一種辣椒疫病的防控方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001 ]本發(fā)明涉及農(nóng)作物病害防治領(lǐng)域，特別是一種一種辣椒疫病的防控方法。
【背景技術(shù)】
[0002] 辣椒疫病是由辣椒疫霉病菌引起的、在世界范圍內(nèi)普遍發(fā)生的土傳病害。該病害 最早是在1918年被發(fā)現(xiàn)在辣椒產(chǎn)區(qū)嚴(yán)重發(fā)生，隨后該發(fā)病區(qū)域的辣椒疫病連年發(fā)生，且不 斷蔓延至周圍地區(qū)。目前，辣椒疫病在美洲、亞洲、歐洲等多個(gè)國(guó)家和地區(qū)普遍發(fā)生，已經(jīng)成 為限制辣椒產(chǎn)業(yè)持續(xù)發(fā)展的重大病害之一。我國(guó)于1950年首次在江蘇發(fā)現(xiàn)此病，隨后，甘 肅省在1987年、陜西省在1989年發(fā)生了辣椒疫病大流行，現(xiàn)在辣椒疫病在我國(guó)辣椒產(chǎn)區(qū)已 經(jīng)普遍發(fā)生，且有逐年加重和蔓延的趨勢(shì)，已經(jīng)成為嚴(yán)重限制辣椒產(chǎn)業(yè)發(fā)展的瓶頸。
[0003] 辣椒疫病的發(fā)生受氣候、土壤類型、辣椒品種、灌溉方式以及田間管理水平等多種 因素影響，因該種病害造成的死苗率達(dá)15.1%，發(fā)生嚴(yán)重的可減產(chǎn)40-70%，甚至絕收。目前， 國(guó)內(nèi)外用于防治辣椒疫病的方法主要有化學(xué)藥劑防治、生物防治、選育抗病品種及農(nóng)業(yè)措 施等。雖然對(duì)各項(xiàng)防治技術(shù)都存在長(zhǎng)時(shí)間的研究和應(yīng)用的報(bào)到，且仍在不斷取得進(jìn)步與發(fā) 展，但在生產(chǎn)層面大規(guī)模推廣應(yīng)用層面仍缺乏防效穩(wěn)定、經(jīng)濟(jì)可行、可操作性的防控措施。
[0004] 生物炭(biochar)是由生物殘?bào)w、有機(jī)廢棄物等生物質(zhì)在無(wú)氧或缺氧條件下高溫 裂解(通常小于700°C)產(chǎn)生的固體產(chǎn)物，制炭過程中，原生物質(zhì)的細(xì)微孔隙結(jié)構(gòu)被完好地 保留在生物炭中，這種多孔性使得制備的生物炭具有較大的表面積;此外，羧基、酚羥基、羥 基、脂肪族雙鍵以及芳香化等典型結(jié)構(gòu)，使得生物炭具備了極強(qiáng)的吸附能力、抗氧化能力 和抗生物分解能力等，從而使得生物炭廣泛應(yīng)用于農(nóng)業(yè)、工業(yè)、環(huán)境、能源等領(lǐng)域。生物炭在 土壤中的應(yīng)用效果主要有:改善土壤團(tuán)粒結(jié)構(gòu)，降低土壤酸度，提高土壤保水、保肥性和養(yǎng) 分利用率，促進(jìn)菌根真菌、根瘤菌及其他有益微生物的生長(zhǎng)繁殖，促進(jìn)植物生長(zhǎng)和提高產(chǎn) 量，防控植物植物病害，吸附土壤中的重金屬和有機(jī)污染物等有毒有害物質(zhì)。研究表明用城 市生活垃圾制備的生物炭施入土壤能減少青枯病菌引起的番前青枯病;Ogawa研究發(fā)現(xiàn)生 物炭和生物炭與堆肥混合物均能抑制細(xì)菌和真菌引起的土傳病害，此外有報(bào)道公開使用桉 樹木和溫室有機(jī)廢棄物制備的生物炭均能促進(jìn)黃瓜生長(zhǎng)并抑制立枯絲核菌引起的黃瓜猝 倒病。
[0005] 生物炭對(duì)土傳病害的防控作用與其對(duì)土壤微生物性狀的改善有較大相關(guān)性，主要 表現(xiàn)在：1)提高土壤或植物根際的微生物數(shù)量和微生物活性;2)促進(jìn)菌根真菌在植物根部 的侵染與增殖;3)促進(jìn)有益微生物的生長(zhǎng);4)改善微生物群落結(jié)構(gòu)。生物炭對(duì)土壤微生物的 影響首先表現(xiàn)在增加土壤微生物數(shù)量和微生物活性，生物炭的多孔性為細(xì)菌、放線菌和真 菌的生存繁殖提供棲息地，且利于微生物躲避土壤掠奪性動(dòng)物的侵襲，對(duì)土壤微生物有一 定保護(hù)作用；Steinbeiss報(bào)道生物炭促進(jìn)土壤革蘭氏陰性細(xì)菌的生長(zhǎng);Elad試驗(yàn)數(shù)據(jù)顯示 生物炭能增加土壤中可培養(yǎng)細(xì)菌、放線菌、酵母菌和絲狀真菌(包含木霉)等的數(shù)量。然而也 有相關(guān)研究顯示，生物炭施用到土壤后對(duì)土傳病害的防控效果不穩(wěn)定，有時(shí)候甚至沒有防 控效果。這主要原因是受生物炭的施用時(shí)間以及生物炭激發(fā)的土壤微生物的種類隨機(jī)性較 大，可預(yù)見性較小，不能形成穩(wěn)定抑制病害的土壤環(huán)境。
[0006] 綠色木霉由于其生長(zhǎng)速度快、生物量大以及較強(qiáng)的生態(tài)競(jìng)爭(zhēng)能力、對(duì)許多植物病 原真菌的生長(zhǎng)抑制作用以及對(duì)作物生長(zhǎng)的促進(jìn)作用，江蘇省農(nóng)科院從土壤中篩選到一株保 藏號(hào)為CGMCC No. 9293的綠色木霉綠色木霉，并在申請(qǐng)?zhí)枮?01510361863.6，發(fā)明名稱為 "高效防控西瓜枯萎病的方法及其專用微生物菌株"的專利文獻(xiàn)中公開，該菌對(duì)西瓜枯萎病 菌有強(qiáng)烈的生長(zhǎng)抑制作用，但是將該菌與生物炭混合施用，防治辣椒疫病，尚未見相關(guān)報(bào) 道。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0007] 針對(duì)上述問題，本發(fā)明提供一種操作簡(jiǎn)單、防效高達(dá)90-100%的防控辣椒疫病的方 法，本發(fā)明是這樣實(shí)現(xiàn)的： 一種利用生物炭防控辣椒疫病的方法，具體步驟如下： 首先清除大田中前茬作物殘?bào)w，按常規(guī)方法施化肥和有機(jī)肥，然后將綠色木霉菌與生 物炭混合，混合物以300-400公斤/畝的施用量均勻撒施，再將土壤旋耕20-25cm，澆水灌溉 至土壤水分含量為18-20%，放置10-30d后，再栽植辣椒；所述綠色木霉菌是指保藏號(hào)為 CGMCC No.9293的綠色木霉TV41菌。
[0008] 進(jìn)一步，本發(fā)明中，所述將綠色木霉菌與生物炭混合是指:將生物炭粉碎后過2毫 米篩，然后加入保藏號(hào)為CGMCC No.9293的綠色木霉TV41菌劑混合，混合物中綠色木霉TV41 菌的含菌量為2X107cf u/g;所述生物炭是由玉米、小麥或水稻秸桿經(jīng)500°C燒制后獲得的。
[0009] 進(jìn)一步，本發(fā)明中，所述綠色木霉TV41菌劑是這樣獲得的： (1) 將保藏號(hào)為CGMCC No. 9293的綠色木霉TV41菌接種到試管斜面培養(yǎng)基PDA中，28±2 °C培養(yǎng)3天;再將綠色木霉菌株轉(zhuǎn)接到TOB液體培養(yǎng)基中，裝液量為80ml/250ml，然后于28 土 2°C溫度下?lián)u床培養(yǎng)3-4天，搖床的轉(zhuǎn)速160rpm; (2) 培養(yǎng)結(jié)束后以5%的接種量V/W接入固體培養(yǎng)基中，于28± 2°C培養(yǎng)6-8天，期間每隔 2-3天翻拌一次，直至產(chǎn)孢； (3) 將綠色木霉菌連同固體培養(yǎng)基自然風(fēng)干或30°C烘干，粉碎過10-20目篩，即獲得綠 色木霉固體菌劑，其含菌量為l〇1(W1cfu/g; 所述的試管斜面培養(yǎng)基PDA配制方法為:稱取馬鈴薯100克，去皮，切成塊煮沸半小時(shí)， 然后用兩層紗布過濾，再加葡萄糖10克，瓊脂10克，溶化后補(bǔ)足水至500毫升，分裝到25毫升 的試管中，每個(gè)試管5毫升培養(yǎng)基，121°C，滅菌15min后擺成斜面?zhèn)溆?，斜面高度不超過試管 長(zhǎng)度的三分之一； 所述的液體培養(yǎng)基TOB配制方法為:稱取馬鈴薯100克，去皮，切成塊煮沸半小時(shí)，然后 用兩層紗布過濾，再加人葡萄糖10克，溶化后補(bǔ)足水至500毫升，分裝到三角瓶中，每個(gè)250 毫升三角瓶裝80毫升，121°C，滅菌15min后冷卻備用； 所述固體培養(yǎng)基的配制方法為:將麩皮與不大于5_長(zhǎng)度的稻草按照質(zhì)量比7:3的均勻 混合，再加入去離子水使混合物中的水分含量為65%，然后121°C滅菌40min，冷卻備用。
[0010] 本發(fā)明打破現(xiàn)有技術(shù)中在辣椒定植時(shí)、或定植后再使用菌劑的常規(guī)防治方法，通 過提前10-30天在土壤中施用含有綠色木霉的生物炭，使得土壤有充裕的時(shí)間形成以功能 微生物為優(yōu)勢(shì)種群的穩(wěn)定的微生物區(qū)系，營(yíng)造不利于病原菌生存的環(huán)境，繼而防控辣椒疫 病，其有益效果體現(xiàn)于： (1) 基于生物炭可以改善土壤的物理、化學(xué)性狀并激發(fā)土壤多種微生物活性的特征，本 發(fā)明在辣椒定植前10-30天施用猜桿生物炭改良辣椒疫病發(fā)生嚴(yán)重的土壤，營(yíng)造不利于病 原菌生長(zhǎng)繁殖的環(huán)境，減少病原菌數(shù)量，降低病害發(fā)生幾率，提高對(duì)辣椒疫病的防控效果， 為秸桿生物炭的高附加值利用開辟新途徑； (2) 施用的生物炭中含有廣譜防病功能的綠色木霉菌劑，該綠色木霉在土壤中繁殖速 度快，且對(duì)辣椒疫霉有強(qiáng)烈的生長(zhǎng)抑制作用，可以達(dá)到穩(wěn)定、持續(xù)抑制病原菌數(shù)量增加、增 強(qiáng)病害防控效果的目的。整個(gè)施用過程簡(jiǎn)單，易于操作，適于大面積推廣使用;施用的綠色 木霉在土壤和辣椒根際有較強(qiáng)的競(jìng)爭(zhēng)和繁殖能力，優(yōu)化辣椒的微生物區(qū)系組成，發(fā)揮對(duì)作 物促生、防病效果，為保護(hù)地土傳病害防治和微生物資源的高效利用開辟新的途徑。
[0011] (3)在辣椒移栽前10-30天施入含有綠色木霉的生物炭后，土壤有機(jī)質(zhì)、速效磷和 速效鉀含量增加，土壤細(xì)菌和真菌總體數(shù)量顯著增加，土壤中可培養(yǎng)的拮抗微生物數(shù)量明 顯增加，土壤多種酶學(xué)活性提高，辣椒疫霉數(shù)量減少，辣椒疫病的發(fā)病率比對(duì)照顯著降低， 防效可達(dá)90-100%，辣椒植株生物量比不施用生物炭提高10-20%，對(duì)設(shè)施栽培土壤性狀改良 和可持續(xù)利用以及設(shè)施農(nóng)業(yè)的持續(xù)發(fā)展具有重要意義。
【附圖說(shuō)明】
[0012] 圖1為實(shí)施例綠色木霉對(duì)辣椒疫霉病菌抑菌試驗(yàn)結(jié)果示意圖。
[0013] 圖2為實(shí)施例不同處理對(duì)辣椒疫病的防控效果示意圖。
【具體實(shí)施方式】
[0014] 實(shí)施例中涉及的培養(yǎng)基配方： 試管斜面培養(yǎng)基PDA配制方法為:稱取馬鈴薯100克，去皮，切成塊煮沸半小時(shí)，然后用 兩層紗布過濾，再加葡萄糖10克，瓊脂10克，溶化后補(bǔ)足水至500毫升，分裝到25毫升的試管 中，每個(gè)試管5毫升培養(yǎng)基，121°C，滅菌15min后擺成斜面?zhèn)溆茫泵娓叨炔怀^試管長(zhǎng)度的 三分之一。
[0015] PDA平板的配制方法為:稱取馬鈴薯100克，去皮，切成塊煮沸半小時(shí)，然后用兩層 紗布過濾，再加葡萄糖10克，瓊脂10克，溶化后補(bǔ)足水至500毫升，平均分裝到5個(gè)250毫升的 三角瓶中，121°C，滅菌15min后冷卻到55-60°C，在超凈工作臺(tái)中將100毫升培養(yǎng)基均勻倒入 5個(gè)直徑8.5厘米的無(wú)菌培養(yǎng)皿中，每個(gè)培養(yǎng)皿倒入約20毫升培養(yǎng)基，冷卻后備用。
[0016] 液體培養(yǎng)基PDB配制方法為:稱取馬鈴薯100克，去皮，切成塊煮沸半小時(shí)，然后用 兩層紗布過濾，再加人葡萄糖10克，溶化后補(bǔ)足水至500毫升，分裝到三角瓶中，每個(gè)250毫 升三角瓶裝80毫升，121°C，滅菌15min后冷卻備用。
[0017] 固體培養(yǎng)基的配制方法為:將麩皮與不大于5_長(zhǎng)度的稻草按照質(zhì)量比7: 3的均勻 混合，再加入去離子水使混合物中的水分含量為65%，然后121°C滅菌40min，冷卻備用。
[0018] 實(shí)施例中涉及的菌劑來(lái)源： 實(shí)施例中所使用的綠色木霉菌(Trichoderma harzianum)為保藏號(hào)為CGMCC No. 9293 的綠色木霉TV41菌，由江蘇省農(nóng)業(yè)科學(xué)院提供。
[0019] 辣椒疫霉由中科院微生物菌種保藏中心提供。
[0020] 實(shí)施例1制備綠色木霉菌劑 a)菌種的活化 采用試管斜面保藏菌種的活化方法:將試管斜面保藏的綠色木霉菌挑取一塊直徑5mm 左右的菌絲塊接種到試管斜面培養(yǎng)基PDA中活化，