本發(fā)明屬于生物技術(shù)應(yīng)用領(lǐng)域，具體地，涉及一種高存活率mcf-7乳腺癌細(xì)胞凍存液。

背景技術(shù)：

乳腺癌是女性最常見(jiàn)的癌癥，主要包括導(dǎo)管癌和小葉癌。2016年美國(guó)ca（acancerjournalforclinicians）公布的最新統(tǒng)計(jì)數(shù)據(jù)顯示，美國(guó)2016年預(yù)計(jì)將有420840例女性患乳腺癌，占女性新發(fā)惡性腫瘤的38%，居女性惡性腫瘤發(fā)病率第一位，并且死亡人數(shù)將達(dá)52930例。更為嚴(yán)重的是全球的乳腺癌發(fā)病率正在逐年增長(zhǎng)。

細(xì)胞培養(yǎng)基是生物與健康相關(guān)研究領(lǐng)域的一項(xiàng)重要技術(shù)。隨著生命科學(xué)的迅速發(fā)展，目前細(xì)胞培養(yǎng)已成為細(xì)胞生物學(xué)、分子生物學(xué)、遺傳學(xué)和免疫學(xué)等學(xué)科研究的重要基礎(chǔ)。為了深入探討細(xì)胞的生長(zhǎng)活動(dòng)規(guī)律、有關(guān)疾病的病理和藥物的藥理（毒理）機(jī)制，開(kāi)發(fā)具有不同針對(duì)性的細(xì)胞培養(yǎng)方法具有重要意義。

其中，mcf-7乳腺癌細(xì)胞作為人源性低轉(zhuǎn)移乳腺癌細(xì)胞，常用于乳腺癌原位生長(zhǎng)、血管生成等乳腺癌的體內(nèi)外研究。此外，mcf-7乳腺癌細(xì)胞還會(huì)同其他乳腺癌高轉(zhuǎn)移性細(xì)胞進(jìn)行對(duì)比研究。然而，隨著研究過(guò)程中越來(lái)越多的運(yùn)用組織細(xì)胞培養(yǎng)增殖技術(shù)，將mcf-7乳腺癌細(xì)胞采用低溫度進(jìn)行長(zhǎng)期保存數(shù)月、數(shù)年、數(shù)十年甚至數(shù)百年，一旦需要，可隨時(shí)對(duì)所保存的細(xì)胞進(jìn)行復(fù)蘇，恢復(fù)其完整的形態(tài)結(jié)構(gòu)與生物學(xué)特性，供生命科學(xué)研究實(shí)驗(yàn)。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：

發(fā)明目的：本發(fā)明提供了一種高存活率mcf-7乳腺癌細(xì)胞凍存液，用于多種人源以及非人源細(xì)胞的培養(yǎng)。

技術(shù)方案：本發(fā)明提供了一種高存活率mcf-7乳腺癌細(xì)胞凍存液，以重量組分計(jì)，包括以下組分：二甲基亞砜5-15份、羥甲基淀粉2-5份、山梨糖3-12份、維生素c1-4份、50%高滲葡萄糖0.8-3份、丙二醇1-1.5份、(s)-(-)-1-(4-氟異喹啉-5-基）磺酰基-2-甲基-1,4-二氮環(huán)庚烷0.3-3份和基礎(chǔ)培養(yǎng)基80-90份。本發(fā)明所述的mcf-7乳腺癌細(xì)胞專(zhuān)用凍存液，組分合理，營(yíng)養(yǎng)豐富，其中，50%高滲葡萄糖為滲透性保護(hù)液，而(s)-(-)-1-(4-氟異喹啉-5-基)磺?；?2-甲基-1,4-二氮環(huán)庚烷則抑制細(xì)胞活動(dòng)和基因表達(dá)，維生素c的抗氧化性好，在保證休眠細(xì)胞的營(yíng)養(yǎng)的同時(shí)還可以顯著減少對(duì)細(xì)胞的損傷，提高凍存細(xì)胞的存活率，并且在增殖方面也保持很好的狀態(tài)，可以方便應(yīng)用于乳腺癌的原位生長(zhǎng)、血管生成以及與其他乳腺癌高轉(zhuǎn)移性細(xì)胞進(jìn)行對(duì)比研究等的相關(guān)研究。

進(jìn)一步的，上述的高存活率mcf-7乳腺癌細(xì)胞凍存液，所述基礎(chǔ)培養(yǎng)基以重量組分計(jì)，包括以下組分：葡萄糖82-88份、碳酸氫鈉12-25份、丙酮酸鈉10-16份、轉(zhuǎn)鐵蛋白3-8份、氯化鉀35-45份、無(wú)水硫酸鎂6-10份、氯化鈉70-78份、氯化鋰5-8份、無(wú)水磷酸二氫鈉10-14份、葉酸0.3-0.5份、肌醇0.8-1.2份、煙酰胺0.3-0.6份、無(wú)水氯化鈣25-35份、硝酸鐵0.2-0.4份、丁二酸6-8份、丁二酸鈉12-16份、d-泛酸鈣0.3-0.6份、酒石酸膽堿0.6-0.8份、核黃素0.1-0.3份、鹽酸硫胺0.2-0.4份、鹽酸吡哆辛0.3-0.5份、4-（2-羥乙基）-1-哌嗪乙磺酸0.3-0.6份、亞麻油1-1.5份、聚脂肪酸酯0.8-1.6份、酚紅鈉1-1.3份和去離子水100份。

進(jìn)一步的，上述的高存活率mcf-7乳腺癌細(xì)胞凍存液，所述基礎(chǔ)培養(yǎng)基還包括3-8份氨基酸，所述氨基酸以重量組分計(jì)，由以下組分組成：l-鹽酸精氨酸5-10份、l-鹽酸胱氨酸3-8份、l-絲氨酸3-6份、甘氨酸1-5份、l-鹽酸組氨酸4-6份、l-異亮氨酸8-20份、l-亮氨酸7-18份、l-鹽酸賴(lài)氨酸10-20份、l-甲硫氨酸1-6份、l-苯丙氨酸2-8份、l-蘇氨酸5-15份、l-色氨酸1-3份、l-酪氨酸5-9份和l-纈氨酸8-12份。

進(jìn)一步的，上述的高存活率mcf-7乳腺癌細(xì)胞凍存液，所述基礎(chǔ)培養(yǎng)基還包括2-5份輔助因子，所述輔助因子以重量組分計(jì)，由以下組分組成：胰島素生長(zhǎng)因子3-8份、白介素62-5份、白介素101-4份、白介素123-6份、tnf-β2-10份、gm-csf1-5份。基礎(chǔ)培養(yǎng)基組分合理，營(yíng)養(yǎng)豐富，可以提高mda-mb-231乳腺癌細(xì)胞凍存時(shí)的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)，保證凍存細(xì)胞的活性。

進(jìn)一步的，上述的高存活率mcf-7乳腺癌細(xì)胞凍存液，所述基礎(chǔ)培養(yǎng)基還包括體積比10-30%的胎牛血清。可以根據(jù)需要，進(jìn)一步增加胎牛血清，提高凍存細(xì)胞的存活率，保持細(xì)胞活性。

進(jìn)一步的，上述的高存活率mcf-7乳腺癌細(xì)胞凍存液，所述基礎(chǔ)培養(yǎng)基以重量組分計(jì)，還包括0.006份青霉素和0.01份的鏈霉素?？梢杂行Х乐箖龃婕?xì)胞被污染。

進(jìn)一步的，上述的高存活率mcf-7乳腺癌細(xì)胞凍存液，所述青霉素選自10000u/ml，所述鏈霉素選自10000μg/ml。青霉素和鏈霉素活性好，效果佳。

有益效果：本發(fā)明所述的mcf-7乳腺癌細(xì)胞專(zhuān)用凍存液，組分合理，營(yíng)養(yǎng)豐富，在保證休眠細(xì)胞的營(yíng)養(yǎng)的同時(shí)還可以顯著減少對(duì)細(xì)胞的損傷，提高凍存細(xì)胞的存活率，并且在增殖方面也保持很好的狀態(tài)，可以方便應(yīng)用于乳腺癌的原位生長(zhǎng)、血管生成以及與其他乳腺癌高轉(zhuǎn)移性細(xì)胞進(jìn)行對(duì)比研究等的相關(guān)研究。

具體實(shí)施方式

下面將通過(guò)幾個(gè)具體實(shí)施例，進(jìn)一步闡明本發(fā)明，這些實(shí)施例只是為了說(shuō)明問(wèn)題，并不是一種限制。

實(shí)施例1

一種高存活率mcf-7乳腺癌細(xì)胞凍存液，以重量組分計(jì)，包括以下組分：二甲基亞砜5份、羥甲基淀粉2份、山梨糖3份、維生素c1份、50%高滲葡萄糖0.8份、丙二醇1份、(s)-(-)-1-(4-氟異喹啉-5-基）磺?；?2-甲基-1,4-二氮環(huán)庚烷0.3份和基礎(chǔ)培養(yǎng)基80份。

其中，所述基礎(chǔ)培養(yǎng)基以重量組分計(jì)，包括以下組分：葡萄糖82份、碳酸氫鈉12份、丙酮酸鈉10份、轉(zhuǎn)鐵蛋白3份、氯化鉀35份、無(wú)水硫酸鎂6份、氯化鈉70份、氯化鋰5份、無(wú)水磷酸二氫鈉10份、葉酸0.3份、肌醇0.8份、煙酰胺0.3份、無(wú)水氯化鈣25份、硝酸鐵0.2份、丁二酸6份、丁二酸鈉12份、d-泛酸鈣0.3份、酒石酸膽堿0.6份、核黃素0.1份、鹽酸硫胺0.2份、鹽酸吡哆辛0.3份、4-（2-羥乙基）-1-哌嗪乙磺酸0.3份、亞麻油1份、聚脂肪酸酯0.8份、酚紅鈉1份和去離子水100份。

另，所述基礎(chǔ)培養(yǎng)基還包括3份氨基酸，所述氨基酸以重量組分計(jì)，由以下組分組成：l-鹽酸精氨酸5份、l-鹽酸胱氨酸3份、l-絲氨酸3份、甘氨酸1份、l-鹽酸組氨酸4份、l-異亮氨酸8份、l-亮氨酸7份、l-鹽酸賴(lài)氨酸10份、l-甲硫氨酸1份、l-苯丙氨酸2份、l-蘇氨酸5份、l-色氨酸1份、l-酪氨酸5份和l-纈氨酸8份。

再，所述基礎(chǔ)培養(yǎng)基還包括2份輔助因子，所述輔助因子以重量組分計(jì)，由以下組分組成：胰島素生長(zhǎng)因子3份、白介素62份、白介素101份、白介素123份、tnf-β2份、gm-csf1份。

進(jìn)一步的，所述基礎(chǔ)培養(yǎng)基還包括體積比10%的胎牛血清。此外，所述基礎(chǔ)培養(yǎng)基以重量組分計(jì)，還包括0.006份青霉素和0.01份的鏈霉素。并且，所述青霉素選自10000u/ml，所述鏈霉素選自10000μg/ml。

實(shí)施例2

一種高存活率mcf-7乳腺癌細(xì)胞凍存液，以重量組分計(jì)，包括以下組分：二甲基亞砜15份、羥甲基淀粉5份、山梨糖12份、維生素c4份、50%高滲葡萄糖3份、丙二醇1.5份、(s)-(-)-1-(4-氟異喹啉-5-基）磺?；?2-甲基-1,4-二氮環(huán)庚烷3份和基礎(chǔ)培養(yǎng)基90份。

其中，所述基礎(chǔ)培養(yǎng)基以重量組分計(jì)，包括以下組分：葡萄糖88份、碳酸氫鈉25份、丙酮酸鈉16份、轉(zhuǎn)鐵蛋白8份、氯化鉀45份、無(wú)水硫酸鎂10份、氯化鈉78份、氯化鋰8份、無(wú)水磷酸二氫鈉14份、葉酸0.5份、肌醇1.2份、煙酰胺0.6份、無(wú)水氯化鈣35份、硝酸鐵0.4份、丁二酸8份、丁二酸鈉16份、d-泛酸鈣0.6份、酒石酸膽堿0.8份、核黃素0.3份、鹽酸硫胺0.4份、鹽酸吡哆辛0.5份、4-（2-羥乙基）-1-哌嗪乙磺酸0.6份、亞麻油1.5份、聚脂肪酸酯1.6份、酚紅鈉1.3份和去離子水100份。

另，所述基礎(chǔ)培養(yǎng)基還包括8份氨基酸，所述氨基酸以重量組分計(jì)，由以下組分組成：l-鹽酸精氨酸10份、l-鹽酸胱氨酸8份、l-絲氨酸6份、甘氨酸5份、l-鹽酸組氨酸6份、l-異亮氨酸20份、l-亮氨酸18份、l-鹽酸賴(lài)氨酸20份、l-甲硫氨酸6份、l-苯丙氨酸8份、l-蘇氨酸15份、l-色氨酸3份、l-酪氨酸9份和l-纈氨酸12份。

再，所述基礎(chǔ)培養(yǎng)基還包括5份輔助因子，所述輔助因子以重量組分計(jì)，由以下組分組成：胰島素生長(zhǎng)因子8份、白介素65份、白介素104份、白介素126份、tnf-β10份、gm-csf5份。

進(jìn)一步的，所述基礎(chǔ)培養(yǎng)基還包括體積比30%的胎牛血清。此外，所述基礎(chǔ)培養(yǎng)基以重量組分計(jì)，還包括0.006份青霉素和0.01份的鏈霉素。并且，所述青霉素選自10000u/ml，所述鏈霉素選自10000μg/ml。

實(shí)施例3

一種高存活率mcf-7乳腺癌細(xì)胞凍存液，以重量組分計(jì)，包括以下組分：二甲基亞砜12份、羥甲基淀粉3份、山梨糖8份、維生素c2份、50%高滲葡萄糖2份、丙二醇1.2份、(s)-(-)-1-(4-氟異喹啉-5-基）磺?；?2-甲基-1,4-二氮環(huán)庚烷0.3-3份和基礎(chǔ)培養(yǎng)基85份。

其中，所述基礎(chǔ)培養(yǎng)基以重量組分計(jì)，包括以下組分：葡萄糖86份、碳酸氫鈉18份、丙酮酸鈉12份、轉(zhuǎn)鐵蛋白6份、氯化鉀40份、無(wú)水硫酸鎂8份、氯化鈉75份、氯化鋰6份、無(wú)水磷酸二氫鈉12份、葉酸0.4份、肌醇1份、煙酰胺0.5份、無(wú)水氯化鈣30份、硝酸鐵0.3份、丁二酸7份、丁二酸鈉14份、d-泛酸鈣0.5份、酒石酸膽堿0.7份、核黃素0.2份、鹽酸硫胺0.3份、鹽酸吡哆辛0.4份、4-（2-羥乙基）-1-哌嗪乙磺酸0.5份、亞麻油1.2份、聚脂肪酸酯1.2份、酚紅鈉1.2份和去離子水100份。

另，所述基礎(chǔ)培養(yǎng)基還包括5份氨基酸，所述氨基酸以重量組分計(jì)，由以下組分組成：l-鹽酸精氨酸8份、l-鹽酸胱氨酸6份、l-絲氨酸5份、甘氨酸4份、l-鹽酸組氨酸5份、l-異亮氨酸12份、l-亮氨酸10份、l-鹽酸賴(lài)氨酸16份、l-甲硫氨酸3份、l-苯丙氨酸6份、l-蘇氨酸9份、l-色氨酸2份、l-酪氨酸6份和l-纈氨酸10份。

再，所述基礎(chǔ)培養(yǎng)基還包括3份輔助因子，所述輔助因子以重量組分計(jì)，由以下組分組成：胰島素生長(zhǎng)因子4份、白介素64份、白介素103份、白介素125份、tnf-β8份、gm-csf3份。

進(jìn)一步的，所述基礎(chǔ)培養(yǎng)基還包括體積比20%的胎牛血清。此外，所述基礎(chǔ)培養(yǎng)基以重量組分計(jì)，還包括0.006份青霉素和0.01份的鏈霉素。并且，所述青霉素選自10000u/ml，所述鏈霉素選自10000μg/ml。

實(shí)施例4

一種高存活率mcf-7乳腺癌細(xì)胞凍存液，以重量組分計(jì)，包括以下組分：二甲基亞砜5份、羥甲基淀粉2份、山梨糖12份、維生素c4份、50%高滲葡萄糖2份、丙二醇1.2份、(s)-(-)-1-(4-氟異喹啉-5-基）磺酰基-2-甲基-1,4-二氮環(huán)庚烷1.5份和基礎(chǔ)培養(yǎng)基90份。

其中，所述基礎(chǔ)培養(yǎng)基以重量組分計(jì)，包括以下組分：葡萄糖82份、碳酸氫鈉25份、丙酮酸鈉16份、轉(zhuǎn)鐵蛋白5份、氯化鉀40份、無(wú)水硫酸鎂6份、氯化鈉78份、氯化鋰6份、無(wú)水磷酸二氫鈉12份、葉酸0.4份、肌醇1.2份、煙酰胺0.3份、無(wú)水氯化鈣28份、硝酸鐵0.2份、丁二酸8份、丁二酸鈉12份、d-泛酸鈣0.6份、酒石酸膽堿0.8份、核黃素0.1份、鹽酸硫胺0.4份、鹽酸吡哆辛0.3份、4-（2-羥乙基）-1-哌嗪乙磺酸0.6份、亞麻油1.2份、聚脂肪酸酯0.8份、酚紅鈉1.3份和去離子水100份。

另，所述基礎(chǔ)培養(yǎng)基還包括5份氨基酸，所述氨基酸以重量組分計(jì)，由以下組分組成：l-鹽酸精氨酸5份、l-鹽酸胱氨酸8份、l-絲氨酸3份、甘氨酸4份、l-鹽酸組氨酸5份、l-異亮氨酸12份、l-亮氨酸7份、l-鹽酸賴(lài)氨酸10份、l-甲硫氨酸6份、l-苯丙氨酸8份、l-蘇氨酸9份、l-色氨酸2份、l-酪氨酸8份和l-纈氨酸8份。

再，所述基礎(chǔ)培養(yǎng)基還包括2份輔助因子，所述輔助因子以重量組分計(jì)，由以下組分組成：胰島素生長(zhǎng)因子3份、白介素65份、白介素103份、白介素125份、tnf-β8份、gm-csf5份。

進(jìn)一步的，所述基礎(chǔ)培養(yǎng)基還包括體積比15%的胎牛血清。此外，所述基礎(chǔ)培養(yǎng)基以重量組分計(jì)，還包括0.006份青霉素和0.01份的鏈霉素。并且，所述青霉素選自10000u/ml，所述鏈霉素選自10000μg/ml。

將實(shí)施例1-4凍存的細(xì)胞分別取凍存后3個(gè)月、6個(gè)月、9個(gè)月、12個(gè)月、18個(gè)月以及24個(gè)月的凍存細(xì)胞進(jìn)行復(fù)蘇，并對(duì)細(xì)胞存活率進(jìn)行測(cè)定，細(xì)胞存活率均在90%以上。

以上所述僅是發(fā)明的幾個(gè)實(shí)施方式，應(yīng)當(dāng)指出，對(duì)于本技術(shù)領(lǐng)域的普通技術(shù)人員來(lái)說(shuō)，在不脫離發(fā)明原理的前提下，還可以做出若干改進(jìn)，這些改進(jìn)也應(yīng)視為本發(fā)明的保護(hù)范圍。