石斛蘭提取物中二芳基乙烷類化合物在抗植物病原真菌中的應(yīng)用
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及植物化學(xué)技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種從石斛蘭中提取分離的二芳基乙烷 類化合物在抗植物病原真菌中的應(yīng)用。
【背景技術(shù)】
[0002] 石斛蘭為蘭科石斛屬植物石斛蘭（Dendrobium nobile)的干燥莖，該植物不僅可 以用于觀賞也可以以其干燥的莖入藥，其具有滋陰養(yǎng)胃、清熱生津、潤(rùn)肺止咳以及明目強(qiáng)身 的功效。從石斛屬植物中分離得到的二芳基乙烷類化合物已有報(bào)道，但未見(jiàn)它們有抗植物 病原真菌活性的報(bào)道。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0003] 本發(fā)明所要解決的技術(shù)問(wèn)題是提供一種從石斛蘭中提取分離的二芳基乙烷類化 合物在抗植物病原真菌中的應(yīng)用。
[0004] 為解決上述技術(shù)問(wèn)題，本發(fā)明采用的技術(shù)方案如下：
[0005] 石斛蘭提取物中二芳基乙烷類化合物在抗植物病原真菌中的應(yīng)用，所述的二芳基 乙烷類化合物結(jié)構(gòu)式如下：
[0006]
[0007] 其中Rp R2、R3、心分別獨(dú)立選自為-OCH 3或-OH或-H。
[0008] 優(yōu)選的結(jié)構(gòu)之一是，札為-OCH 3,私為-OH，R 3為-OH，R 4為-OCH 3。
[0009] 優(yōu)選的結(jié)構(gòu)之二是，札為-OCH 3,私為-OH，R 3為-H，R 4為-H。
[0010] 優(yōu)選的結(jié)構(gòu)之三是，札為-OCH 3,私為-OH，R 3為-H，R 4為-OH。
[0011] 優(yōu)選的結(jié)構(gòu)之四是，札為-H，R 2為-H，R 3為-H，R 4為-OCH 3。
[0012] 優(yōu)選的結(jié)構(gòu)之五是，札為-H，1?2為-H，R3為-H，1? 4為-0CH3。
[0013] 其中，所述的植物病原真菌為甘藍(lán)黑斑、煙草黑脛、辣椒炭疽、水稻胡麻葉、金桔沙 皮、甘蔗鳳梨、玉米大斑、茶輪斑或貢柑鏈格。
[0014] 上述二芳基乙烷類化合物的制備方法如下：
[0015] 1、制備石斛蘭提取物
[0016] 將石斛蘭干燥的莖粉碎后，按常規(guī)用30~95% v/v的乙醇冷浸或者是熱提，得到 提取液，減壓濃縮成膏狀，即為石斛蘭提取物。
[0017] 2、分離純化
[0018] 將上述提取物用水稀釋制成懸浮液后，依次用石油醚、乙酸乙酯進(jìn)行萃取，將乙酸 乙酯萃取液濃縮成浸膏，經(jīng)柱層析、薄層層析、分子篩層析分離得到5個(gè)二芳基乙烷類化合 物為：3Hiydroxy-5-methoxybibenzyl (1)、山藥素 ΠΙ (2)、Gigantol (3)、Tristin (4)以及 3, 3' , 5-trihydroxybibenzyl (5)〇
[0020] 其中，柱層析的條件為：用200~300目硅膠上柱，乙酸乙酯體積百分?jǐn)?shù)為25%的 乙酸乙酯-石油醚混合溶劑為洗脫劑。
[0021 ] 其中，薄層層析條件為：以乙酸乙酯體積百分?jǐn)?shù)為33 %的乙酸乙酯-石油醚混合 溶劑為展開劑。
[0022] 其中，分子篩層析條件為：分子篩為Sephadex LH-20,以氯仿體積百分?jǐn)?shù)為50% 的氯仿-甲醇混合溶劑為洗脫劑。
[0023] 有益效果：本發(fā)明首次發(fā)現(xiàn)了二芳基乙烷類化合物具有抗植物病原真菌的活性， 可用于制備抗植物病原真菌的藥物。
【具體實(shí)施方式】
[0024] 根據(jù)下述實(shí)施例，可以更好地理解本發(fā)明。然而，本領(lǐng)域的技術(shù)人員容易理解，實(shí) 施例所描述的內(nèi)容僅用于說(shuō)明本發(fā)明，而不應(yīng)當(dāng)也不會(huì)限制權(quán)利要求書中所詳細(xì)描述的本 發(fā)明。
[0025] 實(shí)施例1 :二芳基乙烷類化合物的制備。
[0026] 石斛蘭干燥的莖粉5Kg碎后，按常規(guī)用70 % v/v的乙醇浸提3次每次7天，得到 提取液，將提取液減壓濃縮成膏狀，得到石斛蘭提取物800g。將提取物用水稀釋成懸浮 液，依次用石油醚、乙酸乙酯萃取，將乙酸乙酯萃取液濃縮成浸膏，進(jìn)行硅膠柱層析，以石油 醚-乙酸乙酯混和溶劑（100:0 - 0:100, V/V)及乙酸乙酯-甲醇（100:0- 0:100, V/V)按極 性遞增進(jìn)行硅膠柱層析，并按每次約500mL收集餾分。通過(guò)TLC檢測(cè)合并相似流分分成10 個(gè)組分，即Fr. 1 - 10。Fr. 3進(jìn)行葡聚糖凝膠柱層析，再分別用高效液相制備制備洗脫機(jī)為 甲醇和水其體積配比為 3:2 得到 3-hydroxy-5-methoxybibenzyl (69mg)、山藥素 ΠΙ (78mg)、 Gigantol (85mg)、Tristin (67mg)以及 3, 3'，5-trihydroxybibenzyl (58mg) 〇
[0027] 5個(gè)化合物的結(jié)構(gòu)鑒定結(jié)果如下：
[0028] 3-hydroxy-5_methoxybibenzyl :白色粉末，分子式C15H1602。易溶于甲醇，微溶于 水。ESI-MS m/z: 229 [M+H]+，252 [M+Na]+。1H-匪R (CDCl3) :2.81-2. 92 (4H，m,-CH2-CH2-), 3.75(3H,s，-0CH3), -取代苯環(huán)上的 5 個(gè)氫信號(hào) L 17-7.30(5H，dd，H-2'/3'/4'/5'/6'）， 三取代苯環(huán)上的 3 個(gè)氫信號(hào) 6. 25-6. 32 (3H, d, H-2/4/6)。13C-NMR (CDCl3) : 144. 7 (C-I), 108. I (C-2)，161. 0 (C-3)，99. 2 (C-4)，156. 7 (C-5)，106. 9 (C-6)，38. I (C-7)，37. 7 (C-8)，1 41. 8 (C-1，），128. 5 (C-2,，6'），128. 6 (C-3,，5'），126. I (C-4,），55. 4 (C-5-0CH3)。以上數(shù) 據(jù)與文南犬(Ali, M. A. , Kondo, K. , Tsuda, Υ. Synthesisi and nematocidal acitivity of hydroxystilbenes [J] · Chem. Pharm. Bull.，1992, 40 (5) : 1130 - 1125)報(bào)道一致，確定其為 3-hydroxy-5_methoxybibenzyl〇
[0029] 山藥素 ΠΙ :白色粉末，分子式分子式C15H16O3。易溶于甲醇，微溶于水。ESI-MS m/ z: 245 [M+H]+，267 [M+Na] +。1H-NMR(CDCl3) : 2. 77-2. 86 (4H，m，-CH2-CH2-), 3. 75 (3H，s，-OCH3) ，7.14(lH，t，H-5'），6.75(lH，d，H-6'），6.67(lH，d，H-4'），6.65(lH，d，H-2'），6.31(lH，d，H-6) 6· 26 (2H，d，H-2/4)。13C-NMR (CDCl3) : 144. 4 (C-I)，107. 9 (C-2)，156. 6 (C-3)，99. I (C-4)，I 60. 9 (C-5)，106. 8 (C-6)，37. 7 (C-7)，37. 4 (C-8)，143. 6 (C-Γ )，115. 5 (C-2,），155. 5 (C-3,）， 112. 9(C-4'），129. 6(C-5'），121. 0(C-6'），55. 3(C-5-0CH3)。
[0030] Gigantol :白色粉末，分子式分子式C16H18O4。易溶于甲醇，微溶于水。ESI-MS m/ z : 275 [M+H]+，297 [M+Na]+。1H-匪R (CDCl3) :2· 76-2. 84 (4H，m，-CH2-CH2-)，3. 75 (3H，s，-OC H3)，3. 84 (3H，s，-OCH3)，6. 83 (1H，d，H-5)，6. 68 (1H，dd，H-6)，6. 62 (1H，d，H-2)，6. 32 (1H， s，H-6'），6· 26 (2H，d，H-2' /4'）。13C-NMR (CDCl3) : 144. 7 (C-Γ )，108. 2 (C-2,），156. 7 (C-3 ，），99. 2 (C-4,），161. 0 (C-5,），107. 0 (C-6,），37. 4 (C-8)，38. 4 (C-8)，133. 8 (C-I)，114. 4 (C-2), 146. 4 (C-3), 143. 9 (C-4), 111. 3 (C-5), 121. I (C-6), 55. 4 (C-5-〇CH3