紙樺組織培養(yǎng)種苗繁育方法
【專利摘要】本發(fā)明提供了一種紙樺組織培養(yǎng)種苗繁育方法，依次包括如下步驟：(1)選擇培養(yǎng)一年以上的紙樺幼態(tài)嫩梢，從頂芽起向下截取帶腋芽莖段的枝條，作為外植體，(2)對(duì)外植體消毒，(3)將消毒滅菌后的外植體兩端分別切除0.2～0.4，接入啟動(dòng)培養(yǎng)基中培養(yǎng)；(4)將步驟(3)獲得的無(wú)菌萌芽沿莖段縱向分割，一分為二，接種于增殖培養(yǎng)基中培養(yǎng)；(5)將步驟(4)獲得的叢生芽分割成單個(gè)芽，接種于壯苗培養(yǎng)基中培養(yǎng)；(6)將步驟(5)獲得單個(gè)芽接種于配置好的生根培養(yǎng)基中誘導(dǎo)生根。本發(fā)明操作簡(jiǎn)單、重復(fù)性好；種苗健壯、生長(zhǎng)迅速，種苗大小一致，高度整齊；無(wú)愈傷組織產(chǎn)生，低變異、低性狀分離；生根效果好，移栽存活率90％以上，經(jīng)濟(jì)可行。
【專利說(shuō)明】
紙樺組織培養(yǎng)種苗繁育方法
技術(shù)領(lǐng)域
[0001]本發(fā)明涉及紙樺的種苗繁育方法。
【背景技術(shù)】
[0002]紙樺(BETULA PAPYRIFERA)是樺樹(shù)的木本喬木品種，主要的園林、經(jīng)濟(jì)林植物之一，原產(chǎn)北美。本文涉及紙樺的引進(jìn)園林植物品種“Betula papyrifera‘Jacquemontii ’”和“Be tul a papyr if era ‘ Duraheat ’ ”兩個(gè)商品種。該品種木材材質(zhì)優(yōu)良，可作膠合板、細(xì)木工等用材，是一個(gè)重要的工業(yè)用材樹(shù)種，樹(shù)皮可熱解提取焦油，樹(shù)的汁液可以制作飲料;其通直的主干、亮麗的樹(shù)皮顏色和清晰的樹(shù)皮紋理，加上它寬泛的氣候適應(yīng)性和土壤適應(yīng)性，和葉片絨毛包被，隨著近些年園林綠化和城市景觀的發(fā)展，其在城市景觀中用作降塵植物作用日益突出，苗木使用量越來(lái)越大。
[0003]傳統(tǒng)的紙樺繁殖方法采用扦插或籽播方式進(jìn)行種苗繁育，但扦插育苗受季節(jié)限制，一年之中只有短暫的5-9月可以進(jìn)行相關(guān)作業(yè);除此之外，扦插育苗還需要從苗木上截取大量枝條，這樣會(huì)嚴(yán)重影響苗木的整體造型，嚴(yán)重的將直接導(dǎo)致截枝苗木無(wú)法銷售，失去商業(yè)價(jià)值。而采用籽播方式育苗，又受到種子來(lái)源限制，而且育苗時(shí)間局限于2-5月份，種子萌發(fā)率受種子活性以及播種后的天氣狀況的制約，另外籽播育苗還存在嚴(yán)重的性狀分離，很難獲得性狀一致的商業(yè)種苗。
[0004]總之，常規(guī)的種子繁殖速度過(guò)慢，需采種選種，貯藏、催芽播種，育苗管理等一系列較長(zhǎng)周期的實(shí)施步驟，同時(shí)受季節(jié)的限制，播種時(shí)限較短;且種子的成活率低，導(dǎo)致繁殖系數(shù)低;種子繁殖過(guò)程中，發(fā)生性狀分離的概率更多，難以獲得性狀一致的批量種苗。
[0005]扦插育苗插穗生根比較難，扦插時(shí)間短暫、扦插基質(zhì)配比種類以及扦插微環(huán)境控制對(duì)生根率的影響比較大；而且扦插育苗需要截取大量枝條，嚴(yán)重影響樹(shù)勢(shì)和整體觀賞效果;除此之外，植物病毒會(huì)隨著扦插育苗而逐漸積累，隨著扦插繁殖代數(shù)的增加，性狀退化想想十分明顯。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0006]本發(fā)明的目的是提供一種紙樺組織培養(yǎng)種苗繁育方法，以克服現(xiàn)有技術(shù)存在的缺陷。
[0007]本發(fā)明的方法，包括如下步驟:
[0008](I)外植體的選擇:
[0009]選擇溫室培養(yǎng)一年以上的紙樺幼態(tài)嫩梢，從頂芽起向下截取約帶2?6個(gè)，優(yōu)選4個(gè)腋芽莖段的枝條，去除葉片，切取單節(jié)帶腋芽莖段作為外植體，每莖段帶一腋芽，長(zhǎng)I?
2.5cm，優(yōu)選長(zhǎng)1.5_2cm;
[0010](2)外植體消毒:
[0011]將外植體用醫(yī)用酒精棉擦拭，然后置于比例為1:3?5的稀釋漂白水(漂白水:無(wú)菌水體積比，下同)中震蕩消毒10?30min，用無(wú)菌水洗滌I?3次;所述的漂白水為市售“白貓”牌漂白水。
[0012](3)啟動(dòng)培養(yǎng):
[0013]將消毒滅菌后的外植體兩端分別切除0.2?0.4CM，優(yōu)選0.3cm，接入啟動(dòng)培養(yǎng)基中，暗室培養(yǎng)36?60小時(shí)，優(yōu)選48小時(shí)，然后光照時(shí)間12?20小時(shí)，優(yōu)選16h，黑暗6?10小時(shí)，優(yōu)選8h，光強(qiáng)2000?30001ux，優(yōu)選23001ux，20?30攝氏度優(yōu)選25攝氏度培養(yǎng)5?7周，優(yōu)選6周，休眠腋芽萌發(fā)，獲得無(wú)菌萌芽，高約2-3cm;
[0014]所述的啟動(dòng)培養(yǎng)基為WPM+6-BA1.5mg/L+GA32.0mg/L+蔗糖30g/L+瓊脂6.8g/L，培養(yǎng)基的pH為5.85;
[0015]所述WPM培養(yǎng)基、6-BA、GA3、IAA、NAA等藥品均為美國(guó)西格瑪公司銷售成品培養(yǎng)基及植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑，AC(活性炭)、瓊脂等為國(guó)內(nèi)采購(gòu)商品，下同。
[0016](4)增殖培養(yǎng):
[0017]將步驟(3)獲得的無(wú)菌萌芽沿莖段縱向分割，一分為二，接種于增殖培養(yǎng)基中，暗培養(yǎng)36?60小時(shí)，優(yōu)選48小時(shí)，20?30攝氏度優(yōu)選25攝氏度，其余時(shí)間光照12?20小時(shí)，優(yōu)選16h，黑暗6?10小時(shí)，優(yōu)選8h，光強(qiáng)2000?30001ux，優(yōu)選23001ux，培養(yǎng)5?7周，誘導(dǎo)產(chǎn)生從生芽4個(gè)，芽叢高度達(dá)到2cm，增殖率達(dá)到4倍；
[0018]增殖培養(yǎng)基為WPM+6-BA2.0mg/L+IAA0.5mg/L+GA31.0mg/L+添加蔗糖30g/L+瓊脂6.88/1，培養(yǎng)基的?!1為5.85;
[0019](5)壯苗培養(yǎng)
[0020]將步驟(4)獲得的在增值培養(yǎng)基中誘導(dǎo)出的叢生芽分割成單個(gè)芽，接種于壯苗培養(yǎng)基中，暗培養(yǎng)36?60小時(shí)，優(yōu)選48小時(shí)，培養(yǎng)溫度為20?30攝氏度，優(yōu)選25攝氏度，其余時(shí)間光照12?20小時(shí)，優(yōu)選16h，黑暗6?10小時(shí)，優(yōu)選8h，光強(qiáng)2000?30001ux，優(yōu)選23001ux，培養(yǎng)3?5周，優(yōu)選4周；
[0021 ] 壯苗培養(yǎng)基為WPM+AC0.5g/L+添加蔗糖30g/L+瓊脂6.8g/L，PH為5.85;
[0022](6)生根培養(yǎng)
[0023]將步驟(5)獲得單個(gè)芽切除莖段基部0.1?0.3cm，優(yōu)選0.2cm，切去基部Icm以內(nèi)的所有葉片，保留上部葉片，接種于配置好的生根培養(yǎng)基中進(jìn)行誘導(dǎo)生根，接種后暗培養(yǎng)36?60小時(shí)，優(yōu)選48小時(shí)，然后全光照培養(yǎng)。培養(yǎng)溫度為溫度為20?30攝氏度，優(yōu)選25攝氏度，光照12?20小時(shí)，優(yōu)選16h，黑暗6?10小時(shí)，優(yōu)選8h，光強(qiáng)2000?30001ux，優(yōu)選23001ux，培養(yǎng)5?7周，優(yōu)選6周，獲得出根，植株長(zhǎng)高至3cm，主根為2條以上，長(zhǎng)度約3cm的種苗；
[0024]生根培養(yǎng)基為1/2WPM+IBA1.0mg/L+NAA0.5mg/L+ACl.0g/L+添加蔗糖 15g/L+瓊脂6.88/1，培養(yǎng)基的?!1為5.85。
[0025]本發(fā)明的有益效果是:
[0026]操作簡(jiǎn)單、重復(fù)性好；種苗健壯、生長(zhǎng)迅速，種苗莖粗1.0mm，高30mm以上，大小一致，高度整齊;無(wú)愈傷組織產(chǎn)生，低變異、低性狀分離;生根效果好，根系2—4條，根系移栽存活率高，移栽存活率90 %以上，成本節(jié)約、經(jīng)濟(jì)可行。
【具體實(shí)施方式】
[0027]實(shí)施例1
[0028]1.Duraheat外植體的選擇:
[0029]春季4月份，選擇晴朗的天氣，選取溫室內(nèi)生長(zhǎng)健壯、性狀純正、無(wú)病蟲(chóng)害的溫室培養(yǎng)一年以上的Duraheat幼態(tài)嫩梢，從頂芽起向下截取約帶4個(gè)腋芽莖段的枝條，去除葉片，切取單節(jié)帶腋芽莖段作為外植體，每莖段帶一腋芽，長(zhǎng)1.5-2cm。
[0030]2.Duraheat 外植體消毒:
[0031]將莖段依木質(zhì)化程度分為輕微木質(zhì)化和未木質(zhì)化程度單獨(dú)進(jìn)行消毒。在無(wú)菌操作臺(tái)上，將外植體用醫(yī)用酒精棉擦拭干凈，立即倒入比例為1:4的漂白水(商品漂白水:無(wú)菌水體積比，下同)中消毒20min，期間均需不停震蕩，最后用無(wú)菌水分別洗滌3次，每次漂洗5分鐘。
[0032]3.啟動(dòng)培養(yǎng):
[0033]在操作工作臺(tái)上，將消毒滅菌后的外植體兩端分別切除0.3cm，接入啟動(dòng)培養(yǎng)基中，啟動(dòng)培養(yǎng)基為WPM+6-BA 1.5mg/L+GA32.0mg/L+蔗糖30g/L+瓊脂6.8g/L，培養(yǎng)基的pH為
5.85。接種后放入培養(yǎng)室暗培養(yǎng)48小時(shí)，然后光照時(shí)間1611，黑暗811，光強(qiáng)230011?。，室溫25攝氏度。培養(yǎng)6周，休眠腋芽萌發(fā)，植株健壯，無(wú)菌苗株高約2-3cm。
[0034]4.增殖培養(yǎng):
[0035]將在啟動(dòng)培養(yǎng)基中萌發(fā)的休眠腋芽沿莖段縱向分割，一分為二接種于增殖培養(yǎng)基中，增殖培養(yǎng)基為WPM+6-BA2.0mg/L+IAA0.5mg/L+GA3l.0mg/L+添加蔗糖30g/L+瓊脂6.8g/L，培養(yǎng)基的pH為5.85ο暗培養(yǎng)48小時(shí)，培養(yǎng)溫度為25°C，其余時(shí)間光照16h，黑暗8h，光強(qiáng)23001uX。培養(yǎng)6周可誘導(dǎo)產(chǎn)生從生芽4個(gè)，芽叢高度達(dá)到2cm，增殖率達(dá)到4倍。
[0036]5.壯苗培養(yǎng)
[0037]將在增值培養(yǎng)基中誘導(dǎo)出的重生芽分割成單個(gè)芽，接種于壯苗培養(yǎng)基中，壯苗培養(yǎng)基為WPM+AC0.5g/L+添加蔗糖30g/L+瓊脂6.8g/L，PH值為5.85。暗培養(yǎng)48小時(shí)，培養(yǎng)溫度為25°C，其余時(shí)間光照16h，黑暗8h，光強(qiáng)2300lux。培養(yǎng)4周。
[0038]6.生根培養(yǎng)
[0039]將在壯苗培養(yǎng)基中壯苗培養(yǎng)過(guò)的單個(gè)芽切除莖段基部0.2CM，切去基部ICM以內(nèi)的所有葉片，保留上部葉片，接種于配置好的生根培養(yǎng)基中進(jìn)行誘導(dǎo)生根，生根培養(yǎng)基為I/2WPM+IBA1.0mg/L+NAA0.5mg/L+ACl.0g/L+添加蔗糖 15g/L+瓊脂6.8g/L，培養(yǎng)基的pH為
5.85。接種后暗培養(yǎng)48小時(shí)，然后全光照培養(yǎng)。培養(yǎng)溫度為25°C，光照時(shí)間16h，黑暗8h，光強(qiáng)23001ux。培養(yǎng)6周可誘導(dǎo)出根，植株長(zhǎng)高至3cm,健壯，主根為2條以上，長(zhǎng)度約3cm。
[0040]采用直觀觀察方法，進(jìn)行檢驗(yàn)，結(jié)果表明，本發(fā)明的方法具有操作簡(jiǎn)單、重復(fù)性好；種苗健壯、生長(zhǎng)迅速，種苗莖粗1.0mm，高30mm以上，大小一致，高度整齊;無(wú)愈傷組織產(chǎn)生，低變異、低性狀分離;生根效果好，根系2—4條，根系移栽存活率高，移栽存活率90%以上。
【主權(quán)項(xiàng)】
1.紙樺組織培養(yǎng)種苗繁育方法，其特征在于，依次包括如下步驟: (1)外植體的選擇: 選擇溫室培養(yǎng)一年以上的幼態(tài)嫩梢，從頂芽起向下截取帶腋芽莖段的枝條，作為外植體。 (2)外植體進(jìn)行消毒: (3)啟動(dòng)培養(yǎng): 將消毒滅菌后的外植體兩端分別切除0.2?0.4CM，接入啟動(dòng)培養(yǎng)基中培養(yǎng)； (4)增殖培養(yǎng): 將步驟(3)獲得的無(wú)菌萌芽沿莖段縱向分割，一分為二，接種于增殖培養(yǎng)基中培養(yǎng)； (5)壯苗培養(yǎng): 將步驟(4)獲得的在增值培養(yǎng)基中誘導(dǎo)出的叢生芽分割成單個(gè)芽，接種于壯苗培養(yǎng)基中培養(yǎng)； (6)生根培養(yǎng) 將步驟(5)獲得單個(gè)芽切除莖段基部0.1?0.3cm，切去基部Icm以內(nèi)的所有葉片，保留上部葉片，接種于配置好的生根培養(yǎng)基中進(jìn)行誘導(dǎo)生根。2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，步驟(I)中，從頂芽起向下截取帶2?6個(gè)腋芽莖段的枝條，去除葉片，切取單節(jié)帶腋芽莖段作為外植體，每莖段帶一腋芽，長(zhǎng)I?2.5cm。3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，步驟(2)中，將外植體用醫(yī)用酒精棉擦拭，然后置于漂白水:無(wú)菌水體積比例為1:3?5的稀釋漂白水中，震蕩消毒10?30min，用無(wú)菌水洗滌。4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，步驟(3)的培養(yǎng)方法如下；暗室培養(yǎng)36?60小時(shí)，然后光照時(shí)間12?20小時(shí)，黑暗6?10小時(shí)，光強(qiáng)2000?30001UX，20?30攝氏度培養(yǎng)5?7周，休眠腋芽萌發(fā)，獲得無(wú)菌苗株； 所述的啟動(dòng)培養(yǎng)基為WPM+6-BA 1.5mg/L+GA32.0mg/L+蔗糖30g/L+瓊脂6.8g/L，培養(yǎng)基的pH為5.85。5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，步驟(4)的培養(yǎng)方法如下；暗培養(yǎng)36?60小時(shí)，20?30攝氏度，其余時(shí)間光照12?20小時(shí)，黑暗6?10小時(shí)，光強(qiáng)2000?30001ux，培養(yǎng)5?7周，誘導(dǎo)產(chǎn)生從生芽； 增殖培養(yǎng)基為WPM+6-BA2.0mg/L+IAA0.5mg/L+GA3l.0mg/L+添加蔗糖30g/L+瓊脂6.8g/L，培養(yǎng)基的pH為5.85。6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，步驟(5)的培養(yǎng)方法如下:暗培養(yǎng)36?60小時(shí)，培養(yǎng)溫度為20?30攝氏度，其余時(shí)間光照12?20小時(shí)，黑暗6?10小時(shí)，光強(qiáng)2000?30001ux，培養(yǎng)3?5周； 壯苗培養(yǎng)基為WPM+AC0.5g/L+添加蔗糖30g/L+瓊脂6.8g/L，培養(yǎng)基的pH為5.85。7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，步驟(6)的培養(yǎng)方法如下:接種后暗培養(yǎng)36?60小時(shí)，然后全光照培養(yǎng)。培養(yǎng)溫度為20?30攝氏度，光照12?20小時(shí)，黑暗6?10小時(shí)，光強(qiáng)2000?30001ux，培養(yǎng)5?7周，獲得出根種苗； 生根培養(yǎng)基為 1/2WPM+IBA1.0mg/L+NAA0.5mg/L+ACl.0g/L+添加蔗糖 15g/L+瓊脂6.8g/L，培養(yǎng)基的pH為5.85。
【文檔編號(hào)】A01H4/00GK105941147SQ201610296708
【公開(kāi)日】2016年9月21日
【申請(qǐng)日】2016年5月6日
【發(fā)明人】胡春宏, 常蘋, 王婷婷, 季翔
【申請(qǐng)人】江蘇東郁園林科技有限公司