r>[0076]用封口膜將所述培養(yǎng)皿密封后，每天在光照條件下培養(yǎng)時(shí)，用紫外光照射所述培養(yǎng)皿的底部5min，連續(xù)照射90天。光觸媒能有效殺滅多種細(xì)菌，并能將細(xì)菌或真菌釋放出的毒素分解及無害化處理，也能進(jìn)一步地防止培養(yǎng)皿底部發(fā)霉。
[0077]實(shí)施例3
[0078]本發(fā)明提供一種促進(jìn)桄榔種子萌發(fā)的方法，包括以下步驟:
[0079]步驟一、將桄榔種子與濕珍珠巖按體積比為1:3混合均勻，密封后，在12°C下層積90天，得到層積后的桄榔種子;層積處理能解除種子休眠，促進(jìn)種子萌發(fā)。
[0080]步驟二、將所述層積后的桄榔種子裝入牛皮紙袋中后，置于裝有干燥硅膠的干燥器中，室溫干燥3h，得到干燥的桄榔種子。在萌發(fā)培養(yǎng)前，對種子進(jìn)行一點(diǎn)脫水處理，可以適當(dāng)提供萌發(fā)率。
[0081]所述的促進(jìn)桄榔種子萌發(fā)的方法中，所述濕珍珠巖由I重量份的珍珠巖和1.7重量份的無菌水混合后制得。
[0082]所述的促進(jìn)桄榔種子萌發(fā)的方法中，所述干燥器中所述層積后的桄榔種子與所述干燥硅膠的體積比為1: 100。
[0083]所述的促進(jìn)桄榔種子萌發(fā)的方法中，所述步驟一中將所述桄榔種子與所述濕珍珠巖混合之前，還包括對所述桄榔種子進(jìn)行殺菌的步驟，其具體步驟為:
[0084]將所述桄榔種子放入質(zhì)量分?jǐn)?shù)為0.1%的高錳酸鉀溶液中浸泡5min后，取出，用無菌水沖洗3次。對采集的桄榔種子進(jìn)行殺菌，能減少或消除種子上攜帶的病菌。
[0085]所述的促進(jìn)桄榔種子萌發(fā)的方法中，還包括:
[0086]所述步驟一中對所述桄榔種子進(jìn)行殺菌之后，將所述桄榔種子與所述濕珍珠巖混合之前，向所述濕珍珠巖中加入體積為所述濕珍珠巖體積25%的氣相白炭黑，其中，一半的所述氣相白炭黑吸收有自重15倍的50 %多菌靈可濕性粉劑250倍液，另一半的所述氣相白炭黑吸收有自重4倍的2.5 %多殺菌素懸浮劑1250倍液。氣相白炭黑能將吸收的50 %多菌靈可濕性粉劑250倍液和2.5 %多殺菌素懸浮劑1250倍液緩慢釋放出來，既能防止較高濃度的藥劑對種子萌發(fā)的影響，又能長效地為種子萌發(fā)提供適宜的生長環(huán)境。
[0087]所述的促進(jìn)桄榔種子萌發(fā)的方法中，還包括:
[0088]步驟三、對干燥的桄榔種子進(jìn)行殺菌，其具體步驟為:
[0089]先將干燥的桄榔種子放入體積分?jǐn)?shù)為75 %的乙醇水溶液中浸泡0.5min，取出，再放入質(zhì)量分?jǐn)?shù)為1%的次氯酸鈉水溶液中浸泡5min，取出，用無菌水沖洗3次，得到殺菌后的干燥的桄榔種子。對干燥的桄榔種子進(jìn)行殺菌，防止干燥的桄榔種子攜帶較多細(xì)菌，造成萌發(fā)培養(yǎng)過程中種子發(fā)霉，降低發(fā)芽率。
[0090]所述的促進(jìn)桄榔種子萌發(fā)的方法中，還包括:
[0091]步驟四、對步驟三中得到的殺菌后的干燥的桄榔種子進(jìn)行萌發(fā)培養(yǎng)，其具體步驟為:
[0092]在直徑為13cm的培養(yǎng)皿中均勻地鋪設(shè)厚度為1.5cm的珍珠巖后，向培養(yǎng)皿中加入105mL無菌水，再將50粒所述殺菌后的干燥的桄榔種子置于培養(yǎng)皿中，與珍珠巖混合均勻，之后用封口膜將培養(yǎng)皿密封，在30°C下，每天先在光照條件下培養(yǎng)12h，再在黑暗條件下培養(yǎng)12h，連續(xù)培養(yǎng)90天。
[0093]所述的促進(jìn)桄榔種子萌發(fā)的方法中，在步驟四中，還包括:
[0094]在所述培養(yǎng)皿中鋪設(shè)珍珠巖之前，向所述培養(yǎng)皿的底部均勻鋪設(shè)厚度為0.9cm的麥飯石球，并向培養(yǎng)皿中倒入12g的50%多菌靈可濕性粉劑125倍液，之后在所述麥飯石球上鋪設(shè)一層與培養(yǎng)皿直徑相同的濾紙，珍珠巖鋪設(shè)在所述濾紙上;萌發(fā)培養(yǎng)過程中，水分會逐漸向培養(yǎng)皿的底部層積，造成培養(yǎng)皿底部易發(fā)霉，在培養(yǎng)皿底部設(shè)置麥飯石球，麥飯石球能吸附細(xì)菌，且向培養(yǎng)皿中倒入有50 %多菌靈可濕性粉劑125倍液，麥飯石球能吸收水分和50 %多菌靈可濕性粉劑125倍液，并將吸收的藥劑緩慢釋放出來，能保證培養(yǎng)皿的底部處在無菌狀態(tài)。
[0095]將殺菌后的干燥的桄榔種子置于培養(yǎng)皿中之后，與珍珠巖混合均勻之前，向珍珠巖中加入15g的吸收有自重250倍殺菌劑的保水劑，之后與珍珠巖和殺菌后的干燥的桄榔種子混合均勻，最后向珍珠巖的表面均勻噴灑7g的甘油，其中，所述殺菌劑由以下重量份數(shù)的組分制成:溶菌酶0.25份、溶壁酶0.4份、殼聚糖0.15份、木醋液2份和水25份。溶菌酶能使細(xì)菌細(xì)胞壁破裂，還可與帶負(fù)電荷的病毒蛋白直接結(jié)合，與DNA、RNA、脫輔基蛋白形成復(fù)鹽，使病毒失活。溶壁酶能分解真菌細(xì)胞壁，酶解最適溫度為25-35°C，萌發(fā)培養(yǎng)的溫度為30°C，因而能使溶壁酶處在適宜的酶解溫度下。殼聚糖具有抑菌活性。木醋液能抑制雜菌的繁殖，具有防菌，防蟲的功效，木醋液中醋酸含量較高，溶液呈酸性，能溶解殼聚糖，且使溶菌酶和溶壁酶處在適宜的酸性環(huán)境下，提高了酶解效率。
[0096]所述的促進(jìn)桄榔種子萌發(fā)的方法中，所述培養(yǎng)皿的底部涂覆有光觸媒，所述的促進(jìn)桄榔種子萌發(fā)的方法，還包括:
[0097]用封口膜將所述培養(yǎng)皿密封后，每天在光照條件下培養(yǎng)時(shí)，用紫外光照射所述培養(yǎng)皿的底部4min，連續(xù)照射90天。光觸媒能有效殺滅多種細(xì)菌，并能將細(xì)菌或真菌釋放出的毒素分解及無害化處理，也能進(jìn)一步地防止培養(yǎng)皿底部發(fā)霉。
[0098]對比例I
[0099]I)采種、消毒:2014年9月，在廣西藥用植物園內(nèi)采收成熟的桄榔果實(shí)，將種子剝出后再用流動的自來水沖洗干凈，室內(nèi)陰干I天，篩取灰黑色堅(jiān)硬的種子400粒，平均分成八組，每組用300mL的質(zhì)量分?jǐn)?shù)為0.1 %的高錳酸鉀溶液浸泡消毒5分鐘，過濾出桄榔種子后用蒸餾水沖洗3遍，進(jìn)行第一次種子消毒。
[0100]2)將四組第一次消毒后的桄榔種子分別與濕珍珠巖按體積比為1: 3混合均勻，密封后，在10°C下層積90天，得到四組層積后的桄榔種子，另外四組不做層積處理。其中，濕珍珠巖由I重量份的珍珠巖和1.7重量份的水混合均勻得到。
[0101]3)脫水處理:將四組層積后的桄榔種子及四組不做層積處理的桄榔種子分別與3000g硅膠混合后置于干燥器內(nèi)脫水3小時(shí)。
[0102]4)萌發(fā)培養(yǎng):將四組依次經(jīng)過層積和脫水處理后的桄榔種子取出，標(biāo)記為CJl、CJ2、CJ3、CJ4;將四組未經(jīng)層積處理，但經(jīng)過脫水處理后的桄榔種子取出，標(biāo)記為CK1、CK2、CK3、CK4。之后將八組桄榔種子分別先用體積份數(shù)為75%的乙醇浸種0.5分鐘，再用質(zhì)量分?jǐn)?shù)為1%的次氯酸鈉水溶液浸種5分鐘，最后用無菌蒸餾水沖洗3次，進(jìn)行第二次種子消毒。將第二次消毒后的每組桄榔種子均勻擺放到玻璃培養(yǎng)皿內(nèi)(直徑為13cm的玻璃培養(yǎng)皿內(nèi)預(yù)先鋪滿珍珠巖，經(jīng)過120°C高溫滅菌處理20分鐘)，封口膜封口后置于光照培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)90天。設(shè)置光照培養(yǎng)箱每天8:00至20:00進(jìn)行光照，光照強(qiáng)度為1000?30001x，培養(yǎng)溫度為300C;其余時(shí)間為黑暗，培養(yǎng)溫度為30°C。
[0103]90天后以胚根突破種皮的桄榔種子粒數(shù)占每組供試種子粒數(shù)的百分比記為種子萌發(fā)率，經(jīng)層積處理的(^1、(^2、(^3、(^4的種子萌發(fā)率分別為68%、78%、85%、73%，平均萌發(fā)率達(dá)76%;而未經(jīng)層積處理的0(1、0(2、0(3、0(4的種子萌發(fā)率分別2%、6%、0%、2%，平均萌發(fā)率達(dá)2.5%。說明經(jīng)過層積處理使桄榔種子的萌發(fā)率提高30.4倍。
[0104]對比例2
[0105]I)采種、消毒:2014年9月，在廣西藥用植物園內(nèi)采收成熟的桄榔果實(shí)，將種子剝出后再用流動的自來水沖洗干凈，室內(nèi)陰干I天，篩取灰黑色堅(jiān)硬的種子400粒，平均分成八組，每組用300mL的質(zhì)量分?jǐn)?shù)為0.1 %的高錳酸鉀溶液浸泡消毒5分鐘，過濾出桄榔種子后用蒸餾水沖洗3遍。
[0106]2)將八組第一次消毒后的桄榔種子分別與濕珍珠巖按體積比為1: 3混合均勻，密封后，在10°C下層積90天，得到八組層積后的桄榔種子。其中，濕珍珠巖由I重量份的珍珠巖和1.7重量份的水混合均勻得到。
[0107]3)脫水處理:將八組層積后的桄榔種子分別與3000g硅膠混合后置于干燥器內(nèi)脫水3小時(shí)。
[0108]4)萌發(fā)培養(yǎng):將四組依次經(jīng)過層積和脫水處理后的桄榔種子取出，標(biāo)記為CAl、CA2、CA3、CA4;將另外四組依次經(jīng)過層積和脫水處理后的桄榔種子取出，標(biāo)記為CB1、CB2、CB3、CB4。之后將八組桄榔種子分別先用體積份數(shù)為75%的乙