本發(fā)明屬于食藥用菌栽培
技術(shù)領(lǐng)域：
，涉及一種白色牛樟芝子實(shí)體的培養(yǎng)方法及其培養(yǎng)基。
背景技術(shù)：
：牛樟芝(antrodiacinnamomea)屬于非折菌目、多孔菌料、薄孔菌屬、樟芝種，乃多年生蕈菌類。牛樟芝為臺灣特有的菌種，僅生長于臺灣特有種牛樟樹的中空樹洞中，且生長緩慢。牛樟芝含有豐富的活性物質(zhì)，牛樟芝子實(shí)體已知的生理活性成份主要有：多醋體(polysaccharides)、三萜類(triterpenoids)、超氧歧化酶(suproxidedismutase,sod)、腺苷(adenosines)、麥角固醇(ergosterols)等；其中，三萜類化合物具有多種生物活性，如保肝護(hù)肝、調(diào)節(jié)免疫、抑制血管新生、抗腫瘤、抗炎癥、抗氧化、降血壓等。大量文獻(xiàn)表明，牛樟芝具有多種生物活性，牛樟芝子實(shí)體在治療肝病(hepaticdisease)、無名腫毒、發(fā)熱(fever)、糖尿病、高血壓、解酒及抗癌等皆顯示器具有高度發(fā)展?jié)摿?。由于野生牛樟芝?shù)量稀少取得不易，并且有遭受環(huán)境污染的問題，因此近年來多以人工栽培方法來培養(yǎng)牛樟芝，目前主要生產(chǎn)牛樟芝培育方法系有液態(tài)培養(yǎng)法、固態(tài)培養(yǎng)法及椴木培養(yǎng)法。牛樟芝子實(shí)體形態(tài)豐富多變，有板狀、鐘狀、馬蹄狀或塔狀，初生時(shí)為鮮紅色，漸長變?yōu)榈t褐色、淡褐色或淡黃褐色。野生白色牛樟芝甚為稀少，而以人工栽培方法來培養(yǎng)白色牛樟芝更為少見，因此白色牛樟芝在市場上更為稀有及珍貴。技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：本發(fā)明所要解決的技術(shù)問題在于提供一種白色牛樟芝子實(shí)體的培養(yǎng)方法，其是自野生牛樟芝順利分離出白色牛樟芝菌種并接種至含有培養(yǎng)基的培養(yǎng)皿，進(jìn)一步的將培養(yǎng)基的成份及其含量作適當(dāng)?shù)恼{(diào)整，以及培養(yǎng)環(huán)境的刺激以培養(yǎng)白牛樟芝子實(shí)體的培養(yǎng)方法。本發(fā)明所要解決的另一技術(shù)問題在于提供一種用于培養(yǎng)白色牛樟芝子實(shí)體的培養(yǎng)基。為解決上述技術(shù)問題，本發(fā)明采用了以下技術(shù)方案實(shí)現(xiàn)：本發(fā)明的一種白色牛樟芝子實(shí)體的培養(yǎng)方法，包括以下步驟：(1)將白色牛樟芝子實(shí)體進(jìn)行切片獲得子實(shí)體切片；(2)將步驟(1)得到的子實(shí)體切片采用菌種培養(yǎng)基進(jìn)行菌種純化得到白色牛樟芝菌種；(3)配制培養(yǎng)基；將所述白色牛樟芝菌種接菌至所述培養(yǎng)基上進(jìn)行培養(yǎng)；以及(4)對接菌在培養(yǎng)基上的白色牛樟芝菌種進(jìn)行生長環(huán)境調(diào)控培養(yǎng)。進(jìn)一步的，其中所述步驟(2)中的菌種純化方法包括：將子實(shí)體切片接種于含有菌種培養(yǎng)基的培養(yǎng)皿中，經(jīng)過4～6次的移植后，確認(rèn)無雜菌出現(xiàn)即可獲得白色牛樟芝菌種；所述菌種培養(yǎng)基至少包括：質(zhì)量濃度為1～3％w/w馬鈴薯葡萄糖提取物(potatodextrosebroth,pdb)以及質(zhì)量濃度為0.5～1.5％w/w的瓊脂(agar)。其中，馬鈴薯葡萄糖提取物(potatodextrosebroth,pdb)，可采用馬鈴薯葡萄糖肉湯。進(jìn)一步的，所述步驟(3)中配制培養(yǎng)基包括：依比例混合培養(yǎng)基的各組成成分，所述培養(yǎng)基的組成成分包括：質(zhì)量濃度為2～4％w/w的馬鈴薯葡萄糖提取物，質(zhì)量濃度為2～4％w/w的小麥提取物(maltextract)，質(zhì)量濃度為0.1～0.3％w/w的氮源，質(zhì)量濃度為0.5～0.6％w/w的瓊脂(agar)，和質(zhì)量濃度為5～7％w/w的蔗糖(sucrose)；其中，所述氮源可采用：胺基酸、蛋白胨、酵母萃取物或牛肉萃取物等，優(yōu)選的可采用胺基酸(aminoacids)；將各組成成分混合后，放入一個(gè)至多個(gè)可滅菌容器中并加入逆滲透水?dāng)嚢杈鶆蚴蛊淙芙?逆滲透水加入量以使各組成成分達(dá)到所需的濃度為準(zhǔn))；將溶解后的培養(yǎng)基原液放入滅菌釜；設(shè)定條件為121℃，15～30分鐘進(jìn)行滅菌處理，將滅菌后的培養(yǎng)基溶液倒入培養(yǎng)皿，靜置冷卻后即可得到固態(tài)培養(yǎng)基。進(jìn)一步的，所述步驟(2)中將白色牛樟芝子實(shí)體切片在含有菌種培養(yǎng)基的培養(yǎng)皿中培養(yǎng)，培養(yǎng)溫度控制在22～30℃。進(jìn)一步的，所述步驟(4)中對所述接菌在培養(yǎng)基上的白色牛樟芝菌種進(jìn)行生長環(huán)境調(diào)控培養(yǎng)包括：低溫刺激培養(yǎng)、刀傷刺激培養(yǎng)和光線刺激培養(yǎng)中的至少一種。優(yōu)選的，所述步驟(4)中對所述接菌在培養(yǎng)基上的白色牛樟芝菌種進(jìn)行低溫刺激培養(yǎng)，其中低溫刺激溫度范圍4℃至15℃。所述低溫刺激培養(yǎng)是將其培養(yǎng)溫度范圍設(shè)定為4～15℃用以模擬牛樟芝在自然環(huán)境下冬天的溫度，用以對牛樟芝菌種進(jìn)行低溫刺激，促進(jìn)其二次代謝物產(chǎn)生。優(yōu)選的，所述步驟(4)中對所述接菌在培養(yǎng)基上的白色牛樟芝菌種進(jìn)行刀傷刺激培養(yǎng)，包括：采用刀片或針頭在白色牛樟芝制造多個(gè)1～2公分的傷痕，用于二次代謝物合成以及重量的增加。優(yōu)選的，所述步驟(4)中對所述接菌在培養(yǎng)基上的白色牛樟芝菌種進(jìn)行光線刺激培養(yǎng)，包括對所述接菌在培養(yǎng)基上的白色牛樟芝菌種在光照環(huán)境下進(jìn)行光線刺激培養(yǎng)；其中，所述光照環(huán)境選用紅光或藍(lán)光，所述光照環(huán)境的照光強(qiáng)度為5μmol/s.m2至20μmol/s.m2。通過光線刺激，以刺激二次代謝物增生，提高牛樟芝的活性成份的含量。優(yōu)選的，當(dāng)所述光照環(huán)境為紅光時(shí)，該光照環(huán)境的照光強(qiáng)度為12μmol/s.m2至20μmol/s.m2；或當(dāng)光照環(huán)境為藍(lán)光時(shí)，該光照環(huán)境的照光強(qiáng)度為8μmol/s.m2至16μmol/s.m2。本發(fā)明的另一目的在于，提供一種用于培養(yǎng)白色牛樟芝子實(shí)體的培養(yǎng)基，所述培養(yǎng)基至少包括：馬鈴薯葡萄糖提取物，其質(zhì)量濃度為2～4％w/w；小麥提取物(maltextract)，其質(zhì)量濃度為2～4％w/w；氮源，其質(zhì)量濃度為0.1～0.3％w/w，其中，所述氮源可采用：胺基酸、蛋白胨、酵母萃取物或牛肉萃取物；優(yōu)選的，氮源可采用胺基酸(aminoacids)；瓊脂(agar)，其質(zhì)量濃度為0.5～0.6％w/w；和蔗糖(sucrose)，其質(zhì)量濃度為5～7％w/w。本發(fā)明的白色牛樟芝子實(shí)體的培養(yǎng)方法及其培養(yǎng)基的有益效果還在于：本申請利用培養(yǎng)皿來培養(yǎng)白色牛樟芝子實(shí)體，并進(jìn)行生長環(huán)境調(diào)控培養(yǎng)(低溫刺激培養(yǎng)、刀傷刺激培養(yǎng)和光線刺激培養(yǎng)中的至少一種)，用于縮短培養(yǎng)時(shí)間，并提升培養(yǎng)成功率以及產(chǎn)量。本申請利用自制的培養(yǎng)基加入到培養(yǎng)皿中對白色牛樟芝菌種進(jìn)行培養(yǎng)，并通過生長環(huán)境進(jìn)行調(diào)控培養(yǎng)，以通過培養(yǎng)基縮短培養(yǎng)時(shí)間，而通過生長環(huán)境刺激以促進(jìn)二次代謝物產(chǎn)生，提升培養(yǎng)成功率以及產(chǎn)量，經(jīng)過本培養(yǎng)基結(jié)合生長環(huán)境刺激可縮短培養(yǎng)時(shí)間的同時(shí)，大大增加牛樟芝的活性成份的含量。本申請采用人工栽培方法來培養(yǎng)白色牛樟芝，且培育得到的牛樟芝成分種類對比現(xiàn)有技術(shù)栽培的牛樟芝更加多元。附圖說明通過閱讀下文優(yōu)選實(shí)施方式的詳細(xì)描述，各種其他的優(yōu)點(diǎn)和益處對于本領(lǐng)域普通技術(shù)人員將變得清楚明了。附圖僅用于示出優(yōu)選實(shí)施方式的目的，而并不認(rèn)為是對本發(fā)明的限制。在附圖中：圖1為白色牛樟芝子實(shí)體培養(yǎng)流程圖；圖2為以三組不同培養(yǎng)基進(jìn)行白色牛樟芝培養(yǎng)，測定各組白色牛樟芝平均重量以及95％乙醇萃取率的結(jié)果示意圖；圖3為以兩種不同溫度進(jìn)行低溫刺激白色牛樟芝生長，測定各組白色牛樟芝平均重量、95％乙醇萃取率的結(jié)果示意圖；圖4為以不同光照強(qiáng)度刺激比較白色牛樟芝生長，測定各組白色牛樟芝平均重量、95％乙醇萃取率的結(jié)果示意圖；圖5為以刀傷刺激的有無比較白色牛樟芝生長，測定各組白色牛樟芝平均重量、95％乙醇萃取率的結(jié)果示意圖；圖6為白色牛樟芝酒精萃取物的hplc層析圖譜；圖7為市售椴木培養(yǎng)牛樟芝(紅色)酒精萃取物的hplc層析圖譜。具體實(shí)施方式下面將參照附圖更詳細(xì)地描述本公開的示例性實(shí)施例。雖然附圖中顯示了本公開的示例性實(shí)施例，然而應(yīng)當(dāng)理解，可以以各種形式實(shí)現(xiàn)本公開而不應(yīng)被這里闡述的實(shí)施例所限制。相反，提供這些實(shí)施例是為了能夠更透徹地理解本公開，并且能夠?qū)⒈竟_的范圍完整的傳達(dá)給本領(lǐng)域的技術(shù)人員。為更進(jìn)一步闡述本發(fā)明為達(dá)成預(yù)定發(fā)明目的所采取的技術(shù)手段及功效，以下結(jié)合附圖及較佳實(shí)施例，對依據(jù)本發(fā)明提出的白色牛樟芝子實(shí)體的培養(yǎng)方法及其培養(yǎng)基詳細(xì)說明如下：首先進(jìn)行培養(yǎng)基的調(diào)配與篩選：本發(fā)明的培養(yǎng)基的組成成分包括：質(zhì)量濃度為2～4％w/w的馬鈴薯葡萄糖提取物，質(zhì)量濃度為2～4％w/w的小麥提取物(maltextract)，質(zhì)量濃度為0.1～0.3％w/w的氮源(氮源可采用：胺基酸、蛋白胨、酵母萃取物或牛肉萃取物；優(yōu)選的，氮源可采用胺基酸(aminoacids)，質(zhì)量濃度為0.5～0.6％w/w的瓊脂(agar)，和質(zhì)量濃度為5～7％w/w的蔗糖(sucrose)；其調(diào)配方法為：依上述比例混合培養(yǎng)基的各組成成分，將各組成成分混合后，放入一個(gè)至多個(gè)可滅菌容器中并加入逆滲透水以使各組成成分達(dá)到所需的濃度為準(zhǔn)，攪拌均勻使其溶解；將溶解后的培養(yǎng)基原液放入滅菌釜；設(shè)定條件為121℃，15～30分鐘進(jìn)行滅菌處理，將滅菌后的培養(yǎng)基溶液倒入培養(yǎng)皿，靜置冷卻后即可得到固態(tài)培養(yǎng)基。以下采用不同比例調(diào)配培養(yǎng)基并進(jìn)行培養(yǎng)以篩選培養(yǎng)基。實(shí)施例1步驟1：將白色牛樟芝子實(shí)體進(jìn)行切片獲得子實(shí)體切片；具體的可以將刀片先用75％酒精消毒后，將木頭上的白色牛樟芝菇體切下，采用干凈的紗布或塑料袋將菇體包好。在菌株分離前，采用75％酒精擦拭并照射uv光20分鐘后，即可將白色牛樟芝菇體放入無菌操坐臺。菌株分離時(shí)，采用沾有75％酒精的棉花或紗布將菇體表面擦拭一遍；用解剖刀除去菇體表皮，并將里面肉質(zhì)部分分割成0.5公分大小的子實(shí)層切片。步驟2：將得到的子實(shí)體切片采用菌種培養(yǎng)基進(jìn)行菌種純化得到白色牛樟芝菌種；具體的可以包括：將得到的子實(shí)體切片接種于含有質(zhì)量濃度為1～3％w/w的馬鈴薯葡萄糖提取物(potatodextrosebroth,pdb)以及質(zhì)量濃度為0.5～1.5％w/w的瓊脂(agar)的菌種培養(yǎng)基的培養(yǎng)皿中。每一培養(yǎng)皿置放一塊子實(shí)體切片，并蓋上蓋子。將上述培養(yǎng)皿置于20～25℃下培養(yǎng)，菌絲長至約1～3公分時(shí)，將外圍的菌絲切下并移植置新的培養(yǎng)皿中，經(jīng)過4～6次的移植后確認(rèn)無雜菌出現(xiàn)即可獲得白色牛樟芝菌種。步驟3：配制培養(yǎng)基(配方一)；將所述白色牛樟芝菌種接菌至所述培養(yǎng)基上進(jìn)行培養(yǎng)；用于培養(yǎng)白色牛樟芝子實(shí)體的培養(yǎng)基包括以下成分：馬鈴薯葡萄糖提取物pdb(potatodextrosebroth)，其質(zhì)量濃度為4％w/w；蔗糖，其質(zhì)量濃度為5％w/w；胺基酸(aminoacids)，其質(zhì)量濃度為0.3％w/w；瓊脂(agar)，其質(zhì)量濃度為0.5％w/w。氮源不限于胺基酸。將上述組成成分按比例混合后，放入一個(gè)至數(shù)個(gè)可滅菌容器中并加入1000ml逆滲透水伴勻溶解。接著放入滅菌釜；設(shè)定條件為121℃、15～30分鐘進(jìn)行滅菌。將滅菌后的培養(yǎng)基溶液倒入培養(yǎng)皿，每片培養(yǎng)皿約12～27ml。靜置冷卻后即可得到固態(tài)培養(yǎng)基，將分離出來的白色牛樟芝菌種植入接菌在該培養(yǎng)基上，在22～30℃的環(huán)境培養(yǎng)，培養(yǎng)天數(shù)為180天。實(shí)施例2步驟1和步驟2同實(shí)施例1；步驟3：配制培養(yǎng)基(配方二)；將所述白色牛樟芝菌種接菌至所述培養(yǎng)基上進(jìn)行培養(yǎng)；用于培養(yǎng)白色牛樟芝子實(shí)體的培養(yǎng)基包括以下成分：pdb(potatodextrosebroth)，其質(zhì)量濃度為2％w/w；小麥抽出物(maltextract)，其質(zhì)量濃度為2％w/w；蔗糖，其質(zhì)量濃度為7％w/w；胺基酸(aminoacids)，其質(zhì)量濃度為0.2％w/w；瓊脂(agar)，其質(zhì)量濃度為0.6％w/w。將上述組成成分按比例混合后，放入一個(gè)至數(shù)個(gè)可滅菌容器中并加入1000ml逆滲透水伴勻溶解。接著放入滅菌釜；設(shè)定條件為121℃、15～30分鐘進(jìn)行滅菌。將滅菌后的培養(yǎng)基溶液倒入培養(yǎng)皿，每片培養(yǎng)皿約15～25ml。靜置冷卻后即可得到固態(tài)培養(yǎng)基，將分離出來的白色牛樟芝菌種植入接菌在該培養(yǎng)基上，在22～30℃的環(huán)境培養(yǎng)，培養(yǎng)天數(shù)為180天。實(shí)施例3步驟1和步驟2同實(shí)施例1；步驟3：配制培養(yǎng)基(配方三)；將所述白色牛樟芝菌種接菌至所述培養(yǎng)基上進(jìn)行培養(yǎng)；用于培養(yǎng)白色牛樟芝子實(shí)體的培養(yǎng)基包括以下成分：小麥抽出物(maltextract)，其質(zhì)量濃度為4％w/w；蔗糖，其質(zhì)量濃度為6％w/w；胺基酸(aminoacids)，其質(zhì)量濃度為0.1％w/w；瓊脂agar，其質(zhì)量濃度為0.5％w/w。將上述組成成分按比例混合后，放入一個(gè)至數(shù)個(gè)可滅菌容器中并加入1000ml逆滲透水伴勻溶解。接著放入滅菌釜；設(shè)定條件為121℃、15～30分鐘進(jìn)行滅菌。將滅菌后的培養(yǎng)基溶液倒入培養(yǎng)皿，每片培養(yǎng)皿約15～25ml；靜置冷卻后即可得到固態(tài)培養(yǎng)基。在將分離出來的白色牛樟芝菌種植入接菌在該培養(yǎng)基上，在22～30℃的環(huán)境培養(yǎng)，培養(yǎng)天數(shù)為180天。將分別采用實(shí)施例1，2和3的培養(yǎng)基培養(yǎng)180天后所獲得的子實(shí)體采用重量、95％乙醇萃取率的檢測方法進(jìn)行檢測。所述檢測方法為：牛樟芝子實(shí)體原片采收后，去掉培養(yǎng)基放入烘箱烘干；設(shè)定條件為60℃、200分鐘；烘干后以天秤稱重。烘干后的原片取5g打粉加入95％乙醇40倍體積后以超音波震蕩進(jìn)行萃取約1～2小時(shí)，然后用減壓濃縮機(jī)濃縮抽干；秤重計(jì)算萃取物重量與原片重的比例。通過上述檢測方法分別檢測實(shí)施例1，2和3得到的子實(shí)體的重量與95％乙醇萃取率；結(jié)果如圖2所示。由圖2可知三種不同配方所生長出的白色牛樟芝子實(shí)體中，實(shí)施例1中的pdb配方(配方一)，平均干燥重量為0.9g，95％乙醇萃取率為28％。實(shí)施例2中的配方pdb加上小麥抽出物(配方二)；平均干燥重量為1.18g，95％乙醇萃取率為30％。實(shí)施例3中的配方小麥抽出物(配方三)；平均干燥重量為0.85g，95％乙醇萃取率為25％。顯示實(shí)施例2的培養(yǎng)基成份優(yōu)于實(shí)施例1與實(shí)施例3。實(shí)施例4：白色牛樟芝生長環(huán)境調(diào)控之低溫刺激培養(yǎng)從實(shí)施例1～3中的3種培養(yǎng)基中選擇質(zhì)量最佳者實(shí)施例2的進(jìn)行低溫刺激培養(yǎng)。圖1為白色牛樟芝子實(shí)體培養(yǎng)流程圖，如圖1所示：步驟1、步驟2和步驟3同實(shí)施例2中的步驟；步驟4：將已經(jīng)植入白色牛樟芝菌種在該培養(yǎng)基(配方二)的培養(yǎng)皿共三組，放至22～30℃的環(huán)境中培養(yǎng)90天后，第一組控制組；持續(xù)培養(yǎng)至培養(yǎng)180天后采收烘干，另外二組培養(yǎng)皿分別放入4℃和15℃的環(huán)境中培養(yǎng)3～5天后，將培養(yǎng)皿再放回置22～30℃的環(huán)境至培養(yǎng)180天后采收烘干。將三組不同條件下培養(yǎng)所獲得的子實(shí)體，采用重量、95％乙醇萃取率的檢測方法進(jìn)行檢測，分別測量其重量與95％乙醇萃取率。所述檢測方法為：牛樟芝子實(shí)體原片采收后，去掉培養(yǎng)基放入烘箱烘干；設(shè)定條件為60℃、200分鐘；烘干后以天秤稱重。烘干后的原片取5g打粉加入95％乙醇40倍體積后以超音波震蕩進(jìn)行萃取約1～2小時(shí)，然后用減壓濃縮機(jī)濃縮抽干；秤重計(jì)算萃取物重量與原片重的比例；結(jié)果如圖3所示。圖3的結(jié)果為不同的低溫刺激，第一組為15℃；第二組為4℃，結(jié)果顯示第一組平均干燥重量為1.18g，95％乙醇萃取率為33％；第二組平均干燥重量為1.18g，95％乙醇萃取率為36％。顯示低溫刺激培養(yǎng)重量不變，但乙醇萃取率分別增加1％和2％；而4℃的效果比15℃所得到的結(jié)果高。實(shí)施例5：白色牛樟芝生長環(huán)境調(diào)控-刀傷刺激培養(yǎng)從實(shí)施例1～3中的3種培養(yǎng)基中選擇質(zhì)量最佳者實(shí)施例2的進(jìn)行刺激培養(yǎng)。步驟1、步驟2和步驟3同實(shí)施例2中的步驟；步驟4：將已經(jīng)植入白色牛樟芝菌種在該培養(yǎng)基的培養(yǎng)皿，放至22～30℃的環(huán)境中培養(yǎng)90天后，將其中一組(刺激組)已經(jīng)長出白色牛樟芝的培養(yǎng)皿取出，以刀片或針頭在白色牛樟芝上制造多個(gè)0.5～1公分傷痕；模擬昆蟲咬傷以刺激二次代謝物生合成，之后放回至22～30℃的環(huán)境中再培養(yǎng)至180天，另一組(無刺激組)在22～30℃的環(huán)境中培養(yǎng)至180天，二組所獲得的白色牛樟芝子實(shí)體分別采用所述重量、95％乙醇萃取率的檢測方法進(jìn)行檢測，分別測量其重量與95％乙醇萃取率；結(jié)果如圖4所示。圖4結(jié)果為刀傷刺激的實(shí)驗(yàn)。第一組為無刀傷刺激組的平均干燥重量和95％乙醇萃取率分別為1.2g和30％。第二組為刀傷刺激；傷痕刺激的菇體其平均干燥重量和95％乙醇萃取率分別為1.53g和35％，與第一組無刀傷實(shí)驗(yàn)相比干燥重量和乙醇萃取率分別增加27％和16％。顯示刀傷的刺激有助于的二次代謝物生合成以及重量的增加。實(shí)施例6：白色牛樟芝不同光照強(qiáng)度刺激培養(yǎng)從實(shí)施例1～3中的3種培養(yǎng)基中選擇質(zhì)量最佳者實(shí)施例2的進(jìn)行刺激培養(yǎng)。步驟1、步驟2和步驟3同實(shí)施例2中的步驟；步驟4：將已經(jīng)植入白色牛樟芝菌種在該培養(yǎng)基的培養(yǎng)皿，放至22～30℃的環(huán)境中培養(yǎng)至第75天后進(jìn)行光照刺激。本實(shí)驗(yàn)期分成五組，分別為控制組；無照光培養(yǎng)，第一組以紅光；照光強(qiáng)度為20μmol/s.m2，第二組為紅光；照光強(qiáng)度為12μmol/s.m2，第三組為藍(lán)光；照光強(qiáng)度為16μmol/s.m2，第四組為藍(lán)光；照光強(qiáng)度為8μmol/s.m2。除控制組外，各組經(jīng)過15天照射后停止照射，放至22～30℃的環(huán)境中，繼續(xù)培養(yǎng)至180天。五組所獲得的白色牛樟芝子實(shí)體分別采用所述重量、95％乙醇萃取率的檢測方法進(jìn)行檢測，分別測量其重量與95％乙醇萃取率；結(jié)果如圖5所示。圖5為光照刺激實(shí)驗(yàn)，控制組平均重量為1.2g；95％乙醇萃取率為30％。光照刺激第一組至第四組，實(shí)驗(yàn)結(jié)果平均重量分別為1.18g、1.16g、1.17g、1.19g，與控制組無太大差異。在95％乙醇萃取率的光照刺激的結(jié)果，由第一組至第四組實(shí)驗(yàn)結(jié)果平均95％乙醇萃取率分別為36％、32.5％、34.8％、31.5％。與控制組的95％乙醇萃取率相比分別增加20％、8.3％、16％、5％。結(jié)果顯示有照光刺激的組別其平均重量無太大差異，而95％乙醇萃取率均有增加。其中紅光照光強(qiáng)度為20μmol/s.m2所得到的乙醇萃取率為最高。實(shí)施例7牛樟芝酒精萃取物的制備，以及白色牛樟芝萃取物指紋圖譜分析分別取3克的市售椴木培養(yǎng)的牛樟芝子實(shí)體(紅色)和實(shí)例4所培養(yǎng)的白色牛樟芝鮮品，以凍干機(jī)(溫度低于-45℃，真空度低于300mtorr)凍干。干品再以粉碎機(jī)粉碎，分別倒入血清瓶中，加10倍體積的95％酒精及攪拌子，以冷浸方式攪拌萃取3-5天。抽氣過濾(no.1濾紙)，濃縮、干燥后稱重，即為牛樟芝酒精萃取物，并保存于防潮箱中。將上述制備的牛樟芝萃取物白色牛樟芝萃取物指紋圖譜分析；具體的包括：1、將上述制備的牛樟芝萃取物白色牛樟芝萃取物分別以甲醇回溶，濃度5mg/ml。2、離心，10000rpm，10mins，取上清液進(jìn)行hplc分析。3、高效液相色層分析儀：唧筒(pump):spectrasystemp1000，自動采樣器(autoinjector):spectrasystemas1000，偵測儀(detector):finnigansurveyorpdaplusdetector。液相色層分析條件:層析管柱：agilent，eclipsexdb-c18，4.6mm*150mm，5μm偵測儀：pda(uv254nm)；樣品注射量：5μl；層析流速：0.8ml/min；hplc沖提條件(如表1)：表1分析結(jié)果白色牛樟芝萃取物如圖6，售椴木培養(yǎng)的牛樟芝子實(shí)體(紅色)酒精萃取物如圖7。比較圖6和圖7的hplc層析圖譜以及參考文獻(xiàn)(臺灣特有種牛樟芝(菇)(antrodiacinnamomea)子實(shí)體標(biāo)準(zhǔn)繼正確學(xué)名判斷之關(guān)鍵，2013.08。臺灣食藥用菇菌類生技協(xié)會)所公布hplc層析圖譜所標(biāo)示之椴木培養(yǎng)的牛樟芝子實(shí)體之特征層析普峰，可明顯看出白色牛樟芝萃取物具有椴木培養(yǎng)的牛樟芝子實(shí)體之特征層析普峰(如表2)，另外白色牛樟芝萃取物也有一些與椴木培養(yǎng)的牛樟芝子實(shí)體不同的層析普峰(如圖4中滯留時(shí)間分別為4.2、6.5、6.8、12.7和20.5min等)，顯示本發(fā)明所得到的白色牛樟芝其成份種類更為多元。表2compoundrt(min)antcina32.2antcinb25.7antcinc17.3antcink9.0antcinh19.4dehydrosulphurenicacid22.6dehydroeburicoicacid40.1以上所述僅為本發(fā)明的優(yōu)選實(shí)施例，對本發(fā)明具有說明性，而非限制性。本領(lǐng)域技術(shù)人員應(yīng)理解，在不脫離本發(fā)明技術(shù)方案范圍內(nèi)，當(dāng)可利用上述揭示的技術(shù)內(nèi)容作出些許更動或修飾為等同變化的等效實(shí)施例，但凡是未脫離本發(fā)明技術(shù)方案的內(nèi)容，依據(jù)本發(fā)明的技術(shù)實(shí)質(zhì)對以上實(shí)施例所作的任何簡單修改、等同變化與修飾，均仍屬于本發(fā)明技術(shù)方案的范圍內(nèi)。且本領(lǐng)域技術(shù)人員應(yīng)理解，在本發(fā)明權(quán)利要求所限定的范圍內(nèi)可對其進(jìn)行適應(yīng)性的改變，但均應(yīng)落入本發(fā)明的保護(hù)范圍之內(nèi)。當(dāng)前第1頁12