本發(fā)明涉及到棕櫚樹(shù)繁殖技術(shù)領(lǐng)域，尤其是一種棕櫚樹(shù)組織培養(yǎng)快繁技術(shù)體系的建立。

背景技術(shù)：

棕櫚樹(shù)又名拼櫚，樹(shù)高2丈，葉大而圓，上聳，四散開(kāi)裂，擾如車(chē)輪，積聚于樹(shù)梢，莖呈三枝，四季不調(diào)，六、七月開(kāi)黃白花，八、九月結(jié)果實(shí)，果實(shí)作房如魚(yú)，子呈黑色，棕櫚樹(shù)樹(shù)皮很堅(jiān)硬，根部有皮重疊而裹，每皮一匝為一節(jié)，三旬采一次，皮又向一長(zhǎng)，九、十月采其皮用。一年剝皮二三次，否則樹(shù)會(huì)死。性味：味苦、澀，性平，無(wú)毒。主治：澀腸，止瀉痢，腸風(fēng)和白帶過(guò)多，另可養(yǎng)血。因此,開(kāi)發(fā)和利用優(yōu)質(zhì)棕櫚樹(shù),發(fā)展棕櫚樹(shù)能源林產(chǎn)業(yè)將是我國(guó)生物質(zhì)能源產(chǎn)業(yè)發(fā)展進(jìn)程中的又一新亮點(diǎn)，對(duì)構(gòu)筑我國(guó)生物質(zhì)能源產(chǎn)業(yè)的發(fā)展格局和促進(jìn)生物質(zhì)能源產(chǎn)業(yè)快速發(fā)展、壯大具有重要意義。目前棕櫚樹(shù)的繁殖以野生自然繁殖為主，織培養(yǎng)快繁方式繁殖育苗鮮見(jiàn)報(bào)道。棕櫚樹(shù)是常異花授粉植物,野生實(shí)生苗的差異性很大,利用種子繁殖實(shí)生苗不利于保持優(yōu)良母樹(shù)含油率高等優(yōu)良性狀。棕櫚樹(shù)能源林的建立需要大量種苗,迅速經(jīng)濟(jì)地繁殖大量的棕櫚樹(shù)優(yōu)質(zhì)種苗成為當(dāng)前亟待解決的問(wèn)題。而本發(fā)明以棕櫚樹(shù)帶腋芽莖段為外植體，通過(guò)外植體消毒、誘導(dǎo)培養(yǎng)、繼代培養(yǎng)、生根培養(yǎng)、煉苗移栽等過(guò)程獲得了棕櫚樹(shù)離體再植株，建立棕櫚樹(shù)組織培養(yǎng)快速繁殖技術(shù)體系，能滿(mǎn)足能源林造林對(duì)棕櫚樹(shù)苗的巨大需求，同時(shí)對(duì)促進(jìn)生物質(zhì)能源產(chǎn)業(yè)快速發(fā)展具有重要意義。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：

本發(fā)明的目的在于提供出一種棕櫚樹(shù)組織培養(yǎng)快繁技術(shù)體系的建立，本發(fā)明以棕櫚樹(shù)帶腋芽莖段為外植體，通過(guò)外植體消毒、誘導(dǎo)培養(yǎng)、繼代培養(yǎng)、生根培養(yǎng)、煉苗移栽等過(guò)程獲得了棕櫚樹(shù)離體再植株，建立棕櫚樹(shù)組織培養(yǎng)快速繁殖技術(shù)體系，從而實(shí)現(xiàn)了本發(fā)明的目的。

本發(fā)明的技術(shù)解決方案是這樣的，一種棕櫚樹(shù)組織培養(yǎng)快繁技術(shù)體系的建立，其特征在于包括以下步驟：

步驟（1）外植體采集及消毒：取材前一天下午噴施抗生素溶液，混合均勻噴施在棕櫚樹(shù)的葉子,第二天的下午,選取健壯,無(wú)病蟲(chóng)害的植株取材,取材時(shí)在幼嫩莖尖先用75%酒精擦洗表面后取下莖尖6個(gè)未萌動(dòng)的腋芽立刻放在含6%抗壞血酸溶液的燒杯里,帶回實(shí)驗(yàn)室,在流動(dòng)水下沖洗 5h，用軟毛刷7%洗衣粉溶液輕輕刷洗材料，再用自來(lái)水以滴水的形式?jīng)_洗 69min,于超凈工作臺(tái)中以9%次氯酸鈉溶液浸泡18s，無(wú)菌水沖洗6次，再用0.8%升汞溶液消毒18min，無(wú)菌水沖洗8次后用無(wú)菌濾紙吸干表面的水分備用;

步驟（2）誘導(dǎo)培養(yǎng)：將經(jīng)步驟（1）處理后的嫩枝剪成約4cm帶腋芽的莖段并接種到誘導(dǎo)培養(yǎng)基進(jìn)行叢生芽誘導(dǎo)培養(yǎng),接種后置于每天光照16小時(shí)，光照強(qiáng)度為3500lx，置于培養(yǎng)溫度為24℃，空氣相對(duì)濕度為75%%的條件下培養(yǎng)33天后統(tǒng)計(jì)誘導(dǎo)情況;

步驟（3）繼代培養(yǎng)：將步驟（2）誘導(dǎo)培養(yǎng)得到叢生芽接種到繼代培養(yǎng)基進(jìn)行叢生芽增殖培養(yǎng),接種后每天光照16小時(shí)，光照強(qiáng)度為3500lx，置于培養(yǎng)溫度為24℃，空氣相對(duì)濕度為75%的條件下培養(yǎng)33天后統(tǒng)計(jì)發(fā)芽數(shù);

步驟（4）生根培養(yǎng)：切取步驟（3）增殖中獲得高4cm以上的植株并接種至生根培養(yǎng)基中進(jìn)行誘導(dǎo)生根,接種后每天光照16小時(shí)，光照強(qiáng)度為3500lx，培養(yǎng)溫度為24℃，空氣相對(duì)濕度為75%的條件下培養(yǎng)33天后統(tǒng)計(jì)生根情況;

步驟（5）煉苗移栽：將生根培養(yǎng)基上獲得的具備移栽條件的瓶苗進(jìn)行煉苗，瓶苗移至常溫下 6天后，打開(kāi)瓶蓋 4天，然后洗去附著于苗根系上的培養(yǎng)基，移栽至盛有由泥炭土:珍珠巖＝2:2的移栽培養(yǎng)基質(zhì)的容器袋中進(jìn)行培養(yǎng)，每個(gè)容器袋移栽1株生根苗,置于溫度控制在 14℃，濕度應(yīng)保持在 75％左右的大棚內(nèi)，移栽33天后統(tǒng)計(jì)成活率。

步驟（1）所述的抗生素溶液是指由四環(huán)素76mg/L+慶大霉素52mg/L+利福平6mg/L+多菌靈6g/L組成的混合液。

步驟（2）所述的誘導(dǎo)培養(yǎng)基為：MS+1.3mg/LNAA+2.3mg/L ZT+9mg/L 氯化膽堿+3.1g/L AC+31g/L蔗糖+6.5g/L瓊脂，pH為5.9。

步驟（3）所述的繼代培養(yǎng)基為：MS+0.13mg/LTDZ+1.3mg/LIBA+3.5mg/L 6-BA+32g/L蔗糖+6.5g/L瓊脂，pH為5.9。

步驟（4）所述的生根培養(yǎng)基為：1/2MS+3.5mg/LIBA+1.3mg/L IAA+33g/L蔗糖+6.5g/L瓊脂，pH為5.9。

與現(xiàn)有技術(shù)相比本發(fā)明的優(yōu)點(diǎn)是：棕櫚樹(shù)為大戟科棕櫚屬木本油料植物，其成熟種子胚中的油脂,可用作工業(yè)油源和動(dòng)力油源等,是一種優(yōu)質(zhì)的可再生能源。作為一種可再生能源植物，棕櫚樹(shù)得到了廣泛的重視。棕櫚樹(shù)能源林的建立需要大量種苗,迅速經(jīng)濟(jì)地繁殖大量的棕櫚樹(shù)優(yōu)質(zhì)種苗成為當(dāng)前亟待解決的問(wèn)題。目前棕櫚樹(shù)的繁殖以野生自然繁殖為主，織培養(yǎng)快繁方式繁殖育苗鮮見(jiàn)報(bào)道。棕櫚樹(shù)是常異花授粉植物,野生實(shí)生苗的差異性很大,利用種子繁殖實(shí)生苗不利于保持優(yōu)良母樹(shù)含油率高等優(yōu)良性狀。為了滿(mǎn)足能源林造林對(duì)棕櫚樹(shù)苗的巨大需求，本發(fā)明以棕櫚樹(shù)帶腋芽莖段為外植體，通過(guò)外植體消毒、誘導(dǎo)培養(yǎng)、繼代培養(yǎng)、生根培養(yǎng)、煉苗移栽等過(guò)程獲得了棕櫚樹(shù)離體再植株，建立棕櫚樹(shù)組織培養(yǎng)快速繁殖技術(shù)體系，對(duì)促進(jìn)生物質(zhì)能源產(chǎn)業(yè)快速發(fā)展具有重要意義。

具體實(shí)施方式

下面實(shí)施例是對(duì)本發(fā)明的進(jìn)一步說(shuō)明。

實(shí)施例1

（1）外植體采集及消毒：取材前一天下午噴施由四環(huán)素75mg/L+慶大霉素50mg/L+利福平5mg/L+多菌靈5g/L組成的混合液溶液，混合均勻噴施在棕櫚樹(shù)的葉子正反面。第二天的下午,選取健壯,無(wú)病蟲(chóng)害的植株取材。取材時(shí)在幼嫩莖尖先用75%酒精擦洗表面后取下莖尖5個(gè)未萌動(dòng)的腋芽立刻放在含3%抗壞血酸溶液的燒杯里,帶回實(shí)驗(yàn)室。在流水下沖洗 4h，用軟毛刷5%洗衣粉溶液輕輕刷洗材料，再用自來(lái)水以滴水的形式?jīng)_洗 70min。于超凈工作臺(tái)中以13%次氯酸鈉溶液浸泡48s，無(wú)菌水沖洗5次，再用0.3%升汞溶液消毒8min，無(wú)菌水沖洗5次后用無(wú)菌濾紙吸干表面的水分備用。

（2）誘導(dǎo)培養(yǎng)：將經(jīng)步驟（1）處理后的嫩枝剪成約4cm帶腋芽的莖段并接種到誘導(dǎo)培養(yǎng)基進(jìn)行叢生芽誘導(dǎo)培養(yǎng)。接種后置于每天光照15小時(shí)，光照強(qiáng)度為2500lx，培養(yǎng)溫度為25℃，空氣相對(duì)濕度為75%的條件下培養(yǎng)35天后誘導(dǎo)率為90%。所述的誘導(dǎo)培養(yǎng)基為：MS+0.6 mg/LNAA+6.0mg/L ZT+4mg/L 氯化膽堿+2.5g/L AC+ 28g/L蔗糖+5.5g/L瓊脂，pH為5.6。

（3）繼代培養(yǎng)：將步驟（2）誘導(dǎo)培養(yǎng)得到叢生芽接種到繼代培養(yǎng)基進(jìn)行叢生芽增殖培養(yǎng)。接種后置于每天光照15小時(shí)，光照強(qiáng)度為2500lx，培養(yǎng)溫度為28℃，空氣相對(duì)濕度為75%的條件下培養(yǎng)35天后增殖系數(shù)為5.0。所述的繼代培養(yǎng)基為：MS+0.08mg/L TDZ+0.4mg/L IBA+2.5mg/L 6-BA+21g/L蔗糖+6.0g/L瓊脂，pH為5.6。

（4）生根培養(yǎng)：切取步驟（3）增殖中獲得高4cm以上的植株并接種至生根培養(yǎng)基中進(jìn)行誘導(dǎo)生根。接種后每天光照15小時(shí)，光照強(qiáng)度為2500lx，培養(yǎng)溫度為26℃，空氣相對(duì)濕度為75%的條件下培養(yǎng)35天生根率為90%。所述的生根培養(yǎng)基為：1/2MS+2.5mg/LIBA+0.8mg/LIAA+21g/L蔗糖+6.0g/L瓊脂，pH為5.6。

（5）煉苗移栽：將生根培養(yǎng)基上獲得的具備移栽條件的瓶苗進(jìn)行煉苗，瓶苗移至常溫下 6天后，打開(kāi)瓶蓋 4天，然后洗去附著于苗根系上的培養(yǎng)基，移栽至盛有由泥炭土:珍珠巖＝3:1的移栽培養(yǎng)基質(zhì)的容器袋中進(jìn)行培養(yǎng)，每個(gè)容器袋移栽1株生根苗。溫度控制在 14℃，濕度應(yīng)保持在 75％左右的大棚內(nèi)，移栽33天后成活率90%。

實(shí)施例2

（1）外植體采集及消毒：取材前一天下午噴施由四環(huán)素76mg/L+慶大霉素51mg/L+利福平6mg/L+多菌靈8g/L組成的混合液溶液，混合均勻噴施在棕櫚樹(shù)的葉子底面。第二天的下午,選取健壯,無(wú)病蟲(chóng)害的植株取材。取材時(shí)在幼嫩莖尖先用75%酒精擦洗表面后取下莖尖6個(gè)未萌動(dòng)的腋芽立刻放在含1%抗壞血酸溶液的燒杯里,帶回實(shí)驗(yàn)室。在流水下沖洗 5h，用軟毛刷5%洗衣粉溶液輕輕刷洗材料，再用自來(lái)水以滴水的形式?jīng)_洗 93min。于超凈工作臺(tái)中以14%次氯酸鈉溶液浸泡50s，無(wú)菌水沖洗5次，再用0.1%升汞溶液消毒10min，無(wú)菌水沖洗6次后用無(wú)菌濾紙吸干表面的水分備用。

（2）誘導(dǎo)培養(yǎng)：將經(jīng)步驟（1）處理后的嫩枝剪成約4cm帶腋芽的莖段并接種到誘導(dǎo)培養(yǎng)基進(jìn)行叢生芽誘導(dǎo)培養(yǎng)。接種后置于每天光照17小時(shí)，光照強(qiáng)度為3000lx，置于培養(yǎng)溫度為26℃，空氣相對(duì)濕度為75%的條件下培養(yǎng)33天后誘導(dǎo)率為90%。所述的誘導(dǎo)培養(yǎng)基為：MS+0.8mg/LNAA+7.0mg/L ZT+6mg/L 氯化膽堿+2.0g/L AC+ 33g/L蔗糖+6.5g/L瓊脂，pH為5.8。

（3）繼代培養(yǎng)：將步驟（2）誘導(dǎo)培養(yǎng)得到叢生芽接種到繼代培養(yǎng)基進(jìn)行叢生芽增殖培養(yǎng)。接種后置于每天光照15小時(shí)，光照強(qiáng)度為3000lx，置于培養(yǎng)溫度為26℃，空氣相對(duì)濕度為75%的條件下培養(yǎng)33天后增殖系數(shù)為5.5。所述的繼代培養(yǎng)基為：MS+0.3mg/LTDZ+0.7mg/LIBA+3.5mg/L 6-BA+26g/L蔗糖+6.0g/L瓊脂，pH為5.8。

（4）生根培養(yǎng)：切取步驟（3）增殖中獲得高4cm以上的植株并接種至生根培養(yǎng)基中進(jìn)行誘導(dǎo)生根。接種后置于每天光照15小時(shí)，光照強(qiáng)度為3500lx，置于培養(yǎng)溫度為24℃，空氣相對(duì)濕度為75%的條件下培養(yǎng)33天生根率為92%。所述的生根培養(yǎng)基為：1/2MS+5.0mg/LIBA+0.9mg/LIAA+21g/L蔗糖+6.0g/L瓊脂，pH為5.8。

（5）煉苗移栽：將生根培養(yǎng)基上獲得的具備移栽條件的瓶苗進(jìn)行煉苗，瓶苗移至常溫下 6天后，打開(kāi)瓶蓋 5天，然后洗去附著于苗根系上的培養(yǎng)基，移栽至盛有由泥炭土:珍珠巖＝2:2的移栽培養(yǎng)基質(zhì)的容器袋中進(jìn)行培養(yǎng)，每個(gè)容器袋移栽1株生根苗。置于溫度控制在 14℃，濕度應(yīng)保持在 75％左右的大棚內(nèi)，移栽35天后成活率94%。