本發(fā)明涉及美葉柯無性繁殖技術(shù)，尤其是一種美葉柯組培苗生根誘導(dǎo)方法。
背景技術(shù)：
美葉柯（Lithocarpus calophyllus）又名紅葉櫞（江西）、硬葉椆、黃椆、黃背櫟（廣東）、者錐（廣西），系殼斗科（Fagaceae）柯屬（Lithocarpus）喬木，喬木，高達(dá)28米，胸徑1米，新生枝的上段被早脫落的疏微柔毛，二年生枝褐黑色，有皮孔。葉硬革質(zhì)，寬橢圓形，卵形或長(zhǎng)橢圓形，長(zhǎng)8-15厘米，寬4-9厘米，頂部漸尖或短突尖，尾狀，基部近于圓或淺耳垂?fàn)?，有時(shí)一側(cè)略短或偏斜，側(cè)脈每邊7-11條，在葉面凹陷，在葉緣附近急向上彎而隱沒，支脈甚纖細(xì)，彼此近于平行，葉背無毛，但有甚厚的棕黃色至紅褐色、可抹落的甚短的氈毛狀、粉末狀鱗秕層，二年生葉的葉背灰白色或稍帶蒼灰色，蠟鱗層緊實(shí)；葉柄長(zhǎng)2.5-5厘米，花和花序與星毛柯的相同；殼斗厚木質(zhì)，高5-10毫米，寬15-25毫米；堅(jiān)果高15-20毫米，寬18-26毫米，頂部平坦中央微凹陷或甚短尖，常有淡薄的灰白色粉霜，果臍口徑10-14毫米，深2-4毫米?；ㄆ?-7月，果次年8-9月成熟。樹皮暗褐黑色，不開裂或淺縱裂，樹高約15米的樹皮厚約12毫米，內(nèi)皮淡紅褐色，脊棱甚突出，高達(dá)3毫米，木材淡灰褐色，頗堅(jiān)重，不甚耐腐。果實(shí)含淀粉。產(chǎn)江西、福建二省西南部、湖南南部、廣東、廣西、貴州南部。生于海拔500-1 200米山地常綠闊葉林中。
目前，美葉柯資源仍處于野生分布狀態(tài)，但隨著保護(hù)植物多樣性的需求，規(guī)模化人工栽培美葉柯資源勢(shì)在必行。組織培養(yǎng)技術(shù)是一種快速無性繁殖技術(shù)，選擇美葉柯優(yōu)良家系或者無性系為材料，通過組織培養(yǎng)方法繁殖苗木，既可以滿足生產(chǎn)上的數(shù)量要求，又可保持母本性狀。然而在組培過程中，常常出現(xiàn)生根率低、生根不統(tǒng)一、根系數(shù)量少以及根系不粗壯的問題。
技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：
本發(fā)明的目的在于提供一種能提高美葉柯組培苗的生根率，根系數(shù)量以及根系萌發(fā)整齊度的美葉柯組培苗生根誘導(dǎo)方法。
為了實(shí)現(xiàn)上述發(fā)明目的，本發(fā)明的技術(shù)方案如下：
一種美葉柯組培苗生根誘導(dǎo)方法，選取增殖繼代美葉柯小苗，先進(jìn)行預(yù)生根培養(yǎng)，然后再進(jìn)行生根培養(yǎng)，置于適宜環(huán)境中培養(yǎng)，獲得帶根組培苗，主要操作步驟如下：
（1）取材：選取經(jīng)常規(guī)組培中壯芽培養(yǎng)35～40d的美葉柯繼代芽，消毒瓶子外表后，在超凈工作臺(tái)上的無菌空間內(nèi)，選取繼代芽叢中生長(zhǎng)健壯、高度1～2cm的單芽，于節(jié)下2～3mm處剪切，清除基部葉片和葉柄，備用；
（2）預(yù)生根培養(yǎng)：將步驟（1）修剪后的單芽接種于預(yù)生根培養(yǎng)基中,在特定的光溫環(huán)境中進(jìn)行預(yù)生根培養(yǎng)；
（3）生根培養(yǎng)：待步驟（2）中的單芽經(jīng)過30～35d預(yù)生根培養(yǎng)后，將單芽轉(zhuǎn)接入生根培養(yǎng)基，在特定的光溫環(huán)境中進(jìn)行生根培養(yǎng)。
以上所述的預(yù)生根培養(yǎng)基其原料含量為：1/2改良MS培養(yǎng)基+NAA 1.0～2.0mg/L+維生素C6g/L++VC 15mg/L+蔗糖25g/L+瓊脂5.0g/L。
以上所述的生根培養(yǎng)基其原料含量為：1/2改良MS培養(yǎng)基+IAA 1.0～2.0mg/L+ABT2#0.5～2.0 mg/L+蔗糖25g/L+瓊脂5.0g/L。
以上所述的改良MS培養(yǎng)基的基本組成為：KNO3 830 mg/L；NH4NO3 810 mg/L；CaCl2·2H2O 260 mg/L；MgSO4·7H2O 350 mg/L；Ca(NO3)2·4H2O 600 mg/L；KH2PO4 360 mg/L；MnSO4·H2O 22.3 mg/L；ZnSO4·7H2O 8.6 mg/L；CuSO4·5H2O 0.025 mg/L；H3BO3 6.2 mg/L；Na2MoO4·2H2O 0.025 mg/L；KI 0.83 mg/L；CoCl2·6H2O 0.025 mg/L；維生素B1 1.0 mg/L；維生素B6 0.5 mg/L；煙酸 0.5 mg/L；甘氨酸 2.0 mg/L；肌醇 75 mg/L。
以上步驟（2）和步驟（3）所述的光溫環(huán)境為：溫度20±1℃，濕度40～45%，光照強(qiáng)度2000～2500lux，光照15～16h/d。
本發(fā)明具有的優(yōu)點(diǎn)及有益效果如下：
1、本發(fā)明采用1/2改良MS培養(yǎng)基作為基本培養(yǎng)基，同時(shí)重點(diǎn)調(diào)整了與美葉柯生根的相關(guān)的微量元素和有機(jī)成分，使得培養(yǎng)基更科學(xué)，更有針對(duì)性，更易促使美葉柯繼代芽生根，效果顯著。
2、本發(fā)明在生根誘導(dǎo)前采用低濃度NAA和抗壞血酸（VC）對(duì)繼代單芽進(jìn)行預(yù)生根培養(yǎng)，然后再進(jìn)行生根培養(yǎng)，可使組培苗發(fā)根統(tǒng)一，發(fā)根速度快，根系粗壯且數(shù)量較多。
3、本發(fā)明在增殖繼代單芽經(jīng)過30～35d時(shí)間預(yù)生根培養(yǎng)后轉(zhuǎn)入生根培養(yǎng)，即可達(dá)到預(yù)生根培養(yǎng)效果，又避免了小苗在預(yù)生根培養(yǎng)階段長(zhǎng)出根系而使后期生根培養(yǎng)發(fā)根不整齊。
4、本發(fā)明的在特定的光溫條件下進(jìn)行預(yù)生根和生根培養(yǎng)，適應(yīng)美葉柯組培苗的生長(zhǎng)特性，促進(jìn)苗木的生長(zhǎng)。
5、本發(fā)明縮短了美葉柯繼代芽生根周期，生根率高，根系多，質(zhì)量好，生根組培苗移栽成活率高，可實(shí)現(xiàn)美葉柯組培產(chǎn)業(yè)化育苗，為人工無性系林的建設(shè)提供優(yōu)質(zhì)種苗，具有較好的經(jīng)濟(jì)效益、社會(huì)效益和生態(tài)效益。
具體實(shí)施方式
下面結(jié)合具體實(shí)施例對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步說明。
實(shí)施例1：
選取經(jīng)常規(guī)組培中壯芽培養(yǎng)35～36d的美葉柯繼代芽，消毒瓶子外表后，在超凈工作臺(tái)上的無菌空間內(nèi)，選取繼代芽叢中生長(zhǎng)健壯、高度1～2cm的單芽，于節(jié)下2～3mm處剪切，清除基部葉片和葉柄。將修剪后的單芽接種于預(yù)生根培養(yǎng)基中,置于溫度20±1℃，濕度40%，光照強(qiáng)度2000lux，光照16h/d的條件下進(jìn)行預(yù)生根培養(yǎng)。其中所述的預(yù)生根培養(yǎng)基其原料含量為：1/2改良MS培養(yǎng)基+NAA 1.0mg/L+維生素C6g/L++VC 15mg/L+蔗糖25g/L+瓊脂5.0g/L。
單芽經(jīng)過30～35d預(yù)生根培養(yǎng)后，將單芽轉(zhuǎn)接入生根培養(yǎng)基，置于溫度20±1℃，濕度40%，光照強(qiáng)度2000lux，光照16h/d的條件下進(jìn)行生根培養(yǎng)。所述的生根培養(yǎng)基其原料含量為：1/2改良MS培養(yǎng)基+IAA 1.0mg/L+ABT2#0.5 mg/L+蔗糖25g/L+瓊脂5.0g/L。
以上所述的改良MS培養(yǎng)基的基本組成為：KNO3 830 mg/L；NH4NO3 810 mg/L；CaCl2·2H2O 260 mg/L；MgSO4·7H2O 350 mg/L；Ca(NO3)2·4H2O 600 mg/L；KH2PO4 360 mg/L；MnSO4·H2O 22.3 mg/L；ZnSO4·7H2O 8.6 mg/L；CuSO4·5H2O 0.025 mg/L；H3BO3 6.2 mg/L；Na2MoO4·2H2O 0.025 mg/L；KI 0.83 mg/L；CoCl2·6H2O 0.025 mg/L；維生素B1 1.0 mg/L；維生素B6 0.5 mg/L；煙酸 0.5 mg/L；甘氨酸 2.0 mg/L；肌醇 75 mg/L。
實(shí)施例2：
選取經(jīng)常規(guī)組培中壯芽培養(yǎng)36～37d的美葉柯繼代芽，消毒瓶子外表后，在超凈工作臺(tái)上的無菌空間內(nèi)，選取繼代芽叢中生長(zhǎng)健壯、高度1～2cm的單芽，于節(jié)下2～3mm處剪切，清除基部葉片和葉柄。將修剪后的單芽接種于預(yù)生根培養(yǎng)基中,置于溫度20±1℃，濕度40%，光照強(qiáng)度2500lux，光照15h/d的條件下進(jìn)行預(yù)生根培養(yǎng)。其中所述的預(yù)生根培養(yǎng)基其原料含量為：1/2改良MS培養(yǎng)基+NAA 1.5mg/L+維生素C6g/L++VC 15mg/L+蔗糖25g/L+瓊脂5.0g/L。
單芽經(jīng)過30～35d預(yù)生根培養(yǎng)后，將單芽轉(zhuǎn)接入生根培養(yǎng)基，置于溫度20±1℃，濕度40%，光照強(qiáng)度2500lux，光照15h/d的條件下進(jìn)行生根培養(yǎng)。所述的生根培養(yǎng)基其原料含量為：1/2改良MS培養(yǎng)基+IAA 1.0mg/L+ABT2#1.0 mg/L+蔗糖25g/L+瓊脂5.0g/L。
以上所述的改良MS培養(yǎng)基的基本組成為：KNO3 830 mg/L；NH4NO3 810 mg/L；CaCl2·2H2O 260 mg/L；MgSO4·7H2O 350 mg/L；Ca(NO3)2·4H2O 600 mg/L；KH2PO4 360 mg/L；MnSO4·H2O 22.3 mg/L；ZnSO4·7H2O 8.6 mg/L；CuSO4·5H2O 0.025 mg/L；H3BO3 6.2 mg/L；Na2MoO4·2H2O 0.025 mg/L；KI 0.83 mg/L；CoCl2·6H2O 0.025 mg/L；維生素B1 1.0 mg/L；維生素B6 0.5 mg/L；煙酸 0.5 mg/L；甘氨酸 2.0 mg/L；肌醇 75 mg/L。
實(shí)施例3：
選取經(jīng)常規(guī)組培中壯芽培養(yǎng)37～38d的美葉柯繼代芽，消毒瓶子外表后，在超凈工作臺(tái)上的無菌空間內(nèi)，選取繼代芽叢中生長(zhǎng)健壯、高度1～2cm的單芽，于節(jié)下2～3mm處剪切，清除基部葉片和葉柄。將修剪后的單芽接種于預(yù)生根培養(yǎng)基中,置于溫度20±1℃，濕度45%，光照強(qiáng)度2000lux，光照16h/d的條件下進(jìn)行預(yù)生根培養(yǎng)。其中所述的預(yù)生根培養(yǎng)基其原料含量為：1/2改良MS培養(yǎng)基+NAA 2.0mg/L+維生素C6g/L++VC 15mg/L+蔗糖25g/L+瓊脂5.0g/L。
單芽經(jīng)過30～35d預(yù)生根培養(yǎng)后，將單芽轉(zhuǎn)接入生根培養(yǎng)基，置于溫度20±1℃，濕度45%，光照強(qiáng)度2000lux，光照16h/d的條件下進(jìn)行生根培養(yǎng)。所述的生根培養(yǎng)基其原料含量為：1/2改良MS培養(yǎng)基+IAA 2.0mg/L+ABT2#1.5 mg/L+蔗糖25g/L+瓊脂5.0g/L。
以上所述的改良MS培養(yǎng)基的基本組成為：KNO3 830 mg/L；NH4NO3 810 mg/L；CaCl2·2H2O 260 mg/L；MgSO4·7H2O 350 mg/L；Ca(NO3)2·4H2O 600 mg/L；KH2PO4 360 mg/L；MnSO4·H2O 22.3 mg/L；ZnSO4·7H2O 8.6 mg/L；CuSO4·5H2O 0.025 mg/L；H3BO3 6.2 mg/L；Na2MoO4·2H2O 0.025 mg/L；KI 0.83 mg/L；CoCl2·6H2O 0.025 mg/L；維生素B1 1.0 mg/L；維生素B6 0.5 mg/L；煙酸 0.5 mg/L；甘氨酸 2.0 mg/L；肌醇 75 mg/L。
實(shí)施例4：
選取經(jīng)常規(guī)組培中壯芽培養(yǎng)39～40d的美葉柯繼代芽，消毒瓶子外表后，在超凈工作臺(tái)上的無菌空間內(nèi)，選取繼代芽叢中生長(zhǎng)健壯、高度1～2cm的單芽，于節(jié)下2～3mm處剪切，清除基部葉片和葉柄。將修剪后的單芽接種于預(yù)生根培養(yǎng)基中,置于溫度20±1℃，濕度45%，光照強(qiáng)度2500lux，光照15h/d的條件下進(jìn)行預(yù)生根培養(yǎng)。其中所述的預(yù)生根培養(yǎng)基其原料含量為：1/2改良MS培養(yǎng)基+NAA 2.0mg/L+維生素C6g/L++VC 15mg/L+蔗糖25g/L+瓊脂5.0g/L。
單芽經(jīng)過30～35d預(yù)生根培養(yǎng)后，將單芽轉(zhuǎn)接入生根培養(yǎng)基，置于溫度20±1℃，濕度45%，光照強(qiáng)度2500lux，光照15h/d的條件下進(jìn)行生根培養(yǎng)。所述的生根培養(yǎng)基其原料含量為：1/2改良MS培養(yǎng)基+IAA 2.0mg/L+ABT2#2.0 mg/L+蔗糖25g/L+瓊脂5.0g/L。
以上所述的改良MS培養(yǎng)基的基本組成為：KNO3 830 mg/L；NH4NO3 810 mg/L；CaCl2·2H2O 260 mg/L；MgSO4·7H2O 350 mg/L；Ca(NO3)2·4H2O 600 mg/L；KH2PO4 360 mg/L；MnSO4·H2O 22.3 mg/L；ZnSO4·7H2O 8.6 mg/L；CuSO4·5H2O 0.025 mg/L；H3BO3 6.2 mg/L；Na2MoO4·2H2O 0.025 mg/L；KI 0.83 mg/L；CoCl2·6H2O 0.025 mg/L；維生素B1 1.0 mg/L；維生素B6 0.5 mg/L；煙酸 0.5 mg/L；甘氨酸 2.0 mg/L；肌醇 75 mg/L。