本發(fā)明涉及生物繁殖培養(yǎng)的技術(shù)領(lǐng)域，特別是昆蟲(chóng)病原線蟲(chóng)清洗方法的技術(shù)領(lǐng)域。

背景技術(shù)：

近年來(lái)，作為新型生物殺蟲(chóng)劑，昆蟲(chóng)病原線蟲(chóng)已廣泛應(yīng)用于農(nóng)林、牧草和衛(wèi)生害蟲(chóng)的安全防治，受到國(guó)內(nèi)外學(xué)者及商業(yè)部門的高度重視，并走向商品化生產(chǎn)。昆蟲(chóng)病原線蟲(chóng)腸道內(nèi)攜帶共生細(xì)菌，它們互惠共生，作為昆蟲(chóng)的“蛔蟲(chóng)”與其體內(nèi)專化性攜帶的共生細(xì)菌一起致死寄主昆蟲(chóng)。它們搜索寄主能力強(qiáng)，侵染致死有效性高，起效時(shí)間快，對(duì)人畜、天敵、環(huán)境安全，是一類重要的害蟲(chóng)生物防治因子，在工業(yè)化國(guó)家的生物農(nóng)藥市場(chǎng)中，此類線蟲(chóng)的市場(chǎng)銷售額排生物殺蟲(chóng)劑第二位。目前全球已有超過(guò)60個(gè)國(guó)家的100多個(gè)實(shí)驗(yàn)室在研究此類有益生物。在我國(guó)，昆蟲(chóng)病原線蟲(chóng)也已經(jīng)商業(yè)化生產(chǎn)，并應(yīng)用于防治多種農(nóng)林、草地、花卉以及衛(wèi)生害蟲(chóng)等。

昆蟲(chóng)病原線蟲(chóng)是昆蟲(chóng)的?；约纳鞌?，是以昆蟲(chóng)為寄主的致病性線蟲(chóng)，一般專指斯氏線蟲(chóng)科和異小桿線蟲(chóng)科兩類。它們是目前國(guó)際上新型的生物殺蟲(chóng)劑。與其它生物殺蟲(chóng)劑相比，這類線蟲(chóng)具有廣泛的寄主范圍；對(duì)寄主具主動(dòng)搜索能力，特別對(duì)土棲性及鉆蛀性害蟲(chóng)；對(duì)人畜、植物及有益生物安全，在歐美的一些國(guó)家可以豁免注冊(cè)使用；易于大量培養(yǎng)；使用方便；在環(huán)境中可循環(huán)利用；能與多種化學(xué)和生物殺蟲(chóng)劑混用；并可用傳統(tǒng)藥械或灌溉設(shè)施來(lái)施用等優(yōu)點(diǎn)。

昆蟲(chóng)病原線蟲(chóng)的培養(yǎng)經(jīng)歷了從活體培養(yǎng)到離體培養(yǎng)的過(guò)程，離體培養(yǎng)又從無(wú)菌培養(yǎng)到單菌培養(yǎng)。目前，線蟲(chóng)的商業(yè)化生產(chǎn)主要是通過(guò)無(wú)菌操作技術(shù)于人工培養(yǎng)基中加入單一共生細(xì)菌和無(wú)菌線蟲(chóng)完成的，即體外單菌培養(yǎng)系統(tǒng)。根據(jù)培養(yǎng)基質(zhì)可分為固體培養(yǎng)和液體發(fā)酵培養(yǎng)，兩者在技術(shù)上不盡相同，如培養(yǎng)容器、培養(yǎng)基配比、培養(yǎng)過(guò)程等，但培養(yǎng)過(guò)程的控制參數(shù)基本相同，一般來(lái)說(shuō)，昆蟲(chóng)病原線蟲(chóng)的商業(yè)化生產(chǎn)過(guò)程包括共生菌的分離制備、線蟲(chóng)繁殖、收獲、清洗及儲(chǔ)存。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：

本發(fā)明的目的就是解決現(xiàn)有技術(shù)中的問(wèn)題，提出一種昆蟲(chóng)病原線蟲(chóng)清洗方法，能夠提高侵染期線蟲(chóng)產(chǎn)量，降低生產(chǎn)成本，發(fā)展前景好。

為實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明提出了一種昆蟲(chóng)病原線蟲(chóng)清洗方法，具體步驟包括：

(a)培養(yǎng)容器中包括培養(yǎng)基、碎海綿、共生細(xì)菌、線蟲(chóng)，將培養(yǎng)好的線蟲(chóng)收獲，先將線蟲(chóng)連同固體培養(yǎng)物浸泡在裝有清水的較大容器中，容器中設(shè)有活動(dòng)篩網(wǎng)；容器中設(shè)有通氣震蕩裝置；

(b)靜置分離，讓線蟲(chóng)通過(guò)篩網(wǎng)，留下海綿等雜質(zhì)，95％左右的感染期線蟲(chóng)從培養(yǎng)物中爬出；

(c)產(chǎn)業(yè)化生產(chǎn)中將除去雜質(zhì)的線蟲(chóng)原液按10:1的比例加入硅藻土粉，通過(guò)壓濾機(jī)進(jìn)行固液分離，壓濾機(jī)壓力設(shè)置小于3公斤；所得含線蟲(chóng)的硅藻土粉進(jìn)行計(jì)數(shù)分包存儲(chǔ)。

作為優(yōu)選，所述(a)步驟中，當(dāng)線蟲(chóng)培養(yǎng)到最佳時(shí)間后，感染期線蟲(chóng)的產(chǎn)量最高，其他蟲(chóng)態(tài)的線蟲(chóng)比例最小，這時(shí)應(yīng)立即收獲，線蟲(chóng)最佳培養(yǎng)周期為24d～28d。

作為優(yōu)選，所述(b)步驟中，保存的線蟲(chóng)必須盡量去掉培養(yǎng)物中的雜質(zhì)和其他蟲(chóng)態(tài)，否則會(huì)影響線蟲(chóng)的保存時(shí)間和質(zhì)量。

作為優(yōu)選，所述(b)步驟中，靜置分離時(shí)間1小時(shí)，線蟲(chóng)沉降到容器底部，將篩網(wǎng)連同固體培養(yǎng)物移走，清洗3～4次，通過(guò)通氣震蕩海綿培養(yǎng)基可提高線蟲(chóng)收獲率。

作為優(yōu)選，所述(c)步驟中，利用硅藻土粉吸附線蟲(chóng)的保存方法，并且在含線蟲(chóng)的硅藻土粉中加入1％的苯并異噻啉，防止長(zhǎng)霉菌，并將封包好的產(chǎn)品保存于4℃的冷庫(kù)中。

本發(fā)明的有益效果：本發(fā)明針對(duì)的是昆蟲(chóng)病原線蟲(chóng)固體培養(yǎng)方法的線蟲(chóng)收獲清洗儲(chǔ)存問(wèn)題，固體培養(yǎng)方法的生產(chǎn)成本要明顯低于液體培養(yǎng)方法，固體培養(yǎng)方法生產(chǎn)的線蟲(chóng)致病力也要明顯高于液體培養(yǎng)方法。因此，當(dāng)市場(chǎng)需求量增大，固體培養(yǎng)方法更具產(chǎn)業(yè)化生產(chǎn)發(fā)展前景，本發(fā)明的清洗方法能夠達(dá)到較好的收獲效果，對(duì)線蟲(chóng)的損傷小，后期制成的線蟲(chóng)產(chǎn)品中線蟲(chóng)成活率高。

本發(fā)明的特征及優(yōu)點(diǎn)將通過(guò)實(shí)施例進(jìn)行詳細(xì)說(shuō)明。

【具體實(shí)施方式】

本發(fā)明一種昆蟲(chóng)病原線蟲(chóng)清洗方法，具體步驟包括：

(d)步驟一、培養(yǎng)容器中包括培養(yǎng)基、碎海綿、共生細(xì)菌、線蟲(chóng)，將培養(yǎng)好的線蟲(chóng)收獲，先將線蟲(chóng)連同固體培養(yǎng)物浸泡在裝有清水的較大容器中，容器中設(shè)有活動(dòng)篩網(wǎng)；容器中設(shè)有通氣震蕩裝置；

步驟二、靜置分離，讓線蟲(chóng)通過(guò)篩網(wǎng)，留下海綿等雜質(zhì)，95％左右的感染期線蟲(chóng)從培養(yǎng)物中爬出；

步驟三、產(chǎn)業(yè)化生產(chǎn)中將除去雜質(zhì)的線蟲(chóng)原液按10:1的比例加入硅藻土粉，通過(guò)壓濾機(jī)進(jìn)行固液分離，壓濾機(jī)壓力設(shè)置小于3公斤，所得含線蟲(chóng)的硅藻土粉進(jìn)行計(jì)數(shù)分包存儲(chǔ)。

所述(a)步驟中，當(dāng)線蟲(chóng)培養(yǎng)到最佳時(shí)間后，感染期線蟲(chóng)的產(chǎn)量最高，其他蟲(chóng)態(tài)的線蟲(chóng)比例最小，這時(shí)應(yīng)立即收獲，線蟲(chóng)最佳培養(yǎng)周期為24d～28d。所述(b)步驟中，保存的線蟲(chóng)必須盡量去掉培養(yǎng)物中的雜質(zhì)和其他蟲(chóng)態(tài)，否則會(huì)影響線蟲(chóng)的保存時(shí)間和質(zhì)量。所述(b)步驟中，靜置分離時(shí)間1小時(shí)，線蟲(chóng)沉降到容器底部，將篩網(wǎng)連同固體培養(yǎng)物移走，通過(guò)通氣震蕩海綿培養(yǎng)基可提高線蟲(chóng)收獲率。所述(c)步驟中，利用硅藻土粉吸附線蟲(chóng)的保存方法，并且在含線蟲(chóng)的硅藻土粉中加入1％的苯并異噻啉，防止長(zhǎng)霉菌，并將封包好的產(chǎn)品保存于4℃的冷庫(kù)中。

本發(fā)明針對(duì)的是昆蟲(chóng)病原線蟲(chóng)固體培養(yǎng)方法的線蟲(chóng)收獲清洗儲(chǔ)存問(wèn)題，固體培養(yǎng)方法的生產(chǎn)成本要明顯低于液體培養(yǎng)方法，固體培養(yǎng)方法生產(chǎn)的線蟲(chóng)致病力也要明顯高于液體培養(yǎng)方法。因此，當(dāng)市場(chǎng)需求量增大，固體培養(yǎng)方法更具產(chǎn)業(yè)化生產(chǎn)發(fā)展前景，本發(fā)明的清洗方法能夠解決固體培養(yǎng)快速回收干凈線蟲(chóng)的難題，對(duì)線蟲(chóng)的損傷小，后期制成的線蟲(chóng)產(chǎn)品中線蟲(chóng)成活率高。

上述實(shí)施例是對(duì)本發(fā)明的說(shuō)明，不是對(duì)本發(fā)明的限定，任何對(duì)本發(fā)明簡(jiǎn)單變換后的方案均屬于本發(fā)明的保護(hù)范圍。