本發(fā)明涉及組織培養(yǎng)
技術(shù)領(lǐng)域：
，特別涉及一種石斛育苗方法。
背景技術(shù)：
：石斛在我國(guó)是一大類(lèi)傳統(tǒng)名貴中藥材，傳統(tǒng)上既可做藥用，又可作保健品用，同時(shí)，從很久以前開(kāi)始到現(xiàn)在還一直被作為一種高檔湯料(食品)使用，目前石斛傳統(tǒng)的藥用和保健功能已得到人們的高度認(rèn)同與喜愛(ài)。由于石斛在自然條件下需要和真菌共生提供營(yíng)養(yǎng)才能萌發(fā)，且萌發(fā)率極低，野生石斛喜陰涼，濕潤(rùn)，通風(fēng)多霧的氣候環(huán)境，對(duì)生長(zhǎng)環(huán)境極為苛刻，遇強(qiáng)光、暴雨、寒潮、干旱即會(huì)死亡，是一種生長(zhǎng)緩慢，自身繁殖能力非常低的蘭科附身植物，由于石斛具有巨大的藥用和保健價(jià)值，導(dǎo)致長(zhǎng)期掠奪性采挖，再加上生存環(huán)境越來(lái)越惡劣，致使野生資源嚴(yán)重枯竭?，F(xiàn)如今石斛繁殖技術(shù)有種子萌發(fā)，扦插、分株繁殖，組織培養(yǎng)，其中種子萌發(fā)萌發(fā)率極低，扦插、分株繁殖繁殖速度也很慢。組織快繁技術(shù)是一種有效提高種苗生產(chǎn)效率的方法，運(yùn)用組織培養(yǎng)進(jìn)行石斛的培育能大大提高石斛的繁殖效率。目前生產(chǎn)上大多采用愈傷組織誘導(dǎo)來(lái)進(jìn)行擴(kuò)繁，但都是在激素配比上進(jìn)行調(diào)試，然而，激素配比調(diào)試難以滿(mǎn)足石斛所需最佳條件，從而導(dǎo)致出芽率較低。技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：本發(fā)明的主要目的是提出一種石斛育苗方法，旨在提高石斛育苗的出芽率。為實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明提出一種石斛育苗方法，包括以下步驟：a、將帶節(jié)的石斛莖段在培養(yǎng)基中培養(yǎng)，誘導(dǎo)腋芽；b、待腋芽生長(zhǎng)高度超過(guò)1cm時(shí)，將芽點(diǎn)切除，誘導(dǎo)叢生芽；c、待眾生芽生長(zhǎng)達(dá)到1cm～2cm時(shí)，切割叢生芽，叢生芽進(jìn)行增值及生根培養(yǎng)，并將切割完叢生芽的原莖段繼續(xù)在培養(yǎng)基中培養(yǎng)，誘導(dǎo)愈傷組織；d、當(dāng)愈傷組織形成后，將愈傷組織切割并轉(zhuǎn)入培養(yǎng)基中繼續(xù)培養(yǎng)，誘導(dǎo)叢生芽；e、將叢生芽轉(zhuǎn)入培養(yǎng)基中增殖培養(yǎng)；f、當(dāng)叢生芽生長(zhǎng)高度達(dá)到2cm～3cm時(shí)，將其轉(zhuǎn)入培養(yǎng)基中進(jìn)行生根培養(yǎng)。優(yōu)選的，上述步驟b還包括：在切除芽點(diǎn)時(shí)，保留0.1cm～0.5cm的芽點(diǎn)在莖段上。優(yōu)選的，上述步驟b還包括：在切除芽點(diǎn)后，對(duì)保留的芽點(diǎn)的切面上進(jìn)行縱切。優(yōu)選的，步驟a中選取的莖段為石斛的靠近根部的莖段。優(yōu)選的，上述步驟a還包括：在培養(yǎng)基培養(yǎng)之前，對(duì)莖段進(jìn)行消毒、殺菌處理。優(yōu)選的，對(duì)步驟a中培養(yǎng)基的配方為：MS，NAA：0.4mg/L～0.6mg/L，碳粉：0.2～1.0g/L，6-BA：1.0mg/L～2.0mg/L，KT：0.2mg/L～0.4mg/L，香蕉：10g/L～25g/L。優(yōu)選的，對(duì)步驟c中培養(yǎng)基的配方為：1/2MS培養(yǎng)基，花寶4號(hào)：1.0～2.0g/L，香蕉：40g/L～60g/L，碳粉0.2g/L～1.0g/L，NAA：0.3mg/L～0.4mg/L，6-BA：0mg/L～2.0mg/L，KT：0.1mg/L～0.3mg/L，碳粉：0.2～1.0g/L。優(yōu)選的，步驟d中培養(yǎng)基的配方為：1/2MS培養(yǎng)基，花寶4號(hào)：1.0～2.0g/L，香蕉：40g/L～60g/L，碳粉0.2g/L～1.0g/L，NAA：1.0mg/L～1.2mg/L，6-BA：1.5mg/L～1.7mg/L。優(yōu)選的，步驟e中培養(yǎng)基的配方為：1/2MS培養(yǎng)基，香蕉：100g/L～120g/L，碳粉0.2g/L～1.0g/L，NAA：0.5mg/L～1.5mg/L，IBA：0.5mg/L～1.0mg/L。本發(fā)明的技術(shù)方案通過(guò)芽點(diǎn)切割以打破頂端優(yōu)勢(shì)，促進(jìn)萌發(fā)更多的叢生芽，縮短培養(yǎng)周期，并通過(guò)叢生芽的切割，以促進(jìn)誘導(dǎo)愈傷組織的形成，利用愈傷組織進(jìn)行擴(kuò)繁，可以有效的增加擴(kuò)繁數(shù)量，從而能生產(chǎn)出大量?jī)?yōu)質(zhì)的石斛苗。附圖說(shuō)明為了更清楚地說(shuō)明本發(fā)明實(shí)施例或現(xiàn)有技術(shù)中的技術(shù)方案，下面將對(duì)實(shí)施例或現(xiàn)有技術(shù)描述中所需要使用的附圖作簡(jiǎn)單地介紹，顯而易見(jiàn)地，下面描述中的附圖僅僅是本發(fā)明的一些實(shí)施例，對(duì)于本領(lǐng)域普通技術(shù)人員來(lái)講，在不付出創(chuàng)造性勞動(dòng)的前提下，還可以根據(jù)這些附圖示出的結(jié)構(gòu)獲得其他的附圖。圖1為霍山石斛增殖培養(yǎng)約60d后的分蘗數(shù)；圖2為霍山石斛增殖培養(yǎng)60d后的生長(zhǎng)值；圖3為霍山石斛通過(guò)土豆處理后的生根培養(yǎng)株高圖；圖4為霍山石斛通過(guò)土豆處理后的生根培養(yǎng)莖粗圖；圖5為霍山石斛通過(guò)土豆處理后的生根培養(yǎng)根數(shù)圖；圖6為霍山石斛通過(guò)土豆處理后的生根培養(yǎng)根粗圖；圖7為霍山石斛通過(guò)香蕉處理后的生根培養(yǎng)株高圖；圖8為霍山石斛通過(guò)香蕉處理后的生根培養(yǎng)莖粗圖；圖9為霍山石斛通過(guò)香蕉處理后的生根培養(yǎng)根數(shù)圖；圖10為霍山石斛通過(guò)香蕉處理后的生根培養(yǎng)根粗圖。本發(fā)明目的的實(shí)現(xiàn)、功能特點(diǎn)及優(yōu)點(diǎn)將結(jié)合實(shí)施例，參照附圖做進(jìn)一步說(shuō)明。具體實(shí)施方式下面將結(jié)合本發(fā)明實(shí)施例中的附圖，對(duì)本發(fā)明實(shí)施例中的技術(shù)方案進(jìn)行清楚、完整地描述，顯然，所描述的實(shí)施例僅僅是本發(fā)明的一部分實(shí)施例，而不是全部的實(shí)施例?；诒景l(fā)明中的實(shí)施例，本領(lǐng)域普通技術(shù)人員在沒(méi)有作出創(chuàng)造性勞動(dòng)前提下所獲得的所有其他實(shí)施例，都屬于本發(fā)明保護(hù)的范圍。需要說(shuō)明，若本發(fā)明實(shí)施例中有涉及方向性指示(諸如上、下、左、右、前、后……)，則該方向性指示僅用于解釋在某一特定姿態(tài)(如附圖所示)下各部件之間的相對(duì)位置關(guān)系、運(yùn)動(dòng)情況等，如果該特定姿態(tài)發(fā)生改變時(shí)，則該方向性指示也相應(yīng)地隨之改變。另外，若本發(fā)明實(shí)施例中有涉及“第一”、“第二”等的描述，則該“第一”、“第二”等的描述僅用于描述目的，而不能理解為指示或暗示其相對(duì)重要性或者隱含指明所指示的技術(shù)特征的數(shù)量。由此，限定有“第一”、“第二”的特征可以明示或者隱含地包括至少一個(gè)該特征。另外，各個(gè)實(shí)施例之間的技術(shù)方案可以相互結(jié)合，但是必須是以本領(lǐng)域普通技術(shù)人員能夠?qū)崿F(xiàn)為基礎(chǔ)，當(dāng)技術(shù)方案的結(jié)合出現(xiàn)相互矛盾或無(wú)法實(shí)現(xiàn)時(shí)應(yīng)當(dāng)認(rèn)為這種技術(shù)方案的結(jié)合不存在，也不在本發(fā)明要求的保護(hù)范圍之內(nèi)。本發(fā)明提出一種石斛育苗方法。在本發(fā)明實(shí)施例中，石斛育苗方法包括以下步驟：a、將帶節(jié)的石斛莖段在培養(yǎng)基中培養(yǎng)，誘導(dǎo)腋芽。選擇粗壯，膠質(zhì)含量高，無(wú)病蟲(chóng)害的霍山石斛植株，去除葉片，洗潔精清洗干凈，流水沖洗大約1小時(shí)，蒸餾水清洗干凈，在超凈工作臺(tái)上用70％酒精搽拭干凈，去除葉鞘，并將石斛鮮條切成大約1.5cm的帶節(jié)莖段。然后通過(guò)大約0.1％升汞浸泡5min-8min，再用10％左右的次氯酸鈉溶液消毒8min，用無(wú)菌水沖洗5-6次。最后將莖段平放接種于培養(yǎng)基中培養(yǎng)大約15天。b、待腋芽生長(zhǎng)高度超過(guò)1cm時(shí)，將芽點(diǎn)切除，誘導(dǎo)叢生芽。在步驟a中，莖段經(jīng)過(guò)15天培養(yǎng)，節(jié)點(diǎn)處長(zhǎng)出高約1cm的奶綠色芽點(diǎn)，此時(shí)進(jìn)行切割芽點(diǎn)。具體操作如下：①、用刀片將芽點(diǎn)割下，也就是去除頂芽，除去頂端優(yōu)勢(shì)；而后將其接種到培養(yǎng)基中。需要說(shuō)明的是，在切割時(shí)，不能將芽點(diǎn)完全割完，應(yīng)保留約0.1cm～0.5cm左右的芽點(diǎn)在莖段上，例如包括0.3cm。為了驗(yàn)證芽點(diǎn)保留長(zhǎng)度與叢生芽的數(shù)量的關(guān)系，實(shí)驗(yàn)數(shù)表如下：芽點(diǎn)保留長(zhǎng)度(cm)30個(gè)莖段，15d后叢生芽平均數(shù)量00.20.14.60.25.60.35.50.45.30.54.90.63.50.72.7由此，可見(jiàn)，當(dāng)芽點(diǎn)保留長(zhǎng)度在0.1～0.5cm時(shí)，叢生芽的數(shù)量最多。當(dāng)芽點(diǎn)全部被切除后，幾乎沒(méi)有叢生芽。當(dāng)芽點(diǎn)保留長(zhǎng)度超過(guò)0.6cm時(shí)，顯然叢生芽的數(shù)量較少，誘導(dǎo)效果不明顯。②、用刀片在保留的芽點(diǎn)的切面上縱切一刀，以增加切口面積，提高愈傷組織成功率。而后繼續(xù)放入原培養(yǎng)基中培養(yǎng)約25天。c、待眾生芽生長(zhǎng)達(dá)到1cm～2cm時(shí)，切割叢生芽，并將切割完叢生芽的原莖段繼續(xù)在培養(yǎng)基中培養(yǎng)，誘導(dǎo)愈傷組織。經(jīng)過(guò)25天左右培養(yǎng)，莖段切口處長(zhǎng)出4-6棵叢生芽，高約1-2cm左右，此時(shí)要切割叢生芽。步操如下：叢生芽增殖：將切割下的叢生芽轉(zhuǎn)入培養(yǎng)基中進(jìn)行培養(yǎng)60天。60天后通過(guò)培養(yǎng)基進(jìn)行生根培養(yǎng)。愈傷組織誘導(dǎo)：將切割完叢生芽的原誘導(dǎo)莖段繼續(xù)放入培養(yǎng)基中誘導(dǎo)愈傷組織。d、當(dāng)愈傷組織形成后，將愈傷組織切割并轉(zhuǎn)入培養(yǎng)基中繼續(xù)培養(yǎng)，誘導(dǎo)叢生芽。經(jīng)過(guò)大約30天的培養(yǎng)，莖段切口已產(chǎn)生愈傷組織，部分愈傷組織已分化出叢生芽，平均一個(gè)莖段產(chǎn)生叢生小芽6-8棵左右，將愈傷組織用刀切成小塊繼續(xù)培養(yǎng)基中。再經(jīng)過(guò)大約30天的培養(yǎng)，莖段叢生芽數(shù)量激增，愈傷組織已全部分化出芽，變成叢生芽簇，高度大概1cm左右，此時(shí)將叢生芽切出轉(zhuǎn)接以進(jìn)行增殖培養(yǎng)，愈傷組織可繼續(xù)轉(zhuǎn)入培養(yǎng)基進(jìn)行叢生芽誘導(dǎo)培養(yǎng)。e、將叢生芽轉(zhuǎn)入培養(yǎng)基中增殖培養(yǎng)。為了提高出芽數(shù)量，將上一步驟中的眾生芽轉(zhuǎn)入培養(yǎng)基中進(jìn)行增殖培養(yǎng)，以得到更多的眾生芽。f、當(dāng)叢生芽生長(zhǎng)高度達(dá)到2cm～3cm時(shí)，將其轉(zhuǎn)入培養(yǎng)基中進(jìn)行生根培養(yǎng)。通過(guò)步驟e的培養(yǎng)，培養(yǎng)大約60天后石斛苗足夠健壯，高度大概2-3cm左右，可進(jìn)行生根培養(yǎng)。將培養(yǎng)出的石斛小苗轉(zhuǎn)入培養(yǎng)基中進(jìn)行生根。g、出苗。石斛小苗在培養(yǎng)生根培養(yǎng)約75天后，石斛苗長(zhǎng)出根系，石斛根達(dá)5cm左右且根，發(fā)綠，石斛苗達(dá)到7-8cm以上，長(zhǎng)出葉片5片以上，葉色濃綠，即可移出室外煉苗移栽。本發(fā)明的技術(shù)方案通過(guò)芽點(diǎn)切割以打破頂端優(yōu)勢(shì)，促進(jìn)萌發(fā)更多的叢生芽，縮短培養(yǎng)周期，并通過(guò)叢生芽的切割，以促進(jìn)誘導(dǎo)愈傷組織的形成，利用愈傷組織進(jìn)行擴(kuò)繁，可以有效的增加擴(kuò)繁數(shù)量，從而能生產(chǎn)出大量?jī)?yōu)質(zhì)的石斛苗。石斛條上部生長(zhǎng)素含量較高，理論上，在選取莖段時(shí)，應(yīng)當(dāng)優(yōu)先選取上部，以在培養(yǎng)時(shí)生長(zhǎng)出更多的叢生芽。為了驗(yàn)證石斛條個(gè)個(gè)位置的莖段對(duì)叢生芽數(shù)量的影響，選取霍山石斛為材料，實(shí)驗(yàn)數(shù)表如下：由此可見(jiàn)，對(duì)于霍山石斛而言，并不是上部莖段產(chǎn)生的叢生芽數(shù)量最對(duì)，相反，靠近根部莖段產(chǎn)生的叢生芽數(shù)量更多，這與技術(shù)人員的認(rèn)知恰恰相反。因此，在選取石斛莖段時(shí)，優(yōu)選靠近根部的莖段。下述內(nèi)容中，將以石斛中的一種，霍山石斛的培育為例進(jìn)行闡述。在上述步驟a中，雖然培育石斛莖段的培養(yǎng)基可以有多種，但是，在本實(shí)施例中，通過(guò)實(shí)驗(yàn)，得出較佳的M1培養(yǎng)基配方。實(shí)驗(yàn)如下：以MS為基本培養(yǎng)基，添加香蕉10g/L～25g/L(為石斛提供各種營(yíng)養(yǎng)元素，例如氨基酸和微量元素等)，NAA，碳粉，KT、6-BA，配置9種不同激素配比的培養(yǎng)基，具體激素配方如表一：表一莖段誘導(dǎo)叢生芽培養(yǎng)基配方表40d后統(tǒng)計(jì)觀(guān)察可得(表二)，從接種的9種培養(yǎng)基來(lái)看，9號(hào)培養(yǎng)基即激素配比為6-BA2mg/L+KT0.4mg/L的腋芽誘導(dǎo)率最高，誘導(dǎo)的腋芽達(dá)到102個(gè)，誘導(dǎo)的芽葉色濃綠、粗壯，高度最高。其次是6號(hào)培養(yǎng)基即激素配比為6-BA1mg/L+KT0.4mg/L，誘導(dǎo)的腋芽數(shù)為90個(gè)，誘導(dǎo)的芽葉色綠色、較粗壯。再次是處理5即激素配比為6-BA1mg/L+KT0.2mg/L。最差的是1、2、7號(hào)培養(yǎng)基，基本不萌發(fā)腋芽，只有少數(shù)萌發(fā)腋芽且萌發(fā)腋芽數(shù)較少，腋芽細(xì)弱，長(zhǎng)勢(shì)較弱，只有極少數(shù)有萌發(fā)現(xiàn)象且健壯度較弱，不適合進(jìn)行下一步的轉(zhuǎn)接。因此1、2、7號(hào)培養(yǎng)基不適合作為霍山石斛莖段誘導(dǎo)叢生芽培養(yǎng)基。表二莖段誘導(dǎo)叢生芽60d統(tǒng)計(jì)表++++非常健壯；+++健壯；++一般健壯；+弱帶節(jié)莖段需要在細(xì)胞分裂素與生長(zhǎng)素的共同作用下才能萌發(fā)出較理想的腋芽。在一定范圍內(nèi)，較高濃度的細(xì)胞分裂素KT和6-BA與較低濃度的NAA協(xié)同有利于芽的誘導(dǎo)，激素濃度過(guò)高或過(guò)低都不利于腋芽的誘導(dǎo)萌發(fā)，6-BA濃度一定的情況下，一定范圍內(nèi)KT越高莖段誘導(dǎo)腋芽數(shù)越多。綜合考慮，霍山石斛莖段誘導(dǎo)叢生芽的較適培養(yǎng)基為基本培養(yǎng)基為:MS，NAA：0.4mg/L～0.6mg/L，6-BA：1.0mg/L～2.0mg/L，KT：0.2mg/L～0.4mg/L，香蕉：10g/L～25g/L。此時(shí)將叢生芽切下進(jìn)行增殖培養(yǎng)，剩余的莖段進(jìn)行愈傷組織的誘導(dǎo)。在此需要說(shuō)明的是，由于莖段在培養(yǎng)過(guò)程中容易褐變的，因?yàn)榕囵B(yǎng)基中其所含的氨基化合物如蛋白質(zhì)、氨基酸及醛、酮等與還原糖相遇，經(jīng)過(guò)一系列反應(yīng)生成褐色聚合物的現(xiàn)象稱(chēng)為褐變反應(yīng)，而褐變會(huì)引起莖段發(fā)芽。添加一定量的碳粉，可有效防止褐變，從而提高從生芽的出芽率，在此，碳粉添加量在0.2～1.0g/L范圍內(nèi)，例如0.3g/L、0.5g/L或0.8g/L。為了防止褐變，下述其它實(shí)施例中將一并加入碳粉。因此，霍山石斛的基本培養(yǎng)基M1為：MS，NAA：0.4mg/L～0.6mg/L，6-BA：1.0mg/L～2.0mg/L，KT：0.2mg/L～0.4mg/L，香蕉：10g/L～25g/L，碳粉：0.2g/L～1.0g/L。在上述步驟c中，通過(guò)正交設(shè)計(jì)，得出較佳的M3培養(yǎng)基配方。設(shè)計(jì)三因素三水平正交實(shí)驗(yàn)，各因素表為表三，正交實(shí)驗(yàn)表為表四，基本培養(yǎng)基為花寶4號(hào)：1.0～2.0g/L，香蕉：40g/L～60g/L，碳粉0.2g/L～1.0g/L。將第一步實(shí)驗(yàn)剩余的莖段接種于正交實(shí)驗(yàn)表中的9個(gè)處理中，每個(gè)處理接種5瓶，每瓶接種5個(gè)莖段，30d時(shí)觀(guān)察愈傷組織誘導(dǎo)數(shù)，60d后觀(guān)察愈傷組織誘導(dǎo)芽數(shù)。表三因素水平表表四愈傷組織誘導(dǎo)正交實(shí)驗(yàn)表30d后各個(gè)觀(guān)察可得各個(gè)處理均有產(chǎn)生愈傷組織，繼續(xù)培養(yǎng)60d后發(fā)現(xiàn)愈傷組織均已產(chǎn)生不定芽，實(shí)驗(yàn)結(jié)果如表五。通過(guò)正交實(shí)驗(yàn)分析可得，個(gè)因素適宜的水平為，NAA：0.3mg/L，6-BA：1mg/L，KT：0.3mg/L，且個(gè)因素影響大小為NAA>KT>6-BA。因此適宜的莖段誘導(dǎo)愈傷組織的M3培養(yǎng)基配方為：1/2MS培養(yǎng)基，花寶4號(hào)：1.0～2.0g/L，香蕉：40g/L～60g/L，碳粉0.2g/L～1.0g/L，NAA：0.3mg/L左右，6-BA：0mg/L～2.0mg/L，KT：0.1mg/L～0.3mg/L，碳粉：0.2～1.0g/L。表五愈傷組織誘導(dǎo)實(shí)驗(yàn)結(jié)果表六愈傷組織誘導(dǎo)實(shí)驗(yàn)結(jié)果通過(guò)表六，可以得出，NAA在0.3mg/L～0.4mg/L時(shí)，愈傷組織誘導(dǎo)數(shù)和不定芽平均誘導(dǎo)數(shù)最高，因此，M3培養(yǎng)基配方為：1/2MS培養(yǎng)基，花寶4號(hào)：1.0～2.0g/L，香蕉：40g/L～60g/L，碳粉0.2g/L～1.0g/L，NAA：0.3mg/L～0.4mg/L，6-BA：0mg/L～2.0mg/L，KT：0.1mg/L～0.3mg/L，碳粉：0.2～1.0g/L。在上述步驟e中，通過(guò)正交設(shè)計(jì)，得出較佳的M2培養(yǎng)基配方?；九囵B(yǎng)基為：1/2MS培養(yǎng)基，花寶4號(hào)：1.0～2.0g/L，香蕉：40g/L～60g/L，碳粉0.2g/L～1.0g/L。添加不同濃度的NAA、6-BA、配置9個(gè)不同激素配比的增殖培養(yǎng)基，培養(yǎng)基配方如表五，將高度一致，約為1cm的增殖苗接種于這9個(gè)不同處理的培養(yǎng)基中，每個(gè)處理接種20瓶，每瓶接種5棵霍山石斛增殖苗，大約60d后統(tǒng)計(jì)觀(guān)察并記錄小苗分蘗棵數(shù)、生長(zhǎng)值、顏色、生長(zhǎng)勢(shì)。生長(zhǎng)勢(shì)：+長(zhǎng)勢(shì)較弱，顏色較黃，苗矮或纖細(xì)；++長(zhǎng)勢(shì)一般，顏色黃綠，苗過(guò)高或纖細(xì)；+++長(zhǎng)勢(shì)較好，顏色綠色；++++長(zhǎng)勢(shì)最好，顏色濃綠，苗粗壯。表七霍山石斛增值培養(yǎng)60d統(tǒng)計(jì)表60d后統(tǒng)計(jì)觀(guān)察可得，從分蘗數(shù)來(lái)看(參照?qǐng)D1)，處理5最好，其次是處理2，處理4，處理3，處理9分蘗數(shù)最差。從生長(zhǎng)值來(lái)看(參照?qǐng)D2)，處理5最好，其次是處理4，處理2，處理1，同樣處理9最差。從生長(zhǎng)勢(shì)、顏色來(lái)看，處理4和處理5最好，顏色濃綠，苗粗壯，處理1和處理2次之，長(zhǎng)勢(shì)較好，顏色綠色，處理7和處理9最差，長(zhǎng)勢(shì)最弱。綜合分析可得，處理5、處理4最適宜做霍山石斛增殖培養(yǎng)培養(yǎng)基。其中處理5最好即NAA1mg/L+6-BA1.5mg/L組合最適宜做霍山石斛增殖培養(yǎng)培養(yǎng)基。處理4未添加6-BA其分蘗性較處理5和處理2差，但苗的長(zhǎng)勢(shì)較好，而且實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)處理4的苗無(wú)需進(jìn)行生根壯苗可實(shí)現(xiàn)一步成苗，既節(jié)約生產(chǎn)資料又縮短了時(shí)間，弊端在于出苗質(zhì)量稍差于進(jìn)行生根壯苗的種苗，且出苗數(shù)量稍低于轉(zhuǎn)接一代的生根苗。實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)添加一定濃度的6-BA和NAA能促進(jìn)霍山石斛增殖誘導(dǎo)，NAA濃度不變，在一定范圍內(nèi)，隨著6-BA濃度的升高其增殖誘導(dǎo)效果也逐漸變強(qiáng)，實(shí)驗(yàn)可得添加6-BA1.5mg/L誘導(dǎo)效果最強(qiáng)，但濃度高于6-BA1.5mg/L時(shí)，誘導(dǎo)效果反而變?nèi)酰f(shuō)明高濃度的6-BA能抑制霍山石斛增殖培養(yǎng)。但6-BA濃度不變的情況下，添加一定濃度梯度的NAA，其增殖效果也是隨著NAA濃度的上升先加強(qiáng)后減弱，因此高濃度的NAA對(duì)霍山石斛的增殖效果無(wú)益。表八霍山石斛增值培養(yǎng)60d統(tǒng)計(jì)表通過(guò)表八可得，NAA：1.0mg/L～1.2mg/L，6-BA：1.5mg/L～1.7mg/L時(shí)，霍山石斛的生長(zhǎng)式及顏色都最好。綜合分析可得，最適宜霍山石斛增殖培養(yǎng)的培養(yǎng)基為1/2MS培養(yǎng)基+花寶4號(hào)1.5g/L+香蕉50g/L+碳粉0.5g/L+NAA1mg/L+6-BA1.5mg/L。M2培養(yǎng)基配方：1/2MS培養(yǎng)基，花寶4號(hào)：1.0～2.0g/L，香蕉：40g/L～60g/L，碳粉0.2g/L～1.0g/L，NAA：1.0mg/L～1.2mg/L，6-BA：1.5mg/L～1.7mg/L。在上述步驟f中，通過(guò)正交設(shè)計(jì)，得出較佳的M4培養(yǎng)基配方?；九囵B(yǎng)基為1/2MS培養(yǎng)基，碳粉0.2g/L～1.0g/L，并且添加不同濃度的NAA、IBA，配置9個(gè)不同激素配比的生根培養(yǎng)基，添加物分別選擇香蕉和土豆，濃度分別為100g/L。培養(yǎng)基配方如表五，將高度一致，約為2.5cm的增殖苗接種于這9個(gè)不同處理的培養(yǎng)基中，每個(gè)處理接種20瓶，每瓶接種5棵霍山石斛增殖苗，75d統(tǒng)計(jì)觀(guān)察一次并記錄小苗生長(zhǎng)勢(shì)、健壯度、苗高、莖粗、根數(shù)、根粗。培養(yǎng)條件為溫度約25℃，光照約2000lx10個(gè)小時(shí)。表九霍山石斛生根激素配比表各個(gè)處理培養(yǎng)約75d后取出試管苗，洗凈，測(cè)量株高，莖粗、根數(shù)、根粗，比較分析如圖3至圖10。分析結(jié)果如下：香蕉處理株高(參照?qǐng)D7)：添加100g/L香蕉培養(yǎng)40d后，處理8，激素配比為NAA1.5mg/L+IBA0.5mg/L株高最高為8.2cm，其次為處理1激素配比為NAA0.5mg/L+IBA0mg/L株高為6.5cm，處理7最低，激素配比為NAA1.5mg/L+IBA0mg/L株高僅為4.8cm。高濃度的NAA(1.5mg/L)配合一定濃度的IBA(0.5mg/L)能有效的促進(jìn)霍山石斛生根苗的增高。香蕉處理莖粗(參照?qǐng)D8)：添加100g/L香蕉培養(yǎng)40d后，石斛莖粗平均達(dá)到0.34cm，其中處理8即激素配比為NAA1.5mg/L+IBA0.5mg/L莖粗最大為0.39cm，其次為處理2即激素配比為NAA0.5mg/L+IBA0.5mg/L、處理5即激素配比為NAA1mg/L+IBA0.5mg/L莖粗其次為0.38cm，處理6即激素配比為NAA1mg/L+IBA1mg/L莖粗最低，僅為0.28cm。單獨(dú)添加一定濃度的NAA對(duì)莖粗的生長(zhǎng)效果不明顯，而添加較高濃度的NAA(1.5mg/L)配合一定濃度的IBA(0.5mg/L)能有效的促進(jìn)霍山石斛莖的橫向生長(zhǎng)，增強(qiáng)莖粗。香蕉處理根數(shù)、根粗(參照?qǐng)D9和圖10)：添加100g/L香蕉培養(yǎng)40d后根數(shù)明顯增加，各個(gè)處理根數(shù)均較多，平均根數(shù)達(dá)到8根，其中處理1即激素配比為NAA0.5mg/L+IBA0mg/L根數(shù)最大，為10根，而處理3即激素配比為NAA0.5mg/L+IBA1mg/L、處理8即激素配比為NAA1.5mg/L+IBA0.5mg/L根數(shù)均較多，平均根數(shù)達(dá)到8.5以上。因此香蕉能有效的促進(jìn)霍山石斛發(fā)根。而香蕉處理其根粗平均達(dá)到1.1mm，其中處理3即激素配比為NAA0.5mg/L+IBA1mg/L根粗最大為0.14cm，而處理6即激素配比NAA1mg/L+IBA1mg/L和處理1即激素配比NAA0.5mg/L+IBA0mg/L根粗其次為0.12cm。單純加低濃度的NAA培養(yǎng)能有效的促進(jìn)根的橫向生長(zhǎng)。添加香蕉處理的霍山石斛生根培養(yǎng)培養(yǎng)基中，綜合生根苗株高、莖粗、根數(shù)、根粗這幾個(gè)指標(biāo)分析可得，適合霍山石斛生根壯苗的激素配比為NAA1.5mg/L+IBA0.5mg/L。土豆處理株高(參照?qǐng)D3)：添加100g/L土豆培養(yǎng)40d后，處理7，激素配比為NAA1.5mg/L+IBA0mg/L株高最高為6.7cm，其次為處理9激素配比為NAA1.5mg/L+IBA1mg/L株高為6.2cm，處理1激素配比為NAA0.5mg/L+IBA0mg/L株高為5.8cm，處理2最低，激素配比為NAA0.5mg/L+IBA0.5mg/L株高僅為5.34cm。高濃度的NAA(1.5mg/L)能有效的促進(jìn)霍山石斛生根苗的增高。土豆處理莖粗(參照?qǐng)D4)：添加100g/L土豆培養(yǎng)40d后，各個(gè)處理石斛莖粗差異不大，均達(dá)到0.3cm以上，處理1即激素配比為NAA0.5mg/L+IBA0mg/L莖粗相對(duì)最大為0.4cm。處理2即激素配比為：NAA0.5mg/L+IBA0.5mg/L、處理4即激素配比為NAA1mg/L+IBA0mg/L培養(yǎng)莖粗相對(duì)較少為0.37cm，而處理5即激素配比為NAA1mg/L+IBA0.5mg/L莖粗最低為0.29cm，最大值于最小值相差僅為1mm，差異不大。因此添加土豆處理的不同激素配比對(duì)石斛莖粗的增長(zhǎng)影響效果不大。土豆處理根數(shù)、根粗(參照?qǐng)D5和圖6)：添加100g/L土豆培養(yǎng)40d后，各個(gè)處理石斛根數(shù)和根粗差異不大。根數(shù)方面處理9即激素配比為NAA1.5mg/L+IBA1mg/L根數(shù)最大為7.8，處理6即激素配比為NAA1mg/L+IBA1mg/L和處理1即激素配比為：NAA0.5mg/L+IBA0mg/L根數(shù)次之，依次為5.9和5.1。根粗方面處理1即激素配比為NAA0.5mg/L+IBA0mg/L和處理8即激素配比為NAA1.5mg/L+IBA0.5mg/L根粗最大為0.14cm，處理4即激素配比為NAA1mg/L+IBA0mg/L根粗對(duì)小僅為0.08cm。添加土豆處理的霍山石斛生根培養(yǎng)培養(yǎng)基中，綜合生根苗株高、莖粗、根數(shù)、根粗這幾個(gè)指標(biāo)分析可得，適合霍山石斛生根壯苗的激素配比為NAA0.5mg/L+IBA0mg/L。綜合分析可得：添加香蕉處理霍山石斛生根苗長(zhǎng)勢(shì)普遍比添加土豆處理好，添加香蕉處理組石斛株高和根數(shù)明顯比添加土豆處理好，而莖粗和根粗差異不顯著，且添加香蕉處理石斛苗顏色濃綠，添加土豆處理石斛苗顏色淺綠。綜合分析可得，添加香蕉100g/L更適宜霍山石斛生根培養(yǎng)。從表十可以看出，無(wú)論是從株高、根數(shù)還是根粗上看，香蕉濃度值為100g/L～120g/L時(shí)，石斛根系生長(zhǎng)最好。表十霍山石斛生根激素配比表由此可得，適宜霍山石斛生根壯苗M4培養(yǎng)基為：1/2MS培養(yǎng)基，香蕉：100g/L～120g/L，碳粉0.2g/L～1.0g/L，NAA：0.5mg/L～1.5mg/L，IBA：0.5mg/L～1.0mg/L。以上所述僅為本發(fā)明的優(yōu)選實(shí)施例，并非因此限制本發(fā)明的專(zhuān)利范圍，凡是在本發(fā)明的發(fā)明構(gòu)思下，利用本發(fā)明說(shuō)明書(shū)及附圖內(nèi)容所作的等效結(jié)構(gòu)變換，或直接/間接運(yùn)用在其他相關(guān)的
技術(shù)領(lǐng)域：
均包括在本發(fā)明的專(zhuān)利保護(hù)范圍內(nèi)。當(dāng)前第1頁(yè)1 2 3