基是確定在該轉錄起始位點前面的位置-1。底下畫兩條線的黑體字母區(qū)是確定出經修飾以使其得以插入一XhoI酶切位點中的引物序列。底下畫線的黑體字母區(qū)是確定出反向引物序列。
“可操縱地連接”(operably linked)一詞如本文中所用者是指稱一調節(jié)序列例如調節(jié)一基因的表達的啟動子。
“轉基因植物”一詞如本文中所使用者意指利用重組DNA技術及/或微生物學方法而不是利用傳統育種方法所產生的植物。
“載體”一詞如本文中所用者意為天然發(fā)生或人工產生的構建體，用以進行基因的攝取、增殖、表達、或轉移，例如質粒、噬菌粒(phagemid)、粘粒(cosmid)、人造染色體、噬菌體、病毒、和反轉錄病毒。
“同源性”或“同源序列”如本文中所用者意指相對于一參比序列或其部分具有顯著相似性的核酸序列。因此，可在嚴格或較低嚴格條件之下雜交到該參比序列或其部份的諸核酸序列即為同源序列(有關嚴格或較低嚴格條件指稱的定義可參看Sambrook et al。Molecular Cloning，Cold Spring Harbor Laboratory(1989)，ISBN 0-87969-309-6)。嚴格雜交條件的一個例子為下面所述者1×SSC中在65℃下雜交(于另一例子中，是在50％甲酰胺和4×SSC內與在42℃下)，隨后于總計約1小時的期間進行數個在0.1×SSC中在65℃下的洗滌步驟。較低嚴格雜交條件的一個例子為在4×SSC中在34℃下雜交及隨后于室溫下進行的數個在1×SSC中的洗滌步驟。再者，同源序列也為在應用相似率算法BLAST時對一參比序列具有顯著相似性的核酸序列或其部份(Basic Local Algnment Search Tool，Altschulet al.，Journal of Molecular Biology 215，403-410(1990))。顯著的相似性，如本文中所用者，指的是在序列在，例如于NCBI的BLAST使用中利用標準參數，相對于參比序列展現出至少60％的相似性。換言之，該等序列展現出至少60％的同源性。
本發(fā)明多核苷酸是由下述特征予以界定其可以促成一外來基因(后文稱為轉基因)在擬南芥物種的植物體內主要以根特異性方式表達?！爸饕?largely)在本發(fā)明中的意義系指稱該轉基因在根部內的表達明顯地超越在該植物莖葉器官內可想像的表達。“在根部內的表達明顯地超越”于本發(fā)明意義之內是指稱其比在莖葉器官內較強至少兩倍。本發(fā)明多核苷酸的啟動子活性可以局限在個別的根部組織或根部區(qū)例如根尖，側根芽和類似者之內。不過，該啟動子活性也可能擴展到整個植物根部內而不會局限于特別區(qū)或組織之內。于本發(fā)明范圍內可以想像者本發(fā)明多核苷酸在，例如，轉基因植物的發(fā)育開端展現出非特異相，于其中啟動子的活性不限于根部。
于此方面，必須特別提及者，上述功能特征不包括將有關該多核苷酸的產物范圍宣稱限制在只用在擬南芥物種的植物體內。更恰當者，本發(fā)明多核苷酸可以用來制備轉基因雙子葉植物，特別是蕓苔科(Brassicaceae)植物，例如蕓苔屬(Brassica)、芥屬(Sinapis)、或蘿卜屬(Raphanus)；或茄科(Solanaceae)，例如Lycopersicon、茄屬(Solanum)、或番椒屬(Capsicum)；或豆科(Fabaceae)，例如蠶豆屬(Vicia)、苜蓿屬(Medicago)、車軸草屬(Trifolium)、大豆屬(Glycine)、或豌豆屬(Pisum)；或葫蘆科(Curcurbitaceae)，例如胡瓜屬(Cucumis)或葫蘆屬(Curcurbita)；或傘型科(Apiaceae)，例如胡蘿卜屬(Daucus)或芹屬(Apium)；或薔薇科(Rosaceae)，例如蘋果屬(Malus)、梨屬(Pyrus)、懸鉤子屬(Rubus)、白花蛇母屬(Fragaria)、或櫻屬(Prunus)；或懸花科(Convulvulaceae)，例如甘諸屬(Ipomoea)；或大戟科(Euphorbiaceae)，例如樹薯屬(Manhot)；或藜科(Chenopodiaceae)，例如甜菜屬(Beta)。
此外，本發(fā)明多核苷酸可以用來制備轉基因單子葉植物，特別是禾本科(Poaceae)，例如小麥屬(Triticum)、大麥屬(Hordeum)、燕麥屬(Avena)、裸麥屬(Secale)、稻屬(Oryza)、玉蜀黍屬(Zea)、或甘蔗屬(Saccharum)；或香蕉科(Musaceae)，例如芭蕉屬(Musa)；或檳榔科(Arecaceae)，例如海刺屬(Phoenix)、油棕屬(Elaeis)、或椰子屬(Cocos)。
本發(fā)明多核苷酸另外具有下列四項特征中的任一者a)衍生自SEQ ID NO1的至少200個連續(xù)核苷酸序列，b)與可衍生自SEQ ID NO1的對應連續(xù)序列有至少60％同源性的至少200個核苷酸，c)多核苷酸，其可經由使用展現出可衍生自SEQ ID NO1的連續(xù)核酸序列所含至少50個核苷酸的基因探針(gene probe)對蕓苔科植物DNA文庫進行篩選而得到，
d)展現出在c)中所定義的多核苷酸所含片段的啟動子活性。
根據特征a)或b)的本發(fā)明多核苷酸所具有最小長度為200個核苷酸。較佳的最小長度分別為300，400，500，600與700個核苷酸。
根據特征b)，本發(fā)明多核苷酸相對于可衍生自SEQ ID NO1的對應數目的核苷酸展現出至少60％的同源性。更佳者為分別為至少70％、80％、和90％的同源性。不依賴于同源性程度任選地施加的一項標準為呈單鏈形式的多核苷酸在嚴格條件下是否會與可衍生自SEQ ID NO1的具有對應長度的單鏈進行雜交。
根據特征c)，本發(fā)明的主題為可以使用對應的基因探針對蕓苔科植物的DNA文庫進行篩選而得到的多核苷酸。舉例而言，此等DNA文庫可為擬南芥屬(Arabidopsis)的DNA文庫，且為在此屬內的擬南芥(Arabidopsis thaliana)種之DNA文庫。此等DNA文庫可由熟諳此技者順利取得。本發(fā)明主題更為利用上述基因探針得到的多核苷酸片段，但其限制條件為其要展現出主要是根特異性啟動子活性。此等展現出啟動子活性的片段優(yōu)選長度同樣地為200個核苷酸。
根據本發(fā)明，提供了一種具有啟動子生物功能的多核苷酸，該多核苷酸在轉基因植物體內主要以根特異性方式表達可操縱地連接的外來基因。如此，可以在根部特異地增濃獨特的多肽，或可以此等多肽影響例如根部的生長或增加其對于致病原和寄生物的抗拒性或防衛(wèi)性。
“外來基因”，根據本發(fā)明意指可以使用的來自外源和內源兩者的編碼一基因產物的核酸序列?！皟仍础币庵负怂嵝蛄惺瞧鹪醋耘c彼等所要根據本發(fā)明整合入的生物體相同之生物體者。而外源意指該核酸序列是源自另一種生物。
經特異地在根部制備及/或增濃且視需要分離出的多肽可以源自任何生物例如人類、動物、植物真菌、原生動物、或病毒且可為任何多肽。
能夠影響根部生長的多肽可為，例如，生長因子、植物激素、抑制劑、或次生代謝的酶。
可為經特異地在根部表達出的多肽所減弱或防御的致病原和寄生物可為來自土壤的真菌，例如腐霉屬(Pythium)、鐮孢屬(Fusarium)，或輪枝孢屬(Verticillium)，或來自土壤的原生動物，例如虐原蟲屬(Plasmodiophora)或Spongospora，或植物寄生性線蟲，例如金線蟲屬(Globodera)，異皮線蟲屬(Heterodera)，根腐線蟲屬(Pratylenchus)，穿孔線蟲屬(Radopholus)，殘根線蟲屬(Trichodorus)，或針線蟲屬(Longidorus)；或昆蟲，例如，金龜屬(Melolontha)，象甲屬(Otiorhynchus)，或大蚊屬(Tipula)。
在將此等啟動子導到要修飾的植物體內之后，通常只有經融合的外來基因之表達會受到調節(jié)。預期不會有多效性啟動子效應。因此，標的栽培植物育種材料的品質不會受到影響，只要其不會受到該外來基因的合意根特異性表達所影響即可。
可根據本發(fā)明使用的較佳多核苷酸為SEQ ID NO1，SEQ IDNO2和SEQ ID NO3中所列出者。此外，對此等序列展現出至少60％，較佳者70％，更佳者80％，且甚至更佳者90％的同源性之多肽也為較佳者。
本發(fā)明的另一方面為一種載體，其不僅含有要導到植物細胞或植物組織內的外來基因而且含有經可操縱地連接的本發(fā)明多核苷酸。本發(fā)明還涉及含有經穩(wěn)定地整合到基因組內的此等載體或多核苷酸與經可操縱地連接的外來基因的植物細胞，以及涉及含有此等植物細胞的轉基因植物。本發(fā)明轉基因植物可為前文所列出的科和屬的雙子葉植物或單子葉植物。根據本發(fā)明一較佳具體實例，該轉基因植物為擬南芥屬(Arabidopsis)，其一個例子為擬南芥種的植物。
再者，本發(fā)明的另一方面為本發(fā)明多核苷酸對于一外來基因在一植物體內的根特異性表達的用途和一種制備此種轉基因植物的方法，其包括下列諸步驟將該外來基因與本發(fā)明多核苷酸融合，任選地制備一含有該融合產物的載體，將該載體或該融合產物導到一植物細胞或植物組織之內，及將該植物細胞或植物組織再生成植物，特別是一可育植物。
本發(fā)明要經由參照下面的操作實施例予以更詳細地解說。
實施例1啟動子pPYK10的分離與克隆使用擬南芥野生型C24的基因組之庫來分離啟動子pPYK10。使用從Pyk10 cDNA5’-區(qū)所衍生的一750bp HindIII限制片段來篩選該文庫。噬斑雜交在親代板上得到一陽性克隆。將該稱為λ-glc的克隆利用二到三次的再鋪板培養(yǎng)予以純化與分離。對噬菌體的DNA施以限制酶分析，并將攜帶啟動子序列的5個片段亞克隆到載體pBluescript-M13+之內。
利用引物延伸分析(腺嘌呤-1)鑒定出啟動子的3’端。
實施例2順式—調節(jié)序列元件的鑒定分析啟動子序列pPYK10的推定順式—調節(jié)序列元件。順式—調節(jié)序列元件大部分皆為相對較短的序列，經由其與特異性DNA結合蛋白質反式因子的相互作用而正面或負面地影響基因表達。序列分析評估出，除了TATA與CAAT盒之外，有數個順式元件，其位于上游處且展現出與來自其他真核生物啟動子的調節(jié)序列的同源性。該等特定序列元件都摘列于表1之中。其中所列出的所有順式序列中，除了阻遏元件GAAAGAA和ATGGG之外，都是轉錄活化序列。
表1于Pyk10基因5’區(qū)內的相關順式—調節(jié)序列元件的整編，其中列出已知的轉錄因子。DR＝直接重復序列 元件 數目 轉錄因子ACGT ACGT-核心 9 例如GBFs，HBPs，CPRFsCATTG CANNTG-基序3 CANCAGATGCANNTG-基序1 CANCATATGCANNTG-基序1 CANCAGCTGCANNTG-基序1 CANCATGTGCANNTG-基序1 CANCAACTGCANNTG-基序1 CANGATA GATA-重復 1×3DR，3× ASF-22DRTGACG As-1元件 3 ASF-1，TGA1-FamTTATTCA AP-1元件 1 AP-1AAGTCTAP-1元件 1 AP-1TGAATAA AP-1元件 2 AP-1TGATTCA AP-1元件 1 AP-1TAACTGMyb基序2 MYB蛋白質TAACAGMyb基序1 MYB蛋白質CCAAT3 C/EBPTGTAAT 1 C/EBPTGTCAC 1TATTTTG 2ATCTAAT 誘發(fā)子盒L 1ATTGTTT 誘發(fā)子盒 2TTGACC誘發(fā)子盒 1 WRKY-FamCCGTCC誘發(fā)子盒 1CTCC 誘發(fā)子盒 1GTGTC2 VP1AAACCAARE序列2TGGTTTARE序列1GAAAGAA 1ATGGG ATGGG-核心1ACGT核心基序為包含在許多植物基因內的序列，其可介導由環(huán)境和發(fā)育所引起的刺激的信號。CANNTG基序可調節(jié)空間型基因表達，時間型基因表達，與由光所誘發(fā)的基因表達。C/EBP元件介導一種細胞類型特異性活性。Myb基序控制次生代謝，調節(jié)細胞形態(tài)發(fā)出，且參與植物生長調節(jié)劑的信號轉導途徑之中。誘發(fā)子盒(elicitor box)介導由誘發(fā)劑所引起的基因誘導。調節(jié)序列TATTTTG為一種對創(chuàng)傷反應的元件。CTCC元件對創(chuàng)傷與誘發(fā)劑都有反應。在啟動子中展現出as-1元件的基因可以用植物生長激素、柳酸、和茉莉酸甲酯加以誘導。展現出序列元件GTGTCA或TGTCAC的啟動子可分別由脫落酸(abscisic acid)和植物生長激素予以誘導。AP-1元件可能出現于數種真核生物啟動子之中，不過彼等的功能尚未經任何細部說明過。由于其也在黑芥子硫苷酸酶(myrosinases)TGG1和TGG2的啟動子區(qū)內有某些程度的含量，因此其也被認為是相關的序列元件。以直接及/或間接重復體形式重復地出現的序列皆為順式調節(jié)序列。于所探討的序列中出現序列元件GATA的數個直接重復體。GATA基序存在于雙子葉植物啟動子區(qū)之中且已描述為光—和組織—特異性元件。于圖2中示意地繪示出出現于Pyk10基因5’區(qū)內的順式—元件的排列。為了容易審視之故，只有顯示出最重要的調節(jié)序列。
實施例3利用Gus報告基因融合分析啟動子活性使用采用GUS報告基因系統(Jefferson，1987)的啟動子分析以期分析PKY10基因的啟動子活性。制備一啟動子片段，與GUS基因融合并利用根癌土壤桿菌導到擬南芥內。
使用該轉基因植物來測定器官與組織特異性GUS基因活性。要用于克隆步驟中(參看上文)的pPKY10b和pPKY10c片段是透過PCR制備的。使用Pfu聚合酶完成該等片段的擴增，該聚合酶展現校讀活性(proofreading activity)。為了隨后將該片段克隆到二元載體pMOG819之內，乃將所使用的引物裝上限制位點，如下面的表中所示者。
制備5’啟動子刪除所使用的引物各個限制酶識別位點是用黑體字型予以強調出。向下的箭號鑒別出限制酶識別位點。PromB GTTGC↓TCGAGATAACTGATAACAT用于XhoIPromC GGACC↓TCGAGCTGCAACGAAGTGT用于XhoIPromF TGCACCC↓GGGTTTTTGTTTGTAAT用于SmaI啟動子片段B的GUS表達啟動子片段C可在根部內造成強烈的GUS表達。啟動子構建體B和C展現出類似的表達樣式，其中啟動子構建體B在子葉中展現出較小的藍色染色。
對再生的植物分析GUS表達。其結果為于初始時，在載有啟動子pPKY10c的植物整個胚芽中出現藍色染色直到萌芽程序后數天為止。植物發(fā)育的愈多，限制到根部的藍色染色愈多，其中子葉邊緣仍然展現隔離的弱藍色染色。于完全發(fā)育的Arabidopsis植物中，藍色染色只出現于根部，且整個根系統都展現出GUS表達。展現出啟動子pPYK10b的克隆也具有類似的表達樣式，但在早期發(fā)育階段中的子葉展現出較小的染色。
權利要求
1.一種能在物種擬南芥(Arabidopsis thalinana)植物中主要以根特異性方式表達一外來基因的多核苷酸，其選自a)可衍生自SEQ ID NO1的至少200個連續(xù)核苷酸，b)與可衍生自SEQ ID NO；1的對應連續(xù)序列有至少60％同源性的至少200個核苷酸，c)多核苷酸，其可經由使用展現出可衍生自SEQ ID NO1的連續(xù)核酸序列所含至少50個核苷酸的基因探針對蕓苔科(Brassicaceae)植物的DNA文庫進行篩選而得到，d)在c)中所定義的多核苷酸的展現出啟動子活性的片段。
2.如權利要求1的多核苷酸，其是選自SEQ ID NO1，SEQ IDNO2和SEQ ID NO3之中，及選自對所述序列展現出至少60％的同源性之多核苷酸。
3.一種載體，其包括如權利要求1或2所述多核苷酸。
4.一種轉基因植物，其在經使用編碼一基因產物的核酸序列予以轉化之后具有至少一穩(wěn)定地整合到基因組內的如權利要求1或2所述多核苷酸，其中該核酸序列可操縱地連接該多核苷酸；或具有存在于該植物細胞內的如權利要求3所述載體。
5.如權利要求4所述的轉基因植物，其中該植物是選自下列之中蕓苔科(Brassicaceae)植物，特別是蕓苔屬(Brassica)、芥屬(Sianpis)或蘿卜屬(Raphanus)；或茄科(Solanaceae)，特別是蕃茄屬(Lycopersicon)、茄屬(Solanum)、或番椒屬(Capsicum)；或豆科(Fabaceae)，特別是蠶豆屬(Vicia)、苜蓿屬(Medicago)、車軸草屬(trifolium)、大豆屬(Clycine)、或豌豆屬(Pisum)；或葫蘆科(Curcurbitaceae)，特別是胡瓜屬(Cucumis)或葫蘆屬(Curcurbita)；或傘型科(Apiaceae)，特別是胡蘿卜屬(Dauceus)或芹屬(Apium)；或薔薇科(Rosaceae)，特別是蘋果屬(Malus)、梨屬(Pyrus)、懸鉤子屬(Rubus)、白花蛇母屬(Fragaria)、或櫻屬(Prunus)、或懸花科(Convulvulaceae)，特別是甘諸屬(Ipomoea)；或大戟科(Euphorbiaceae)，特別是樹薯屬(Manihot)；或藜科(Chenopodiaceae)，特別是甜菜(Beta)屬；或禾木科(Poaceae)，特別是小麥屬(Triticum)、大麥屬(Hordeum)、燕麥屬(Avena)、裸麥屬(Secale)、稻屬(Oryza)、玉蜀黍屬(Zea)、或甘蔗屬(Saccharum)；或香蕉科(Musaceae)，特別是芭蕉屬(Musa)；或檳榔科(Arecaceae)，例如海棗屬(Phoenix)、油棕屬(Elaeis)、或椰子屬(Cocos)；或擬南芥屬(Arabidopsis)，特別是擬南芥。
6.一種轉化的植物細胞或轉化的植物組織，其具有如權利要求3所述的載體或具有在其轉化之后穩(wěn)定地整合到基因組內的如權利要求1或2所述多核苷酸，且具有一編碼一基因產物的核酸序列，該核酸序列可操縱地連接到該多核苷酸。
7.如權利要求6所述的轉化的植物細胞或經轉化的植物組織，其可再生成可育植物。
8.一種種子，其可得自如權利要求4或5所述植物。
9.如權利要求1或所述的多核苷酸，或如權利要求3所述的載體，用于在一植物體內將一外來基因予以根特異性表達的用途。
10.如權利要求9所述的用途，其中該植物是選自下列之中者蕓苔科(Brassicaceae)植物，特別是蕓苔屬(Brassica)、芥屬(Sinapis)、或蘿卜屬(Raphanus)；或茄科(Solanaceae)，特別是蕃茄屬(Lycopersicon)、茄屬(Solanum)、或番椒屬(Capsicum)；或豆科(Fabaceae)，特別是蠶豆屬(Vicia)、苜蓿屬(Medicago)、車軸草屬(Trifolium)、大豆屬(Glycine)、或豌豆屬(Pisum)；或葫蘆科(Curcurbitaceae)，特別是胡瓜屬(Cucumis)或葫蘆屬(Curcurbita)；或傘型科(Apiaceae)，例如胡蘿卜屬(Daucus)或芹屬(Apium)；或薔薇科(Rosaceae)，特別是蘋果屬(Malus)、梨屬(Pyrus)、懸鉤子屬(Rubus)、白花蛇母屬(Fragaria)、或櫻屬(Prunus)；或懸花科(Convulvulaceae)，例如甘諸屬(Ipomoea)；或大戟科(Euphorbiaceae)，特別是樹薯屬(Manhot)；或藜科(Chenopodiaceae)，特別是甜菜屬(Beta)；或禾本科(Poaceae)，特別是小麥屬(Triticum)、大麥屬(Hordeum)、燕麥屬(Avena)、裸麥屬(Secale)、稻屬(Oryza)、玉蜀黍屬(Zea)、或甘蔗屬(Saccharum)；或香蕉科(Musaceae)、特別是芭蕉屬(Musa)；或檳榔科(Arecaceae)，例如海刺屬(Phoenix)、油棕屬(Elaeis)、或椰子屬(Cocos)；或擬南芥屬(Arabidopsis)，特別是擬南芥。
11.一種制備轉基因植物之方法，其包括下列諸步驟a)將一外來基因與如權利要求1或2所述多核苷酸融合，b)任選地制備一含有步驟a)中所得的融合產物之載體，c)將步驟a)中所得融合產物或步驟b)中所得載體導到一植物細胞或植物組織之內，及d)將該植物細胞或植物組織再生成植物，特別是一可育植物。
全文摘要
本發(fā)明涉及轉基因植物，其展現出轉化之后穩(wěn)定地整合到其基因組內的根據SEQ ID Nos1至3的調節(jié)性核酸序列或其片段或其衍生物，及涉及編碼一種基因產物的核酸序列，該核酸序列以可操縱方式連接到該調節(jié)性核酸序列。再者，本發(fā)明涉及制備本發(fā)明轉基因植物的方法及根據SEQ ID Nos1至3的核酸序列。該調節(jié)性核酸序列涉及天然能在物種擬南芥(Arabidopsis thalinana)中主要以根特異性方式表達一外來基因的多核苷酸。
文檔編號C12N15/82GK1434869SQ00819038
公開日2003年8月6日 申請日期2000年12月18日 優(yōu)先權日1999年12月16日
發(fā)明者福拉瑞恩·關德勒, 印克·尼斯, 皮歐特·普易歐 申請人:普拉通公司, 基爾克里斯蒂安－阿爾伯來希特大學校長辦公室