技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種抗植物病毒的大型真菌制劑及其制備方法，特別是適用于防控植物病毒病。
背景技術(shù)：
：植物病毒病廣泛發(fā)生于糧油、蔬菜、果樹等多種作物上，危害相當(dāng)普遍，造成的損失非常嚴(yán)重，并且其防治比較困難，可稱得上是植物病害中的頑癥，日益受到重視。大型真菌次生代謝產(chǎn)物中蘊(yùn)藏著極為豐富的抗病毒天然活性物質(zhì)，是開發(fā)抗植物病毒抑制劑的重要資源。由于天然抗植物病毒物質(zhì)的作用特點(diǎn)與化學(xué)農(nóng)藥有很大不同，只有了解其作用特點(diǎn)并掌握正確的使用方法，才能更好地發(fā)揮其對(duì)病毒病的防治作用。90％以上的植物病毒屬RNA病毒，因此從機(jī)理上篩選RNA合成抑制劑或蛋白合成抑制劑將是一種有的放矢的研究方法。我們認(rèn)為從大型真菌天然次生代謝產(chǎn)物中引入現(xiàn)已發(fā)現(xiàn)的天然化合物活性母體上去一定能研發(fā)出新型、高效、低毒、低殘留的環(huán)境友好的抗植物病毒抑制劑。目前，植物病毒病的防治主要是化學(xué)藥物噴灑防治法，它雖然對(duì)病毒病的發(fā)生發(fā)展起到了一定防控作用，但同時(shí)又帶來了農(nóng)藥在蔬菜、果品上的殘留、對(duì)土壤、大氣、水源等環(huán)境的污染等弊端。特別是蔬菜、果品對(duì)農(nóng)藥的使用要求較高，有毒、殘留期長的藥物已禁止使用。大型真菌次生代謝產(chǎn)物病毒制劑是一種新的生物農(nóng)藥，具有無毒、不污染環(huán)境、無殘留、保護(hù)人畜安全等特點(diǎn)。并且生產(chǎn)過程中無“三廢”排放，生產(chǎn)的原材料可再生。具有用藥量少、藥的持效期長、成本低廉等優(yōu)點(diǎn)。技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：本發(fā)明的目的是提供一種低成本、高活性的抗植物病毒的大型真菌制劑及其制備和應(yīng)用方法，以有效控制植物病毒病的危害。該制劑可以鈍化植物病毒、抑制其繁殖并具有誘導(dǎo)植物對(duì)病毒產(chǎn)生抗性的作用，2-3次用藥可有效控制植物病毒的危害。真菌多糖(Polysaccharides,PS)是廣泛存在于自然界中的一類大分子物質(zhì),也是生命必需的成分之一。大量研究表明,許多多糖對(duì)各種病毒如艾滋病毒(HIV-1),單純皰疹病毒,巨細(xì)胞病毒,流感病毒,囊狀胃炎病毒,勞斯肉瘤病毒,烏肉瘤病毒等有抑制作用；β-葡聚糖被譽(yù)為殺滅病毒細(xì)胞的激光制導(dǎo)炸彈，主要存在于真菌細(xì)胞壁中，其特殊的三重超微螺旋結(jié)構(gòu)具有獨(dú)特的靶向性特點(diǎn)，能鎖定休眠期、耐藥性的“殘存病毒細(xì)胞”，從而"同步"減毒增效，極大限度的保障實(shí)際應(yīng)用效果；糖蛋白（glycoprotein）是一個(gè)比較常見的保護(hù)細(xì)胞免受外來有害分子入侵的分子泵，它位于細(xì)胞膜上，不停的“搜查”著外來的疏水分子，就如同一個(gè)守護(hù)細(xì)胞的“保安”。本發(fā)明就是通過提取彩絨革蓋菌子實(shí)體、桑黃菌子實(shí)體中真菌糖蛋白、多糖、β-葡聚糖等抗病毒成分，輔以適當(dāng)?shù)娜軇┒兄瞥龅囊环N大型真菌抗病毒制劑。其技術(shù)解決方案如下：一種抗植物病毒的大型真菌制劑，由彩絨革蓋菌子實(shí)體、桑黃菌子實(shí)體的復(fù)合提取物與溶劑配制而成。所說的溶劑，為有機(jī)溶劑75%乙醇。上述抗植物病毒的大型真菌制劑及制備方法，按如下方法制備而成：是將彩絨革蓋菌子實(shí)體、桑黃菌子實(shí)體按重量比1：1混合，加工碎成顆粒，過20篩目，把25kg顆粒放入中藥多功能提取設(shè)備的提取釜中進(jìn)行萃取，加入75升75%乙醇，在82－86℃的溫度蒸煮2.0小時(shí)后，再濃縮1小時(shí)，即成彩絨革蓋菌子實(shí)體、桑黃菌子實(shí)體復(fù)合提取物濃縮膏及結(jié)晶體；再加入75%乙醇溶劑，充分溶解，制成飽和液，裝瓶密封即可。本發(fā)明的有益效果：本發(fā)明抗植物病毒制劑對(duì)各類植物病毒病均具有很好的防控作用。不僅防控效果好，而且不污染環(huán)境，成本低廉、制備工藝簡(jiǎn)單，極大地減少了勞動(dòng)量，安全、直接、環(huán)保、高效。本發(fā)明抗植物病毒制劑可用于糧油、蔬菜、果樹等多種作物病毒病的預(yù)防和防治，通過早期用藥可以預(yù)防病毒病的發(fā)生、對(duì)已發(fā)生的病毒病可抑制其進(jìn)一步的發(fā)生、傳播、蔓延，達(dá)到遏制病毒病危害的目的，為植物病毒病的綜合治理提供了技術(shù)保障。附圖說明圖1所示是本發(fā)明制備方法具體工藝流程圖。具體實(shí)施方式下面結(jié)合附圖和具體實(shí)施例對(duì)本發(fā)明進(jìn)行詳細(xì)描述：實(shí)施例1本發(fā)明制備方法具體工藝流程為：其制備方法如下：（1）將彩絨革蓋菌子實(shí)體、桑黃菌子實(shí)體按重量比1:1，加工粉碎成顆粒，過20篩目把25kg顆粒裝入中藥提取釜中進(jìn)行萃取；（2）加入75%乙醇75升，82℃溫度蒸煮2.0小時(shí)后，再濃縮1小時(shí)，濃縮成濃縮膏及結(jié)晶體，即絨革蓋菌子實(shí)體、桑黃菌子實(shí)體復(fù)合提取物；（3）取提取物再加入溶劑75%乙醇，邊加邊攪拌直至充分溶解配制成飽和液即為抗病毒制劑成品。（4）分別灌裝：將抗病毒制劑500ml裝入塑料瓶中密封待用。本實(shí)施例產(chǎn)品主要成分重量百分比為：云芝多糖6.6%云芝糖蛋白1.76%桑黃多糖6.59%β-葡聚糖1.64%殼聚糖0.63%75%乙醇82.78％。實(shí)施例2本發(fā)明制備方法具體工藝流程為：其制備方法如下：（1）將彩絨革蓋菌子實(shí)體、桑黃菌子實(shí)體按重量比1:1，加工粉碎成顆粒，過20篩目把25kg顆粒裝入中藥提取釜中進(jìn)行萃取；（2）加入75%乙醇75升，84℃溫度蒸煮2.0小時(shí)后，再濃縮1小時(shí)，濃縮成濃縮膏及結(jié)晶體，即絨革蓋菌子實(shí)體、桑黃菌子實(shí)體復(fù)合提取物；（3）取提取物再加入溶劑75%乙醇，邊加邊攪拌直至充分溶解配制成飽和液即為抗病毒制劑成品。（4）分別灌裝：將抗病毒制劑500ml裝入塑料瓶中密封待用。本實(shí)施例產(chǎn)品主要成分重量百分比為：云芝多糖7.2%云芝糖蛋白2.1%桑黃多糖6.72%β-葡聚糖1.76%殼聚糖0.81%75%乙醇81.41％。實(shí)施例3本發(fā)明制備方法具體工藝流程為：其制備方法如下：（1）將彩絨革蓋菌子實(shí)體、桑黃菌子實(shí)體按重量比1:1，加工粉碎成顆粒，過20篩目把25kg顆粒裝入中藥提取釜中進(jìn)行萃??；（2）加入75%乙醇75升，86℃溫度蒸煮2.0小時(shí)后，再濃縮1小時(shí)，濃縮成濃縮膏及結(jié)晶體，即絨革蓋菌子實(shí)體、桑黃菌子實(shí)體復(fù)合提取物；（3）取提取物再加入溶劑75%乙醇，邊加邊攪拌直至充分溶解配制成飽和液即為抗病毒制劑成品。（4）分別灌裝：將抗病毒制劑500ml裝入塑料瓶中密封待用。本實(shí)施例產(chǎn)品主要成分重量百分比為：云芝多糖6.9%云芝糖蛋白1.92%桑黃多糖6.61%β-葡聚糖1.69%殼聚糖0.76%75%乙醇82.12％。實(shí)施例4本發(fā)明制備方法具體工藝流程為：其制備方法如下：（1）將彩絨革蓋菌子實(shí)體、桑黃菌子實(shí)體按重量比1:1，加工粉碎成顆粒，過20篩目把25kg顆粒裝入中藥提取釜中進(jìn)行萃取；（2）加入75%乙醇75升，82-86℃溫度蒸煮2.0小時(shí)后，再濃縮1小時(shí)，濃縮成濃縮膏及結(jié)晶體，即絨革蓋菌子實(shí)體、桑黃菌子實(shí)體復(fù)合提取物；（3）取提取物再加入溶劑75%乙醇，邊加邊攪拌直至充分溶解配制成飽和液即為抗病毒制劑成品。（4）分別灌裝：將抗病毒制劑500ml裝入塑料瓶中密封待用。本實(shí)施例產(chǎn)品主要成分重量百分比為：云芝多糖6.6-7.2%云芝糖蛋白1.76-2.1%桑黃多糖6.59-6.72%β-葡聚糖1.64-1.76%殼聚糖0.63-0.81%75%乙醇81.41－82.78％。本發(fā)明抗病毒制劑的應(yīng)用技術(shù)，步驟以下：⑴在各類植物幼苗期，病毒病發(fā)生以前，均勻噴灑50ug/ml的本大型真菌抗病毒制劑，預(yù)防各類病毒病的發(fā)生。⑵在各類植物病毒病發(fā)生期均勻噴灑100ug/ml的本大型真菌抗病毒制劑，治療各類病毒病發(fā)生、傳播、蔓延。本制劑的使用效果如下：一、田間預(yù)防效果試驗(yàn)2015年5月9號(hào)在在泰安市岱岳區(qū)房村鎮(zhèn)進(jìn)行預(yù)防試驗(yàn)。當(dāng)番茄苗第一片真葉出現(xiàn)（破心），噴施藥劑，每個(gè)處理噴施番茄苗100株。以后間隔5天噴一次，連噴三次。藥劑處理為大型真菌抗病毒制劑（實(shí)施例1所得產(chǎn)品）100ug/ml、大型真菌抗病毒制劑50ug/ml、大型真菌抗病毒制劑25ug/ml、20%病毒Ａ（北方齊齊哈爾化工廠生產(chǎn)）50ug/ml、清水對(duì)照等共5個(gè)處理，每個(gè)處理3次重復(fù)，隨機(jī)排列。藥劑噴施完畢后，接種病毒。病毒的制備方法是：采感染病毒病的番茄鮮葉，按鮮病葉：緩沖液=1:3的重量體積比加緩沖液，緩沖液種類為PBS，緩沖液的酸堿度pH7。然后用石英砂將混合體碾磨成勻漿后紗布過濾，摩擦接種。接種10天后調(diào)查病情。計(jì)算病情指數(shù)及預(yù)防效果。結(jié)果見表一。表一：大型真菌抗病毒制劑對(duì)番茄病毒病的預(yù)防效果藥劑用量（ug/ml）病情指數(shù)預(yù)防效果（%）大型真菌抗病毒制劑1008.9292.16大型真菌抗病毒制劑5015.2687.62大型真菌抗病毒制劑2530.8662.7120%病毒Ａ5018.8979.17清水對(duì)照-68.67-注：病毒病分級(jí)標(biāo)準(zhǔn)：0級(jí)：無病癥；1級(jí)：葉片明顯呈花葉或黃化，有瘡斑；3級(jí)：葉片凹凸不平，變小且畸形；5級(jí)：植株形成叢枝，大量落花落蕾；7級(jí)：整個(gè)植株矮化、果小質(zhì)劣，果實(shí)花臉。病情指數(shù)=∑（各級(jí)病株數(shù)x相對(duì)級(jí)數(shù)值）/（調(diào)查總株數(shù)x最高病級(jí)數(shù)）x100預(yù)防效果=（CK0病指數(shù)-藥劑處理后病指數(shù)）/CK0病指數(shù)x100式中：CK0—對(duì)照區(qū)用藥前；CK1—對(duì)照區(qū)用藥后；CL0—處理區(qū)用藥前；CL1—處理區(qū)用藥后。由表一可以看出，大型真菌抗病毒制劑使用濃度100ug/ml、50ug/ml均具有較好的預(yù)防效果，平均預(yù)防效果分別為：92.16%、87.62%，均高于對(duì)照20%病毒Ａ50ug/ml79.17%的預(yù)防效果；大型真菌抗病毒制劑使用濃度25ug/ml的預(yù)防效果相對(duì)較差。綜合分析，大型真菌抗病毒制劑使用濃度100ug/ml、50ug/ml均具有較好的預(yù)防效果，但比較成本以50ug/ml的使用濃度抗病毒效果好，較經(jīng)濟(jì)。二、田間治療效果試驗(yàn)當(dāng)番茄苗第一花序現(xiàn)蕾，接種病毒。病毒制備和接種方法同田間預(yù)防效果試驗(yàn)。接種48h后噴施藥劑。藥劑處理和噴施方法同田間預(yù)防效果試驗(yàn)。每次噴藥前和第三次噴藥5天后調(diào)查病情。結(jié)果見表二。病情分級(jí)標(biāo)準(zhǔn)，病情指數(shù)計(jì)算方法，符號(hào)代表含義同田間預(yù)防效果試驗(yàn)。相對(duì)防效=[1-（CK0病指數(shù)xCL1病指數(shù)）/（CK1病指數(shù)xCL0病指數(shù)）]x100表二：大型真菌抗病毒制劑對(duì)番茄病毒病的治療效果由表二可以看出，大型真菌抗病毒制劑通過三次用藥治療均取得了一定的效果。以使用濃度100ug/ml具有較好的治療效果，平均治療效果為：78.12%，顯著高于使用濃度50ug/ml，平均治療效果為52.17%、使用濃度25ug/ml，平均治療效果為17.67%及對(duì)照20%病毒Ａ50ug/ml，平均治療效果為51.89%的治療效果。綜合分析，大型真菌抗病毒制劑使用濃度100ug/ml具有較好的治療效果。當(dāng)前第1頁1 2 3