1.一種滇黃精的組培快繁方法,其特征在于,包括以下幾個(gè)步驟:
①外殖體的選擇與處理:選取成熟、新鮮、無病蟲害的滇黃精根莖,用刀切取帶芽的根莖置于洗潔精水溶液中浸泡,浸泡1~3min后將其用流水清洗干凈,然后用體積分?jǐn)?shù)為70~75%的酒精浸泡1~2min,用無菌水反復(fù)沖洗2~3次,最后放入質(zhì)量分?jǐn)?shù)為0.1~0.3%的氯化汞中反復(fù)浸泡滅菌3~5次,每次浸泡的時(shí)間為3~5min,每次浸泡后須用無菌水沖洗2~3次,沖洗干凈后再用無菌濾紙將無菌水吸干,用刀切去傷口壞死的部分即可進(jìn)行接種;
②誘導(dǎo)培養(yǎng):將步驟①中消毒處理后的根莖接種于誘導(dǎo)培養(yǎng)基上進(jìn)行誘導(dǎo)培養(yǎng),在培養(yǎng)溫度為23~28℃,光照強(qiáng)度為2000~2500Lux,光照時(shí)間為12~16h/天的條件下培養(yǎng),培養(yǎng)20~30天后根莖部分膨大,根莖的切口處誘導(dǎo)出淡黃色致密的愈傷組織,所述誘導(dǎo)培養(yǎng)基為:MS基本培養(yǎng)基+1.0~3.0mg/L6-BA+0.5~1.0mg/L2,4-D+1.0~2.0mg/L赤霉素+5.0~10.0g/L瓊脂+20.0~30.0g/L蔗糖;
③繼代培養(yǎng):先將步驟②中誘導(dǎo)出的愈傷組織轉(zhuǎn)接于繼代培養(yǎng)基中進(jìn)行繼代培養(yǎng),在培養(yǎng)溫度為23~28℃,光照強(qiáng)度為2000~2500Lux,光照時(shí)間為12~16h/天的條件下培養(yǎng),培養(yǎng)20~30天分化出新的幼芽;所述繼代培養(yǎng)基為:MS培養(yǎng)基+3.0~4.5mg/L6-BA+2.0~3.0mg/L62BA +3.0~5.0mg/L玉米素+0.2~1.0mg/LNAA+1.0~3.0g/L瓊脂+5.0~10.0g/L蔗糖;
④增殖培養(yǎng):將步驟③中繼代培養(yǎng)成功的帶有幼芽的根莖切成0.4~0.8cm3的小塊,然后接種于增殖培養(yǎng)基中,在培養(yǎng)溫度為23~28℃,光照強(qiáng)度為2000~2500Lux,光照時(shí)間為12~16h/天的條件下培養(yǎng)20~30天后獲得分化苗;所述增殖培養(yǎng)基為:MS培養(yǎng)基+2.0~4.0mg/L6-BA+0.5~1.5mg/L2,4D+0.5~1.0 mg/L GA3 +6.0~8.0g/L瓊脂+20.0~25.0g/L蔗糖;
⑤生根培養(yǎng):待步驟④中增殖培養(yǎng)得到的分化苗長(zhǎng)至2~4cm時(shí),先將分化苗轉(zhuǎn)接到生根培養(yǎng)基上誘導(dǎo)生根,在培養(yǎng)溫度為23~28℃,光照強(qiáng)度為2000~2500Lux,光照時(shí)間為12~16h/天的條件下培養(yǎng)20~30天后可觀察到分化苗長(zhǎng)出3~6條根須,根須長(zhǎng)度為2~4cm,然后將分化苗移至自然光下培養(yǎng),培養(yǎng)10天后即可進(jìn)行組培苗的移栽,所生根培養(yǎng)基為:1/2MS培養(yǎng)基 +0.2~1.0mg/LNAA +0.2~0.6mg/LIBA+0.2~0.5%活性炭+5~20%香蕉 +6.0~8.0g/L瓊脂+20.0~25.0g/L蔗糖;
⑥煉苗移栽:將步驟⑤中培養(yǎng)得到的組培苗從生根培養(yǎng)基中取出,洗凈根部的培養(yǎng)基后,將組培苗移栽至苗床的育苗基質(zhì)中,移栽初期需搭建小拱棚,覆蓋透明塑料布,適當(dāng)遮蔭,保持環(huán)境溫度20~25℃,空氣濕度70~80%,每隔7天噴施1次營(yíng)養(yǎng)液,15天后除去塑料布,逐漸通風(fēng),增加光照,轉(zhuǎn)入常規(guī)管理,30~40天即可進(jìn)行大田移栽。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種滇黃精的組培快繁方法,其特征在于:在步驟②中,所述的誘導(dǎo)培養(yǎng)基中還添加有1.0~2.0mg/LKT+0.1~0.2mg/LNAA。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種滇黃精的組培快繁方法,其特征在于:在步驟⑤中,所述生根培養(yǎng)基中還添加有0.3~0.5mg/LCA。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種滇黃精的組培快繁方法,其特征在于:在步驟⑥中,所述育苗基質(zhì)為:樹皮20~40份、鋸末10~30份、蛭石30~40份、黑土10~20份、珍珠巖2~5份、草木灰0.2~0.3份。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種滇黃精的組培快繁方法,其特征在于:在步驟①中,所述氯化汞中含有質(zhì)量分?jǐn)?shù)為0.02~0.1%的土溫20。