一種鐵皮石斛壯苗生根培養(yǎng)基及制備方法和培養(yǎng)方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明屬于植物生物工程技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種鐵皮石斛壯苗生根培養(yǎng)基及制備方法和培養(yǎng)方法。
【背景技術(shù)】
[0002]鐵皮石斛為蘭科石斛屬多年生草本植物，在《道藏》中被列為“中華九大仙草”之首，具有強(qiáng)陰益精、養(yǎng)胃生津、降三高、提高人體免疫力、抗衰老、抗腫瘤等功效。因其具有獨(dú)特的功效，鐵皮石斛自古以來(lái)一直為廣大養(yǎng)生之士所青睞。野生鐵皮石斛主要分布在浙江、安徽、貴州、江西、云南等地，鐵皮石斛種子因其獨(dú)特的構(gòu)造，無(wú)法獨(dú)自萌發(fā)，只有在碰到合適的共生菌的情況下才有可能自然萌發(fā)，加之人們對(duì)野生資源的瘋狂采挖，現(xiàn)在野生鐵皮石斛資源已經(jīng)瀕臨滅絕。隨著現(xiàn)代生物組培技術(shù)的發(fā)展，目前鐵皮石斛種苗的人工繁育技術(shù)已經(jīng)逐漸形成。
[0003]傳統(tǒng)的鐵皮石斛組織培養(yǎng)中，壯苗生根一般是在基礎(chǔ)培養(yǎng)基的基礎(chǔ)上通過(guò)添加激素如NAA、6-BA等促進(jìn)鐵皮石斛種苗的生長(zhǎng)和增值。但激素添加的合理種類(lèi)、添加量很難掌握，往往需要花費(fèi)許多的時(shí)間和精力進(jìn)行大量的基礎(chǔ)研究。不當(dāng)或者過(guò)量的添加會(huì)導(dǎo)致組培苗生長(zhǎng)緩慢、弱小、葉片黃化斑駁、整體失綠、變異率升高等情況，加之部分表征往往有表現(xiàn)滯后性，這些不利因素均嚴(yán)重影響種苗的高效生產(chǎn)和大田栽培的成活率。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0004]本發(fā)明所要解決的第一個(gè)技術(shù)問(wèn)題是提供一種無(wú)激素、無(wú)有害化學(xué)成分添加、快速促進(jìn)壯苗生根的鐵皮石斛壯苗生根培養(yǎng)基。
[0005]本發(fā)明所要解決的第二個(gè)技術(shù)問(wèn)題是提供一種可操作性強(qiáng)的鐵皮石斛壯苗生根培養(yǎng)基的制備方法。
[0006]本發(fā)明所要解決的第三個(gè)技術(shù)問(wèn)題是提供一種利用上述培養(yǎng)基培養(yǎng)鐵皮石斛壯苗的方法。
[0007]本發(fā)明解決上述第一個(gè)技術(shù)問(wèn)題所采用的技術(shù)方案為:一種鐵皮石斛壯苗生根培養(yǎng)基，該培養(yǎng)基由基礎(chǔ)培養(yǎng)基和額外添加于基礎(chǔ)培養(yǎng)基中的添加物組成，該培養(yǎng)基的pH值為6.0-6.4，以所述的基礎(chǔ)培養(yǎng)基的重量計(jì)，所述的添加物在所述的基礎(chǔ)培養(yǎng)基中的添加量分別為:椰子汁1~3 %、去皮馬鈴薯1~3 %、去皮香蕉3~5 %、干大_&3~5 %、粉狀活性炭
0.05-0.10 %、蔗糖 2-3 %、瓊脂 0.55-0.75 %。
[0008]所述的基礎(chǔ)培養(yǎng)基為l/3~2/3MS基礎(chǔ)培養(yǎng)基。MS基礎(chǔ)培養(yǎng)基是目前使用最普遍的培養(yǎng)基，其組成包括大量元素、微量元素、鐵鹽、有機(jī)成分、肌醇等等，可以自制或者選擇市售產(chǎn)品。1/3MS基礎(chǔ)培養(yǎng)基即大量元素變?yōu)樵瓉?lái)的1/3的培養(yǎng)基，同理2/3MS基礎(chǔ)培養(yǎng)基即大量元素變?yōu)樵瓉?lái)的2/3的培養(yǎng)基。本申請(qǐng)選用l/3~2/3MS基礎(chǔ)培養(yǎng)基，可更好地促進(jìn)鐵皮石斛苗的生長(zhǎng)。
[0009]本發(fā)明解決上述第二個(gè)技術(shù)問(wèn)題所采用的技術(shù)方案為:一種鐵皮石斛壯苗生根培養(yǎng)基的制備方法，包括以下步驟:
1)添加物的預(yù)處理:將新鮮椰子榨汁得到椰子汁，將馬鈴薯和香蕉去皮，將干大豆于20-28 °(:水中泡發(fā)8~12小時(shí)，并準(zhǔn)備好粉狀活性炭、蔗糖、瓊脂，備用；
2)基礎(chǔ)培養(yǎng)基的配制:配制基礎(chǔ)培養(yǎng)基；
3)添加物的添加:以基礎(chǔ)培養(yǎng)基的重量計(jì)，稱(chēng)取各添加物，各添加物在基礎(chǔ)培養(yǎng)基中的添加量分別為:椰子汁1~3 %、去皮馬鈴薯1~3 %、去皮香蕉3~5 %、干大顯3~5 %、粉狀活性炭0.05~0.10 %、蔗糖2~3 %、瓊脂0.55~0.75 %，將椰子汁、去皮馬鈴薯、去皮香蕉、大豆、粉狀活性炭、蔗糖和瓊脂依次添加至基礎(chǔ)培養(yǎng)基中，得到鐵皮石斛壯苗生根培養(yǎng)基，用NaOH溶液將鐵皮石斛壯苗生根培養(yǎng)基的pH值調(diào)至6.0-6.4 ;
4)分裝與滅菌:將鐵皮石斛壯苗生根培養(yǎng)基加熱到85~90°C，保溫5~8 min后分裝，然后在121 °C的高壓蒸汽中滅菌20~25 min，最后將滅完菌的培養(yǎng)基冷卻備用。
[0010]本發(fā)明解決上述第三個(gè)技術(shù)問(wèn)題所采用的技術(shù)方案為:一種利用上述培養(yǎng)基培養(yǎng)鐵皮石斛壯苗的方法，培養(yǎng)過(guò)程為:在培養(yǎng)基中接種高度為1~1.5 cm的鐵皮石斛母苗，在24-28 °C下每天光照11~13小時(shí)，光照強(qiáng)度為2500~3000 Lux，直至壯苗生根。
[0011]與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明的優(yōu)點(diǎn)在于:本發(fā)明鐵皮石斛壯苗生根培養(yǎng)基，采用天然添加物代替?zhèn)鹘y(tǒng)激素，無(wú)有害化學(xué)成分添加，有效避免了傳統(tǒng)培養(yǎng)基添加激素調(diào)試時(shí)間長(zhǎng)、工作量大、培養(yǎng)出的種苗穩(wěn)定性差、變異率高的問(wèn)題；本發(fā)明鐵皮石斛壯苗生根培養(yǎng)基的制備方法簡(jiǎn)便、易操作，原料來(lái)源廣、成本低；利用本發(fā)明培養(yǎng)基培養(yǎng)的鐵皮石斛壯苗生根時(shí)間短，一般在11~12周，且培養(yǎng)的種苗苗體粗壯，形狀穩(wěn)定，品質(zhì)優(yōu)良，根系發(fā)達(dá)，移栽成活率可達(dá)99.2 %以上，無(wú)變異情況出現(xiàn)，因此本發(fā)明培養(yǎng)基可大幅提高鐵皮石斛種植的效率、成活率和質(zhì)量。
【具體實(shí)施方式】
[0012]以下結(jié)合實(shí)施例對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步詳細(xì)描述。
[0013]實(shí)施例一的鐵皮石斛壯苗生根培養(yǎng)基，由1/3MS基礎(chǔ)培養(yǎng)基和額外添加于基礎(chǔ)培養(yǎng)基中的添加物組成，該培養(yǎng)基的pH值為6.0，以1/3MS基礎(chǔ)培養(yǎng)基的重量計(jì)，添加物在1/3MS基礎(chǔ)培養(yǎng)基中的添加量分別為:椰子汁1 %、去皮馬鈴薯1 %、去皮香蕉3 %、干大顯3%、粉狀活性炭0.05 %、蔗糖2 %、瓊脂0.55 %，該鐵皮石斛壯苗生根培養(yǎng)基的制備方法包括以下步驟:
1)添加物的預(yù)處理:將新鮮椰子榨汁得到椰子汁，將馬鈴薯和香蕉去皮，將干大豆于25 °(:水中泡發(fā)10小時(shí)，并準(zhǔn)備好粉狀活性炭、蔗糖、瓊脂，備用；
2)基礎(chǔ)培養(yǎng)基的配制:配制1/3MS基礎(chǔ)培養(yǎng)基；
3)添加物的添加:以1/3MS基礎(chǔ)培養(yǎng)基的重量計(jì)，稱(chēng)取各添加物并依次添加至1/3MS基礎(chǔ)培養(yǎng)基中，得到鐵皮石斛壯苗生根培養(yǎng)基，用NaOH溶液將鐵皮石斛壯苗生根培養(yǎng)基的pH值調(diào)至6.0 ；
4)分裝與滅菌:將鐵皮石斛壯苗生根培養(yǎng)基加熱到85°C，保溫5 min后分裝，然后在121 °C的高壓蒸汽中滅菌20 min，最后將滅完菌的培養(yǎng)基冷卻，即制得實(shí)施例一的培養(yǎng)基。
[0014]利用實(shí)施例一的培養(yǎng)基培養(yǎng)鐵皮石斛壯苗的方法，培養(yǎng)過(guò)程為:在培養(yǎng)基中接種高度為1~1.5 cm的鐵皮石斛母苗，在24 °C下每天光照13小時(shí)，光照強(qiáng)