本發(fā)明涉及農(nóng)業(yè)生物技術(shù)中植物組織培養(yǎng)的方法，具體地說，涉及一種民族藥雞矢藤的組培快繁方法。

背景技術(shù)：

民族藥雞矢藤(paederiascandens)為茜草科雞矢藤屬植物，以根或全草入藥，是彝、苗、土家等24個少數(shù)民族常用的中草藥之一，具有袪風利濕，消食化積，止咳，止痛等功效，常用于風濕筋骨痛，跌打損傷，外傷性疼痛，肝膽、胃腸絞痛，黃疸型肝炎，消化不良，小兒疳積，肺結(jié)核咯血，支氣管炎，放療引起的白血球減少癥，農(nóng)藥中毒等疾病的治療。

雞矢藤屬多為柔弱纏繞性灌木或藤本，全世界約有40種，主產(chǎn)于亞洲熱帶地區(qū)，我國有12種，主要分布于西南、中南至華南地區(qū)，以西南部居多，其喜較溫暖環(huán)境，耐寒，多生于山坡谷地、溪邊及路邊或林下灌叢。到目前為止對雞矢藤的研究主要集中在其有效成分和藥理及臨床應用等方面，而有關(guān)其繁殖技術(shù)研究甚少。雞矢藤可通過種子、扦插、壓條等方式繁殖，但均存在周期長、繁殖系數(shù)低下等缺點。因此，有必要通過組織培養(yǎng)技術(shù)建立雞矢藤的組培快繁體系，為雞矢藤規(guī)?；N植提供優(yōu)質(zhì)種苗。本發(fā)明選擇雞矢藤帶節(jié)莖段為外植體，經(jīng)誘導、增殖、生根、煉苗以及移栽等步驟，建立了民族藥雞矢藤的組培快速繁殖體系。本發(fā)明具有周期短、成本低廉、繁殖系數(shù)高等特點，可直接用于雞矢藤種苗的工廠化生產(chǎn)，對于促進民族藥雞矢藤的資源開發(fā)具有重要的現(xiàn)實意義。

目前，國內(nèi)外尚未有雞矢藤組織培養(yǎng)技術(shù)的報道，也未有雞矢藤組培快繁專利的申請。

技術(shù)實現(xiàn)要素：

本發(fā)明的目的是提供一種民族藥雞矢藤的組培快繁方法，本發(fā)明選擇雞矢藤帶節(jié)莖段為外植體，經(jīng)誘導、增殖、生根、煉苗以及移栽等步驟，其誘導高達91.5％以上，達到了非常高的成活率，建立了民族藥雞矢藤的組培快速繁殖體系，從而實現(xiàn)了本發(fā)明的目的。

本發(fā)明提供的技術(shù)方案為：一種民族藥雞矢藤的組培快繁方法，包括依次進行的如下步驟：獲取雞矢藤的外植體、外植體誘導、增殖培養(yǎng)、生根培養(yǎng)、移栽；

所述的外植體誘導操作的外植體誘導培養(yǎng)基包括：ms培養(yǎng)基、3.0～5.0mg/lkt、0.5～1.0mg/lnaa、25～30g/l蔗糖、3.5～4.0g/l瓊脂、0.5～1.0g/l活性炭，外植體誘導培養(yǎng)基ph為5.4～5.8。

在上述的民族藥雞矢藤的組培快繁方法中，所述的外植體誘導操作的方法為：將采集得到的作為外植體的雞矢藤的帶節(jié)藤莖消毒后剪切成2.0～2.5cm的帶節(jié)藤莖并接種到誘導培養(yǎng)基中，置于25～28℃進行全暗培養(yǎng)20～25天即可誘導形成不定芽。

在上述的民族藥雞矢藤的組培快繁方法中，所述的增殖培養(yǎng)操作所用到的增殖培養(yǎng)基包括：ms培養(yǎng)基、3.0～5.0mg/l6-ba、0.5～1.0mg/lnaa、0.1～0.3mg/l2,4-d、20～30g/l蔗糖、3.5～4.0g/l瓊脂、0.1～0.5g/l活性炭，增殖培養(yǎng)基ph為5.4～5.8。

在上述的民族藥雞矢藤的組培快繁方法中，所述的增殖培養(yǎng)操作為：將經(jīng)增殖培養(yǎng)操作得到的不定芽切成長1.5～2.0cm的莖段并接種到增殖培養(yǎng)基中培養(yǎng)15～20天即可實現(xiàn)不定芽的增殖。

在上述的民族藥雞矢藤的組培快繁方法中，所述的生根培養(yǎng)操作所用到的生根培養(yǎng)基包括：1/2ms培養(yǎng)基、0.5～1.0mg/lggr-7、0.05～0.1mg/l矮壯素、15～20g/l蔗糖、3.0～4.0g/l瓊脂、0.1～0.3g/l活性炭，生根培養(yǎng)基ph為5.4～5.8。

在上述的民族藥雞矢藤的組培快繁方法中，所述的生根培養(yǎng)操作的方法為：從基部切取增殖培養(yǎng)操作得到的長2.0～3.0cm的不定芽并接種到生根培養(yǎng)基中培養(yǎng)20～25天即能實現(xiàn)試管苗的生根。

在上述的民族藥雞矢藤的組培快繁方法中，所述的移栽操作的具體方法為：將經(jīng)生根培養(yǎng)操作得到的根系生長良好的試管苗在溫室的自然光下煉苗1～2天，洗凈根部的培養(yǎng)基移栽于體積比為1:1的腐殖土、泥炭土混合基質(zhì)中栽培成苗即得種苗。

在上述的民族藥雞矢藤的組培快繁方法中，增殖培養(yǎng)操作、生根培養(yǎng)操中培養(yǎng)條件均為：培養(yǎng)溫度為25～28℃，光照強度為2500～3000lx，光照時間為11～13小時/天。

有益效果：

本發(fā)明采用植物組織培養(yǎng)技術(shù)建立了民族藥雞矢藤的組培快速繁殖體系，本發(fā)明具有周期短、成本低廉、繁殖系數(shù)高等特點，可直接用于雞矢藤種苗的工廠化生產(chǎn)，對于促進民族藥雞矢藤的資源開發(fā)具有重要的現(xiàn)實意義。

具體實施方式

下面結(jié)合具體實施方式，對本發(fā)明的技術(shù)方案作進一步的詳細說明，但不構(gòu)成對本發(fā)明的任何限制。

實施例一

(1)外植體采集：在野外選取生長健壯、無明顯病害的雞矢藤植株中上部、向陽充實的帶節(jié)藤莖為外植體，采集后立即進行保水保濕處理并及時帶回實驗室。

(2)外植體誘導：當步驟(1)采集回實驗室外植體先在自來水下沖洗5小時，置于超凈工作臺中于75％的乙醇溶液中消毒10秒鐘，無菌水沖洗3次后用無菌濾紙吸干水分后，置于0.1％的升汞溶液中消毒10分鐘，無菌水沖洗5次后用無菌濾紙吸干水分后切成2.0～2.5cm左右的帶節(jié)藤莖并接種到誘導培養(yǎng)基中，置于25℃進行全暗培養(yǎng)20天即可誘導形成不定芽，誘導率為95.8％，污染率低于12％。所述的誘導培養(yǎng)基為：ms培養(yǎng)基+5.0mg/lkt+1.0mg/lnaa+25g/l蔗糖+3.5g/l瓊脂+0.5g/l活性炭，ph為5.4。

(3)增殖培養(yǎng)：將步驟(2)誘導得到的不定芽切成長約1.5～2.0cm的莖段并接種到增殖培養(yǎng)基中培養(yǎng)15天即可實現(xiàn)不定芽的增殖，增殖系數(shù)達到7.0倍。所述的增殖培養(yǎng)基為：ms培養(yǎng)基+5.0mg/l6-ba+1.0mg/lnaa+0.3mg/l2,4-d+20g/l蔗糖+3.5g/l瓊脂+0.1g/l活性炭，ph為5.4。

(4)生根培養(yǎng)：從基部切取步驟(3)增殖得到的長約2.0～3.0cm的不定芽并接種到生根培養(yǎng)基中培養(yǎng)20天即能實現(xiàn)試管苗的生根，生根率為98％。所述的生根培養(yǎng)基為：1/2ms培養(yǎng)基+1.0mg/lggr-7(生根粉)+0.1mg/l矮壯素+15g/l蔗糖+3.0g/l瓊脂+0.1g/l活性炭，ph為5.4。

(5)移栽：將步驟(4)根系生長良好的試管苗在溫室的自然光下煉苗1天，洗凈根部的培養(yǎng)基移栽于體積比為1:1的腐殖土、泥炭土混合基質(zhì)中栽培成苗即得種苗，移栽30天后成活率96.5％。

上述步驟(3)～(4)的培養(yǎng)條件為：培養(yǎng)溫度為25℃，光照強度為2500lx，光照時間為11小時/天。

實施例二

(1)外植體采集：在野外選取生長健壯、無明顯病害的雞矢藤植株中上部、向陽充實的帶節(jié)藤莖為外植體，采集后立即進行保水保濕處理并及時帶回實驗室。

(2)外植體誘導：當步驟(1)采集回實驗室外植體先在自來水下沖洗6小時，置于超凈工作臺中于75％的乙醇溶液中消毒12秒鐘，無菌水沖洗4次后用無菌濾紙吸干水分后，置于0.1％的升汞溶液中消毒14分鐘，無菌水沖洗6次后用無菌濾紙吸干水分后切成2.0～2.5cm左右的帶節(jié)藤莖并接種到誘導培養(yǎng)基中，置于26℃進行全暗培養(yǎng)23天即可誘導形成不定芽，誘導率為93.1％。污染率低于10％。所述的誘導培養(yǎng)基為：ms培養(yǎng)基+4.0mg/lkt+0.8mg/lnaa+27g/l蔗糖+3.8g/l瓊脂+0.8g/l活性炭，ph為5.6。

(3)增殖培養(yǎng)：將步驟(2)誘導得到的不定芽切成長約1.5～2.0cm的莖段并接種到增殖培養(yǎng)基中培養(yǎng)17天即可實現(xiàn)不定芽的增殖，增殖系數(shù)達到6.2倍。所述的增殖培養(yǎng)基為：ms培養(yǎng)基+4.0mg/l6-ba+0.8mg/lnaa+0.2mg/l2,4-d+25g/l蔗糖+3.7g/l瓊脂+0.3g/l活性炭，ph為5.6。

(4)生根培養(yǎng)：從基部切取步驟(3)增殖得到的長約2.0～3.0cm的不定芽并接種到生根培養(yǎng)基中培養(yǎng)22天即能實現(xiàn)試管苗的生根，生根率為94.8％。所述的生根培養(yǎng)基為：1/2ms培養(yǎng)基+0.8mg/lggr-7(生根粉)+0.08mg/l矮壯素+18g/l蔗糖+3.5g/l瓊脂+0.2g/l活性炭，ph為5.6。

(5)移栽：將步驟(4)根系生長良好的試管苗在溫室的自然光下煉苗1.5天，洗凈根部的培養(yǎng)基移栽于體積比為1:1的腐殖土、泥炭土混合基質(zhì)中栽培成苗即得種苗，移栽30天后成活率為97％。

上述步驟(3)～(4)的培養(yǎng)條件為：培養(yǎng)溫度為27℃，光照強度為2700lx，光照時間為12小時/天。

實施例三

(1)外植體采集：在野外選取生長健壯、無明顯病害的雞矢藤植株中上部、向陽充實的帶節(jié)藤莖為外植體，采集后立即進行保水保濕處理并及時帶回實驗室。

(2)外植體誘導：當步驟(1)采集回實驗室外植體先在自來水下沖洗7小時，置于超凈工作臺中于75％的乙醇溶液中消毒15秒鐘，無菌水沖洗5次后用無菌濾紙吸干水分后，置于0.1％的升汞溶液中消毒15分鐘，無菌水沖洗7次后用無菌濾紙吸干水分后切成2.0～2.5cm左右的帶節(jié)藤莖并接種到誘導培養(yǎng)基中，置于28℃進行全暗培養(yǎng)25天即可誘導形成不定芽，誘導率為91.7％，污染率低于8％。所述的誘導培養(yǎng)基為：ms培養(yǎng)基+3.0mg/lkt+0.5mg/lnaa+30g/l蔗糖+4.0g/l瓊脂+1.0g/l活性炭，ph為5.8。

(3)增殖培養(yǎng)：將步驟(2)誘導得到的不定芽切成長約1.5～2.0cm的莖段并接種到增殖培養(yǎng)基中培養(yǎng)20天即可實現(xiàn)不定芽的增殖，增殖系數(shù)達到5.1倍。所述的增殖培養(yǎng)基為：ms培養(yǎng)基+3.0mg/l6-ba+0.5mg/lnaa+0.1mg/l2,4-d+25g/l蔗糖+3.8g/l瓊脂+0.3g/l活性炭，ph為5.6。

(4)生根培養(yǎng)：從基部切取步驟(3)增殖得到的長約2.0～3.0cm的不定芽并接種到生根培養(yǎng)基中培養(yǎng)23天即能實現(xiàn)試管苗的生根，生根率為92.9％。所述的生根培養(yǎng)基為：1/2ms培養(yǎng)基+0.5mg/lggr-7(生根粉)+0.05mg/l矮壯素+20g/l蔗糖+4.0g/l瓊脂+0.3g/l活性炭，ph為5.8。

(5)移栽：將步驟(4)根系生長良好的試管苗在溫室的自然光下煉苗2天，洗凈根部的培養(yǎng)基移栽于體積比為1:1的腐殖土、泥炭土混合基質(zhì)中栽培成苗即得種苗，移栽30天后成活率為95.6％。

上述步驟(3)～(4)的培養(yǎng)條件為：培養(yǎng)溫度為28℃，光照強度為3000lx，光照時間為13小時/天。

上述實施例為本發(fā)明較佳的實施方式，但本發(fā)明的實施方式并不受上述實施例的限制，其它的任何未背離本發(fā)明的精神實質(zhì)與原理下所作的改變、修飾、替代、組合、簡化，均應為等效的置換方式，都包含在本發(fā)明的保護范圍之內(nèi)。