本發(fā)明涉及一種微體繁殖方法，具體來說涉及一種植物快繁與優(yōu)質(zhì)苗培育方法，特別是一種切花月季“卡羅拉”的微體繁殖方法。

背景技術(shù)：

月季(Rosa hybrida L.)是薔薇科(Rosaceae)薔薇屬(Rosa L.)植物，是我國十大名花之一，被譽(yù)為“花中皇后”，象征和平友誼、愛情、美好，升華人們的心靈，具有極高的觀賞價(jià)值和商業(yè)價(jià)值，現(xiàn)有技術(shù)中，切花月季“卡羅拉”的組培快繁中，容易出現(xiàn)莖段初代培養(yǎng)中易污染褐變，莖增殖和芽分化的細(xì)弱，生根壯苗率低和移栽成活率低等技術(shù)難點(diǎn)。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：

本發(fā)明的目的在于提供一種切花月季“卡羅拉”的微體繁殖方法，利用組織培養(yǎng)技術(shù)快速繁殖切花月季“卡羅拉”，是提高“卡羅拉”質(zhì)量和數(shù)量，獲得大量整齊一致的種苗的最佳方法，本發(fā)明針對“卡羅拉”的形態(tài)特征，已成功研發(fā)出用莖段為材料，進(jìn)行莖段切割、消毒、初代培養(yǎng)、增殖培養(yǎng)、生根培養(yǎng)和試管苗移栽等一系列關(guān)鍵技術(shù)，解決了“卡羅拉”大規(guī)模生產(chǎn)的技術(shù)瓶頸。

本發(fā)明的構(gòu)成：一種切花月季“卡羅拉”的微體繁殖方法，其特征在于：所述微體繁殖方法，包括如下步驟：

(1) 外植體的選擇與滅菌

首先選用生長季節(jié)新發(fā)的幼嫩莖段，要求生長健壯，無病蟲害，無木質(zhì)化，帶腋芽，實(shí)驗(yàn)材料在自來水下沖洗30 min，邊洗邊用毛刷刷洗表面，在高濃度的洗滌液中浸泡20 min，自來水下沖凈；在超凈工作臺上，先用75％酒精消毒30 S，再用0.1％升汞液消毒l0min，無菌水漂洗6次；最后用無菌濾紙吸干表面水分；

(2) 初代培養(yǎng)

用解剖刀將帶腋芽的莖段切割成0.5-0.8cm的長度，接入到1/2 MS+6-BA 1.5 mg/L+NAA 0.5 mg/L+蔗糖20g/L +瓊脂8-10g/L的誘導(dǎo)培養(yǎng)基中，pH 5.7，莖段剛接入培養(yǎng)基時(shí)，要放到培養(yǎng)溫度為15 -20℃的黑暗條件下培養(yǎng)5-7天，然后放到光照強(qiáng)度為1800-2000 Lux 的日光燈下培養(yǎng)30-40 d，光照時(shí)間12h/d；

（3）繼代培養(yǎng)

初代獲得的芽長至1cm時(shí)，接入增殖培養(yǎng)基1/2 MS+6-BA 1.0 mg/L +NAA mg/L+蔗糖20g/L +瓊脂8-10g/L，pH 5.6，每隔2-3個(gè)月繼代一次，經(jīng)過反復(fù)分割繼代培養(yǎng)，獲得大量的根狀莖，在光強(qiáng)為1800-2000 lux 的日光燈下培養(yǎng)30-40 d，溫度25±1℃，光照時(shí)間12h/d；

（4）生根培養(yǎng)

到芽高長至3-4cm時(shí)轉(zhuǎn)至生根壯苗培養(yǎng)，放在溫度25±1℃，光強(qiáng)2000 lux日光燈下培養(yǎng)2-3個(gè)月，光照時(shí)間12h/d，在培養(yǎng)后期的1個(gè)月，放在溫室內(nèi)，生根培養(yǎng)基：1/2 MS+NAA0.5 mg/L+IBA 0.1 mg/ L+活性炭2-3g/L +蔗糖20g/L +瓊脂8-10g/L；

（5）試管苗移栽

待小苗高6-7cm，有5-7條根時(shí)移栽，基質(zhì)填埋于根莖部位，先放在高濕、1600 lux 的弱光條件緩苗7-10d，再放到20-25℃，空氣濕度相對70%的條件下，1-2月噴施1/1000的營養(yǎng)液和抗菌劑。

切花月季“卡羅拉”的微體繁殖方法，其特征在于“所述基質(zhì)是蛭石，營養(yǎng)液是MS大量元素，抗菌劑是百菌清。

與現(xiàn)有技術(shù)比較，本發(fā)明解決了莖段初代培養(yǎng)中易污染褐變，莖增殖和芽分化的細(xì)弱，生根壯苗率低和移栽成活率低等技術(shù)難點(diǎn)，提出一種既能解決上述技術(shù)難題，又能降低生產(chǎn)成本，實(shí)現(xiàn)“卡羅拉”規(guī)?；瘍?yōu)質(zhì)組培苗生產(chǎn)的方法，即切花月季“卡羅拉”的微體繁殖方法。

具體實(shí)施方式

以下通過實(shí)施例結(jié)合本發(fā)明的有益效果作進(jìn)一步說明：

切花月季“卡羅拉”的微體繁殖方法，包括如下步驟：

(1) 外植體的選擇

選用生長季節(jié)新發(fā)的幼嫩莖段，要求生長健壯，無病蟲害，無木質(zhì)化，帶腋芽。

（2）消毒滅菌

實(shí)驗(yàn)材料在自來水下沖洗30 min，邊洗邊用毛刷刷洗表面，在高濃度的洗滌液中浸泡20 min，自來水下沖凈；在超凈工作臺上，先用75％酒精消毒30 S，再用0.1％升汞液消毒l0min，無菌水漂洗6次；最后用無菌濾紙吸干表面水分。

（3）莖段的切割

在超凈工作臺中用解剖刀將消毒后的莖段切割成5-8cm帶腋芽的小段，盡量保證腋芽的完整性，以免生長點(diǎn)受損。

(4) 初代培養(yǎng)

用解剖刀將帶腋芽的莖段切割成0.5-0.8cm的長度，接入到1/2 MS+6-BA 1.5 mg/L+NAA 0.5 mg/L+蔗糖20g/L +瓊脂8-10g/L的誘導(dǎo)培養(yǎng)基中，pH 5.7，莖段剛接入培養(yǎng)基時(shí)，要放到培養(yǎng)溫度為15 -20℃的黑暗條件下培養(yǎng)5-7天，然后放到光照強(qiáng)度為1800-2000 Lux 的日光燈下培養(yǎng)30-40 d，光照時(shí)間12h/d。

（5）繼代培養(yǎng)

初代獲得的芽長至1cm左右時(shí)，接入增殖培養(yǎng)基1/2 MS+6-BA 1.0 mg/L +NAA mg/L+蔗糖20g/L +瓊脂8-10g/L。，pH 5.6，每隔2-3個(gè)月繼代一次，經(jīng)過反復(fù)分割繼代培養(yǎng)，獲得大量的根狀莖，在光強(qiáng)為1800-2000 lux 的日光燈下培養(yǎng)30-40 d，溫度25±1℃，光照時(shí)間12h/d。

（6）生根培養(yǎng)

到芽高長至3-4cm時(shí)轉(zhuǎn)至生根壯苗培養(yǎng)，放在溫度25±1℃，光強(qiáng)2000 lux日光燈下培養(yǎng)2-3個(gè)月，光照時(shí)間12h/d，在培養(yǎng)后期的1個(gè)月，放在溫室內(nèi)，生根培養(yǎng)基：1/2 MS+NAA0.5 mg/L+IBA 0.1 mg/ L+活性炭2-3g/L +蔗糖20g/L +瓊脂8-10g/L。

（7）試管苗移栽

待小苗高6-7cm，有5-7條根時(shí)移栽，基質(zhì)填埋于根莖部位，先放在高濕、1600 lux 的弱光條件緩苗7-10d，再放到20-25℃，空氣濕度相對70%的條件下，1-2月噴施1/1000的營養(yǎng)液和抗菌劑。

切花月季“卡羅拉”的微體繁殖方法，其特征在于“所述基質(zhì)是蛭石，營養(yǎng)液是MS大量元素，抗菌劑是百菌清。

切花月季“卡羅拉”的微體繁殖方法以上所述，僅是本發(fā)明的較佳實(shí)施例而已，并非對本發(fā)明作任何形式上的限制，任何未脫離本發(fā)明技術(shù)方案內(nèi)容，依據(jù)本發(fā)明的技術(shù)實(shí)質(zhì)對以上實(shí)施例所作的任何簡單修改、等同變化與修飾，均仍屬于本發(fā)明技術(shù)方案的范圍內(nèi)。