本發(fā)明屬于甜葉菊培養(yǎng)基
技術領域：
，具體地，涉及一種抑菌的甜葉菊培養(yǎng)基。
背景技術：
：組織培養(yǎng)過程中，普遍存在幾個難題，即微生物污染問題、褐變問題、玻璃化等現(xiàn)象。近年來甜葉菊組織培養(yǎng)技術發(fā)展很快，微生物污染問題也越來越突出，有關這個問題的研究也越來越深入。微生物污染問題主要來自兩方面：一是植物材料本身帶菌；二是操作者及空氣中所帶微生物所致；另外，污染還可能由于培養(yǎng)基帶菌，操作用具帶菌的交叉污染所致。污染的微生物分為細菌及真菌兩大類。細菌污染的特點是：菌斑呈粘液狀，而且在接種后2～3d即可發(fā)現(xiàn)。工作人員使用了未經(jīng)充分消毒的工具及呼吸時排出的細菌所引起的，有時也因操作人員用手接觸材料或器皿邊緣，這也增加了微生物落入材料或器皿的機會，還應特別注意避免交叉污染，如，已滅菌的接種工具被消毒不夠徹底的超凈工作臺面污染后又污染消毒過的材料和已滅菌的培養(yǎng)基等。真菌污染的特點：一般多由接種室的空氣污染造成。形成的原因，一是接種室的空氣本身未經(jīng)很好消毒，二是操作時由于打開瓶蓋時真菌孢子落入瓶內(nèi)，或在去掉包頭紙及解除捆扎包頭紙的橡皮筋時，揚起了真菌孢子，致使接種室空間污染。需要指出的是，要特別注意潛伏性內(nèi)生菌的污染，這是往往被操作者所忽視的問題。在植物體中除了根尖和莖尖的頂端分生組織以外可以認為其他部位都是有菌的，只是程度不一樣而已。特別是維管系統(tǒng)中帶菌的機會最大，但是在培養(yǎng)的初期往往不會表現(xiàn)出來，只是到了外植體壞死的時候突然在外植體表面出現(xiàn)了污染，這種情況就屬于潛伏性污染。因為在培養(yǎng)的初期，細胞的生命力比較旺盛，即使組織中有菌潛伏，但是由于細胞本身的防御系統(tǒng)（包括膜系統(tǒng)、酶系統(tǒng)和細胞分裂等），微生物不能侵入到細胞里面，所以看不出來，當培養(yǎng)到一定階段，由于各種環(huán)境因素的變化，比如培養(yǎng)基嚴重失水，或者其他原因等，潛伏性污染便會表現(xiàn)出來。因此通常情況下在組織培養(yǎng)的各個環(huán)節(jié)中均要嚴格按照無菌操作的要求，無菌培養(yǎng)，外植體經(jīng)過消毒滅菌后，接種于滅菌過的培養(yǎng)基中，即進入無菌培養(yǎng)的環(huán)節(jié)。培養(yǎng)室內(nèi)需清潔少菌，采用的方法有在室內(nèi)裝紫外燈，定期開燈滅菌，還可用高錳酸鉀和甲醛混合液定期熏蒸等。上述防止組織培養(yǎng)過程中微生物污染的措施均有一定效果，其不足之處在于，各個抑菌環(huán)節(jié)孤立，不能形成完整統(tǒng)一的抑菌鏈，若過程中任意一個環(huán)節(jié)操作疏忽，微生物便乘虛而入，致使組織培養(yǎng)失敗，降低組織培養(yǎng)質(zhì)量和效率，此外，通過對培養(yǎng)基滅菌，無菌接種，在無菌環(huán)境中培養(yǎng)，均為通過外在操作達到滅菌抑菌的目的，這些環(huán)節(jié)中一旦任何一個環(huán)節(jié)做的不到位則感染細菌等微生物，因此需要一種持續(xù)發(fā)揮抑菌功能的措施，使甜葉菊外植體長期處于一個無菌環(huán)境，同時增強甜葉菊外植體的內(nèi)在抑菌能力，抵抗外來微生物的污染。技術實現(xiàn)要素：針對現(xiàn)有技術中的缺陷，本發(fā)明的目的是提供一種抑菌的甜葉菊培養(yǎng)基，本發(fā)明的目的在于針對現(xiàn)有甜葉菊組織培養(yǎng)中抑菌措施的不足，通過在培養(yǎng)基中加入中草藥，使培養(yǎng)基一直處于一個對外來細菌等微生物有防治功能的環(huán)境，從而達到高效且持續(xù)抑菌的效果，減少人力物力投入，降低成本。本發(fā)明提供一種抑菌的甜葉菊培養(yǎng)基，所述抑菌的甜葉菊培養(yǎng)基包括基礎組分和中草藥提取液組分。優(yōu)選地，所述基礎組分和中草藥提取液組分重量比為3～5：1。優(yōu)選地，所述中草藥提取液組分包括如下重量份數(shù)的組分：鳳尾草11～14份、松針8～13份、元寶草8～10份、瓦楞子5～9份、重樓3～6份、田基黃2～5份、茵陳8～14份。優(yōu)選地，所述中草藥提取液組分包括如下重量份數(shù)的組分：鳳尾草12～13份、松針9～12份、元寶草9～10份、瓦楞子6～8份、重樓4～5份、田基黃3～4份、茵陳9～12份。優(yōu)選地，所述中草藥提取液組分包括如下重量份數(shù)的組分：鳳尾草12份、松針11份、元寶草9份、瓦楞子7份、重樓4份、田基黃4份、茵陳11份。優(yōu)選地，所述基礎組分配方如下：MS+0.10～0.19mg/LKT+0.08～0.18mg/LGA3+1.5～2.2mg/LMgSO4+3.5～4.1mg/LNH4NO3+10～20mg/L石榴皮汁+110～200mg/L瓊脂培養(yǎng)基。優(yōu)選地，所述基礎組分配方如下：MS+0.14～0.17mg/LKT+0.13～0.16mg/LGA3+1.7～2.1mg/LMgSO4+3.6～4.0mg/LNH4NO3+12～17mg/L石榴皮汁+116～188mg/L瓊脂培養(yǎng)基。優(yōu)選地，所述基礎組分配方如下：MS+0.15mg/LKT+0.14mg/LGA3+1.9mg/LMgSO4+3.9mg/LNH4NO3+15mg/L石榴皮汁+150mg/L瓊脂培養(yǎng)基。優(yōu)選地，所述抑菌的甜葉菊培養(yǎng)基用于所述甜葉菊愈傷組織培養(yǎng)階段、原球莖培養(yǎng)階段、繼代培養(yǎng)階段、傳代培養(yǎng)階段或生根培養(yǎng)階段任一階段。優(yōu)選地，所述抑菌的甜葉菊培養(yǎng)基用于采用根、莖或葉作為外植體的組織培養(yǎng)。與現(xiàn)有技術相比，本發(fā)明具有如下的有益效果：本發(fā)明在基礎培養(yǎng)基的基礎上增加中草藥提取液，所述中草藥包括鳳尾草、松針、元寶草、瓦楞子、重樓、田基黃和茵陳，上述中草藥對抑菌具有明顯效果，將其加入基礎培養(yǎng)基上，可以持續(xù)發(fā)揮抑菌功能，抵抗由于人為因素或者環(huán)境因素造成甜葉菊培養(yǎng)過程中的微生物污染，保障組織培養(yǎng)順利進行，提高了組織培養(yǎng)質(zhì)量和效率。具體實施方式下面結合具體實施例，進一步闡述本發(fā)明。應理解，這些實施例僅用于說明本發(fā)明而不用于限制本發(fā)明的范圍。實施例1本實施例所述抑菌的甜葉菊培養(yǎng)基包括基礎組分和中草藥提取液組分。所述基礎組分和中草藥提取液組分重量比為5：1；所述中草藥提取液組分包括如下重量份數(shù)的組分：鳳尾草11份、松針13份、元寶草8份、瓦楞子9份、重樓3份、田基黃5份、茵陳8份；所述基礎組分配方如下：MS+0.19mg/LKT+0.08mg/LGA3+2.2mg/LMgSO4+3.5mg/LNH4NO3+20mg/L石榴皮汁+110mg/L瓊脂培養(yǎng)基；所述抑菌的甜葉菊培養(yǎng)基用于所述甜葉菊愈傷組織培養(yǎng)階段；所述抑菌的甜葉菊培養(yǎng)基用于采用根的組織培養(yǎng)。實施例2本實施例所述抑菌的甜葉菊培養(yǎng)基包括基礎組分和中草藥提取液組分。所述基礎組分和中草藥提取液組分重量比為3：1；所述中草藥提取液組分包括如下重量份數(shù)的組分：鳳尾草14份、松針8份、元寶草10份、瓦楞子5份、重樓6份、田基黃2份、茵陳14份；所述基礎組分配方如下：MS+0.10mg/LKT+0.18mg/LGA3+1.5mg/LMgSO4+4.1mg/LNH4NO3+10mg/L石榴皮汁+200mg/L瓊脂培養(yǎng)基；所述抑菌的甜葉菊培養(yǎng)基用于所述甜葉菊原球莖培養(yǎng)階段；所述抑菌的甜葉菊培養(yǎng)基用于采用莖的組織培養(yǎng)。實施例3本實施例所述抑菌的甜葉菊培養(yǎng)基包括基礎組分和中草藥提取液組分。所述基礎組分和中草藥提取液組分重量比為4：1；所述中草藥提取液組分包括如下重量份數(shù)的組分：鳳尾草13份、松針9份、元寶草10份、瓦楞子6份、重樓5份、田基黃3份、茵陳12份；所述基礎組分配方如下：MS+0.14mg/LKT+0.16mg/LGA3+1.7mg/LMgSO4+4.0mg/LNH4NO3+12mg/L石榴皮汁+188mg/L瓊脂培養(yǎng)基；所述抑菌的甜葉菊培養(yǎng)基用于所述甜葉菊繼代培養(yǎng)階段；所述抑菌的甜葉菊培養(yǎng)基用于采用葉作為外植體的組織培養(yǎng)。實施例4本實施例所述抑菌的甜葉菊培養(yǎng)基包括基礎組分和中草藥提取液組分。所述基礎組分和中草藥提取液組分重量比為3：1；所述中草藥提取液組分包括如下重量份數(shù)的組分：鳳尾草12份、松針12份、元寶草9份、瓦楞子8份、重樓4份、田基黃4份、茵陳9份；所述基礎組分配方如下：MS+0.17mg/LKT+0.13mg/LGA3+2.1mg/LMgSO4+3.6mg/LNH4NO3+17mg/L石榴皮汁+116mg/L瓊脂培養(yǎng)基；所述抑菌的甜葉菊培養(yǎng)基用于所述甜葉菊傳代培養(yǎng)階段；所述抑菌的甜葉菊培養(yǎng)基用于采用莖作為外植體的組織培養(yǎng)。實施例5本實施例所述抑菌的甜葉菊培養(yǎng)基包括基礎組分和中草藥提取液組分。所述基礎組分和中草藥提取液組分重量比為5：1；所述中草藥提取液組分包括如下重量份數(shù)的組分：鳳尾草12份、松針11份、元寶草9份、瓦楞子7份、重樓4份、田基黃4份、茵陳11份；所述基礎組分配方如下：MS+0.15mg/LKT+0.14mg/LGA3+1.9mg/LMgSO4+3.9mg/LNH4NO3+15mg/L石榴皮汁+150mg/L瓊脂培養(yǎng)基；所述抑菌的甜葉菊培養(yǎng)基用于所述甜葉菊生根培養(yǎng)階段；所述抑菌的甜葉菊培養(yǎng)基用于采用葉作為外植體的組織培養(yǎng)。實施例6本實施例所述抑菌的甜葉菊培養(yǎng)基包括基礎組分和中草藥提取液組分。所述基礎組分和中草藥提取液組分重量比為4：1；所述中草藥提取液組分包括如下重量份數(shù)的組分：鳳尾草13份、松針11份、元寶草9份、瓦楞子8份、重樓4份、田基黃5份、茵陳13份；所述基礎組分配方如下：MS+0.15mg/LKT+0.15mg/LGA3+1.9mg/LMgSO4+3.8mg/LNH4NO3+16mg/L石榴皮汁+167mg/L瓊脂培養(yǎng)基；所述抑菌的甜葉菊培養(yǎng)基用于所述甜葉菊生根培養(yǎng)階段；所述抑菌的甜葉菊培養(yǎng)基用于采用葉作為外植體的組織培養(yǎng)。實驗例1、材料處理選取經(jīng)消毒處理的甜葉菊莖外植體，隨機分成7組，每組2～3個。2、配制培養(yǎng)基配制基礎培養(yǎng)基，所述基礎培養(yǎng)基配方如下：MS+0.15mg/LKT+0.14mg/LGA3+1.9mg/LMgSO4+3.9mg/LNH4NO3+15mg/L石榴皮汁+150mg/L瓊脂培養(yǎng)基，調(diào)PH為6.1～6.5，配制相同的7組，其中一組作為對照組。按照實施例1、2、3、4、5、6所述比例將中草藥提取液加入到配制的基礎培養(yǎng)基，制得所述抑菌的甜葉菊培養(yǎng)基，分別標為1、2、3、4、5、6組。3、實驗方法在無菌條件下將甜葉菊莖外植體分別接種到6組含有中草藥提取液的培養(yǎng)基和對照組上，在相同的無菌環(huán)境中和管理條件下培養(yǎng)至外植體生根，分別統(tǒng)計6組產(chǎn)生的菌斑數(shù)，結果見表1。表1菌斑產(chǎn)生數(shù)量情況一覽表名稱菌斑數(shù)量1組02組13組04組05組16組0對照組6由表1可以看出，本發(fā)明具有高效的抑菌作用。同時由實驗結果可以得出實施例1、3、4、6所述的培養(yǎng)基，抑菌效果更為優(yōu)異。以上對本發(fā)明的具體實施例進行了描述。需要理解的是，本發(fā)明并不局限于上述特定實施方式，本領域技術人員可以在權利要求的范圍內(nèi)做出各種變形或修改，這并不影響本發(fā)明的實質(zhì)內(nèi)容。當前第1頁1 2 3