專利名稱:一種殺真菌農(nóng)用抗生素及其制備工藝的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于農(nóng)藥生產(chǎn)技術(shù)領(lǐng)域：
，特別是涉及一種可產(chǎn)生殺真菌的農(nóng)用抗生素制備工藝和用途。
二背景技術(shù)：
農(nóng)藥是保證農(nóng)作物穩(wěn)產(chǎn)、高產(chǎn)，解決世界糧食問題不可缺少的重要物資，同時(shí)也是一個(gè)能獲得巨大經(jīng)濟(jì)利益和社會(huì)效益的產(chǎn)業(yè)。然而，化學(xué)農(nóng)藥殘留所引起的環(huán)境污染、人畜中毒、病原菌或害蟲抗藥性增強(qiáng)等問題日趨嚴(yán)重，大力研究、開發(fā)、生產(chǎn)和應(yīng)用生物農(nóng)藥，已成為全球農(nóng)藥產(chǎn)業(yè)發(fā)展的新趨勢。目前世界各國正在采取實(shí)際步驟減少化學(xué)農(nóng)藥的使用，如美國環(huán)保局曾宣布撤銷91種化學(xué)農(nóng)藥的登記；歐盟制定了減少一半化學(xué)農(nóng)藥使用量的五年和十年計(jì)劃，并禁止在直接入口的瓜果蔬菜等農(nóng)產(chǎn)品生產(chǎn)中使用化學(xué)農(nóng)藥。我國也已將發(fā)展生物農(nóng)藥和綠色食品列入《中國21世紀(jì)議程》。因此，研究和開發(fā)高效、低毒、與環(huán)境兼容性良好、病蟲害不易產(chǎn)生抗性的新型農(nóng)用抗生素將會(huì)具有更加廣闊的市場前景。
農(nóng)用抗生素作為生物農(nóng)藥中的重要類群，較其它生物農(nóng)藥具有更高效、快速、安全等優(yōu)點(diǎn)。自1958年日本成功開發(fā)出滅瘟素并用于防治稻瘟病以來，日、美、英、法等國相繼開展了農(nóng)用抗生素的研究與開發(fā)工作，并取得很大的成就。隨著科學(xué)技術(shù)的發(fā)展和國際學(xué)術(shù)交流的日益頻繁，我國在農(nóng)用抗生素方面的研發(fā)工作取得很大的成就。也開發(fā)出一些擁有自主知識產(chǎn)權(quán)、高效、廣譜的農(nóng)用抗生素如井岡霉素、中生菌素、公主嶺霉素、農(nóng)抗120等，且均在農(nóng)作物病蟲害防治工作中發(fā)揮著重要作用。但是，目前我國生物農(nóng)藥的市場占有率僅有2％～3％，其潛力遠(yuǎn)沒有得到充分的開發(fā)和應(yīng)用。
現(xiàn)有的農(nóng)用抗生素主要用于水稻、小麥等大田農(nóng)作物的病蟲害防治，而用于防治蔬菜和果樹上的特別是真菌病害如黃瓜霜霉病、枯萎病、番茄葉霉病、灰霉病、辣椒疫病、葡萄黑痘病等的生物農(nóng)藥則相對較少，因此，針對蔬菜和果樹上的重要病害，研究和開發(fā)廣譜高效的新型農(nóng)用抗生素，在我國乃至國際上都有著十分重要的意義，本項(xiàng)發(fā)明就是在此背景下創(chuàng)制的。
三
發(fā)明內(nèi)容1、發(fā)明目的本發(fā)明提供一種產(chǎn)生殺真菌農(nóng)用抗生素的菌株及其發(fā)酵工藝，其目的在于能有效控制植物真菌病害，同時(shí)能保障人畜安全和保護(hù)環(huán)境。
2、技術(shù)方案本發(fā)明是通過以下技術(shù)方案來實(shí)現(xiàn)的一種殺真菌農(nóng)用抗生素，其特征在于它的化學(xué)結(jié)構(gòu)式為 其分子式為C35H53NO13，其分子量為695。
該農(nóng)用抗生素的制備工藝，其特征在于該工藝按如下步驟依次進(jìn)行(A)菌種擴(kuò)繁過程采用殺真菌素鏈霉菌Streptomyces fungicidicusYh06，它的菌種保藏編號為CGMCC NO.1247，在種子罐中加入下列基礎(chǔ)培養(yǎng)成分，按重量百分含量計(jì)花生餅粉 2.0～4.0；大豆餅粉 2.0～5.0；玉米粉 1.0～4.0；玉米漿 0.4～1.2；酵母浸粉 0.02～0.1；碳酸鈣 0.1～0.3；
氯化鈉 0.1～0.5；硫酸銨 0.05～1.2；硫酸鋅 0.01～0.06；硫酸鎂 0.01～0.06；其余含量為水，滅菌30分鐘備用；培養(yǎng)條件在種子罐中培養(yǎng)40小時(shí)～50小時(shí)；其溫度控制在26℃～30℃，pH值6.0～8.0，罐壓控制在0.05～0.2Mpa；(B)發(fā)酵抗生素生成過程將A步驟種子罐中形成的培養(yǎng)液送入發(fā)酵罐進(jìn)行發(fā)酵；在發(fā)酵罐內(nèi)主要加入下列培養(yǎng)基，按重量百分含量計(jì)花生餅粉 2.0～4.0；大豆餅粉 2.0～5.0；玉米粉 1.0～4.0；玉米漿 0.2～1.0；酵母浸粉 0.1～0.5；碳酸鈣 0.1～0.3；氯化鈉 0.1～0.5；硫酸銨 0.05～0.2；硫酸鋅 0.01～0.06；其余含量為水，滅菌30分鐘備用；在上述物料放入發(fā)酵罐后，滅菌前調(diào)整pH值使其控制在6.0～8.0；培養(yǎng)時(shí)罐壓控制在0.05～0.2MPa，空氣流量1∶(0.2～1.0)，培養(yǎng)溫度26～30℃，時(shí)間為40小時(shí)～50小時(shí)；(C)發(fā)酵后處理，按以下步驟依次進(jìn)行1)放罐前，管道預(yù)先進(jìn)行消毒；2)對發(fā)酵液進(jìn)行加熱使其溫度達(dá)到80～100℃，維持10分鐘，之后迅速冷卻；
3)用濃度為6N的鹽酸調(diào)整發(fā)酵液的pH值使其控制在3.5～5.0；再將發(fā)酵液進(jìn)行過濾，過濾得清液；4)將清液抽入到濃縮罐中，在700mmHg真空度，蒸汽壓0.02～0.06MPa，溫度在60℃～80℃條件下進(jìn)行減壓濃縮，使?jié)饪s液效價(jià)控制在15000單位/ml以上；5)加入穩(wěn)定劑、助劑后得成品。
所述的殺真菌農(nóng)用抗生素的制備工藝，其特征在于由種子罐送入發(fā)酵罐的上罐接種量為8％～15％(V/V)，菌株在種子罐的培養(yǎng)時(shí)間為40～50小時(shí)。
所述的殺真菌農(nóng)用抗生素的制備工藝，其特征在于種子罐和發(fā)酵罐中均加入玉米油0.5～0.8/萬(V/V)和硅酮消泡劑0.5～0.8/萬(V/V)。
所述的殺真菌農(nóng)用抗生素的制備工藝，其特征在于發(fā)酵后處理步驟中，穩(wěn)定劑采用苯甲酸和硫酸銅，助劑為Toween80；按重量百分含量計(jì)苯甲酸加入濃縮液的0.1％～0.4％，硫酸銅為濃縮液的1％～2％，Toween80按重量百分含量計(jì)是濃縮液的0.1％～0.5％。
所述的殺真菌農(nóng)用抗生素的用途，其特征在于該化合物用作防治和治療植物的真菌病害。
3、優(yōu)點(diǎn)及效果本發(fā)明具有穩(wěn)定的原料來源，且成本低，適合大規(guī)模工業(yè)化生產(chǎn)，如發(fā)酵配方中所采用的原料主要有玉米淀粉、花生餅粉、酵母粉、葡萄糖等。產(chǎn)品質(zhì)量穩(wěn)定。在保證原料穩(wěn)定的同時(shí)，可以通過嚴(yán)格控制各項(xiàng)發(fā)酵參數(shù)，來控制成品的質(zhì)量，從而形成科學(xué)完整的質(zhì)量體系，該產(chǎn)品對光、熱、酸等穩(wěn)定，濃縮液在常溫下保存2年不失效。本產(chǎn)品低毒，對人、畜無毒害，對農(nóng)作物無藥害，不刺激皮膚、眼等，耐雨水沖刷。防治植物真菌病害效果明顯。據(jù)遼寧省幾個(gè)市、縣及北京、吉林、黑龍江等地蔬菜、煙草、玉米等作物大田試驗(yàn)。
四具體實(shí)施方式本發(fā)明是采用以下方案實(shí)施的實(shí)施例1
一種可產(chǎn)生殺真菌的農(nóng)用抗生素的菌株，其學(xué)名為殺真菌素鏈霉菌Streptomyces fungicidicus Yh06，它的菌種保藏編號為CGMCC NO.1247；該菌株細(xì)胞壁屬于氨基酸I型，其全細(xì)胞糖類型屬于糖型C。該菌株在高氏一號、克氏一號、PDA、葡萄糖酵母瓊脂、瓦氏肉汁瓊脂培養(yǎng)基上生長良好；在高氏一號培養(yǎng)基上氣生菌絲和孢子堆在生長初期呈白色，之后逐漸變成灰色或淺灰色，基內(nèi)菌絲多為黃色或淺黃色，可溶性色素黃色、淺黃色；氣生菌絲柔直、末端略微彎曲，孢子絲呈鏈狀；孢子球型或卵圓形，表面光滑；該菌株明膠液化較強(qiáng)，能使牛奶凝固且胨化，能在纖維素上生長但不分解，水解淀粉，不產(chǎn)生類黑色素和硫化氫，可利用葡萄糖、果糖、蔗糖、鼠李糖、乳糖、麥芽糖、阿拉伯糖、淀粉、檸檬酸鈉和肌醇等碳源，不能利用棉子糖。
采用該菌株生產(chǎn)一種農(nóng)用抗生素，其化學(xué)結(jié)構(gòu)式為 其分子式為C35H53NO13，其分子量為695，抗生素屬四烯類抗生素。
上述殺真菌農(nóng)用抗生素的發(fā)酵工藝，其特征在于可按如下步驟依次進(jìn)行(A)菌種擴(kuò)繁過程采用殺真菌素鏈霉菌(Streptomyces fungicidicus Yh06)，在種子罐中加入下列基礎(chǔ)培養(yǎng)成分，按重量百分含量計(jì)花生餅粉 4.0；大豆餅粉 2.0；玉米粉 2.0；
玉米漿 0.4；酵母浸粉 0.03；碳酸鈣 0.15；氯化鈉 0.15；硫酸銨 0.05；硫酸鋅 0.01；硫酸鎂 0.01；其余含量為水，滅菌30分鐘。
培養(yǎng)條件在種子罐中培養(yǎng)30小時(shí)～40小時(shí)；其溫度控制在26℃～30℃，pH值6.0～7.0，罐壓控制在0.05～0.2MPa，(B)發(fā)酵抗生素生成過程將A步驟形成的種子培養(yǎng)液送入發(fā)酵罐，上罐接種量為10％～15％(V/V)；在發(fā)酵罐內(nèi)主要加入下列培養(yǎng)基，按重量百分含量計(jì)花生餅粉 4.0大豆餅粉 3.0；玉米粉 1.0；玉米漿 0.2酵母浸粉 0.15；碳酸鈣 0.2；氯化鈉 0.2；硫酸銨 0.05；硫酸鋅 0.06其余含量為水，滅菌30分鐘備用。
在上述物料放入發(fā)酵罐后，滅菌前調(diào)整pH值使其控制在6.0；培養(yǎng)時(shí)罐壓控制在0.05MPa，空氣流量1∶0.5，培養(yǎng)溫度為28℃，時(shí)間為45小時(shí)，發(fā)酵罐中加玉米油0.5/萬(V/V)和硅酮消泡劑0.5/萬(V/V)。
(C)發(fā)酵后處理，按以下步驟依次進(jìn)行1)放罐前，管道預(yù)先進(jìn)行消毒；2)對發(fā)酵液進(jìn)行加熱使其溫度達(dá)到100℃，維持10分鐘，之后迅速冷卻；3)用濃度為6N的鹽酸調(diào)整發(fā)酵液的pH值使其控制在3.5；再將發(fā)酵液進(jìn)行過濾，過濾得清液；4)將清液抽入到濃縮罐中，在700mmHg真空度，蒸汽壓0.02MPa，溫度在65℃條件下進(jìn)行減壓濃縮，使?jié)饪s液效價(jià)控制在15000單位/ml以上；5)加入穩(wěn)定劑、助劑后得成品。穩(wěn)定劑采用苯甲酸和硫酸銅，助劑為Toween80。按重量百分含量計(jì)苯甲酸加入濃縮液的0.2％，硫酸銅為濃縮液的2％，Toween80按重量百分含量計(jì)是濃縮液的0.1％。
實(shí)施例2、試驗(yàn)地選擇在沈陽市東陵區(qū)英達(dá)鄉(xiāng)生產(chǎn)農(nóng)戶保護(hù)地番茄的農(nóng)戶。該農(nóng)戶生產(chǎn)番茄已有7年的歷史，早春季節(jié)的葉霉病、灰霉病、早疫病等已成為常發(fā)病害。試驗(yàn)在2003和2004年每年進(jìn)行了2次。采用本發(fā)明的殺真菌農(nóng)用抗生素，這兩年基本無上述病害的發(fā)生。此外，在遼寧、山東等幾個(gè)地方的試驗(yàn)田內(nèi)實(shí)施，發(fā)現(xiàn)該殺真菌農(nóng)用抗生素還具有對黃瓜霜霉病、枯萎病、辣椒疫病、葡萄黑痘病等都具有治療和預(yù)防的作用，說明其具有廣譜的、抑殺真菌的作用。
最后需要說明的是這種可產(chǎn)生殺真菌的農(nóng)用抗生素的菌株，其保藏在中國微生物菌種保藏管理委員會(huì)普通微生物中心，地址為北京海淀區(qū)中關(guān)村北一條13號，中國科學(xué)院微生物所，保藏日期為2004年11月22日。
權(quán)利要求
1.一種殺真菌農(nóng)用抗生素，其特征在于它的化學(xué)結(jié)構(gòu)式為 其分子式為C35H53NO13，其分子量為695。
2.一種如權(quán)利要求
1所述的殺真菌農(nóng)用抗生素的制備工藝，其特征在于該工藝按如下步驟依次進(jìn)行(A)菌種擴(kuò)繁過程采用殺真菌素鏈霉菌(Streptomyces fungicidicusYh06)，它的菌種保藏編號為CGMCC NO.1247，在種子罐中加入下列基礎(chǔ)培養(yǎng)成分，按重量百分含量計(jì)花生餅粉 2.0～4.0；大豆餅粉 2.0～5.0；玉米粉 1.0～4.0；玉米漿 0.4～1.2；酵母浸粉 0.02～0.1；碳酸鈣 0.1～0.3；氯化鈉 0.1～0.5；硫酸銨 0.05～1.2；硫酸鋅 0.01～0.06；硫酸鎂 0.01～0.06；其余含量為水，滅菌30分鐘備用；培養(yǎng)條件在種子罐中培養(yǎng)40小時(shí)～50小時(shí)；其溫度控制在26℃～30℃，pH值6.0～8.0，罐壓控制在0.05～0.2Mpa；(B)發(fā)酵抗生素生成過程將A步驟種子罐中形成的培養(yǎng)液送入發(fā)酵罐進(jìn)行發(fā)酵；在發(fā)酵罐內(nèi)主要加入下列培養(yǎng)基，按重量百分含量計(jì)花生餅粉 2.0～4.0；大豆餅粉 2.0～5.0；玉米粉 1.0～4.0；玉米漿 0.2～1.0；酵母浸粉 0.1～0.5；碳酸鈣 0.1～0.3；氯化鈉 0.1～0.5；硫酸銨 0.05～0.2；硫酸鋅 0.01～0.06；其余含量為水，滅菌30分鐘備用；在上述物料放入發(fā)酵罐后，滅菌前調(diào)整pH值使其控制在6.0～8.0；培養(yǎng)時(shí)罐壓控制在0.05～0.2MPa，空氣流量1(0.2～1.0)，培養(yǎng)溫度為26～30℃，時(shí)間為40小時(shí)～50小時(shí)；(C)發(fā)酵后處理，按以下步驟依次進(jìn)行1)放罐前，管道預(yù)先進(jìn)行消毒；2)對發(fā)酵液進(jìn)行加熱使其溫度達(dá)到80～100℃，維持10分鐘，之后迅速冷卻；3)用濃度為6N的鹽酸調(diào)整發(fā)酵液的pH值使其控制在3.5～5.0；再將發(fā)酵液進(jìn)行過濾，過濾得清液；4)將清液抽入到濃縮罐中，在700mmHg真空度，蒸汽壓0.02～0.06MPa，溫度在60℃～80℃條件下進(jìn)行減壓濃縮，使?jié)饪s液效價(jià)控制在15000單位/ml以上；5)加入穩(wěn)定劑、助劑后得成品。
3.根據(jù)權(quán)利要求
2所述的殺真菌農(nóng)用抗生素的制備工藝，其特征在于由種子罐送入發(fā)酵罐的上罐接種量為8％～15％(V/V)，菌株在種子罐的培養(yǎng)時(shí)間為40～50小時(shí)。
4.根據(jù)權(quán)利要求
3所述的殺真菌農(nóng)用抗生素的制備工藝，其特征在于種子罐和發(fā)酵罐中均加入玉米油0.5～0.8/萬(V/V)和硅酮消泡劑0.5～0.8/萬(V/V)。
5.根據(jù)權(quán)利要求
3所述的殺真菌農(nóng)用抗生素的制備工藝，其特征在于發(fā)酵后處理步驟中，穩(wěn)定劑采用苯甲酸和硫酸銅，助劑為Toween80；按重量百分含量計(jì)苯甲酸加入濃縮液的0.1％～0.4％，硫酸銅為濃縮液的1％～2％，Toween80按重量百分含量計(jì)是濃縮液的0.1％～0.5％。
6.一種如權(quán)利要求
1所述的殺真菌農(nóng)用抗生素的用途，其特征在于該化合物用作防治和治療植物的真菌病害。
專利摘要
本發(fā)明屬于農(nóng)藥生產(chǎn)技術(shù)領(lǐng)域：
，特別是涉及一種可產(chǎn)生殺真菌的農(nóng)用抗生素制備工藝和用途。該抗生素生產(chǎn)菌株為殺真菌素鏈霉菌，它的菌種保藏編號為CGMCC NO.1247；其產(chǎn)生的抗生素屬四烯類抗生素，其分子式為C
文檔編號A01P3/00GK1994086SQ200610139147
公開日2007年7月11日 申請日期2005年3月16日
發(fā)明者吳元華 申請人:吳元華導(dǎo)出引文BiBTeX, EndNote, RefMan